|
Основные принципы классификации микробов. Микробы, или микроорганизмы
Билет№7
Структура и химический состав бактериальной клет ки.
Бактериальная клетка состоит из клеточной стенки, цитоплазматической мембраны, цитоплазмы с включениями и яд ра, называемого нуклеоидом. Имеются дополни тельные структуры: капсула, микрокапсула, слизь, жгутики, пили. Некоторые бактерии в неблагоприятных условиях спо собны образовывать споры.
Клеточная стенка. В клеточной стенке грамположительных бактерий содержится небольшое количество полисахаридов, липидов, белков. Основным компонентом толстой клеточной стенки этих бактерий является многослойный пептидогликан (муреин, мукопептид), составляющий 40-90 % массы клеточ ной стенки. С пептидогликаном клеточной стенки грамположительных бактерий ковалентно связаны тейхоевые кислоты (от греч. teichos— стенка).
В состав клеточной стенки грамотрицательных бакте рий входит наружная мембрана, связанная посредством липопротеина с подлежащим слоем пептидогликана. На ультратонких срезах бактерий наружная мембрана имеет вид волнообразной трехслойной структуры, сходной с внутрен ней мембраной, которую называют цитоплазматической. Основным компонентом этих мембран является бимолекулярный (двойной) слой липидов. Внутренний слой наружной мембраны представлен фосфолипидами, а в наружном слое расположен липополисахарид.
Функции клеточной стенки.
1.Обусловливает форму клетки.
2. Защищает клетку от механических повреждений извне и выдерживает значительное внутреннее давление;
3. Обладает свойством полупроницаемости, поэтому через нее избирательно проникают из среды питательные вещества.
4. Несет на своей поверхности рецепторы для бактериофагов и различных химических веществ.
Метод выявления клеточной стенки - электронная микроскопия, плазмолиз.
L-формы бактерий, их медицинское значение
L-формы - это бактерии, полностью или частично лишенные клеточной стенки (протопласт +/- остаток клеточной стенки), поэтому имеют своеобразную морфологию в виде крупных и мелких сферических клеток. Способны к размножению.
Цитоплазматическая мембрана располагается под клеточной стенкой (между ними - периплазматическое пространство). По строению является сложным липидобелковым комплексом, таким же, как у клеток эукариот (универсальная мембрана).
Функции цитоплазматической мембраны:
1. Является основным осмотическим и онкотическим барьером.
2. Участвует в энергетическом метаболизме и в активном транспорте питательных веществ в клетку, так как является местом локализации пермеаз и ферментов окислительного фосфорилирования.
3. Участвует в процессах дыхания и деления.
4. Участвует в синтезе компонентов клеточной клетки (пептидогликана).
5. Участвует в выделении из клетки токсинов и ферментов.
Цитоплазматическая мембрана выявляется только при электронной микроскопии.
Вакцины. Определение. Современная классификация
Вакцина — медицинский препарат, предназначенный для создания иммунитета к инфекционным болезням.
Классификации вакцин:
1.Живые вакцины - препараты, действующим началом в которых являются ослабленные тем или иным способом, потерявшие свою вирулентность, но сохранившие специфическую антигенность штаммы патогенных бактерий. Примером таких вакцин являются БЦЖ и вакцина против натуральной оспы человека, в качестве которой используется непатогенный для человека вирус оспы коров.
2.Инактивированные (убитые) вакцины – препараты, в качестве действующего начала включающие убитые химическим или физическим способом культуры патогенных вирусов или бактерий, (клеточные, вирионные) или же извлечённые из патогенных микробов комплексы антигенов, содержащие в своём составе проективные антигены (субклеточные, субвирионные вакцины). В препараты иногда добавляют консерванты и адьюванты.
Молекулярные вакцины – в них антиген находится в молекулярной форме или даже в виде фрагментов его молекул, определяющих специфичность т. е. в виде эпитопов, детерминант.
Корпускулярные вакцины – содержащие в своем составе протективный антиген
3.Анатоксины относятся к числу наиболее эффективных препаратов. Принцип получения – токсин соответствующей бактерии в молекулярном виде превращают в нетоксичную, но сохранившую свою антигенную специфичность форму путем воздействия 0.4% формальдегида при 37t в течение 3-4 недель, далее анатоксин концентрируют, очищают, добавляют адьюванты.
