Общая эпизоотология и инфекционные болезни. Ч. I-Ананьева Н.Б. Общая эпизоотологияи инфекционныеболезни
 Скачать 0.93 Mb.
|
|
Метод конкурентной иммунофлюоресценции основан на свя- зывании стандартного меченого и присутствующего в исследуемой пробе немеченого антигенов с антителами, сорбированными на твердой подложке. Поскольку меченый и немеченый антигены кон- курируют за связывание с антителами, по количеству связанного меченого антигена можно определить концентрацию антигена в ис- следуемой пробе. Иммуноферментный анализ (ИФА) – наиболее надежный, экономичный и высокочувствительный метод, применяемый для количественной оценки антител и антигенов. Его отличает простота проведения реакции, возмож- ность инструментального учета и автома- тизации всех ее этапов. Внедрение в лабораторную практику иммуноферментного анализа позволило значительно расширить возможности ди- агностики инфекционных заболеваний, аутоиммунных и гормональных наруше- ний. Из-за разнообразия объектов исследо- вания – от низкомолекулярных соедине- ний до вирусов и бактерий, и многообра- зия условий проведения ИФА существует большое количество вариантов этого ме- тода (рис. 9). Рис. 9. Микропланшет, используемый для ИФА 23 ИФА основан на использовании антител, конъюгированных или связанных с ферментами, в основном пероксидазой хрена или щелочной фосфатазой. Комплексы антител с ферментами называ- ются конъюгатами. Механизм реакции при определении антигена заключается в следующем: на твердый носитель, которым могут быть целлюлоза, полиакриламид, декстран и различные пластмас- сы, сорбируют антитела к искомому веществу или инфекционному агенту. Чаще носителем служит поверхность лунок микропанелей. Затем несорбированные белки отмывают специальным раствором и в лунки добавляют исследуемый материал, например сыворотку крови, где находятся искомые антигены (вирусы или бактерии и т.д.). Антитела, закрепленные на пластиковой подложке, «подби- рают» антигены, присутствующие в крови животного, специфи- чески с ними связываясь. Затем добавляют антитела, связанные с ферментом – конъюгаты. Оставшиеся молекулы сформируют «сэндвич», состоящий из следующих слоев: фиксированное на подложке антитело – антиген – связанное с ферментом антитело (рис. 10). Чтобы обнаружить образовавшиеся иммунные комплексы, т.е. соединения меченых антител с антигенами, добавляют субстрат, разлагаемый присоединенным к антителам ферментом. После до- бавления в данную систему хромогенного субстрата последний расщепляется ферментом конъюгата, в результате чего изменяется цвет раствора в лунке. Интенсивность окрашивания пробы исследуемого материала прямо пропорциональна содержанию в ней искомого антигена. Учет интенсивности реакции опытных и контрольных проб прово- дят на основании измерения оптической плотности на специальных приборах – спектрофотоме- трах. Чем выше оптическая плотность в данной ячей- ке, тем большее количество специфических антител со- держится в пробе. Описанная выше после- довательность проведения реакции называется «санд- вич» вариантом ИФА. В случае, когда неизвест- ным компонентом является антитело, первая реакция Рис. 10. Схема иммуноферментного твердофазного анализа Cубстрат расщепляемый ферментом (окраска субстрата при этом изменяется) Окрашенный субстрат Антитело Ферменты Антиген Пластина микротитратора 24 происходит между искомым антителом и очищенным антигеном возбудителя, фиксированным на поверхности лунок планшета. Для выявления образовавшихся иммунных комплексов проводят вто- рую реакцию, в которой в качестве антигена выступает специфиче- ски связавшееся антитело, а в качестве антител к нему – конъюгат. Это вариант непрямого иммуноферментного анализа. Например, с помощью этого вариант ИФА определяют антитела к токсоплазмо- зу – паразитарному заболеванию кошек, собак и человека. В последнее время все более широкое распространение в ве- теринарии получили экспресс-тесты диагностики инфекционных заболеваний. Экспресс-тесты не требуют специальной длительной подготовки проб, просты в применении, отсутствует необходи- мость в использовании дополнительных реагентов и оборудования, поскольку все иммунореагенты находятся в составе тест-кассеты. время исполнения анализа не более – 15–25 минут. И в то же время этот метод достаточно надежен – достоверность достигает 92–98 %. Их можно применять в любом месте: в кабинете, при выезде на дом, в лаборатории. Иммунохроматографические диагностические методы явля- ются позднейшей разработкой, отвечающей всем требованиям, и наиболее широко используемыми в мире диагностическими экс- пресс-методами. От