Бактерийные и вирусные препараты для профилактики, лечения и диагно. Бактерийные и вирусные препараты для профилактики, лечения и. Министерство здравоохранения СССР московский ордена ленина и ордена трудового
 Скачать 387.5 Kb.
|
|
тиоцианат флюоресцеина, дающий ярко-зеленое свечение по периферии клеток с характерной для данного вида бактерий морфологией; реже — различные производные родамина, ко- торые придают оранжево-красное свечение. Приготовление препаратов для люминесцентной микроско- пии несложно: исследуемую взвесь, содержащую микроорга- низмы, наносят на предметное стекло, высушивают, фиксиру- ют в жидком фиксаторе (этанол, ацетон и др.), окрашивают 32 люминесцирующей сывороткой в течение времени, указанного на этикетке ампулы с сывороткой. Просматривают препараты в падающем свете люминесцентного микроскопа с иммерсион- ной системой. Интенсивность свечения оценивается по четырехплюсовой системе: + + + +—очень яркое свечение по периферии бактерий, контрастируемое с темным телом микроорганизма; + + +—яркая флюоресценция периферии изучаемого мик- роорганизма; + + или +—слабое свечение периферии клетки, не контрастируе- мое с телом бактерии. Метод люминесцентной микроскопии широко используется с диагностической целью — для выявления патогенных микро- организмов в патологическом материале от больного, обнару- жения бактерий непосредственно в объектах внешней среды (воды, смывы, почвы и т. д.), а также при определении и тит- ровании антител в сыворотке больных. Люминесцентно-серологический метод (метод Кунса) для выявления микроорганизмов и антител используется в 2 мо- дификациях: прямой и непрямой метод. 1. Прямой метод заключается в том, что исследуемый пре- парат обрабатывается люминесцентной сывороткой, специфи- ческой в отношении изучаемого микроорганизма. В результа- те образуется флюоресцирующий комплекс антиген — анти- тело. В настоящее время выпускаются Люминесцирующие сыво- ротки: колиэнтеритные, брюшнотифозные, паратифозные А и В, дизентерийные Флекснера и Зонне, холерная, бруцеллез- ная, туляремийная, сибиреязвенная, чумная. 2. Непрямой метод может быть использован как для вы- явления бактерий, так и определения антител. Сущность не- прямого метода состоит в том, что сначала проводится обыч- ная иммунная реакция между антигенами и специфическими к ним антителами, затем этот комплекс обрабатывается лю- минесцирующей антисывороткой, специфичность антител ко- тсрой направлена против белков сыворотки того вида живот- пего, от которого получена иммунная сыворотка. Результатом является флюоресцирующий комплекс: антиген — антитело — антиантитело. Для постановки непрямого метода выпускаются Люминесцирующие сыворотки против глобулинов кролика, человека, лошади и др. 33 Этот метод имеет определенное преимущество перед пря- мым, так как является в 10—12 раз более чувствительным и для его постановки можно в лаборатории иметь ограниченный набор люминесцирующих сывороток. Следует подчеркнуть те несомненные преимущества метода люминесцирующих антител, благодаря которым в настоящее время он широко применяется в практике. Во-первых, реак- ция позволяет наблюдать соединение антигена бактерий с антителами буквально на одной особи и, следовательно, ха- рактеризуется высокой чувствительностью, во-вторых, реакция является универсальной (так как может использоваться для обнаружения бактерий, вирусов, риккетсий и их растворимых антигенов), и в-третьих, реакция характеризуется простотой приготовления препаратов и быстрым получением ответа, и, наконец, позволяет исследовать не только живые, но и погиб- шие микроорганизмы. Люминесцентная микроскопия используется для экспресс- диагностики инфекционных заболеваний. III. ДИАГНОСТИКУМЫ В диагностических целях при обнаружении антител в сы- воротке крови больных, реконвалесцентов и бактерионосите- лей используются серологические реакции. Для