Бактерийные и вирусные препараты для профилактики, лечения и диагно. Бактерийные и вирусные препараты для профилактики, лечения и. Министерство здравоохранения СССР московский ордена ленина и ордена трудового
 Скачать 387.5 Kb.
|
|
сина обозначается Limes flocculationis (Lf — порог флокку- ляции), это то количество анатоксина, которое вступает в ре- акцию флоккуляции с одной единицей дифтерийного антиток- сина. Определив дозу анатоксина, давшую инициальную (первичную) реакцию флоккуляции с одной антитоксической единицей сыворотки, рассчитывают количество Lf препарата в 1 мл. Антигенные свойства столбнячного ана- токсина (и некоторых других) обозначают в единицах связывания (ЕС). Для определения ЕС необходимы: испытуемый препарат анатоксина, стандартная антитоксиче- ская сыворотка (с содержанием 0,1 ME в 1 мл), опытная доза токсина (вытитрованная к 0,1 ME стандартной сыворотки), белые мыши. Реакцию связывания проводят следующим образом: в ряд пробирок с одинаковым объемом стандартной сыворотки до- бавляют различные разведения испытуемого анатоксина. Смесь для связывания выдерживают в термостате 45 минут, затем в каждую пробирку добавляют опытную дозу токсина и вновь оставляют в термостате на 45 минут. После этого из каждой пробирки вводят смесь (сыворотки — анатоксина — токсина) 2—4 мышам и наблюдают за состоянием животных в течение 4 суток. Если весь анатоксин, добавленный к сыво- ротке, связался ею, то добавление токсина и последующее заражение мышей ведет к их гибели. При недостаточной дозе анатоксина для связывания всей сыворотки, добавленный ток- син нейтрализуется сывороткой, и мыши остаются живыми. Для расчета ЕС в 1 мл определяемого анатоксина берет- ся то разведение анатоксина, при котором происходит гибель 18 50% белых мышей на 4-е сутки. Это количество анатоксина содержит дозу, связывающую 0,1 ME сыворотки. Анатоксины применяются для профилактики и реже для лечения токсинемических инфекций (дифтерия, газовая ган- грена, ботулизм, столбняк) и некоторых заболеваний, вызван- ных стафилококками. Анатоксины выпускаются в виде монопрепаратов и в со- ставе ассоциированных вакцин, предназначенных для имму- низации против нескольких заболеваний. 1. Дифтерийный анатоксин адсорбированный представляет собой фильтрат токсигенного штамма дифтерийной палочки «Парк Вильяме 8», обезвреженный по методу Рамона. В 1 мл анатоксина содержится 60 Lf (флоккулирующих единиц). Применяется для профилактики дифтерии в виде моно- анатоксина, чаще в составе АДС или АКДС. 2. Столбнячный анатоксин сорбированный — препарат, по- лученный из фильтрата бульонной культуры столбнячной па- лочки, обезвреженный по методу Рамона при 40°С. В 1 мл столбнячного анатоксина содержится не менее 20 ЕС. Применяется в составе АКДС для иммунизации против столбняка детей в возрасте от 6 месяцев до 5 лет с последую- щими ревакцинациями. 3. Дифтерийно-столбнячный анатоксин адсорбированный (АДС) содержит 60 Lf дифтерийного и 20 ЕС столбнячного анатоксина. АДС используют вместо вакцины АКДС при отсутствии необходимости иммунизации против коклюша. 4. Адсорбированная коклюшно-дифтерийно-столбнячная вакцина (АКДС) содержит коклюшные бактерии I фазы, уби- тые мертиолатом, дифтерийный и столбнячный анатоксины и служит для иммунизации детей против соответствующих ин- фекций. В 1мл АКДС содержится 30 Lf дифтерийного анаток- сина, 10 ЕС столбнячного анатоксина и 20 млрд коклюшных микробных тел. 5. Адсорбированный стафилококковый анатоксин — филь- трат бульонной культуры стафилококков, обезвреженный по методу Рамона. Препарат должен содержать 10 ЕС в 1 мл. Анатоксин применяют для профилактики и лечения раз- личных воспалительных процессов, вызываемых стафилокок- ками Стафилококковый анатоксин также рекомендуется для им- \ 4 Бактерийные и вирусные препараты мунизации беременных женщин с целью профилактики ста- филококковых заболеваний у новорожденных и матерей. 