Клиническая биохимия. клин биохимия. Понятие и принципы клинической биохимии. Клиническая биохимия
 Скачать 283 Kb.
|
|
Понятие и принципы клинической биохимии. Клиническая биохимия изучает биохимические изменения, происходящие в организме при различных заболеваниях и патологических состояниях, способы и методы обнаружения этих изменений. Изучение отклонений базируется на естественном течении процессов. Клиническая биохимия традиционно разделяется на общую и частную. Общая решает следующие задачи: Разработка общих методических подходов биохимических исследований патологических процессов. Установление границы нормы тех или иных параметров. Выявление и устранение причин ошибок при проведении биохимических исследований. Осуществление контроля качества биохимических исследований. Частная клиническая биохимия использует методы и приемы общей клинической биохимии в определенных ветеринарных дисциплинах с учетом их особенности и специфики. Задачи клинической биохимии: 1) изучение биохимических изменений в организме при патологии; 2) освоение традиционных и перспективных методов биохимического исследования; 3) клиническая интерпретация результатов биохимического исследования; 4) разработка лечебно-профилактических мероприятий с учетом данных лабораторных анализов. Клиническая биохимия исходит из положения, что все заболевания имеют биохимическую основу и являются нарушением либо в структуре молекул, либо в ходе химических реакций и процессов, а проявляются патологическими состояниями организма, выражающимися в нарушении функции отдельных органов или целого организма. Предметом изучения клинической биохимии являются, биохимические механизмы развития патологических процессов, взаимосвязь и взаимовлияние нарушений метаболизма в организме животных при заболеваниях. Биохимические реакции в организме в большинстве случаев являются многоступенчатыми, последовательными. Процессы, протекающие в организме, принято характеризовать стационарными концентрациями веществ. В состоянии равновесия концентрации веществ, участвующих в реакции, поддерживаются за счет восполнения исходных и удаления конечных продуктов. Изменение концентрации реагирующих веществ не приводит в отличие от закрытых систем к новому термодинамическому равновесию. В силу указанных причин система возвращается в первоначальное стационарное состоян Важнейшей особенностью всех биохимических реакций является их большая скорость, обусловленная присутствием ферментов — биологических катализаторов. Те же реакции вне организма при участии химических катализаторов обладают скоростью на несколько порядков меньше. Ферменты как катализаторы значительно более совершенны, чем химические катализаторы. Компонент искомый или определяемый в пробе вещества или контроля- аналит: Кровь Моча Слюна Ликвор Эякулят Пот Кал Выпотная жидкость(экссудат, транссудат) Соскоб Отпечаток Мазок Основным видом биологического материала, который подвергаются анализу в лаборатории, являются кровь. 1) Цельная кровь – проба венозной, артериальной или капиллярной крови в которой концентрация и свойства клеточных и внутриклеточных компонентов остаются относительно неизмененными по сравнению с состоянием in vivo (в момент взятия у животного образца какой-либо субстанции( (крови, мочи, желудочного содержимого, биоптата и т.д.), - биологической пробы, биологическая субстанция переходит из состояния in vivo в состояние in vitro). Добавление антикоагулянтов в пробу цельной крови стабилизирует клеточные и внутриклеточные компоненты на определенный период времени. 2) Сыворотка – неразделенная внеклеточная часть крови после завершения адекватного процесса свертывания крови. . Для отделения сыворотки от клеток крови в пробе крови, взятой у пациента, вакуумную пробирку следует оставить при комнатной температуре в течение, по меньшей мере 30 мин 3) Если в пробирку с пробой крови добавлен антикоагулянты, кровь остается жидкой (не сворачивается) и получаемая после центрифугирования жидкая часть, называется плазмой. Для тестов, проводимых при клинической биохимии, характерно их соответствие основной клинической цели обследования: 1.Профилактика – выявление ранее не наблюдавшегося отклонения от нормы. 2.Диагностика или дифференциально-диагностическое обследование – установление диагноза. 3.Контроль за лечением (мониторинг)– оценка эффективности лечебных мер. 4.