Пептид если от 10 до 40 аминокислот полипептид
 Скачать 7.45 Mb.
|
5 вопросМетоды выделения индивидуальных белков: избирательное осаждение солями и органическими растворителями, гель-фильтрация, ионообменная хроматография, аффинная хроматография Большинство белков тканей хорошо растворимо в 8–10% растворах солей. При экстракции белков широко применяют различные буферные смеси с определенными значениями рН среды, органические растворители, а также неионные детергенты – вещества, разрушающие гидрофобные взаимодействия между белками и липидами и между белковыми молекулами. Из органических соединений, помимо давно применяемых водных растворов глицерина, широко используют (особенно для солюбилизации) слабые растворы сахарозы. На растворимость белков при экстракции большое влияние оказывает рН среды, поэтому в белковой химии применяют фосфатные, цитратные, боратные буферные смеси со значениями рН от кислых до слабощелочных, которые способствуют как растворению, так и стабилизации белков. Особенно широкое распространение получили трис-буферные системы, представляющие собой смеси 0,2 М раствора трис-(оксиметил)-аминометана (HOCH2)3CNH2(сокращенно обозначают «трис») с 0,1 М раствором хлороводородной кислоты в разных соотношениях. Для выделения белков сыворотки крови используют способы их осаждения этанолом (см. метод Кона), ацетоном, бутанолом и их комбинации. Почти все органические растворители разрывают белок-липидные связи, способствуя лучшей экстракции белков. Для получения из биологического материала белков в чистом, гомогенном, состоянии применяют различные детергенты, способствующие расщеплению белок-липидных комплексов и разрыву белок-белковых связей . В частности, для освобождения белков (ферментов), прочно связанных с биомембранами митохондрий или других субклеточных структур, применяют тритон Х-100, додецилсульфат натрия и дезоксихолат натрия. детергенты, вызывая разрыв белок-белковых связей, разрушают олигомерную (четвертичную) структуру белков. Ионная хроматография: основана на разделении белков, различных по суммарному заряду при опред. значениях рН и ионной силы раствора. При пропускании раствора белков ч/з хроматографическую колонку часть белков задерживаются в ней в рез-те электростатических взаимодействий. В качестве неподвижной фазы используют ионообменники-органич. вещ-ва содержащие заряженые функциональные группы. Афинная хроматография:основана на избирательном взаимодействии белков с лигандами, прикрепленными к твердому носителю. В качестве лиганда используется субстрат или кофермент. Ч/з колонку заполненную лигандом пропускают раствор, содержащий смесь белков. К лиганду присоединяется только белок, специфично взаимодействующий с ним. Гель фильтрация (метод разделения белков по молекулярной массе или метод молекулярного сита): Разделение проводят в хроматографических колонках, заполненных сферическими частицами набухшего геля(размером 10-500 мкм) из полимерных материалов. Частицы геля проницаемы благодаря внутренним каналам, которые характеризуются определенным средним диаметром. Смесь белков вносят в колонку с гелем и элюируют буферным раствором. Белковые молекулы, не способные проникать в гранулы геля (помечены красным цветом), будут перемещаться с высокой скоростью. Средние (зеленого цвета) и небольшие белки (синего цвета) будут в той или иной степени удерживаться гранулами геля. На выходе колонки элюат собирают в виде отдельных фракций. Объем выхода того или иного белка зависит в основном от его молекулярной массы. 6 вопросМногообразие белков. Глобулярные и фибриллярные белки. Простые белки: общая характеристика. Сложные белки: классификация, общая характеристика. Классификация белков по биологическим функциям. Семейства родственных белков (сериновые протеазы, иммуноглобулины). В организме чела 50тыс. белков,отличающихся первичной струтрурой,конформацией,строением активного центра и функцями. Кроме того белки различаются количеством амино-кт, из кот они построены. К глобулярным относ белки форма кот – эллипс. Они имеют компактную стр-ру и многие из них за счёт удаления гидрофобных радикалов внутрь хорошо р-римы в воде (глобин). Фибриллярные белки имеют вытянутую нитевидную структуру. К ним относятся коллагены, эластин, кератин, вып в орг чел стр-рную ф-ю. Простые белки содерж в своём составе только полипептидные цепи, сост из аминок-тных остатков. Сложные белки содерж помимо полипептид цепей небелковую часть, присоед к белку слабыми или ковалентными связями. Небелковая часть может быть представлена ионами Ме, к-либо орг молекулами и носит наз простетической группы. Классификация сложн белков: 1.хромопротеины(прост б+окраш небелк компонент)-гемопротеины и флавопротеины, 2.нуклеопротеины(белок+нуклеиновая к-та)-дезоксирибонуклеопротеины и рибонуклеопротеины, 3.липопротеины(белок+липид)-ЛПВП, ЛПНП, ЛПОНП, хиломикроны, 4.фосфопротеины(белок+фосфорная к-ты)-казеиноген молока, овальбумин, ихтулин, 5.гликопротеины(белок+углеводы/их производные)-интерфероны, трансферрин, церулоплазмин, муцин,6.металлопротеины(белок+ионы металла)-ферритин, трансферрин, гемосидерин. По сходству выполняемых ф-ий белки можно разделить на группы: - ферменты (специализир белки, ускоряющие теч хим р-ий), - регуляторные белки (относятся к белковым гормонам, участвующие в поддержании гомеостаза), - рецепторные белки (сигнальные молекулы действуют на внутриклет процессы через взаимодейств с белками- рецепторами), - транспортные б (переносят специфич лиганды от одного органа к другому), стр-рные б (предают форму тканям, создают опору, опред мех св-ва), - защит б (узнают и связывают чужеродные молекулы, нейтрализуя их), - сократительные белки (при вып своих фи-й наделяют Клетку способностью сокращатся и передвигаться). Белки, имеющие гомологичные участки полипептид цепи, сходную конформацию и родственные ф-и выд в сем-ва белков. Семейство сериновых протеаз.Это семейство ферментов, которые используют уникально активированный остаток серина, расположенный в активном центре, для связывания и каталитического гидролиза пептидных связей в белковых субстратах. Мишени для сериновых протеаз - специфические пептидные связи в белках. Для всех белков этого семейства характерно наличие в активном центре остатков Сер195, Гис57, Асп102. Некоторые амк замены привели к изменению субстр. специфичности этих белков и к возникновению функционального многообразия внутри этого семейства. Так, пищеварительные сериновые протеазы участвуют в переваривании денатурированных пищевых белков. К ним относят трипсин, химотрипсин, эластазу, но каждый из этих ферментов предпочитает разрывать пептидные связи, образованные определёнными аминокислотами. |