6. Ботулинический анатоксин выпускается в виде полиана- токсина, в препарате содержатся анатоксины, полученные из экзотоксинов возбудителя ботулизма А, В, С, Е. Для специфической профилактики полианатоксин рекомен- дуется вводить работникам лабораторий, имеющих контакт с ботулотоксином. 7. Анатоксины из экзотоксинов возбудителей газовой ган- грены Cl. perfringens и Cl. oedematiens входят в состав комп- лексного препарата — сорбированной брюшнотифозной вакци- ны с секстаанатоксином. И. СЫВОРОТКИ Для специфического лечения и экстренной специфической профилактики ряда инфекционных болезней применяют сы- воротки искусственно иммунизированных животных (в основ- ном лошадей). В качестве лечебно-профилактических сыво- роток используют и сыворотки крови людей, переболевших инфекционным заболеванием или иммунизированных соответ- ствующими вакцинными препаратами. Иммунные сыворотки применяют также в лабораториях с диагностическими целями при идентификации выделенных микроорганизмов. Диагностические сыворотки получают при иммунизации кроликов. 1. Лечебные сыворотки Преимущество лечебных сывороток перед вакцинными пре- паратами заключается в быстроте создаваемого пассивного иммунитета. Введенные иммуноглобулины способны немед- ленно нейтрализовать патогенные микроорганизмы и токсиче- ские продукты их жизнедеятельности. Однако гетерогенные (т. е. чужеродные) сыворотки обла- дают одним недостатком — кратковременностью обусловли- ваемого ими пассивного иммунитета. Быстрое выведение (через 1—2 недели) иммуноглобулинов из организма связано с есте- ственным процессом распада белков и действием образовав- шихся антител к введенным белкам — иммуноглобулинам. При введении гомологичной сыворотки (сыворотки чело- века) антитела циркулируют в организме в течение 4—5 не- 20 дель, обусловливая более длительное состояние невосприим- чивости, связанное с тем, что происходит медленный процесс разрушения введенных белков. Следует учитывать и то, что введение гетерогенных сыво- роток может вызвать побочные реакции — анафилактический шок или сывороточную болезнь. Анафилактический шок — аллергическая реак- ция немедленного типа, развивающаяся при повторном парен- теральном введении чужеродного белка. Характеризуется проявлением резкого возбуждения с последующим угнетением центральной нервной системы, бронхоспазмом, резким паде- нием артериального давления — коллапсом, иногда сопровож- дается судорогами. В целях профилактики развития анафи- лактического шока перед введением лечебных сывороток про- изводятся кожные тесты для выявления индивидуальной чув- ствительности к лошадиному белку. С этой целью используют лошадиную сыворотку, ампулы которой находятся в коробках с лечебно-профилактическими сыворотками. В сгибательную поверхность предплечья вводят 0,1 мл сыворотки, разведен- ной в 100 раз, и наблюдают в течение 20 минут. При наличии отрицательной реакции (диаметр папулы в месте инъ- екции не превышает 0,9 см, краснота незначительная) вводят лечебную сыворотку в дозе 0,1 мл подкожно и затем через 30—60 минут (при отсутствии реакции) всю необходимую до- зу сыворотки (метод десенсибилизации по Без- редке). При положительной реакции на лошадиный белок, свидетельствующей о повышенной чувствительности и воз- можности развития анафилактических реакций, лечебная сы- воротка вводится по жизненным показаниям (при прямой угрозе жизни больного) и с особыми предосторожностями только в присутствии врача. Сывороточная болезнь развивается через 6—14 дней после введения сыворотки и проявляется лихорадкой, наличием пятнисто-папулезной зудящей сыпи, лимфаденитом. Частота развития сывороточной болезни зависит от количест- ва введенного чужеродного белка. Для устранения этого ос- ложнения сыворотки подвергают очистке от балластных бел- ков. В настоящее время для очистки и концентрации