Прогностическое обследование, диспансерное наблюдение – оценка степени выздоровления и восстановления нарушенных болезнью функций. Согласно современной концепции, в процессе клинического лабораторного исследования выделяют три этапа: 1) преаналитический (доаналитический); 2) аналитический; 3) постаналитический (послеаналитический) На преаналитическом этапе множество факторов оказывает выраженное влияние на результаты последующего аналитического измерения: предшествующий прием пищи, физиологическое состояние , возрастные и породные особенности, соблюдение анаэробных условий взятия биологического материала, соблюдение стерильных условий,предшествующие физические нагрузки. Во многих случаях для диагностики патологического процесса необходимо проведение функциональных проб с одновременным выполнением биохимическихисследований: тесты с нагрузкой глюкозой, функциональные тесты оценки детоксикационной функции печени, многократное взятие крови на исследование, многократный сбор мочи при проведении функциональных тестов почек. Аналитический этап контроля качества во всех лабораториях является наиболее совершенным. При наличии в лаборатории биохимических автоматизированных систем выполнение его происходит автоматически, включая и статистические параметры оценки внутрилабораторного контроля качества для каждого из исследуемых параметров. Использование при определении каждого из анализируемых образцов трех контрольных проб с низким, нормальным и высоким значением исследуемого параметра позволяет проконтролировать весь интервал (линейность) проводимых измерений. Умение оценивать результаты контроля качества во многом способствует высокому качеству диагностического процесса, поскольку широкие интервалы физиологических значений могут быть результатом суммы случайных ошибок, а динамика биохимических показателей при длительном наблюдении может быть результатом систематических ошибок. Наиболее сложным этапом контроля качества является постаналитический. Суть этого этапа составляет диагностическая интерпретация выполненных исследований и порой многочисленных результатов (концентрация метаболитов, ионов, парциальное давление газов, каталитическая активность ферментов, концентрация водородных ионов). Интегральная оценка многочисленных конкретных результатов, формирование при ряде патологических процессов биохимического диагноза, выделение основного патологического процесса, его осложнений, сопутствующих заболеваний зависят от квалификации сотрудников лаборатории, степени их коллегиального взаимодействия с клиницистами. На результаты лабораторных исследований могут влиять следующие факторы преаналитического этапа: ошибки идентификации пациента и образца биоматериала; биологические факторы – пол, возраст, физическое состояние, биологические ритмы, влияние среды обитания; устранимые факторы – прием пищи, голодание, положение тела, нагрузка,; ятрогенные факторы – диагностические процедуры, оперативные вмешательства, лечебные процедуры, прием лекарственных препаратов; условия взятия, временного хранения и транспортировки биологического материала – время взятия, срок сбора, подготовка участка тела для взятия материала, процедура взятия биоматериала, лабораторная посуда, воздействие факторов среды, консерванты и антикоагулянты, процедура первичной обработки; свойства аналита – биологический полупериод жизни, стабильность в биологическом материале при различных температурах, метаболизм in vitro, включая чувствительность к свету. 2. Методы анализа, применяемые в клинической биохимии При проведении клинических исследований по биохимии применяется ряд методов, выбор которых зависит от вида исследования и направления. 1. Метод -оптический количественный анализ, он основывается на регистрации изменений, происходящих с лучом света при прохождении его через исследуемый раствор. Оптические методы количественного анализа подразделяются следующим образом: 1) рефрактометрия; 2) поляриметрия; 3) фотометрия: а) абсорбционная: • спектрофотометрия; • нефелометрия (собственно нефелометрия и турбидиметрия); • атомно-абсорбционная фотометрия; б) эмиссионная: • флюориметрия; • пламенная фотометрия; • атомно-эмиссионный спектральный анализ. 2. Иммунохимические методы исследований — методы, основанные на спе- цифической реакции взаимодействия антигена с антителом. В связи с отличны- ми аналитическими характеристиками (высокая чувствительность и специфич- ность) иммунохимические методы используются в ситуациях, когда необходимо определить концентрации веществ, содержащихся в очень низких концентраци- ях в биологическом материалеПринципиальная схема иммунохимического анализа: AГ + AТ = комплекс AГ – АТ Целью анализа может быть детекция (выявление) антигена в биоматериале, либо детекция (выявление) антител. В зависимости от технологии выполнения все иммунохимические методы подразделяются следующим образом: 1) Гомогенный иммунохимический анализ. Исследуемый образец смешивается с необходимыми реагентами. Об образовании комплекса АГ-АТ судят по появлению новых свойств метки. 