микра. Микробиология. Блок 1
 Скачать 1.47 Mb.
|
|
Микробиология. БЛОК 1 1. Бактериоскопический метод диагностики. Достоинства метода. 2. Бактериоскопический метод диагностики. Недостатки метода. 3. Жгутики. Строение, функции, методы выявления. 4. Заслуги отечественных ученых в развитии микробиологии. 5. Иммерсионный микроскоп. Принцип работы. Сфера применения. 6. Капсула. Строение, функции, методы выявления. 7. Кислотоустойчивые бактерии: особенности строения и методы выявления. 8. Клеточная стенка, особенности строения и методы выявления. 9. Люминесцентный микроскоп. Принцип работы. Сфера применения. 10.Морфологические и тинкториальные свойства бактерий. Методы изучения. 11.Окраска по Граму. Техника и принцип метода. КОН - тест. Принцип метода и его практическое значение. 12.0сновные группы микроорганизмов. Значение в патологии человека. 13. Предмет и задачи медицинской микробиологии. 14. Принципы классификации микроорганизмов. Понятие о виде и штамме. 15. Световой микроскоп. Показатели качества: разрешающая способность, увеличение. 16. Спора. Строение, функция, методы выявления. 17. Темнопольный микроскоп. Принцип работы. Сфера применения. 18. Фазово - контрастный микроскоп. Принцип работы. Сфера применения. 19. Этапы развития микробиологии. Работы основоположников микробиологии. БЛОК 2 1. Бактериологический метод диагностики. Достоинства и недостатки. 2. Бактериологический метод диагностики. Основные этапы. 3. Биохимические свойства бактерий. Механизмы изучения. 4. Влияние физических факторов на жизнедеятельность микроорганизмов. 5. Влияние химических факторов на жизнедеятельность микроорганизмов. 6. Классификация питательных сред. Особенности состава и применения. 7. Культивирование. Рост и размножение бактерий на жидких питательных средах. 8. Культуральные свойства. Колония и ее характеристики. 9. Метаболизм бактерий. Катаболизм, анаболизм. 10. Методы контроля режима стерилизации. Контроль стерильности. 11.Методы культивирования бактерий. Непрерывное и периодическое 12.Методы культивирования облигатно - анаэробных микроорганизмов. 13.Основные группы дезинфектантов. Механизмы действия. 14.Паровой и воздушный методы стерилизации. Режимы, области применения. 15Литательные среды. Классификация. 16.Способы получения энергии бактериями. Мембранное и субстратное фосфорилирование. 17.Стерилизация. Методы стерилизация, используемые в медицине и 18.Чистая культура. Методы выделения чистой культуры бактерий 19.Экзо - и эндоферменты, адаптавные и конститутивные ферменты. БЛОК 3 1. Антибиотики. Механизм действия на бактериальную клетку. 2. Антимикробные препараты. Классификация. Требования, предъявляемые к препаратам 3. Бактериофаги. Строение. Этапы и исходы взаимодействия вирулентных фагов с клеткой. 4. Бактериофаги. Этапы и исходы взаимодействия умеренных фагов с клеткой. 5. Генетические рекомбинации. 6. ПЦР. Достоинства и недостатки метода. 7. Геном бактерии. Особенности организации и функционирования нуклеотида. 8. Плазмиды бактерий. Строение. Функции. 9. Изменчивость микроорганизмов, ее формы и практическое значение. 10. Лекарственная устойчивость бактерий. Предупреждение формирования и преодоление резистентности. Лекарственная устойчивость микроорганизмов. Биохимические механизмы резистентности. 12. Лекарственная устойчивость микроорганизмов. Генетические механизмы резистентности 13. Методы внутривидового типирования и его значение. 14. Методы определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам. Их достоинства и недостатки. 15.Мутации. Классификация. Роль в изменчивости бактерий. 16.Осложнения и побочные эффекты антибиотикотерапии. 17.УИрименение бактериофагов в медицине и микробиологии. 18.Формы, биологические значение, выявление антагонизма у микробов. 19. Биопленки.Строение. Роль в медицине. Практические навыки 1. Диско - диффузионный метод определения чувствительности к антибиотикам. 