4.Синтетические вакцины. Молекулы эпитопов сами по себе не обладают высокой иммуногенностью для повышения их антигенных свойств эти молекулы сшиваются с полимерным крупномолекулярным безвредным веществом, иногда добавляют адьюванты.
5.Ассоциированные вакцины – препараты, включающие несколько разнородных антигенов.
Требования, предъявляемые к современным вакцинам:
Иммуногенность;
Низкая реактогенность (аллергенность);
Не должны обладать тератогенностью, онкогенностью;
Штаммы, из которых приготовлена вакцина, должны быть генетически стабильны;
Длительный срок хранения;
Технологичность производства;
Простота и доступность в применении.
|
Билет№8
Морфологические и тинкториальные свойства бакте рий.
Морфологические свойства бакте рий. Бактерии — микроорганизмы, не имеющие оформлен ного ядра (прокариоты).
Бактерии имеют разнообразную форму и довольно сложную структуру, определяющую многообразие их функциональной дея тельности. Для бактерий характерны четыре основные формы: сферическая (шаровидная), цилиндрическая (палочковидная), извитая и нитевидная.
Бактерии шаровидной формы — кокки — в зависимости от плоскости деления и расположения относительно друг друга от дельных особей подразделяются на микрококки (отдельно лежащие кокки), диплококки (парные кокки), стрептококки (цепочки кокков), стафилококки (имеющие вид виноградных гроздьев), тетракокки (образования из четырех кокков) и сарцины (паке ты из 8 или 16 кокков).
Палочковидные бактерии располагаются в виде оди ночных клеток, дипло- или стрептобактерий.
Извитые формы бактерий — вибрионы и спириллы, а так же спирохеты. Вибрионы имеют вид слегка изогнутых палочек, спириллы — извитую форму с несколькими спиральными завит ками.
Размеры бактерий колеблются от 0,1 до 10 мкм. В состав бак териальной клетки входят капсула, клеточная стенка, цитоплаз-матическая мембрана и цитоплазма, в которой содержатся нук-леоид, рибосомы и включения. Некоторые бактерии снабжены жгутиками и ворсинками. Ряд бактерий образуют споры, которые располагаются терминально, субтер минально или центрально; превышая поперечный раз мер клетки, споры придают ей веретенообразную форму.
Методы окраски. Окраску мазка производят просты ми или сложными методами. Простые за ключаются в окраске препарата одним красителем; сложные методы (по Граму, Цилю — Нильсену и др.) включают последо вательное использование нескольких красителей и имеют диффе ренциально-диагностическое значение. Отношение микроорганиз мов к красителям расценивают как тинкториальные свойства. Существуют специальные методы окраски, которые используют для выявления жгутиков, клеточной стенки, нуклеоида и разных цитоплазматических включений.
При простых методах мазок окрашивают каким-либо одним красителем, ис пользуя красители анилинового ряда (основные или кис лые). Если красящий ион (хромофор) — катион, то краситель обладает основными свойствами, если хромо фор - анион, то краситель имеет кислые свойства. Кис лые красители — эритрозин, кислый фуксин, эозин. Ос новные красители — генциановый фиолетовый, кристал лический фиолетовый, метиленовый синий, основной фуксин. Преимущественно для окраски микроорганизмов используют основные красители, которые более интенсивно связываются кислыми компонентами клетки. Из сухих красителей, продающихся в виде порошков, готовят на сыщенные спиртовые растворы, а из них — водно-спирто вые, которые и служат для окрашивания микробных кле ток. Микроорганизмы окрашивают, наливая краситель на поверхность мазка на определенное время. Окраску основным фуксином ведут в течение 2 мин, метиленовым синим — 5—7 мин. Затем мазок промывают водой до тех пор, пока стекающие струи воды не станут бесцветными, высушивают осторожным промоканием фильтровальной бумагой и микроскопируют в иммерсионной системе. Ес ли мазок правильно окрашен и промыт, то поле зрения совершенно прозрачно, а клетки интенсивно окрашены.
Сложные методы окраски применяют для изуче ния структуры клетки и дифференциации микроорганиз мов. Окрашенные мазки микроскопируют в иммерсион ной системе. Последовательно нанести на препа рат определенные красители, различающиеся по химическому составу и цвету, протравы, спирты, кислоту и др.
Существуют несколько основных окрасок: по Граму, по Цилю-Нельсону, по Ауески, Нейссера, Бури-Гинса.
