|
|
Клинические методы обследования. Таблица. Название, разновидность
Название метода
|
Название, разновидность
|
Показания
|
Методика
|
Молекулярно- генетический
|
Прямые методы ДНК-типирования: известна точная локализация мутантного гена 1) Метод "блот-гибридизации
2)Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР).
Косвенные методы
1)Метод ПДРФ
Кроме вышеотмеченных методов применяются молекулярно-биологические исследования на уровне белков (энзимодиагностика, иммунохимическая диагностика и анализ физико-химических свойств белков) и промежуточных продуктов метаболизма (флюорометрия, хроматография и др.).
|
Гетерозиготного носительства, мультифакториальной патологии( вариантов артериальной гипертензии, сахарного диабета, онкопатологий) , а также возбудителей инфекционных заболеваний( герпес, токсоплазмоз, грипп, цитомегаловирус, ВИЧ, атипичная пневмония. Для этиотропного лечения как моно- так и полигенных заболеваний. В судебной практике метод широко применяется для идентификации личности и решения проблем спорного отцовства.
|
Прямые методы
1) Метод "блот-гибридизации, заключается в расщеплении ДНК специфическими рестриктазами, "узнающими" определенные нуклеотидные последовательности. После этого полученные фрагменты ДНК разделяют методом электрофореза в агарозном или полиакриламидном геле, далее - фиксируют на нитроцеллюлозном фильтре и подвергают гибридизации с олигонуклеотидным зондом, меченым изотопом, который комплементарно связывается с фрагментом ДНК. После отмывки несвязанной с фильтром радиактивной метки проводится экспозиция исследуемого фрагмента на рентгеновской пленке и анализируется полученный результат, что позволяет определить перестройки внутригенных нуклеотидных последовательностей либо тесно сцепленных с мутантным геном.
2) Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР).
Различают три этапа проведения ПЦР:
1) выделение ДНК из исследуемого материала (венозная кровь и другие клетки организма, содержащие хромосомный материал );
2) амплификация, сущность которой заключается в многократном синтезе определенного участка гена;
3) электрофорез аплифицированного фрагмента в полиакриламидном геле с последующим окрашиванием препарата и анализом характера внутригенной перестройки либо ее исключением.
Косвенные методы основаны на семейном анализе полиморфизма длин рестрикционных фрагментов (метод ПДРФ) исследуемых районов ДНК. Для исследования необходим материал от членов "ядерной" семьи (т.е. пробанда и его родителей).
|
Цитогенетический
|
Используют простые, дифференциальные и флюоресцентные методы окрашивания
|
1. Наличие случая хромосомного заболевания в семье, либо подозрения на ХЗ по клиническим проявления: множественные микро – и макро аномалии у пробанда, особенно в сочетании с отставанием в психо- речевом и моторном развитии, задержка умственного и физического развития.
2.Первичное невынашивание беременности( 2 и более спонтанных аборта, либо выкидыша, мертворождение), первичная аменорея, бесплодие у женщин и мужчин, что может быть обусловлено носительством кого – либо из родителей сбалансированных хромосомных перестроек
3.Пренатальная диагностика хромосомных патологий, а также в случае если у кого либо из родителей имеет место наличие трранслокационного синдрома
4. Подозрение на синдромы с хромосомной нестабильностью( лейкоз, наследственные анемии, иммунодеицитные состояния)
5. Оценка эффективности лечения, прогноза при лейкозах
6.Оценка мутагенных воздействий
|
Объектом исследования служат соматические, мейотические, интерфазные клетки.У консультируемого производится забор 1-2 мл венозной крови с последующим культивированием ее на фитогемагглютинине в течение 48-72 ч. За 2 -3 ч до завершения культивирования используют колцемид(колхицин), который разрушает веретено деления клетки на стадии метафазы( метот метафазных пластинок). Для более детального изучения района хромосом применяется метод про метафазных пластинок. На следующим этапе культуру клеток обрабатывают гипотоническим раствором с целью разрушения ядерных мембран после фиксации клеточной суспензии препарат окрашивают. Для этого используют простые, дифференциальные и флюоресцентные методы окрашивания. При простом окрашивании возможно групповая идентификация хромосом( выявляются числовые аномалии). Каждая хромосома имеет индивидуальный рисунок при дифференциальном окрашивании, который определяется специфически чередующимися гетеро- и эухроматиновыми последовательностями. К простым методам окрашивая относят: Q G R C.
FICH- метод основан на обработке денатурированной хромосомной ДНК специфическими зондами, которые обладают тропизмом к определенным сегментам ДНКа, далее проводится окрашивание флюорохромами. После этого окрашенные хромосомы визуализируются с помощью люминисцентной микроскопии.
|
Биохимический
|
Массовый скрининг новорожденных: Микробиологический тест гатри,
Проба Феллинга, Тесты для раннего выявления наследственной патологии обмена,
Проба Селиванова,
Тест на кетоновые кислоты, Йодозидная проба на цистин, гомоцистин,
Проба Пантуса на ионы хлора, Тест на пролин, Проба Бенедикта на сахара, фенольные кетокислоты, Проба Гайнеса, Тест с толуидиновым синим на выявление гликозоаминогликан, Проба Сулковича на ионы кальция, Тест Милона на тирозин, Проба Легаля на кетоновые тела,
Проба Альтгаузена, Проба на медь.