2. Желточно - солевой агар. 3. Метод серийных разведений в жидкой питательной среде. 4. Метод серийных разведений в плотной питательной среде. 5. Молоко по Тукаеву. 6. Сахарно - кровяной агар Цейсслера. 7. Селенитовый бульон. 8. Солевой агар. 9. Солевой бульон. 10. Среда Вильсона - Блер. 11. Среда Китт - Тароцци. 12. Среда Плоскирева. 13. Среда Эндо. 14. Среды «пестрого ряда» 15. Тиогликолевая среда (СКС). 16. Фаготипирование. 1. Бактериоскопический метод диагностики. Достоинства метода Бактериоскопический метод – метод диагностики инфекционных заболеваний. Основан на: выявлении в исследуемом материале возбудителя идентификации возбудителя по морфологическим и тинкториальным свойствам. Достоинства бактериоскопического метода простота исполнения быстрое получение результатов техническая и экономическая доступность. Техника выполнения Материал от больного визуально изучается, выбирается порция, в которой с наибольшей долей вероятности может быть обнаружен возбудитель заболевания (комочки слизи, гнойные пробки). Он наносится на предметное стекло (иногда материал предварительно эмульгируется в физиологическом растворе, реже подвергается центрифугированию). Капля распределяется по стеклу, высушивается и фиксируется. После этого мазок окрашивается, и препарат просматривается под микроскопом. Обычно мазок окрашивается по Грамму. Иногда, как наиболее щадящий, применяется один из простых методов окраски, тогда препарат красится одним красителем (например, при диагностике менингококковой инфекции, холеры). 2. Бактериоскопический метод диагностики. Недостатки метода Бактериоскопический метод – метод диагностики инфекционных заболеваний. Основан на: выявлении в исследуемом материале возбудителя идентификации возбудителя по морфологическим и тинкториальным свойствам. Недостатки метода Малая информативность Морфологических и тинкториальных свойств недостаточно для идентификации подавляющего большинства возбудителей Нет возможности определить чувствительность возбудителя к антимикробным препаратам Нет возможности выявить источник инфекции, пути и факторы передачи возбудителя Низкая чувствительность Возбудителя в исследуемом материале должно быть много. Если возбудитель не обнаружен - это не значит, что его нет Субъективность Результат зависит от уровня подготовки врача - микроскописта. Техника выполнения Материал от больного визуально изучается, выбирается порция, в которой с наибольшей долей вероятности может быть обнаружен возбудитель заболевания (комочки слизи, гнойные пробки). Он наносится на предметное стекло (иногда материал предварительно эмульгируется в физиологическом растворе, реже подвергается центрифугированию). Капля распределяется по стеклу, высушивается и фиксируется. После этого мазок окрашивается, и препарат просматривается под микроскопом. Обычно мазок окрашивается по Грамму. Иногда, как наиболее щадящий, применяется один из простых методов окраски, тогда препарат красится одним красителем (например, при диагностике менингококковой инфекции, холеры). 3. Жгутики. Строение, функции, методы выявления. Жгутик состоит из трех основных частей : Ось с дисками в клеточной стенке и цитоплазматической мембране Крюк Длинный гибкий жгутик, состоящий из белка - флагеллина Жгутики обладают вращательным типом движения. По расположению и количеству жгутиков выделяют ряд форм бактерий. Монотрихи - имеют один полярный жгутик. Лофотрихи - имеют полярно расположенный пучок жгутиков. Амфитрихи - имеют жгутики по диаметрально противоположным полюсам. Перитрихи - имеют жгутики по всему периметру бактериальной клетки. Бактерии, лишённые жгутиков, называются атрихами . Функция жгутиков : движение бактериальной клетки может служить органом адгезии Методы выявления жгутиков Косвенные Прямые. Косвенно жгутики можно выявить по факту подвижности бактериальных клеток При прямом обнаружении жгутиков их непосредственно наблюдают в микроскоп. метод Морозова основан на обволакивании жгутика тонким слоем солей серебра или ртути. При этом жгутик, не меняя своей формы, становиться чуть толще. Этого достаточно, чтобы структура стала видимой. Хорошо жгутики видны при использовании электронного микроскопа. 