Генно-инженерные вакцины. Принципы получения,
Генно-инженерные вакцины – это препараты, полученные с помощью биотехнологии, которая по сути сводиться к генетической рекомбинации .
Для начала получают ген, который должен быть встроен в геном реципиента. Небольшие гены могут быть получены методом химического синтеза. Для этого расшифровывается число и последовательность аминокислот в белковой молекуле вещества, затем по этим данным узнают очерёдность нуклеотидов в гене, далее следует синтез гена химическим путем.
Крупные структуры, которые довольно сложно синтезировать получаются путем выделения(клонирования), прицельного выщепления этих генетических образований с помощью рестриктаз.
Полученный одним из способов целевой ген с помощью ферментов сшивается с другим геном, который используется в качестве вектора для встраивания гибридного гена в клетку. Вектором могут служить плазмиды, бактериофаги, вирусы человека и животных. Экспрессируемый ген встраивается в бактериальную или животную клетку, которая начинает синтезировать несвойственное ей ранее вещество, кодируемое эксперссируемым геном.
В качестве реципиентов экспрессируемого гена чаще всего используется E. coli, B. subtilis, псевдомонады, дрожжи, вирусы. некоторые штаммы способны переключаться на синтез чужеродного вещества до 50% своих синтетических возможностей – эти штамм называются суперпродуцентами.
Иногда к генно-инженерным вакцинам добавляется адъювант.
Примерами таких вакцин служат вакцина против гепатита В (энджерикс), сифилиса, холеры, бруцеллёза, гриппа, бешенства.
Есть определённые сложности в разработке и применении:
- длительное время к генно-инженерным препаратам относились настороженно.
- на разработку технологии для получения вакцины затрачиваются значительные средства
- при получении препаратов данным способом возникает вопрос об идентичности полученного материала природному веществу.
|
Билет№9
Структура и химический состав вирусов и бактериофагов
Вирусы — мельчайшие микробы, не имеющие клеточного строения, белоксинтезирующей системы, содержащие только ДНК или РНК. Относятся к царству Vira. Являясь облигатными внутриклеточными паразитами, вирусы размножаются в ци топлазме или ядре клетки. Они — автономные генетические структуры. Отличаются особым — разобщенным (дисъюнктивным) способом размножения (репродукции): в клетке от дельно синтезируются нуклеиновые кислоты вирусов и их белки, затем происходит их сборка в вирусные частицы. Сформированная вирусная частица называется вирионом. Бактериофа́ги — вирусы, избирательно поражающие бактериальные клетки. Чаще всего бактериофаги размножаются внутри бактерий и вызывают их лизис. Как правило, бактериофаг состоит из белковой оболочки и генетического материала одноцепочечной или двуцепочечной нуклеиновой кислоты (ДНК или, реже, РНК). Размер частиц приблизительно от 20 до 200 нм.
Морфологию и структуру вирусов изучают с помощью элек тронного микроскопа, так как их размеры малы и сравнимы с толщиной оболочки бактерий.
Форма вирионов может быть раз личной: палочковидной (вирус табачной мозаики), пулевидной (вирус бешенства), сферической (вирусы полиомиели та, ВИЧ), в виде сперматозоида (многие бактериофаги). Различают просто устроенные и сложно устроенные вирусы.
Простые, или безоболочечные, вирусы состоят из нуклеиновой кисло ты и белковой оболочки, называемой капсидом. Капсид состоит из повторяющихся морфологических субъединиц — капсомеров. Нуклеиновая кислота и капсид взаимодействуют друг с другом, образуя нуклеокапсид.
Сложные, или оболочечные, вирусы снаружи капсида окружены ли-попротеиновой оболочкой (суперкапсидом, или пеплосом). Эта оболоч ка является производной структурой от мембран вирус-инфицированной клетки. На оболочке вируса расположены гликопротеиновые ши пы, или шипики (пепломеры). Под оболочкой некоторых вирусов нахо дится матриксный М-белок.
Капсид и суперкапсид защищают вирионы от влияния окру жающей среды, обусловливают избирательное взаимодействие (адсорбцию) с клетками, определяют антигенные и иммуногенные свойства вирионов. Внутренние структуры вирусов называ ются сердцевиной.