наличия возможности быстро обнаружить возбудителя ин- фекционного заболевания может зависеть здоровье и жизнь живот- ного, поэтому быстрая диагностика позволит назначить адекватное лечение в минимальные сроки. Принцип работы экспресс-тестов основан на методе иммунох- роматографии (ИХА), сущность которого заключается в следую- щем: при нанесении исследуемого образца жидкости (сыворотка крови, смывы со слизистых) на специальную нитроцеллюлозную мембрану на которой закреплены специфически связывающиеся агенты (антитела или антигены), раствор с исследуемым биологи- ческим материалом проходит вдоль мембраны за счет капиллярных сил. В случае присутствия в исследуемом материале тестируемого антигена или антитела происходит связывание с агентами на под- ложке (мембране). В результате чего на мембране появляются одна или две четко окрашенные полосы, свидетельствующие о негатив- ном или позитивном результате теста. В настоящее время существуют экспресс-тесты для диагно- стики ряда заболеваний, таких как: парвовирусный энтерит собак, чума плотоядных, панлейкопения кошек, вирусный иммунодефи- 25 цит кошек, вирусная лейкемия кошек, калицивироз кошек, диро- филяриоз, анаплазмоз, болезнь Лайма, а также некоторых гормонов и ферментов. Таким образом, иммунологические методы, используемые в клинической практике и экспериментальных исследованиях, очень разнообразны. Многие из них являются методами экспресс-диа- гностки и позволяют в кратчайшие сроки провести анализы на ин- фекционные заболевания или оценить иммунный статус животно- го или человека. 3. Задания для самостоятельной работы 1. Темы для рефератов: а) клиническое исследование свиней, подозреваемых в заболе- вании инфекционной болезнью; б) порядок клинического исследования лошадей на предмет ис- ключения заразных болезней; в) клиническое исследование коров и быков на предмет исклю- чения инфекционных болезней; г) клиническое исследование овец на предмет исключения ин- фекционных болезней. 2. Написать план сбора эпизоотологического анамнеза в круп- ной животноводческой ферме и в личном хозяйстве граждан, про- живающих в сельской местности. 3. Отработать приемы клинического исследования животных при инфекционных болезнях с использованием инструментов и без них. 26 Тема № 3 Общие ветеринарно-санитарные мероприятия при профилактике инфекционных болезней Цель занятия. Научиться определить границы эпизоотическо- го очага, неблагополучной и угрожаемой зоны, освоить принципы оздоровительных и профилактических мероприятий, ознакомить- ся с ролью вакцинации в системе мероприятий и организацией её проведения. Материальное обеспечение. Таблицы эпизоотической цепи, слайды. Вопросы: 1. Эпизоотический процесс. 2. Профилактические меры. 3. Планирование противоэпизоотических мероприятий. 1. Эпизоотический процесс, сложный непрерывный процесс возникновения и распространения заразных болезней, связанный с цепной передачей возбудителей от заражённых животных вос- приимчивым здоровым. В основе эпизоотического процесса лежит биологический паразитизм, в связи с этим эпизоотический про- цесс можно рассматривать как процесс взаимодействия популяции патогенного паразита с популяцией восприимчивых животных в конкретных условиях внешней среды. Изучением эпизоотического процесса занимается эпизоотология. Эпизоотический процесс раз- вивается при последовательном взаимодействии трёх обязатель- ных элементов, составляющих эпизоотическую цепь: источника возбудителя инфекции (инвазии), механизма его передачи и вос- приимчивых животных. При исключении любого из звеньев этой цепи эпизоотического процесса прекращается (рис. 11). Источник возбудителя – первое звено эпизоотической цепи – организм зараженного животного (случаи явной, скрытой инфек- ции или инвазии и носительства микробов или паразитов). Меха- низм передачи возбудителя включает его выведение из заражённого организма, пребывание во внешней среде и новое заражение. Каж- дый вид возбудителей эволюционно приспособлен к определённо- 27 Рис. 11. Эпизоотическая цепь и пути передачи возбудителя му механизму передачи (непосредственный контакт или передача с участием тех или иных элементов внешней среды). Пути передачи возбудителя инфекции – второе звено эпизо- отической цепи. Передача возбудителя путем непосредственного соприкосновения больных и здоровых животных происходит без участия факторов внешней среды. Она осуществляется при укусе (бешенство), во время случки (бруцеллез у свиней), при сосании ма- терей (инфекционная агалактия овец и коз, болезнь Ауески у сви- ней), в случае прикосновения к больному (ящур, оспа). Передача