4. Заслуги отечественных ученых в развитии микробиологии О существовании живых микроорганизмов человечество узнало лишь, после того, как были изобретены оптические приборы. В XVIII в. русский врач Д. С. Самойлович (1744— 1805), работая в районах чумных эпидемий в России, высказал мысль о существовании мельчайшего живого возбудителя этой страшной болезни. Лишь в XIX в. было установлено, что микроорганизмы являются возбудителями заразных болезней животных и человека. Этот период связан с именами И. И. Мечникова, Л. Пастера, Р. Коха и других ученых. И. И. Мечников (1845— 1915) —крупнейший русский ученый, один из основоположников мировой и отечественной микробиологии. И. И. Мечников создал учение о фагоцитозе и его роли в иммунитете и одним из первых разработал учение об антагонизме микробов, которое явилось теоретической основой для получения таких средств, как антибиотики. Он развил учение о причинах старения организма и указал путь к долголетию. Особую роль в истории отечественной и мировой микробиологии сыграл Д. И. Ивановский (1864— 1920). Изучая так называемую мозаичную болезнь листьев табака, он обнаружил микроорганизмы, которые получили название фильтрующихся вирусов. Д. И. Ивановский доказал, что эти микробы невидимы под микроскопом и не растут на обычных питательных средах. Это замечательное открытие явилось началом новой науки — вирусологии. Большой вклад в развитие микробиологии внес Л. С. Ценковский (1822— 1887). Особенно известны его работы «О низших водорослях и инфузориях» и о борьбе с сибирской язвой. Л. С. Ценковский разработал метод изготовления вакцины против сибирской язвы. Эта вакцина с успехом применяется в России в ветеринарной практике до настоящего времени. Большие заслуги в развитии отечественной микробиологии принадлежат академику Н. Ф. Гамалея (1859— 1949). Им была организована в 1886 г. вторая в мире пастеровская станция. Н. Ф. Гамалея выполнил ценные работы по эпидемиологии чумы и некоторым вопросам бактериологии туберкулеза. В советский период Н. Ф. Гамалея подготовил целую плеяду микробиологов. Особенно велики его заслуги в области ликвидации оспы в нашей стране. Характерной чертой русских ученых была их готовность к самопожертвованию во имя науки. 5. Иммерсионный микроскоп. Принцип работы. Сфера применения. М икроскоп - это оптический прибор, позволяющий получить обратное изображение изучаемого объекта и рассмотреть мелкие детали его строения В микроскопе выделяют две части: 1. Оптическую 2. Механическую К оптической части относят: Объектив - система неравнозначных линз, главная из которых - передняя фронтальная линза, которая увеличивает в 90 раз, но дает искажение - аберрации. Поэтому в объективе находится корригирующие линзы. Окуляр - система увеличивающих линз, которая увеличивает изображение данное объективом. Увеличение окуляров обозначено на них цифрами: х7, х10, х15 Конденсер Аббе - система собирающих линз которые находятся под предметным столиком и служат для концентрации светового потока от зеркала. Зеркало - служит для направления света через конденсор и отверстие предметного столика на объект. Аберрации бывают: сферические хроматические Сферические аберрации возникают за счет того что лучи не пересекаются в одной точке. Хроматические аберрации возникают за счет разложения белого света на составные части. Механическая часть микроскопа состоит: Подставка - это основание микроскопа. Коробка с микрометренным механизмом, построенном на принципе взаимодействующих шестерен, прикреплена к подставке неподвижно Тубус - цилиндр, в который сверху вставляют окуляры Предметный