Тип симметрии. Капсид или нуклеокапсид могут иметь спираль ный, икосаэдрический (кубический) или слож ный тип симметрии. Икосаэдрический тип сим метрии обусловлен образованием изометричес ки полого тела из капсида, содержащего вирус ную нуклеиновую кислоту (например, у вирусов гепатита А, герпеса, полиомиелита). Спираль ный тип симметрии обусловлен винтообразной структурой нуклеокапсида (например, у вируса гриппа).
Включения — скопление вирионов или отдельных их компонентов в цитоплазме или ядре клеток, выяв ляемые под микроскопом при специальном окрашива нии. Вирус натуральной оспы образует цитоплазмати-ческие включения — тельца Гварниери; вирусы герпеса и аденовирусы — внутриядерные включения.
Размеры вирусов определяют с помощью электронной мик роскопии, методом ультрафильтрации через фильтры с извест ным диаметром пор, методом ультрацентрифугирования. Одним из самых мелких вирусов является вирус полиомиелита (около 20 нм), наиболее крупным — натуральной оспы (около 350 нм).
Вирусы имеют уникальный геном, так как содержат либо ДНК, либо РНК. Поэтому различают ДНК-содержащие и РНК-содержащие вирусы. Они обычно гаплоидны, т.е. име ют один набор генов. Геном вирусов представлен различными видами нуклеиновых кислот: двунитчатыми, однонитчатыми, линейными, кольцевыми, фрагментированными. Среди РНК-содержащих вирусов различают вирусы с положительным (плюс-нить РНК) геномом. Плюс-нить РНК этих вирусов выполняет наследственную функцию и функцию информационной РНК (иРНК). Имеются также РНК-содержащие вирусы с отрицатель ным (минус-нить РНК) геномом. Минус-нить РНК этих виру сов выполняет только наследственную функцию.
Геном вирусов способен включаться в состав генетического аппарата клетки в виде провируса, проявляя себя генетическим паразитом клетки. Нуклеиновые кислоты некоторых вирусов (вирусы герпеса и др.) могут находиться в цитоплазме инфициро ванных клеток, напоминая плазмиды.
Иммуноферментный анализ, иммуноблоттинг.
Иммуноферментный анализ или метод — выявление ан тигенов с помощью соответствующих им антител, конъюгированных с ферментом-меткой (пероксидазой хрена, бета-галактозидазой или щелочной фосфатазой). После соединения антигена с меченной ферментом иммунной сывороткой в смесь добавляют субстрат/хромоген. Субстрат расщепляется ферментом и изменяется цвет продукта реакции — интен сивность окраски прямо пропорциональна количеству свя завшихся молекул антигена и антител. ИФА применяют для диагностики вирусных, бактериальных и паразитарных бо лезней, в частности для диагностики ВИЧ-инфекций, гепати та В и др., а также определения гормонов, ферментов, лекар ственных препаратов и других биологически активных ве ществ, содержащихся в исследуемом материале в минорных концентрациях (1010-1012 г/л). Твердофазный ИФА— вариант теста, когда один из компо нентов иммунной реакции (антиген или антитело) сорбирован на твердом носителе, напр., в лунках планшеток из полистирола. Компоненты выявляют добавлением меченых антител или анти генов. При положительном результате изменяется цвет хромоге на. Каждый раз после добавления очередного компонента из лунок удаляют несвязавшиеся реагенты путем промывания,
I. При определении антител (левый рисунок) в лунки планшеток с сорбированным антигеном последовательно добавляют сы воротку крови больного, антиглобулиновую сыворотку, ме ченную ферментом, и субстрат/хромоген для фермента.
II. При определении антигена в лунки с сорби рованными антителами вносят антиген (сыворотку кро ви с искомым антигеном), добавляют диагностическую сыво ротку против него и вторичные антитела (против диагностиче ской сыворотки), меченные ферментом, а затем субстрат/хро моген для фермента.
| |
Билет№10
Действие физических и химических факторов на мк.
Влияние физических факторов.