постановки таких реакций применяются диагностику- мььпрепараты, содержащие взвесь обезвреженных микроор- ганизмов или определенные антигены. Необходимость использования диагностикумов для сероло- гических реакций связана не только с явным их преимущест- вом перед живыми культурами микробов (безопасность в ра- боте), но еще и потому, что для приготовления диагностику- мов подбираются штаммы микроорганизмов с высокой чувст- вительностью к антителам и способностью длительно сохра- нять антигенные свойства. Для инактивации микроорганизмов при приготовлении диагностикумов чаще всего используются химические вещест- ва, особенно формалин, являющийся лучшим консервантом. Убитые нагреванием микробы хуже сохраняют антигенные свойства и применяются редко. В серологических реакциях (реакции агглютинации, реак- ции пассивной гемагглютинации, реакции связывания компле- мента, реакции торможения гемагглютинации) для выявления 34 \ специфических антител применяются: бактериальные, эритро- цитарные и вирусные диагностикумы. Бактериальные диагностикумы могут содержать инак- . тивированную микробную взвесь или отдельные антигенные компоненты бактерий: О, Н или Vi-антигены и используются в реакциях агглютинации. Эритроцитарные диагностикумы представляют собой эритроциты (обработанные танином или формалином) с ад- сорбированными на них антигенами, извлеченными из бакте- рий, и применяются в РПГА (реакции пассивной гемагглю- тинации). В том случае, когда РПГА используется для выяв- ления антигена в выделениях больных, в тканях и др., при- меняют «аитительные диагностикумы», т. е. эритроциты, сен- сибилизированные антителами. Вирусные диагностикумы — препараты, содержащие инактированные вируссодержащие жидкости (культуральные, из куриных эмбрионов или организма животных, зараженных соответствующим вирусом), применяются в РСК. (реакции связывания комплемента), реакции торможения гемагглюти- нации (РТГА) и реакции нейтрализации. В настоящее время в лабораториях используются следу- ющие диагностикумы. 1 .Бактериальный диагностируй сальмонелл тифа (или сальмонелл паратифа А и В, шигелл Флекснера, Зонне и др. бактерий семейства Enterobacteriaceae) является 3-млрд. взвесью бактерий, инактивированных формалином, и приме- няется в реакции агглютинации для обнаружения антител в сыворотке больных. 2. Сальмонеллезные О-диагностикумы содержат О-анти- гены различных групп сальмонелл (инактивированных 15%- ным раствором глицерина). Применяются для выявления О-антител при сальмонеллезных инфекциях в реакции агглю- тинации с сывороткой больных. 3. Сальмонеллезные Н-монодиагностикумы (Н-антигены 1 и 2-й фазы) — представляют собой жгутиковые антигены 1-й фазы (а, в, с, е, eh и др.) и 2-й фазы (1, 2, 5, 6, 7), выде- ленные путем обработки 0,5—0,75%-ным формалином из буль- онной культуры сальмонелл соответствующих видов и исполь- зуются в реакции агглютинации для определения заболевания в прошлом (анамнестическая реакция агглютинации) и реж-е с диагностической целью. 4. Vi — брюшнотифозный диагностикум — препарат, полу- ченный из S. typhi в Vi — форме воздействием формалина, при- 35 меняется в реакции агглютинации при выявлении брюшноти- фозного бактерионосительства. 5. Единый бруцеллезный диагностикум — взвесь бруцелл (инактивированных фенолом), подкрашенная метиленовым синим. Единый диагностикум применяется для определения антител в сыворотках крови больных бруцеллезом людей и животных в реакциях агглютинации Райта и Хеддльсона. 6. Эритроцитарный сальмонеллезный О-диагностикум — взвесь эритроцитов с адсорбированными на них О-антигенами. различных групп сальмонелл. Используется для постановки РПГА с сывороткой больного при уточнении клинического диагноза сальмонеллезной инфекции. 7. Эритроцитарный Vi-диагностикум — эритроциты, сенси- билизированные очищенным Vi-антигеном S. typhi, применяет- ся в РПГА при выявлении брюшнотифозного бактерионоси- тельства. 