Массовый биохимический скрининг беременных: исследование альфафетопротеина, хорионического гонадотропина, эстриола, 17-оксипрогестерона и др.
|
1.Диагностика наследственных болезней обмена.
2.Массовый скрининг с целью раннего выявления фенилкетонурии (ФКУ) (проба Феллинга, тест Гатри) и врожденного гипотиреоза(ВГ) (исследование тироксина -Т4 и тиреотропного гормона - ТТГ).
3.Массовый скрининг беременных рекомендуется осуществлять при следующих условиях: 1) тестируемое заболевание является частым (распространенность более 1 случая на 20 тыс. новорожденных); 2) наличие методов профилактической терапии (ФКУ, ВГ и др.) и пренатальной диагностики; 3) применяемые экспресс-методы диагностики экономически доступны для региона
|
Массовый скрининг новорожденных, либо селективное "просеивание" в группах риска по конкретной наследственной патологии обмена Микробиологический тест гатри:
Для диагностики применяются фильтровальная бумага, пропитанная каплей крови новорожденного, взятой на 4-5 сутки жизни из пятки или большого пальца. При проведении пробы рост бактерий на питательной среде происходит вокруг вокруг дисков с образцами крови, содержащих избыточное количество фенилаланина, концентрацию которого можно определить по контрольным образцам.
Проба Феллинга: материалом для исследования служит моча предполагаемого больного, в которую добавляется треххлористое железо, изменяющее окраску мочи при избыточном содержании продуктов фенилаланина. Она может быть положительной при других наследственных заболеваниях: лейцинозе, тирозинозе, гистидинемии. Пробы рекомендуют проводить трижды. Тесты для раннего выявления наследственной патологии обмена: исследование плотности, прозрачности, реакции и цвета: снижение плотности утренней мочи взятой натощак до 1006 и ниже наблюдается при несахарном диабете, кислая реакция мочи – при аминоацидопатиях, изменение прозрачности наблюдается при липурии; черно-коричневая окраска мочи при добавлении щелочи имеет место при алкаптонурии, молочно-белый – при липурии, красный – при порфирии, гемоглобинурии, коричневый – при метгемоглобинурии, порфирии, билирубинурии;
Проба Селиванова: выявляет избыток фруктозы (при фруктоземии);
Тест на кетоновые кислоты: выявление алкаптонурии, фенилкетонурии, болезни «мочи с запахом кленового сиропа», гистидинемии, болезни «сушеного хмеля»;
Йодозидная проба на цистин, гомоцистин: при гомоцистинурии, цистинурии, болезни Вильсона-Коновалова, синдрома де Тони-Дебре-Фанкони;
Проба Пантуса на ионы хлора: при гипо- гиперальдостеронизме, тубулопатиях;
Тест на пролин: при б. Вильсона-Коновалова, , синдромах Жозефа, де Тони-Дебре-Фанкони;
Проба Бенедикта на сахара, фенольные кетокислоты: при галактоземии, с-ме де Тони-Дебре-Фанкони, цистинозе, врожденной непереносимости лактозы, почечном и сахарном диабете;
Проба Гайнеса более информативна в отношении сахаров;
Тест с толуидиновым синим на выявление гликозоаминогликан:при мукополисахаридозах;
Проба Сулковича на ионы кальция: при идиопатической гиперкальциемии;
Тест Милона на тирозин: при тирозинозе, синдроме Хартнапа, галактоземии, б.Вильсона-Коновалова, цистинозе;
Проба Легаля на кетоновые тела: при сахарном и почечном диабете, гликогенозах;
Проба Альтгаузена: при гликогенозах
Проба на медь: при болезни Вильсона-Коновалова.
Массовый биохимический скрининг беременных (исследование альфафетопротеина, хорионического гонадотропина, эстриола, 17-оксипрогестерона и др.) с целью пренатальной диагностики хромосомных синдромов, врожденных аномалий развития.
|
Популяционно – статистический
|
ДНК-типирование, цитогенетическое, биохимическое исследование, компьютерная диагностика
|
Исследования частот генов, спектра, распространенности наследственной патологии в различных этнических группах (популяциях), а также влияния на эти показатели факторов популяционной динамики (инбридинг, дрейф генов, миграции и др.).
|
|
Близнецовый
|
1.диагностика зиготности, 2.экспериментальное изучение анкетирование близнецов
3.метод контроля по партнеру:
|
Сравнительная оценка вклада генетических и средовых факторов в процесс формирования нормальных и аномальных признаков у человека.
|
диагностика зиготности, основанная на анализе сходства и различия признаков в паре (метод полисистемного сходства): сравнение цвета и плотности трабекул радужных оболочек, особенности строения лицевой и др. областей (разрез глазных щелей, форма ушных раковин, носа, черепа, характер оволосения, пигментация и т.д.);
экспериментальное изучение близнецов: сравнение по антигенному составу, белковым фракциям, активности ферментов, по характеристикам видов обмена (углеводный, липидный и др.), по гаплотипам HLA, по исследованию вкусовой чувствительности (например на фенилтиокарбамид), по результатам методов диагностики (РКТ, ЭМГ, ЭЭГ, допплерография)
3)анкетирование близнецов(при масштабных популяционных исследованиях);
4) метод контроля по партнеру: применяется у монозиготных близнецов, позволяет сравнить влияние средового фактора на одного из близнецов в паре, при отсутствии такого же воздействия на другого близнеца.
| |
|
|
Скачать 20.78 Kb.