столик предназначен для расположения на нем препарата. Кронштейн конденсора подвижно присоединен к коробке микрометренного механизма Иммерсионная система - оптическая система, в которой пространство между объективом и стеклом заполнено жидкостью. Применяемая таким образом жидкость называется иммерсионной. Иммерсионное масло создает оптическую однородную среду между объективом и стеклом. Принцип работы. Сфера применения Иммерсионная система применяется для исследования микроорганизмов. Преимущество по сравнению с сухой системой : устанавливается однородная среда с одинаковым показателем преломления между объективом и стеклом падающие лучи, не подвергаясь преломлению и изменению направления, попадают в объектив достигается наилучшее освещение. 6. Капсула. Строение, функции, методы выявления. Капсула – диффузный, однородный , слизистый слой, расположенный с наружной стороны клеточной стенки бактерии Состоит из : полисахаридов или полипептидов Функции : защитная антигенная запас веществ адгезия Методы выявления: Метод окраски по Бурри - Гинсу Используется для окраски капсульных бактерий. Основан на том, что капсула не воспринимает красители. Капсулу выявляют негативным контрастированием фона по Бурри. Для этого черную тушь смешивают в культурой и высушивают. После этого проводят фиксацию в пламени горелки Окрашивают тела микробных клеток по Гинсу - водным фуксином в течение 1 минуты Промывают водой 5 - 10 секунд. NB! В результате на темном фоне хорошо видна бесцветная капсула и красные тела микробов 7. Кислотоустойчивые бактерии: особенности строения и методы выявления. КИСЛОТОУСТОЙЧИВЫЕ БАКТЕРИИ — группа бактерий, не теряющих жизнеспособность после воздействия на них разведёнными кислотами и щелочами. Стенка кислотоустойчивых бактерий состоит из 3 слоев : Липиды Белки Полисахариды Особенности : Клеточная стенка кислотоустойчивых бактерий отличается высоким содержанием липидов. Кислотоустойчивые бактерии с трудом окрашиваются, но затем удерживают основной краситель при обесцвечивании кислотой. Некислотоустойчивые бактерии легко окрашиваются, а затем легко обесцвечиваются кислотой и окрашиваются дополнительным красителем. Методы выявления : Метод Циля - Нильсена для дифференциации кислотоустойчивых бактерий (возбудителей туберкулеза) от некислотоустойчивых. Мазок окрашивают карболовым фуксином Циля (основной краситель) при нагревании 3 - 5 мин. Обесцвечивают раствором серной кислоты (дифференцирующее вещество) в течение 1 - 2 мин. Промывают водой. Докрашивают 3 - 5 мин метиленовым синим (дополнительный краситель). NB! Кислотоустойчивые микроорганизмы окрашиваются в красный цвет, некислотоустойчивые в синий 8. Клеточная стенка, особенности строения и методы выявления. Клеточная стенка является обязательным структурным элементом бактериальной клетки Особенности строения : Опорный каркас клеточной стенки бактерий — пептидогликан (муреин) Остов молекулы пептидогликана — дисахарид Его образуют N - ацетилглюкозамин и N - ацетилмурамовая кислота, соединённые через n- гликозидные связи. К молекуле N - ацетилмурамовой кислоты присоединяются олигопептиды, образующие боковые цепочки Клеточная стенка способна по - разному воспринимать красители; на этом основаны тинкториальные свойства бактерий. На поверхности располагаются рецепторы для бактериофагов, бактериоцинов и различных химических веществ. Нарушение синтеза компонентов клеточной стенки приводит к гибели бактерии. Функции клеточной стенки: защищает бактерии от внешних воздействий придаёт им характерную форму поддерживает постоянство внутренней среды участвует в делении осуществляет транспорт питательных веществ выделение метаболитов В 1884 г. датский биолог Кристиан Грам разработал метод окрашивания, с помощью которого было установлено, что бактерии подразделяются на две естественные группы, что обусловлено различиями в строении их клеточной стенки |