возбудителя инфекции через корма и воду типична для алиментарных инфекций, развивающихся в результате зараже- ния через рот. Заражение может произойти как при стойловом, так и при пастбищном содержании животных. Патогенные микробы попадают в корма и воду с выделениями больных животных (в том числе с экскретами грызунов), с навозом, почвой. Перезаражению животных способствует использование общих кормушек, водопо- йных корыт. Таким путем могут передаваться возбудители тубер- кулеза, бруцеллеза, паратуберкулеза, сапа, ящура, классической чумы свиней. Нередко заражение происходит при скармливании необезвреженных боенских и кухонных отходов (чума свиней), не- обезвреженного молока или обрата (туберкулез, бруцеллез, ящур). Известны случаи заноса возбудителей с кормом в хозяйства, рас- положенные на значительном расстоянии от не благополучных пун- ктов (ящур, классическая чума свиней). Передача возбудителей инфекции через почву возможна при инфекциях, возбудители которых долгое время сохраняются в почве. 28 Такие инфекции называют почвенными (сибирская язва, ЭМКАР, злокачественные отеки, столбняк). Споры возбудителей сибирской язвы, ЭМКАР попадают в почву из трупов или с выделениями жи- вотных и годами сохраняются в ней. Животные заражаются в основ- ном при поедании травы, через загрязненную спорами землю, а также при водопое из мелких загрязненных водоисточников. Возбудители столбняка и злокачественного отека попадают в почву с фекалиями здоровых животных, в кишечнике которых обитают как сапрофиты. Эти микробы (споры) длительно сохраняются в почве и вызывают заболевание животных и людей при проникновении с частичками почвы в раны, особенно глубокие (раневая инфекция). Передача возбудителя инфекции через воздух возможна при туберкулезе, контагиозной плевропневмонии крупного рогатого скота, оспе овец, гриппе лошадей, ларинготрахеите кур. Инфекции, возникающие при передаче возбудителя через воздух, называют ре- спираторными или аэрогенными. Кроме того, их подразделяют на капельные и пылевые. Капельные инфекции возникают при проник- новении в дыхательные пути животных мельчайших капелек слизи, содержащих возбудителей болезни, которые попа дают в воздух при чиханье, кашле, фырканье животных с поражениями легких и верх- них дыхательных путей. Такой путь передачи возбудителя инфек- ции возможен при пастереллезе, орнитозе, туберкулезе. Пищевые инфекции передаются при вдыхании пыли, содержащей патогенных микробов. Мельчайшие частицы пыли способны подниматься в воз- дух и долго оставаться во взвешенном состоянии. Они образуются при полном высыхании капелек слизи, фекалий и других выделений больных животных. Возбудители пылевых инфекций обладают зна- чительной устойчивостью к высушиванию и действию лучей солнца. Пылевой механизм передачи возбудителя возможен, прежде всего, при туберкулезе, оспе, сибирской язве. Микобактерии туберкуле- за сохраняются в пыли неделями, но все-таки легче передаются ка- пельным способом. Вирус оспы овец в высохших струпьях остается жизнеспособным до 2 мес и может на десятки метров разноситься с пылью по воздуху. Известны случаи сибирской язвы овец, возника- ющие вследствие пылевого заражения. Передаче патогенных микро- бов воздушно-капельным путем способствуют низкая температура и высокая влажность воздуха, а также недостаточная вентиляция и плохая освещенность перемещения. Трупы животных, животное сырье и продукты животновод- ства имеют большое значение как факторы передачи возбудителей инфекции. Трупы животных, погибших от болезней, возбудители 29 которых длительно сохраняются во внешней среде (ЭМКАР, си- бирская язва, брадзот и др.), представляют наибольшую опасность. Неправильная и несвоевременная уборка таких трупов ведет к за- ражению почвы, воды и надолго делает опасным использование больших участков пастбищ, водоемов. Дикие плотоядные, собаки, хищные птицы растаскивают части трупов на большие расстояния. При отсутствии должного ветеринарного надзора важным фактором передачи возбудителей инфекции может стать сырье, полученное от павших и вынужденно убитых больных животных (шкуры, волос, щетина, рога и копыта, кости), а также различные продукты животноводства. Известны случаи сибирской язвы жи- вотных, возникавшие в результате заноса в почву пастбищ и в водо- емы спор возбудителя со сточными водами кожевенных предпри- ятий. Перевозка и использование необезвреженного мяса больных животных могут привести к вспышкам ящура, классической чумы свиней, болезни Ауески: Через необезвреженные молоко и обрат пе- редаются ящур, туберкулез, бруцеллез, сальмонеллезы. Реализация необезвреженных