8. Гриппозный диагностикум представляет собой алланто- исную жидкость инфицированных вирусом гриппа (типов А, В) куриных эмбрионов и инактивированную мертиолатом или формалином. Диагностикумы необходимы при постановке РТГА с парными сыворотками больных для уточнения кли- нического диагноза и циркулирующего типа вируса гриппа. 9. Диагностикум вируса клещевого энцефалита получают из суспензии мозга белых мышей, зараженных вирусом кле- щевого энцефалита. Суспензию подвергают центрифугирова- нию (для осветления) и инактивируют химическими вещест- вами. Диагностикум используется в РТГА и РСК. с сывороткой больных при диагностике заболевания. IV. АЛЛЕРГЕНЫ И ТОКСИНЫ ДЛЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ КОЖНЫХ ПРОБ Аллергены бактериальные или инфекционные представля- ют собой взвесь убитых микробных клеток или извлеченных из них различных фракций и применяются в качестве диагно- стических препаратов для выявления повышенной чувстви- тельности организма к возбудителям инфекционных заболе- ваний. Бактериальные экзотоксины (дифтерийный, скарлатиноз- ный), используются для кожных проб при определении анти- токсического иммунитета к этим заболеваниям. 36 Аллергические кожные пробы применяются с целью диаг- ностики при многих инфекционных заболеваниях, сопровож- дающихся аллергической перестройкой организма. В зависи- мости от способа введения аллергена кожные пробы могут быть аппликационные — при определении чувствительности к некоторым лекарственным, химическим веществам; скарифи- кационные — при определении чувствительности к бытовым, пыльцевым, эпидермальным аллергенам и внутрикожные — при определении чувствительности к бактериальным и гриб- ковым аллергенам. Диагностическое значение реакций организма на аллерге- ны различно в течение инфекционного процесса. В начале ин- фекционного процесса положительная реакция свидетельству- ет только о зараженности определенным возбудителем и со- стоянии аллергии к нему и не может расцениваться как диагностическая. В разгар заболевания аллергическая проба учитывается как диагностическая. После некоторых инфекци- онных болезней остается аллергия к соответствующему возбу- дителю в течение нескольких лет, обнаружение которой сви- детельствует о перенесенной инфекции. При положительной реакции на аллерген, учитываемой через 20 минут, а затем через 24 и 48 часов (редко 7 суток), ощущается чувство жже- ния на месте введения препарата, появляется покраснение, отек, может быть везикула. Аллергены, применяемые с диагностической целью, разно- образны по химической природе и методам получения. Ниже приводится описание некоторых диагностических • препаратов, вошедших в широкую практику. 1. Туберкулин. В настоящее время выпускаются три пре- парата для проведения аллергических туберкулиновых проб: альттуберкулин Коха, сухой очищенный туберкулин (РРД) и очищенный туберкулин в стандартном разведении. Альттуберкулин Коха (АТК)—желтовато-коричневая жид- кость, получаемая в результате выпаривания до 1/10 перво- начального объема 5—6-недельной культуры микобактерий, выращенной на глицериново-мясо-пептонном бульоне. Старый туберкулин Коха содержит продукты жизнедеятельности и распада микобактерий и питательную среду. Препарат дол- жен содержать не менее 90000 ТЕ (туберкулиновых единиц) в 1 мл. Альттуберкулин рекомендуется применять только для на- кожных проб Пирке. Сухой очищенный туберкулин (РРД)— (Derivatum protei- 37 I nos purificatum tuberculini mammalinii) представляет собой белковый препарат, полученный из фильтрата культуры мико- бактерий туберкулеза осаждением химическими веществами с последующей очисткой. В 1 мл очищенного сухого туберкули- на содержится 50000 ТЕ. Препарат применяется для внутри- кожных проб по Манту, подкожной пробы Коха и других те- стов. Очищенный туберкулин в стандартном