2) Гетерогенный иммунохимический анализ. В этих методах один из компонентов реакции (антиген или антитело) фиксирован на твердой фазе. 3) Иммунохимические методы на основе диффузии и электрофореза В процессе иммунодифузии растворенный антиген и растворенное антитело взаимодействуют между собой с образованием нерастворимого комплекса АГ-АТ (преципитат - образование твёрдой фазы (осадка) в растворе в результате химической реакции.). Детекцию (выявление) можно проводить либо визуально, либо при помощи специальной измерительной аппаратуры. При этом следует отметить, что здесь очень большое значение имеет точность в соотношении концентраций между антигенами и антителами. Согласно закономерности Гейдельберга-Кенделла, видимая преципитация с образованием крупных комплексов возможна только при определенном (эквивалентном) соотношении концентраций антигена и антител. 3. Методы фракционирования биологических жидкостей 1. Хроматография (от греч. chroma, род. пад. chro », «крас- ка») — один из наиболее избирательных методов разделения близких по химической структуре веществ. -Адсорбционная хроматография. -Тонкослойная хроматография -Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) -Колоночная жидкостная хроматография низкого давления -Аффинная хроматография -Гель-фильтрация (гель-хроматография) -Ионообменная хроматография. -Адсорбционная хроматография 2.Электрофорез — процесс разделения заряженных частиц под действием внешнего электрического поля. В результате проведения электрофореза можно осуществлять идентификацию и определение количества различных макромолекул, микрочастиц, клеток по их подвижности в направлении силовых линий электрического поля. -Иммуноэлектрофорез: а) Классический иммуноэлектрофорез, б) Иммуноэлектрофорез методом переноса - Ракетный имуноэлектрофорез (двумерный) - Электрофорез с последующей иммунофиксацией - Встречный иммуноэлектрофорез 4. Методы микроскопии в клинико-диагностической лаборатории 1 Методы световой микроскопии Метод светлого поля в проходящем свете Метод темного поля в проходящем свете Метод фазового контраста Исследование в поляризованном свете Исследования в свете люминесценции. Методы электронной микроскопии 5. Сухая химия («dry сhemistry») - подразумевает анализ биологических жидкостей с помощью технологий использования сухих реагентов на твердофазных носителях. После нанесения исследуемой жидкости на тест-системы про исходит активация реагентов и химическая реакция (как в пробирке). Учет результатов может быть качественным, полуколичественным и количественным. 6. Молекулярно-биологические методы исследований — группа методов, предназначенных для детекции (выявления) в биологическом материале нуклеиновой кислоты (РНК, ДНК) 7. Весовой (гравиметрический) анализ, основанный на выделении вещества в результате определенных реакций, высушивания и точного взвешивания его на аналитических либо торсионных весах. Примером этого анализа может служить определение содержания фибриногена по методу Рутберг. 8. Объемный (титрометрический) анализ, основанный на точном измерении объемов реагирующих между собой веществ в эквивалентных (равных) количествах.Примером может служить определение кислотности желудочного сока, хлоридов в биологических жидкостях титрометрическим способом и др. 9. Электрообъемные (электроаналитические) методы, основанные на электрохимических свойствах растворов. Примером этих методов является определение концентрации ионов водорода, хлора, натрия, калия, кальция в биологических жидкостях с помощью ионоселективных электродов. 3. ПРИНЦИПЫ ЗАБОРА МАТЕРИАЛА ДЛЯ КЛИНИКО-БИОХИМИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ. Химический состав биологического материала вариабелен. Он может за короткий промежуток времени значительно изменяться. Поэтому для получения сопоставимых результатов необходимо соблюдать ряд правил при отборе и хранении биологического материала. Это важно, так как нормативные значения определены с учетом этих правил. 1. Отбор материала необходимо производить с учетом суточной динамики. Кровь принято отбирать утром, до кормления. При повторном исследовании отбирать материал необходимо в одно и то же время. В течение четырех часов после кормления концентрация некоторых субстратов (общий белок, глюкоза, липиды и ряд. других) повышена (к примеру, норма для содержания глюкозы в сыворотке крови у крупного рогатого скота колеблется в пределах 2,2 - 3,2 ммолъ/л, однако в течение 1 - 2 часов после кормления ее концентрация может возрастать в 2-4 и более раз, при углеводном перекорме глюкоза может кратковременно появляться в моче). У некоторых видов животных: свиней и взрослых курей сразу после кормления ряд биохимических исследований в сыворотке крови невозможны вовсе из высокого содержания в ней жира и ряда др. веществ, придающих ей мутность. 2. Процесс отбора биологического материала должен быть максимально безболезненным и быстрым (беспокойство, болевая реакция, длительный венозный застой в месте инъекции значительно изменяют состав крови). 3. Взятие материала всегда проводят до лечебных процедур, особенно внутривенных инъекций электролитов, раствора глюкозы. Так же необходимо учитывать лекарственные препараты, которые вводились животному (например, вакцинация живыми вакцинами приводит к снижению фагоцитарной активности нейтрофилов). 