Влияние температуры. Различные группы микроорга низмов развиваются при определенных диапазонах температур. Бактерии, растущие при низкой температуре, называют психрофилами, при средней (около 37 °С) — мезофилами, при вы сокой — термофилами. К психрофильным микроорганизмам относится боль шая группа сапрофитов В зависимости от температуры культивирования свой ства бактерий меняются. Интервал температур, при кото ром возможен рост психрофильных бактерий, колеблется от -10 до 40 °С, а температурный оптимум — от 15 до 40 °С, прибли жаясь к температурному оптимуму мезофильных бактерий. Мезофилы включают основную группу патогенных и услов но-патогенных бактерий. Они растут в диапазоне температур 10— 47 °С; оптимум роста для большинства из них 37 °С. При более высоких температурах развива ются термофильные бактерии. На дне океана в горячих сульфидных водах живут бактерии, развивающиеся при темпе ратуре 250—300 °С и давлении 262 атм.
Высушивание. Обезвоживание вызывает нарушение функ ций большинства микроорганизмов. Наиболее чувствительны к высушиванию патогенные микроорганизмы (возбудители гоно реи, менингита, холеры, брюшного тифа, дизентерии и др.). Более устойчивыми являются микроорганизмы, защищенные слизью мокроты. Высушивание под вакуумом из замороженного состояния — лиофилизацию — используют для продления жизнеспособнос ти, консервирования микроорганизмов. Лиофилизированные куль туры микроорганизмов и иммунобиологические препараты дли тельно (в течение нескольких лет) сохраняются, не изменяя своих первоначальных свойств.
Действие излучения. Неионизирующее излучение — уль трафиолетовые и инфракрасные лучи солнечного света, а также ионизирующее излучение — гамма-излучение радиоактивных ве ществ и электроны высоких энергий губительно действуют на микроорганизмы через короткий промежуток времени. УФ-лучи применяют для обеззараживания воздуха и различных предме тов в больницах, родильных домах, микробиологических лабо раториях. С этой целью используют бактерицидные лампы УФ-излучения с длиной волны 200—450 нм.
Ионизирующее излучение применяют для стерилизации од норазовой пластиковой микробиологической посуды, питатель ных сред, перевязочных материалов, лекарственных препаратов и др. Однако имеются бактерии, устойчивые к действию иони зирующих излучений, например Micrococcus radiodurans была вы делена из ядерного реактора.
Действие химических веществ. Химические вещества могут ока зывать различное действие на микроорганизмы: служить источ никами питания; не оказывать какого-либо влияния; стимули ровать или подавлять рост. Химические вещества, уничтожающие микроорганизмы в окружающей среде, называются дезинфи цирующими. Антимикробные хи мические вещества могут обладать бактерицидным, вирулицидным, фунгицидным действием и т.д.
Химические вещества, используемые для дезинфекции, отно сятся к различным группам, среди которых наиболее широко представлены вещества, относящиеся к хлор-, йод- и бромсодержащим соединениям и окислителям.
Антимикробным действием обладают также кислоты и их соли (оксолиновая, салициловая, борная); щелочи (аммиак и его соли). Стерилизация – предполагает полную инактивацию микробов в объектах, подвергшихся обработке. Дезинфекция — процедура, пре дусматривающая обработку загрязненного микробами предмета с целью их уничтоже ния до такой степени, чтобы они не смогли вызвать инфекцию при использовании дан ного предмета. Как правило, при дезинфек ции погибает большая часть микробов (в том числе все патогенные), однако споры и некоторые резистентные вирусы могут остаться в жизнеспособном состоянии. Асептика – комплекс мер, направленных на предупреждение попадания возбудителя инфекции в рану, органы больного при операциях, лечебных и диагностических процедурах. Методы асептики применяют для борьбы с экзогенной инфекцией, источниками которой являются больные и бактерионосители. Антисептика – совокупность мер, направленных на уничтожение микробов в ране, патологическом очаге или организме в целом, на предупреждение или ликвидацию воспалительного процесса.
Серологические реакции, используемые для диагнос тики
Иммунные реакции используют при диа гностических и иммунологических исследо ваниях у больных и здоровых людей. С этой целью применяют серологические методы, т. е. методы изучения антител и антигенов с помо щью реакций антиген—антитело, определяе мых в сыворотке крови и других жидкостях, а также тканях организма.
Обнаружение в сыворотке крови боль ного антител против антигенов возбудите ля позволяет поставить диагноз болезни. Серологические исследования применяют также для идентификации антигенов микро бов, различных биологически активных ве ществ, групп крови, тканевых и опухолевых антигенов, иммунных комплексов, рецепто ров клеток и др.