антиток- сических сывороток — для выделения иммуноглобулинов — применяется м е то д «Д и а ф е р м - 3», который включает следующие этапы. I. Гипериммунная кровь от лошадей подвергается сепари- 2! рованию для отделения плазмы от форменных элементов крови. II. К плазме добавляют пепсин для ферментативного гид- ролиза сывороточных белков. III. Ферментированная плазма подвергается термоденату- рации при температуре 58°С в присутствии 14%-кого суль- фата аммония, что приводит к осаждению балластных белков, которые и удаляются. IV. Для высаливания активных глобулинов из оставшейся жидкой части плазмы добавляют 34% сульфата аммония. V. Проведение диализа осадка с глобулинами против про- точной воды для удаления сульфата аммония. VI. Дополнительная очистка диализата от оставшихся бал- ластных белков в присутствии хлороформа, который затем отделяется на сепараторах. VII. В заключение проводится осветление сыворотки и стерилизующая фильтрация. В процессе очистки и концентрации полностью удаляются альбумины и большая часть а -глобулинов, остаются f и (32 глобулины, которые составляют 90% антитоксинов. Кроме того, при протеолизе происходит глубокое изменение моле- кулы антитоксического антитела и уменьшаются его нежела- тельные свойства. По своей направленности и особенности действия лечеб- ные сыворотки можно разделить на следующие группы: анти- токсические, антибактериальные и антивирусные сыворотки (или гетерогенные иммуноглобулины) и иммуноглобулины гомологичные (получаемые из крови человека). Антитоксические сыворотки Антитоксические сыворотки получают иммунизацией лоша- дей возрастающими дозами анатоксинов, а затем и соответ- ствующими токсинами. Сыворотки подвергают очистке и кон- центрации методом «Диаферм-3»,контролю на безвредность, апирогенность, затем титруют т. е. определяют содержание антитоксинов в 1 мл препарата. Специфическая активность сывороток или количество антител измеряется с помощью специальных методов, основанных на способности сывороток in vitro и in vivo нейтрализовать соответствующие токсины и выражается в международных антитоксических единицах (ME), принятых ВОЗ. За 1 ME принимается то минимальное количество сыворотки, которое способно ней- трализовать определенную дозу токсина, выражающуюся в стандартных единицах, обозначаемых как смертельные, не- кротические или реактивные дозы в зависимости от вида ток- сина и способа титрования. Титрование антитоксических сывороток может проводить- ся тремя методами — методами Эрлиха, Рёмера, Района. Титрование сывороток по методу Района осуществляется с помощью реакции флоккуляции по извест- ному анатоксину или токсину, одну Lf (Limes flocculationis — порог флоккуляции) которых нейтрализует одна единица диф- терийного антитоксина. Первичная или инициальная реакция флоккуляции наступает при соответствии количества антигенных единиц анатоксина количеству антитоксинов в ис- следуемой сыворотке. Исходя из результатов первичной реак- ции флоккуляции и ведется расчет антитоксических единиц в 1 мл испытуемой сыворотки. Однако метод Рамона является только ориентировочным. Метод Эрлиха. Перед титрованием сывороток по ме- тоду Эрлиха проводят определение условной смертельной (опытной) дозы токсина Lt (Limes tod). Lt определяется с помощью стандартной антитоксической сыворотки, к опреде- ленному количеству которой добавляют различные объемы токсина и после выдерживания смеси при комнатной темпе- ратуре (в течение 45 минут) вводят белым .