разведении (РРД-2) приготовлен из порошка-туберкулина разведением его в ра- створителе (твин-80), обеспечивающим стабилизацию биоло- гической активности препарата — 2 или 5 ТЕ в 0,1 мл. Применяется только для постановки внутрикожных проб по Манту. Преимуществом очищенных туберкулинов является их большая чувствительность и стандартность. Туберкулиновая диагностика проводится с целью опреде- ления инфицированности населения, особенно детей и подро- стков, туберкулезом; при отборе людей, подлежащих привив- кам против туберкулеза; определения эффективности вакци- нации и т. д. При массовой туберкулиновой диагностике применяют внутрикожную пробу Манту, используя очищенный туберку- лин в стандартном разведении. При отсутствии у обследуемого человека инфицированно- сти микобактериями туберкулеза наблюдается отрицательная реакция; при размере инфильтрата 2—4 мм — проба сомни- тельная, поэтому реакцию следует повторить через 3—4 неде- ли. Если инфильтрат более 5 мм — реакция расценивается как положительная. 2. Тулярин содержит убитые нагреванием при 70°С мик- роорганизмы в 3%-ном глицерине, применяется для внутри- кожного введения при диагностике туляремии, начиная с 3—5-го дня болезни. Проба с тулярином применяется также для определения посгвакцинального иммунитета. 3. Бруцеллин — представляет собой фильтрат 3-недельной (убитой нагреванием) бульонной культуры всех трех видов бруцелл. Препарат вводится строго внутрнкожно при диагностике бруцеллеза и при определении иммунитета у вакцинирован- ных людей (кожная проба Бюрне). 4. Токсоплазмин — антигенный комплекс, полученный из экссудата брюшной полости мышей, зараженных внутри- 38 брюшинно возбудителем токсоплазмоза. Препарат не должен содержать жизнеспособных токсоплазм. Токсоплазмин применяется для диагностики при заболе- ваниях, подозрительных на токсоплазмоз — при акушерской патологии, поражении глаз, лихорадках неясной этиологии и т. п. 5. Антраксин — препарат, содержащий белково-полисаха- ридно-нуклеиновый комплекс, полученный путем гидролиза сибиреязвенных бацилл. Антраксин используется для диагно- стики у больных сибирской язвы, для определения состояния аллергии у иммунизированных людей и у перенесших эту ин- фекцию. Аллергическая проба положительна уже в первые дни заболевания. 6. Дизентерии — является белковой фракцией двух возбу- дителей дизентерии шигелл Флекснера и Зонне и использует- ся в качестве дополнительного средства диагностики при подозрении на дизентерийную этиологию желудочно-кишечно- го заболевания у людей всех возрастов. 7. Бактериальные аллергены из таких микроорганизмов как стафилококки, стрептококки, пневмококки, нейссерии ка- таральные, эшерихии, энтерококки, протеи, ложнодифтерий- ные палочки получают в виде очищенных термостабильных фракций фильтратов 5—6-суточной бульонной культуры (ме- тод Андо-Вержиковского) или в виде нативных препаратов — инактнвированной взвеси бактерий, содержащей и продукты метаболизма. Очищенные бактериальные аллергены пред- ставляют собой извлеченные из микроорганизмов белки (до 83%) с небольшой примесью Сахаров и нуклеиновых кислот. Препараты предназначены для выявления повышенной чувст- вительности организма к микроорганизмам, из которых они получены. Бактериальные экзотоксины (дифтерийный и скарлатиноз- ный) применяются для определения антитоксического имму- нитета к дифтерии в реакции Шика и к скарлатине в реакции Дика. Дифтерийный токсин готовят из очищенного экзотоксина, после двухлетней выдержки, разведением в глицерино-жела- тиновой смеси с таким расчетом, чтобы в 0,2 мл содержалось 1/40 Dim для морской свинки. Токсин вводят в дозе 0,2 мл строго внутрикожно в среднюю часть ладонной поверхности предплечья. При положительной реакции на токсин (т. е. при отсутствии антитоксического иммунитета у обследуемого), учитываемой через 72—96 часов, на месте введения появляет- |