При выделении микроба от больного про водят идентификацию возбудителя путем изучения его антигенных свойств с помощью иммунных диагностических сывороток, т. е. сывороток крови гипериммунизированных животных, содержащих специфические ан титела. Это так называемая серологическая идентификация микроорганизмов.
В микробиологии и иммунологии широко применяются реакции агглютинации, преци питации, нейтрализации, реакции с участи ем комплемента, с использованием меченых антител и антигенов (радиоиммунологичес кий, иммуноферментный, иммунофлюоресцентный методы). Перечисленные реакции различаются по регистрируемому эффекту и технике постановки, однако, все они осно ваны на реакции взаимодействия антигена с антителом и применяются для выявления как антител, так и антигенов. Реакции иммуните та характеризуются высокой чувствительнос тью и специфичностью.
Особенности взаимодействия антитела с ан тигеном являются основой диагностических реакций в лабораториях. Реакция invitroмеж ду антигеном и антителом состоит из специ фической и неспецифической фазы. В специ фическую фазу происходит быстрое специфи ческое связывание активного центра антитела
с детерминантой антигена. Затем наступает неспецифическая фаза — более
|
Билет№11
Методы стерилизации, аппаратура.
Стерилизация предполагает полную инактивацию микробов в объектах, подвергающихся обработке. Существует три основных метода стерили зации: тепловой, лучевой, химической.
Тепловая стерилизацияоснована на чувстви тельности микробов к высокой температуре. При 60 "С и наличии воды происходит денату рация белка, деградация нуклеиновых кислот, липидов, вследствие чего вегетативные фор мы микробов погибают. Споры, содержащие очень большое количество воды в связанном состоянии и обладающие плотными оболоч ками, инактивируются при 160—170 °С.. Для тепловой стерилизации применяют, в основном, сухой жар и пар под давлением.
Стерилизацию сухим жаром осуществля ют в воздушных стерилизаторах (прежнее название — «сухожаровые шкафы или печи Пастера»). Воздушный стерилизатор пред ставляет собой металлический плотно закры вающийся шкаф, нагревающийся с помощью электричества и снабженный термометром. Обеззараживание материала в нем произво дят, как правило, при 160 °С в течение 120 мин. Однако возможны и другие режимы: 200 °С - 30 мин, 180 "С - 40 мин.
Стерилизуют сухим жаром лабораторную посуду и другие изделия из стекла, инстру менты, силиконовую резину, т. е. объекты, которые не теряют своих качеств при высокой температуре. Большая часть стерилизуемых предметов не выдерживает подобной обработки, и поэтому их обеззараживают в паровых стерилизаторах.
Обработка паром под давлением в паровых стерилизаторах (старое название — «автокла вы») является наиболее универсальным мето дом стерилизации.
Паровой стерилизатор— металлический цилиндр с прочными стенками, герметически закрывающийся, состоящий из водопаровой и стерилизующей камер. Аппарат снабжен манометром, термометром и другими конт рольно-измерительными приборами. В авто клаве создается повышенное давление, что приводит к увеличению температуры кипения. Поскольку кроме высокой температуры на микробы оказывает воздействие и пар, споры погибают уже при 120 °С. Наиболее распростра ненный режим работы парового стерилизатора: 2 атм — 121 °С — 15—20 мин. Время стерилиза ции уменьшается при повышении атмосфер ного давления, а следовательно, и температуры кипения (136 °С — 5 мин). Микробы погибают за несколько секунд, но обработку материала производят в течение большего времени, так как, во-первых, высокая температура должна быть и внутри стерилизуемого материала и, во-вторых, существует так называемое поле безопасности (рассчитанное на небольшую не исправность автоклава). Стерилизуют в автоклаве бульшую часть предметов: перевязочный материал, белье, коррозионно-устойчивые металлические инструменты, питательные среды, растворы, инфекционный материал и т. д.
Одной из разновидностей тепловой стери лизации является дробная стерилизация, ко торую применяют для обработки материалов, не выдерживающих температуру выше 100 °С, например, для стерилизации питательных сред с углеводами, желатина. Их нагревают в во дяной бане при 80 °С в течение 30—60 мин.
В настоящее время применяют еще один метод тепловой стерилизации, предназначен ный специально для молока — ультравысоко температурный (УВТ): молоко обрабатывают в течение нескольких секунд при 130—150 °С.
