микра. Микробиология. Блок 1
 Скачать 1.47 Mb.
|
|
17. Применение бактериофагов в медицине и микробиологии. Практическое использование бактериофагов. 1.Для идентификации (определение фаготипа). 2.Для фагопрофилактики (купирование вспышек). 3.Для фаготерапии (лечение дисбактериозов). 4.Для оценки санитарного состояния окружающей среды и эпидемиологического анализа. 18.Формы, биологическое значение ,выявления антагонизма у бактерий 19. Биопленки. Строение Роль в медицине. Биопленка — сообщество микробов, которые прикреплены к поверхности или друг к другу, заключены в матрикс синтезированных ими внеклеточных полимерных веществ, имеют измененный фенотип, проявляющийся другими параметрами роста и экспрессии специфичных генов . В природе биопленки распространены повсеместно. Формирование биопленок отмечено у большинства бактерий в природных, клинических и промышленных условиях. Они образуются в условиях текучести на границе двух средовых фаз (жидкость — жидкость, жидкость — воздух и т.д.). Биопленки обнаруживаются на твердых субстратах, погруженных в водный раствор, а также могут создавать плавающие маты на жидких поверхностях. Роль.К настоящему времени достоверно доказана роль микробных биопленок в возникновении и развитии таких распространенных заболеваний, как инфекции, связанные с катетеризацией сосудов, вызванные Staphylococcus aureus и другими грамположительными микроорганизмами; инфекции сердечных клапанов и Агар Мюлера- Хинтон(Похож на МПА) Суспеньзия культуры(наслоить) Диски с АБ Далее инкубация суставных протезов, вызываемые стафилококками; пародонтит, обусловленный рядом микроорганизмов полости рта; инфекции мочевых путей, определяемые Е. coli и др. патогенами; инфекции среднего уха — причина, например, Haemo philus influenzae, муковисцидоз, вызываемый P. Aeruginosa и др. Практические навыки Диско-диффузионный метод определения чувствительности к антибиотикам Диск с Аб-это диск из фильтровальной бумаги пропитанный АБ,концетрация соответствует среднетерапевтической(это аб в плазме крови)далее инкубация. Далее измеряется зона задержки роста d в мм сравнивают с экспертными таблицами) Катигории отношения м/о к АБ 1)Чувствительеый(подавление м/о в конц. Терап диапазона) 2)Промежуточный/умеренно устойчивый(подавление только в предельной терап. Конц) 3)Устойчивые/резистентные Достоинства метода Простота постановки теста и учета результатов Низкая стоимость Доступность для любой диагностической лаборатории Недостатки Результат носит качественный характер Может быть использован не для всех препаратов (особенности диффузии некоторых препаратов в агаре) Большое влияние "человеческого фактора" на конечный результат Метод серийных разведений в жидкой питательной среде. Испытуемый штамм засевают в серию пробирок с бульоном, содержащим различные концентрации антибиотика. После инкубации учитывают результат. О наличии роста судят по помутнению среды (в некоторых случаях - по изменению окраски). Определение проводят в обычных пробирках (макрометод) или в 96-ти луночных панелях (микрометод). Достоинства метода 1)Количественная оценка резистентности 2)Простота учета 3)Возможность автоматизации постановки и учета при использовании 96-луночных панелей Недостатки:Высокая трудоемкость (особенно при использовании макрометода) Метод серийных разведений в плотной питательной среде. Посев испытуемых культур производят на чашки с различными концентрациями антибиотика. После инкубации определяют минимальную концентрацию препарата, при которой подавляется рост штамма - минимальная ингибирующая концентрация (МИК). Достоинства метода 1) Количественная характеристика резистентности 2)Возможно отслеживать нарастание резистентности в популяции микроорганизмов 3) Одномоментное определение резистентности большого количества штаммов к большому количеству препаратов (при использовании штампа-репликатора) Недостатки метода 1)Высокая трудоемкость, большой объем подготовительной работы. Не удобен для работы с единичными штаммами. Желточно-солевой агар. Элективно-дифференциальная С помощью желточно-солевого агара можно выявить наличие у стафилококков фермента лецито- вителазы. Желточно-солевой агар - это элективно-дифференциальная среда.