микра. Микробиология. Блок 1
 Скачать 1.47 Mb.
|
|
. Грамположительные бактерии 1. бактерии с толстым слоем пептидогликана в клеточной стенке 2. при окраске по Граму окрашиваются в синий цвет. Грамотрицательные бактерии 1. бактерии с тонким слоем пептидогликана в клеточной стенке 2. при окраске по Граму окрашиваются в красный цвет. Методы выявления : Метод Грама для дифференциации бактерии по биохимическим свойствам их клеточной стенки. На фиксированный мазок положить кусочек фильтровальной бумаги и нанести с избытком генцианвиолет ( основной краситель ) (1- 2 мин) Слить краситель Промыть препарат водой Нанести раствор Люголя (KI) (1- 2 мин), затем слить его Воздействовать на препарат спиртом (30- 60 сек) Промыть препарат водой дистиллированной водой. Докрасить красным фуксином ( дополнительный краситель (1- 2 мин) Промыть и подсушить препарат 9. Люминесцентный микроскоп. Принцип работы. Сфера применения Люминесцентный микроскоп - обычный биологический микроскоп, снабженный двумя светофильтрами один пропускает только возбуждающие сине - или ультрафиолетовые лучи (его помещают перед источником света) второй поглощает эти лучи и пропускает только более длинноволновый свет люминесценции препарата (его устанавливают в тубусе или на окуляре микроскопа). Источниками света служат ртутно - кварцевые лампы. Яркое цветное свечение объектов на темном фоне обеспечивает высокий контраст. Принцип работы : Основано на способности некоторых клеток и красителей светиться при попадании на них ультрафиолетовых и других коротковолновых лучей света. Для люминесцентной микроскопии применяются специальные оптические устройства и микроскопы, основной частью которых является источник ультрафиолетовых лучей и система фильтров к нему Сфера примениения : диагностика туберкулеза Достоинства : высокая контрастность дает цветное изображение позволяет обнаружить живые и погибшие микроорганизмы прозрачные и непрозрачные объекты установить локализацию бактерий, вирусов и их антигенов в пораженных клетках организма. Недостатки высокая стоимость Различают собственную (первичную) флюоресценцию наведенную (вторичную) флюоресценцию Так как большая часть микроорганизмов не обладает собственной флюоресценцией, они обрабатываются красителями, способными флюоресцировать (вторичная люминесценция). 10. Морфологические и тинкториальные свойства бактерий. Методы изучения Морфологические свойства : форма (определяется клеточной стенкой ) размер взаимное расположение клеток (связано с плоскостью их деления) Тинкториальные свойства – восприимчивость микроорганизмов к различным красителям. Для бактерий характерны четыре основные формы: шаровидная палочковидная извитая нитевидная Шаровидные бактерии, или кокки : Микрококки (отдельно расположенные клетки) Диплококки (располагаются парами) Стрептококки ( клетки округлой или вытянутой формы, составляющие цепочку) Сарцины ( располагаются в виде «пакетов» из 8 и более кокков) Стафилококки ( расположенные в виде грозди винограда в результате деления в разных плоскостях) Палочковидные бактерии : Монобактерии ( расположены отдельными клетками) Диплобактерии (расположены по две клетки) Стрептобактерии ( после деления образуют цепочки клеток) Палочковидные бактерии могут образовывать споры : Бациллы клостридии. Извитые бактерии : Вибрионы ( изогнутость тела не превышает одного оборота ) Спирохеты ( изгибы тела в один или несколько оборотов) Нитевидные бактерии : Актиномицеты (ветвящиеся бактерии ) Методы изучения: Простые (1 краситель, фуксин) Сложные (2 красителя, дифференцирующие веществава, фиксаторы, протравы) Методы окраски по Граму (толстая или тонкая стенка) Цилю - Нильсену (кислотоуст стенка) Ожешко (споры) Бурри - Гинсу (капсула) Нейссеру (зерна волютина) Морозову (жгутики) Размер бактерий Микроорганизмы измеряются в микрометрах и нанометрах Средние размеры бактерий – 2 – 3 х 0,3 – 0,8 мкм. Форма и размер - важный диагностический признак. Способность бактерий изменять свою форму и величину называется полиморфизм 11.Окраска по Граму. Техника и принцип метода. КОН-тест. Принцип метода и его практическое значение. Метод Грама — метод окраски микроорганизмов для исследования, позволяющий дифференцировать бактерии по биохимическим свойствам их клеточной стенки. Предложен в 1884 году датским врачом Г. К. Грамом. По Граму бактерии окрашивают анилиновыми красителями — генциановым или метиловым фиолетовым и др., затем краситель фиксируют раствором иода. При последующем промывании окрашенного препарата спиртом те виды бактерий, которые оказываются прочно окрашенными в синий цвет, называют грамположительными бактериями (обозначаются Грам (+)), — в отличие от грамотрицательных (Грам (−)), которые при промывке обесцвечиваются. После промывания растворителем при окрашивании по Граму добавляется контрастный красный краситель, который