Химическая стерилизацияпредполагает ис пользование токсичных газов: оксида этиле на, смеси ОБ (смеси оксида этилена и бро мистого метила в весовом соотношении 1:2,5) и формальдегида. Эти вещества являются алкилирующими агентами, их способность в присутствии воды инактивировать активные группы в ферментах, других белках, ДНК и РНК приводит к гибели микроорганизмов.
Стерилизация газами осуществляется в присутствии пара при температуре от 18 до 80 °С в специальных камерах. В больницах используют формальдегид, в промышленных условиях — оксид этилена и смесь ОБ. Перед химической стерилизацией все из делия, подлежащие обработке, должны быть высушены.
Этот вид стерилизации небезопасен для персонала, для окружающей среды и для па циентов, пользующихся простерилизованными предметами (большинство стерилизующих агентов остается на предметах).
Однако существуют объекты, которые мо гут быть повреждены нагреванием, например, оптические приборы, радио- и электронная аппаратура, предметы из нетермостойких по лимеров, питательные среды с белком и т. п., для которых пригодна только химическая сте рилизация. В последнее время в связи с широким рас пространением в медицинской практике изде лий из термолабильных материалов, снабжен ных оптическими устройствами, например эндоскопов, стали применять обезврежива ние с помощью химических растворов. После очистки и дезинфекции прибор помещают на определенное время (от 45 до 60 мин) в сте рилизующий раствор, затем прибор должен быть отмыт стерильной водой. Для стери лизации и отмывки используют стерильные емкости с крышками. Простерилизованное и отмытое от стерилизующего раствора изделие высушивают стерильными салфетками и по мещают в стерильную емкость. Все манипу ляции проводят в асептических условиях и в стерильных перчатках. Хранят эти изделия не более 3 суток.
Лучевая стерилизацияосуществляется либо с помощью гамма-излучения, либо с помо щью ускоренных электронов. Лучевая стерилизация является альтернати вой газовой стерилизации в промышленных условиях, и применяют ее также в тех случаях, когда стерилизуемые предметы не выдержи вают высокой температуры. Лучевая стерили зация позволяет обрабатывать сразу большое количество предметов (например, одноразо вых шприцев, систем для переливания крови). Благодаря возможности широкомасштабной стерилизации, применение этого метода впол не оправданно, несмотря на его экологичес кую опасность и неэкономичность. Еще одним способом стерилизации является фильтрование. Фильтрование с помощью раз личных фильтров (керамических, асбестовых, стеклянных), а в особенности мембранных уль трафильтров из коллоидных растворов нитроцеллюкозы или других веществ позволяет освободить жидкости (сыворотку крови, лекарства) от бак терий, грибов, простейших и даже вирусов. Для ускорения процесса фильтрации обычно создают повышенное давление в емкости с фильтруемой жидкостью или пониженное давление в емкости с фильтратом.
|
Билет№12
Осложнения антибиотикотерапии, их предупреждение.
Как и всякие лекарственные средства, практически каждая группа антимикробных химиопрепаратов может оказывать побочное действие, причем и на макроорганизм, и на микробы, и на другие лекарственные средства.
Осложнения со стороны макроорганизма
Наиболее частыми осложнениями анти микробной химиотерапии являются:
Токсическое действие препаратов. Как правило, развитие этого осложнения зависит от свойств самого препарата, его до зы, способа введения, состояния больного и проявляется только при длительном и систе матическом применении антимикробных химиотерапевтических препаратов, когда созда ются условия для их накопления в организме. Особенно часто такие осложнения бывают, когда мишенью действия препарата являются процессы или структуры, близкие по составу или строению к аналогичным структурам кле ток макроорганизма. Токсическому действию антимикробных препаратов особенно подвер жены дети, беременные, а также пациенты с нарушением функций печени, почек.
Побочное токсическое влияние может прояв ляться как нейротоксическое (например, гликопептиды и аминогликозиды оказывают ототоксическое действие, вплоть до полной потери слуха за счет воздействия на слуховой нерв); нефротоксическое (полиены, полипептиды, аминогликозиды, макролиды, гликопептиды, сульфаниламиды); общетоксическое (противо грибковые препараты — полиены, имидазолы); угнетение кроветворения (тетрациклины, суль фаниламиды, левомицетин/хлорамфеникол, который содержит нитробензен — супрессор функции костного мозга); тератогенное [ами ногликозиды, тетрациклины нарушают развитие костей, хрящей у плода и детей, формирова ние зубной эмали (коричневая окраска зубов), левомицетин/хлорамфеникол токсичен для но ворожденных, у которых ферменты печени не полностью сформированы («синдром серого ребенка»), хинолоны — действуют на развива ющуюся хрящевую и соединительную ткани].