мышам или мор- ским свинкам. Затем наблюдают за животными четверо су- ток. За опытную дозу токсина (Lt) принимается то количест- во токсина, которое в смеси с 1 ME стандартной сыворотки вызывает гибель 50% взятых в опыт животных. На втором этапе титрования к различным разведениям испытуемой сыворотки добавляют опытную дозу токсина, смесь также выдерживают и вводят животным. По получае- мым результатам производят расчет титра испытуемой анти- токсической сыворотки. Метод Рёмера. Титрование антитоксических сывороток по методу Рёмера проводится также в два этапа, но является более экономичным, т. к. опыт проводится на одном живот- ном. Предварительно определяется опытная некротическая доза токсина — Ln (limes necrosis) введением внутрикожно морской свинке различного количества токсина со стандарт- ной сывороткой. За некротическую дозу токсина принимается то его наименьшее количество, которое при внутрикожном введении морской свинке в смеси с 1/50 ME стандартной про- тиводифтериГ'ной сыворотки вызывает на месте введения нек- 23 роз на 4—5-й день. Затем различные объемы испытуемой сы- воротки в смеси с оттитрованной некротической дозой токсина вводятся внутрикожно морской свинке и по результатам про- водится расчет титра сыворотки. По методу Рёмера титруется противодифтерийная сыворотка. В настоящее время выпускаются и применяются следую- щие антитоксические сыворотки. 1. Противодифтерийную сыворотку получгют гиперимму- низацией лошадей дифтерийным анатоксином и применяют, главным образом, с терапевтической целью. За 1 ME стандартной противодифтерийной сыворотки при- нимается то ее минимальное количество, которое нейтрализу- ет 100 Dim стандартного токсина для морской свинки весом 250 г. В 1 мл сыворотки должно содержаться не менее 2006 ME. Доза вводимой сыворотки зависит от тяжести заболева- ния: 5000—15000 ME при легких формах и от 30000—50000 ME при токсических. Сыворотку вводят подкожно или вну- тримышечно. 2. Противостолбнячная сыворотка представляет собой пре- парат, получаемый из сыворотки крови лошадей, гиперимму- низированных столбнячным анатоксином или токсином. За 1 ME противостолбнячной сыворотки принимается то количество сыворотки, которое нейтрализует 1000 Dim стан- дартного токсина для морской свинки весом 350 г. В 1 мл противостолбнячной сыворотки должно содержать- ся не менее 1500 ME. Одна профилактическая доза, равная 3000 ME столбняч- ного антитоксина, вводится подкожно. С лечебной целью сы- воротку вводят в значительно больших дозах (100000— 200000 ME) внутримышечно, внутривенно или в спинномоз- говой канал в зависимости от тяжести заболевания. 3. Противогангренозные моно- и поливалентные сыворотки получают гипериммунизацией лошадей анатоксинами или ток- синами возбудителей газовой гангрены (Cl. perfringens, C1. oedematiens, Cl. septicum). Доза каждого типа антитокси- нов— 10000 ME в 1 мл сыворотки. Противогангренозные сыворотки применяются для лечения и профилактики газовой гангрены. С профилактической целью сыворотку вводят внутримышечно, с лечебной — внутривенно, очень медленно, капельным методом. До установления бактериологического диагноза необходи- мо вводить смесь моновалентных сывороток или поливалент- ную сыворотку. После определения вида возбудителя, вызвав- 24 шего газовую гангрену, вводится сыворотка соответствующего вида. 4. Противоботулинические антитоксические сыворотки А, В, Е получают от лошадей, гипериммунизированных анаток- синами соответствующих типов, и выпускают в виде монова- лентных сывороток, включающих по 1 ампуле сыворотки каж- дого типа, или в виде поливалентной сывсротки, содержащей в ампуле антитела ко всем 3 типам токсинов клостридий бо- тулизма. За I ME противоботулинической сыворотки принимается то наименьшее количество ее, которое обладает способностью нейтрализовать 10000 Dim токсина для мышей весом 18—20г. Одна лечебная доза антитоксина типа А— 10000 ME, ти- па В — 5000 ME и типа Е— 10000 ME. Антитоксины типов С и F в настоящее время не включаются в поливалентную сы- воротку, так как заболевания, вызываемые возбудителями этих типов, встречаются редко. При первых признаках заболевания больному вводят по- ливалентную сыворотку (внутримышечно или внутривенно). После установления типа токсина назначается соответствую- |