окрашивает все грамотрицательные бактерии в красный или розовый цвет. Это происходит из - за наличия внешней мембраны, препятствующей проникновению красителя внутрь клетки. Тест классифицирует бактерии, разделяя их на две группы относительно строения их клеточной стенки Методика окраски • На фиксированный мазок положить кусочек фильтровальной бумаги и нанести с избытком основной краситель (1 - 2 мин) • Слить краситель, промыть препарат водой, нанести раствор Люголя. (1 -2 мин) • Слить раствор Люголя, препарат поместить в спирт (или налить спирт на препарат). (30 - 60 сек) • Тщательно промыть дистиллированной водой. • Докрасить одним из дополнительных красителей. (1 - 2 мин) • Промыть и подсушить препарат КОН - тест с помощью КОН - теста грамотрицательные микроорганизмы от грамположительных. В основе метода с КОН лежит способность клеточной стенки грамположительных бактерий сохранять целостность при воздействии гидроокиси калия, тогда как клеточная стенка грамотрицательных микроорганизмов разрушается при указанном воздействии. Методика выполнения работы. На предметное стекло наносят каплю 3 % - ного водного раствора КОН. Петлей вносят суточную агаровую культуру исследуемых бактерий и тщательно эмульгируют. При положительной реакции, если суспензия в капле становится вязкой, нити слизи тянутся за петлей на 0,5 – 2,0 см и даже дальше, это - грамотрицательные бактерии, если нет – грамположительные бактерии. Учет этой пробы более удобен на черном фоне. Образование слизистой консистенции после обработки грамотрицательных бактерий КОН обусловлено выходом из их клеток ДНК, являющейся вязким компонентом 12. 0сновные группы микроорганизмов. Значение в патологии человека. Микроорганизмы относятся к трем царствам: Vira - к ним относятся вирусы; Eucariotae- к ним относятся простейшие и грибы; Procariotae - к ним относятся истинные бактерии, риккетсии, хламидии, микоплазмы, спирохеты, актиномицеты. Основные отличия прокариот от эукариот состоят в том, что прокариоты не имеют: морфологически оформленного ядра (нет ядерной мембраны и отсутствует ядрышко), его эквивалентом является нуклеоид, или генофор, представляющий собой замкнутую кольцевую двунитевую молекулу ДНК, прикрепленную в одной точке к цитоплазматической мембране; по аналогии с эукариотами эту молекулу называют хромосомной бактерией; сетчатого аппарата Гольджи; эндоплазматической сети; митохондрий. 1.Прокариоты - организмы, не обладающие оформленным ядром и внутриклеточными мембранными структурами 1.1 Собственно бактерии – наиболее обширная группа паразитических и свободно живущих прокариота, обладающих жесткой клеточной стенкой (брюшной тиф; сибирская язва; газовая гангрена) 1.2 Актиномицеты – бактерии способные к образованию длинных септированных или несептированных нитей (нитчатые бактерии) (актиномикоз) Значение в паталогии человека - многие актиномицеты используются в качестве штаммов - продуцентов при производстве антибиотиков и ферментных препаратов) 1.3 Микоплазмы – бактерии, не имеющие клеточной стенки (атипичная пневмония; урогенитальный микоплазмоз) 1.4 Риккетсии – бактерии, облигатные внутриклеточные паразиты (эпидемический сыпной тиф; клещевой риккетсиоз; пятнистая лихорадка скалистых гор; лихорадка цуцугамуши) 1.5 Хламидии – бактерии, облигатные внутриклеточные паразиты. Отличаются от риккетсий сложным циклом внутриклеточного размножения (трахома; хламидийная пневмония) 1.6 Спирохеты – спирально извитые микроорганизмы. Отличаются наличием внутриклеточных фибриллярных структур (сифилис ;лептоспироз; боррелиоз Лайма) 1.7 Цианобактерии - значительная группа крупных грамотрицательных бактерий, способных к фотосинтезу, сопровождающемуся выделением кислорода 2. Эукариоты – организмы, обладающие оформленным ядром и внутриклеточными мембранными структурами 2.1 Простейшие – одноклеточные эукариотические животные 2.2 Низшие грибы – гетеротрофные одноклеточные и многоклеточные микроорганизмы 3. Вирусы – неклеточная форма жизни Значение в патологии человека Если бактериальное равновесие нарушается, человеку приходится столкнуться с отрицательными сторонами микробного соседства. Нарушенное равновесие предполагает, что положительные микроорганизмы либо перестали преобладать в сообществе, либо изменились условия их жизни, в результате чего микробы стали опасны. Вредные микробы в кишечнике В природе это происходит часто. Изменение температурного режима, появление дополнительных физических или химических факторов – любое из этих событий играет большую роль и может изменить бактериальную картину экосистемы. Человек – достаточно стабильная экосистема с постоянным температурным режимом, физическими процессами и химической средой. Любое изменение в бактериальном равновесии имеет значение. Это серьезная угроза здоровью человека. Опасными для человека являются бактерии, провоцирующие и поддерживающие процессы гниения (разложения белков). Три основных вида этих условно болезнетворных микроорганизмов: кишечная палочка; стафилококки; шигеллы. Эти микробы гниения являются постоянными участниками бактериальных сообществ, населяющих человека, но благодаря преобладанию в этих сообществах полезных молочнокислых бактерий, процессы гниения дезактивируются. Плюс в том, что деятельность условно патогенной микрофлоры в значительной степени тормозится. Но как только в природе этих взаимоотношений что - то меняется, микробы гниения начинают активную деятельность. 