Предупреждение осложнений состоит в от казе от противопоказанных данному пациенту препаратов, контроле за состоянием функций печени, почек и т. п.
Дисбиоз (дисбактериоз). Антимикробные химиопрепараты, особен но широкого спектра, могут воздействовать не только на возбудителей инфекций, но и на чувствительные микроорганизмы нормаль ной микрофлоры. В результате формируется дисбиоз, поэтому нарушаются функции ЖКТ, возникает авитаминоз и может развиться вто ричная инфекция (в том числе эндогенная, например кандидоз, псевдомембранозный ко лит). Предупреждение последствий такого рода осложнений состоит в назначении, по возможности, препаратов узкого спектра действия, сочетании лечения основного заболевания с противогрибковой терапией (например, назначением нистатина), витаминотерапей, применением эубиотиков и т. п.
Отрицательное воздействие на иммунную систему. К этой группе осложнений отно сят прежде всего аллергические реакции. Причинами развития гиперчувствительности может быть сам препарат, продукты его распа да, а также комплекс препарата с сывороточ ными белками. Возникновение такого рода осложнений зависит от свойств самого пре парата, от способа и кратности его введения, индивидуальной чувствительности пациента к препарату. Аллергические реакции разви ваются примерно в 10 % случаев и проявля ются в виде сыпи, зуда, крапивницы, отека Квинке. Относительно редко встречается та кая тяжелая форма проявления аллергии, как анафилактический шок. Такое осложнение чаще дают бета-лактамы (пенициллины), рифамицины. Сульфаниламиды могут вызвать гиперчувствительность замедленного типа. Предупреждение осложнений состоит в тща тельном сборе аллергоанамнеза и назначении препаратов в соответствии с индивидуальной чувствительностью пациента. Кроме того, антибиотики обладают некоторым иммунодепрессивным действием и могут способство вать развитию вторичного иммунодефицита и ослаблению напряженности иммунитета.
Эндотоксический шок (терапевтический). Это явление, которое возникает при лече нии инфекций, вызванных грамотрицательными бактериями. Введение антибиотиков вызывает гибель и разрушение клеток и вы свобождение больших количеств эндотокси на. Это закономерное явление, которое со провождается временным ухудшением кли нического состояния больного.
Взаимодействие с другими препаратами. Антибиотики могут способствовать потен цированию действия или инактивации других препаратов (например, эритромицин стиму лирует выработку ферментов печени, которые начинают ускоренно метаболизировать ле карственные средства разного назначения).
Побочное воздействие на микроорганизмы.
Применение антимикробных химиопрепа-ратов оказывает на микробы не только прямое угнетающее или губительное воздействие, но также может привести к формированию ати пичных форм микробов (например, к обра зованию L-форм бактерий или изменению других свойств микробов, что значительно затрудняет диагностику инфекционных забо леваний) и персистирующих форм микробов. Широкое использование антимикробных ле карственных средств ведет также к форми рованию антибиотикозависимости (редко) и лекарственной устойчивости — антибиотикорезистентности (достаточно часто).
Реакция иммунофлюоресценции. Механизм, компонен ты,
Иммунофлюоресцентный метод (РИФ, реакция иммунофлюоресценции, реакция Кунса) - метод выявления специфических Аг с помощью Ат, конъюгированных с флюорохромом. Обладает высокой чувствительностью и специфичностью.
Применяется для экспресс-диагностики инфекционных заболеваний (идентификация возбудителя в исследуемом материале), а также для определения Ат и поверхностных рецепторов и маркеров лейкоцитов (иммунофенотипирование) и др. клеток.
Обнаружение бактериальных и вирусных антигенов в инфек ционных материалах, тканях животных и культурах клеток при помощи флюоресцирующих антител (сывороток) получило широкое применение в диагностической практике. Приготовление флюоресцирующих сывороток основано на спо собности некоторых флюорохромов (например, изотиоцианата флюоресцеина) вступать в химическую связь с сывороточными белками, не нарушая их иммунологической специфичности.
| |
|
|
Скачать 0.51 Mb.