Питательная основа МПА Элективным фактором в ней является 10% NaCI (подавляет рост сопутствующей микрофлоры), дифференциальным - лецитин куриного желтка. Вокруг колоний стафилококков, продуцирующих лецитовителазу (фермент, расщепляющий лецитин), образуется зона помутнения (радужный венчик, «перламутровая зона»). Назначение:Выделение стафилококков и дифференцировка по лецитовителазному признаку (S.aureus - lec+, остальные - lec-) с одновременным подавлением сопутствующей микрофлоры. Молоко по Тукаеву. Тип среды:ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ ДЛЯ АНАЭРОБОВ Состав - Пептон+глюкоза+обезжиренное молоко(редуцирующий фактор) Рост анаэробов при посеве на молоко. Большинство анаэробов вызывают створаживание молока. Для приготовления мазка стерильной бактериологической петлей берут содержимое пробирки со дна пробирки. Окрашивают по Граму. Клостридии представляют крупные Грам (+) палочки с непрокрашенными терминальными или субтерминальными Сахарно-кровяной агар Цейсслера. Тип среды:дифференциальная Кровяной агар - обогащенная питательная среда для многих видов патогенных микроорганизмов, среда для определения гемолитических свойств микроорганизмов. Питательная основа - Мясо-пептонный агар; Дифференцирующее вещество - кровь (эритроциты)+глюкоза(дыхательный субстрат) Эту среду можно инкубировать только в анаэростате. Поддерживает рост многих м/дифференцируя их по способности к гемолизу: b-гемолиз расщепление мембрат эритроцитов с просветелнием вокруг колоний. А-гемолиз распад гемоглобина за счет перекрестных соединений м/о, колоний окружены зеленым ореолом. Гамма-гемолиз или отсутствие гемолиза Принцип действия :Кровь является фактором роста, необходимым для многих требовательных микроорганизмов Некоторые микроорганизмы обладают гемолитической активностью и способны образовывать колонии, окруженные зоной гемолиза. Таким образом среда позволяет дифференцировать микроорганизмы по наличию и типу гемолиза Назначение:Выделение и дифференцировка микроорганизмов по гемолитической активности. Выделение и культивирование требовательных микроорганизмов. Селенитовый бульон Тип среды-сложная питательная среда с элективными свойствами. Селенитовый бульон предназначен для выделения чистой культуры сальмонелл Состав: панкреатический гидролизат казеина a-Д-лактоза ,натрия гидроселенит (без теллура) ,натрий гидрофосфат ,калий дигидрофосфат Через 6 ч инкубации при температуре (37±1) °С среда должна обеспечивать накопление сальмонелл не менее, чем в 5 раз и ингибицию роста кишечной палочки не менее, чем 1,5 раза. Готовая среда прозрачная, светло-желтого цветаЧерез 6 ч инкубации при температуре (37±1) °С проводят высев на среду Эндо. Колонии сальмонелл через 18-20 ч инкубации при температуре (37±1) °С бесцветные, прозрачные, круглые, диаметром 2,0-3,0 мм. Среда содержит высокую концентрацию углевода и низкую концентрацию пептического перевара животной ткани для того, чтобы образующиеся в ходе ферментации пептона амины не могли нейтрализовать кислоту, которая, например, в небольшом количестве образуется при окислении углевода (2). Фосфат придает буферные свойства среде. Концентрация агар-агара позволяет определять подвижность микроорганизмов и способствует распространению кислоты в среде. Микроорганизмы, окисляющие углевод, продуцируют кислоту в аэробных условиях, а в анаэробных не растут и не образуют кислоту, тогда как ферментирующие образуют кислоту в обеих пробирках (в аэробных и анаэробных условиях). Солевой агар Тип среды:Элективная Состав:Питательная основа - питательный агар (мясо-пептонный агар) Элективный фактор - 10% хлорида натрия Принцип действия:Высокая концентрация хлорида натрия подавляет рост большинства микроорганизмов. Стафилококки при концентрации соли 10% не подавляются и формируют на среде изолированные колонии. Назначение:Выделение стафилококков с одновременным подавлением сопутствующей микрофлоры. Солевой бульон. Тип среды:Обогатительная (с селективными свойствами) Состав:Питательная основа - питательный бульон (мясо-пептонный бульон) Элективный фактор - 10% хлорида натрия Принцип действия:Высокая концентрация хлорида натрия подавляет рост большинства микроорганизмов. Стафилококки при концентрации соли 10% размножаются. Если в исходном материале стафилококков было мало, то после инкубации их концентрация увеличится и при высеве из накопительной среды на плотную мы получим рост колоний стафилококков. Назначение:Накопление стафилококков с одновременным подавлением сопутствующей микрофлоры. Среда Вильсона-Блер-ДИФЕРЕНЦИАЛЬНАЯ плотная селективная питательная среда для анаэробных бактерий, содержа щая сернистокислый натрий ихлорное железо; анаэробные бактерии образу ют колонии