13. Предмет и задачи медицинской микробиологии. Микробиология (греч. micro – малый, bios – жизнь и logos – учение) – наука о мельчайших организмах. Среди микроорганизмов различают: эукариоты – грибы и простейшие; прокариоты – бактерии, риккетсии, микоплазмы и др. вирусы Предмет: изучает морфологию физиологию (питание, рост, размножение) иммунологию генетику экологию микроорганизмов , имеющих мед. значение. Задачи медицинской микробиологии Установление этиологической роли различных микроорганизмов в патологии человека. На этом строится диагностика инфекционных заболеваний. Разработка методов диагностики и профилактики инфекционных заболеваний. Изучение болезнетворных свойств патогенных микроорганизмов с целью определения клинической и эпидемиологической значимости того или иного микроорганизма. Контроль за эффективностью лечебных и профилактических мероприятий. Изучение асептики, антисептики, дезинфекции, стерилизации. Изучение механизмов распространения микроорганизмов во внешней среде, в основном в питьевой воде, пище, воздухе. Изучение вопросов охраны внешней среды. Главная задача медицинской микробиологии – ликвидация инфекционных болезней. 14. Принципы классификации микроорганизмов. Понятие о виде и штамме. Микроорганизмы систематизированы по их сходству, различиям и взаимоотношениям между собой. Этим занимается специальная наука — систематика микроорганизмов. Систематика включает три части: Таксономию Классификацию Идентификацию. В основу таксономии микроорганизмов положены их Морфологические свойства. Физиологические свойства. Биохимические свойства. Молекулярно - биологические свойства. Различают следующие таксономические категории: Царство Подцарство Отдел Класс Порядок Семейство Род Вид Подвид В рамках той или иной таксономической категории выделяют таксоны — группы организмов, объединенные по определенным однородным свойствам. Микроорганизмы представлены доклеточными формами (вирусы — царство Vira) клеточными формами (бактерии, архебактерии, грибы и простейшие). Различают 3 домена: домен «Bacteria» — прокариоты, представленные настоящими бактериями (эубактериями); домен «Archaea» — прокариоты, представленные архебактериями; домен «Eukarya» — эукариоты, клетки которых имеют ядро с ядерной оболочкой и ядрышком, а цитоплазма состоит из высоко¬организованных органелл — митохондрий, аппарата Гольджи и др. Домен «Eukarya» включает: грибы и простейшие. Морфологическая классификация Для бактерий характерны четыре основные формы: сферическая (шаровидная), цилиндрическая (палочковидная), извитая нитевидная Шаровидные бактерии, или кокки : Микрококки – отдельно расположенные клетки. Диплококки – располагаются парами. Стрептококки – клетки округлой или вытянутой формы, составляющие цепочку. Сарцины – располагаются в виде «пакетов» из 8 и более кокков. Стафилококки – кокки, расположенные в виде грозди винограда в результате деления в разных плоскостях. Палочковидные бактерии Монобактерии – расположены отдельными клетками. Диплобактерии – расположены по две клетки. Стрептобактериии – после деления образуют цепочки клеток. Палочковидные бактерии могут образовывать споры: бациллы и клостридии. Извитые бактерии Вибрионы – изогнутость тела не превышает одного оборота Спирохеты – изгибы тела в один или несколько оборотов. Нитевидные бактерии Актиномицеты - это ветвящиеся бактерии Одной из основных таксономических категорий является - вид . Вид — это совокупность особей, объединенных по близким свойствам, но отличающихся от других представителей рода. Чистая культура - масса клеток, состоящая из микроорганизмов, принадлежащих одному виду и полученных как потомство одной клетки Штамм – это чистая культура одного вида бактерий, выделенных из разных источников или из одного источника в разное время. Штаммы могут различаться по некоторым признакам, не выходящим за пределы характеристики вида. Клон - это совокупность бактерий, являющихся потомством одной клетки 15. Световой микроскоп. Показатели качества: разрешающая способность, увеличение. Световой микроскоп - это оптический прибор, позволяющий получить обратное изображение изучаемого объекта и рассмотреть мелкие детали его строения В микроскопе выделяют две части : 1. Оптическую 2. Механическую К оптической части относят: |