продуктов убоя больной птицы может привести к вспышкам ньюкаслской болезни. Яйца кур, больных туберкуле- зом, пуллорозом, болезнью Марека, могут содержать возбудителей этих инфекций, передающихся трансовариальным путем. Навоз от больных животных при неблагополучии по ящуру, паратуберкулезу, туберкулезу и многим другим болезням, возбуди- тели которых выделяются с мочой и калом, также служит важным фактором передачи возбудителей инфекций и подлежит обязатель- ному обеззараживанию. Передача возбудителей инфекции через предметы снаряже- ния и ухода за животными, тару и средства транспорта происходит нередко. Транспорт и разнообразная тара, загрязненные выделени- ями больных, неоднократно служили факторами распространения ящура, классической чумы свиней, оспы овец. При слабом ветеринарном надзоре распространению инфекци- онных болезней способствуют массовые скопления животных на ба- зарах, рынках, предубойных базах мясокомбинатов, на станциях и в портах погрузки и выгрузки транспортируемого скота. Среди скота, поступившего из разных мест, могут быть животные в инкубационном периоде болезни, скрыто больные, микробоносители. Скученность животных в таких случаях благоприятствует передаче возбудителей. Бесконтрольное перемещение скота способствует распространению бруцеллеза, туберкулеза и других инфекций, для которых типично ла- тентное течение болезни или длительное носительство возбудителя. 30 Передача возбудителей инфекции живыми переносчиками, прежде всего членистоногими (насекомые и клещи), имеет большое значение в распространении инфекционных болезней. Перенос воз- будителей может быть чисто механическим: микробы короткое вре- мя сохраняются на поверхности тела или в пищеварительном тракте переносчика. В других случаях (специфический перенос) возбудитель размножается в организме насекомого или клеща и даже передается из поколения в поколение трансовариальным путем. Установлено, что клещи, питающиеся кровью теплокровных животных, могут быть переносчиками возбудителей сибирской язвы, ЭМКАР, ИНАН лошадей и некоторых других септических инфекций. Муха-жигалка также способна переносить возбудите лей таких болезней. Иксодовые клещи переносят возбудителей ИЭМ лошадей, туляремии. Такой путь передачи патогенных микробов называют трансмиссивным. Болезни, возбудители которых пере- даются только трансмиссивным путем, называют облигатно-транс- миссивными (инфекционный энцефаломиелит лошадей, ИНАН, африканская чума лошадей). Им всегда свойственна сезонность, связанная с периодом активности переносчиков. Имеются и фа- культативно-трансмиссивные инфекции, при которых возбудитель передается не только трансмиссивным, но и другими путями (си- бирская язва, африканская чума свиней). Переносчиками возбудителей некоторых инфекций могут быть невосприимчивые или маловосприимчивые к ним животные. Так, собаки, дикие плотоядные и хищные птицы, поедая и растаскивая трупы животных, могут стать переносчиками возбудителей сибир- ской язвы и ЭМКАРа (рассеивают споры с фекалиями). Собаки мо- гут быть переносчиками бруцелл. Неоднократно регистрировали случаи переноса вируса ящура лошадьми, которых содержали со- вместно с больным рогатым скотом. Крысы и мыши, обитающие в животноводческих помещениях, распространяют болезнь Ауески и являются носителями многих других патогенных микробов. Механическими переносчиками возбудителей болезней жи- вотных могут быть и люди. Возможен, в частности, перенос на одежде и обуви людей возбудителей ящура, оспы животных, клас- сической чумы свиней. Таким образом, пути и способы передачи возбудителей инфек- ционных болезней чрезвычайно разнообразны. При проведении противоэпизоотических мероприятий большое значение имеют меры, направленные на выявление этих путей и разрыв механизма передачи патогенного микроба. 31 Восприимчивые животные – третье звено эпизоотической цепи. Для того чтобы возникла и распространилась какая-либо инфекционная болезнь, недостаточно наличия возбу дителя и воз- можностей его передачи. Эпизоотический процесс будет развивать- ся в том случае, если имеются восприимчивые животные. Поэтому при проведении противоэпизоотических мероприятий необходимо уделять большое внимание обеспечению невосприимчивости по- головья путем улучшения условий содержания животных, а также применения средств специфической профилактики. Мероприятия против инфекционных болезней животных (так называемые противоэпизоотические мероприятия), проводимые в нашей стране, представляют собой сочетание предупредительных или профилактических мер с мерами по ликвидации возникшей болезни в случае ее появления. |