черного цвета в результате образованиясернистого железа. Готовится из питательного агара, к которому добавляют 1% глюкозы, хлорид железа и сульфит натрия. Анаэробные клостридии(Clostridium perfringens) образуют на среде колонии черного цвета за счет образования соединений железа с серой Принцип действия Глюкоза является дыхательным субстратом и используется в энергетических анаэробных процессах. C.perfringens восстанавливает сульфит натрия до сульфида, который, взаимодействуя с ионами железа образует черное нераствориемое соединение - сульфид железа. назначение Обнаружение сульфитредуцирующих клостридий (в первую очередь Clostridium perfringens) Среда Китт-Тароцци. Среда Китта - Тароцци. Готовится на основе бульона Хоттингера с добавлением кусочков печени или мяса и разливается по пробиркам. Используется в качестве среды накопления. После посева патологического материала для прекращения диффузии кислорода воздуха поверхность питательной среды заливают небольшим слоем вазелинового масла или расплавленного парафина. Помещение в питательную среду кусочков печени, головного мозга, почек и других внутренних органов. При этом тканевые клетки активно поглощают и адсорбируют на себе кислород, в результате чего в среде создаются анаэробные условия. Примером питательной среды, сконструированной по этому принципу, является содержащая кусочки печени среда Китта - Тароцци. Среда Плоскирева. Тип среды Элективно-дифференциальная Состав Питательная основа - питательный агар (мясо-пептонный агар) Дифференцирующий фактор - лактоза Элективный фактор - соли желчных кислот Индикатор - нейтральный красный Принцип действия: Соли желчных кислот подавляют рост сопутствующей микрофлоры. Поскольку полного подавления не происходит, колонии вырастающих микроорганизмов можно дифференцировать по способности расщеплять лактозу. В питательной среде накапливаются кислые метаболиты. В кислой среде нейтральный красный окрашивает лактозоположительные колонии в красный (брусничный) цвет. Среды «пестрого ряда» Среда Эндо. Среда Эндо - плотная, сложная питательная дифференциально- диагностическая среда. Применяется для посева и выделения энтеробактерий. Состав: МПА - питательная основа; лактоза - дифференциальный фактор; фуксин, нейтрализованный гипосульфитом - индикатор PH. Принцип работы среды - если выросшие микроорганизмы расщепляют лактозу, среда закисляется, PH меняется в кислую сторону, колонии будут окрашенными в тёмнокрасный цвет иногда с металлическим блеском. Так выглядят на этой среде колонии кишечной палочки. Шигеллы. сальмонеллы не расщепляют лактозу и поэтому их колонии окрашены в цвет среды. Тиогликолевая среда Тип среды: Среда для анаэробов (обогатительная) Состав :Питательная основа - питательный бульон (мясо-пептонный бульон) + 0,1% агар-агара Дыхательный субстрат - глюкоза Редуцирующий фактор - тиоловые соединения (тиогликолят натрия и цистеин) Принцип действия:Глюкоза является дыхательным субстратом и используется в энергетических анаэробных процессах. Тиоловые соединения связывают токсичные формы кислорода и снижают окислительно- восстановительный потенциал среды. Небольшое количество агар-агара повышает вязкость среды и уменьшает насыщение среды кислородом в результате конвекции. Назначение:Накопление анаэробных микроорганизмов. Фаготипирование. Фаготипирование - один из методов эпидемиологического маркирования. Применяется для выявления источника инфекции. Выделение бактерий одного фаговара от разных больных указывает на общий источник их заражения. При внутривидовой идентификации бактерий, т.е. при определении фаговара (фаготипа) бактерий с помощью фаготипирования, на чашку Петри с плотной питательной средой, засеянную чистой культурой возбудителя в виде газона, наносят капли различных диагностических ти-поспецифических фагов. Бактерии, чувствительные к фагу, лизируются (образуется стерильное пятно, бляшка, или так называемая негативная колония фага) Фаготипирование микроорганизмов можно проводить двумя методами. Первый метод фаготипирования, наиболее часто применяемый в практике, основан на определении чувствительности исследуемой культуры к стандартным препаратам специфических бактериофагов, взятых в определённом разведении. Второй метод фаготипирования бактерий заключается в разделении их на группы по характеру выделяемых из культур умеренных фагов. В медицинской практике этот метод используется очень редко, а в ветеринарной – вообще не применяется. |