4. Полученный материал сразу же помещается в чистую и закрытую посуду. Контакт с внешней средой не допускается. В случае, если исследуемое вещество (например, билирубин, витамин В2 и др.) разрушаются на свету, биологический материал помещают в светонепроницаемый пакет или ящик. 5. Биологические процессы продолжаются и in vitro, поэтому их необходимо минимизировать. Для этого, если не используются консерванты, наиболее подходит низкая температура. Клеточные структуры сохраняют при температуре 4 - 8 °С (не допуская замораживания). Сыворотку, плазму и другие безклеточные биологические материалы лучше сразу после получения замораживать и транспортировать в таком виде. Считается, что при температуре -25 °С активность ферментов минимальна. Для каждого определяемого показателя при определенных условиях существуют максимальные сроки хранения (указываются обычно в методиках). Так как кровь - основной объект клинической биохимии, наиболее часто подвергаемый биохимическому исследованию. Пробы крови берут у животных перед кормлением или через 5 - 6 часов после кормления. РАЗДЕЛ 2. КЛИНИЧЕСКАЯ БИОХИМИЯ НАРУШЕНИЙ ОБМЕНА ВЕЩЕСТВ Тема 2.1. Кровь в норме и патологии у различных видов животных. 1. Морфологический и химический состав крови в норме у различных видов животных 2. Изменение состава крови при патологических состояниях и интерпретация результатов исследований крови. 1. МОРФОЛОГИЧЕСКИЙ И ХИМИЧЕСКИЙ СОСТАВ КРОВИ В НОРМЕ У РАЗЛИЧНЫХ ВИДОВ ЖИВОТНЫХ Диагностическое знамение анализа картины крови. Исследование морфологического состава крови — один из важнейших диагностических методов в клинической практике. Органы кроветворения чрезвычайно чувствительны к различным физиологическим и особенно патологическим воздействиям на организм, и кровь тонко отражает результаты этих воздействий. Общий (клинический) анализ крови включает в себя определение концентрации гемоглобина, количества эритроцитов, других показателей красной крови, лейкоцитов, выведение лейкограммы, определение скорости оседания эритроцитов. Необходимо помнить, что состав и свойства периферической крови претерпевают определенные сдвиги под влиянием многих факторов. На морфологическую картину крови влияют возраст, порода и конституция животного, мышечное напряжение, сезон, лактация, условия кормления, содержания и др. Таким образом, состав крови в норме у животных может варьировать. В период новорожденнbz у животных повышено содержание эритроцитов, тромбоцитов и лейкоцитов; эти показатели значительно снижаются через 2...4 нед после рождения; в лейко-грамме у молодняка в первые дни жизни увеличено число нейт-рофилов (у телят до 80 %) и снижено число эозинофилов, среди нейтрофилов встречаются юные; наблюдают повышенный процент палочкоядерных форм. С возрастом, по мере старения животного, в крови количество лейкоцитов и лимфоцитов уменьшается, а нейтрофилов возрастает Отмечены и морфологические различия состава крови, связанные с полом животного. У самцов выше содержание эритроцитов, уровень гемоглобина, чем у самок При мышечном напряжении у животных (особенно у лошадей) кратковременно (на несколько часов) увеличиваются уровень гемоглобина, гематокрит, количество эритроцитов и лейкоцитов при относительном и абсолютном нейтрофилезе, лимфоцитопении и эозинопении. В горных местностях, где парциальное давление воздуха снижено, у животных количество эритроцитов и гемоглобина заметно выше, чем у животных равнинных территорий. У крупного рогатого скота в конце лета лейкоцитов в крови больше, чем в конце зимы У молочных (ангельнская, голландская, остфризская, ярославская) и мясных пород крупного рогатого скота (шортгорнская и герефордская) содержание эритроцитов, лейкоцитов выше, чем у животных мясо-молочного направления (метисышвицы и метисысимменталы). У животных костромской породы относительно больше эритроцитов, гемоглобина и лейкоцитов, чем у коров других пород. У коров кавказской бурой породы очень высокий процент лимфоцитов и содержится больше обычного лейкоцитов. У высокопродуктивных животных в крови форменных элементов больше, чем у животных низкопродуктивных На морфологический состав крови животных большое влияние оказывает солнечный свет: например, содержание клеток красной крови у крупного рогатого скота увеличивается в весенне-летний период и заметно снижается к зиме Характер кормов и тип кормления животных также отражаются на составе крови. Недостаточное по питательности кормление способствует снижению основных показателей крови. Неблагоприятно воздействует также одностороннее кормление, в том числе с обильной дачей сочных или концентрированных кормов Подсчет эритроцитов. Активный период жизненного цикла эритроцитов протекает в периферической крови, куда они поступают из красного костного мозга. Эритроцит — высокоспециализированная клетка, предназначенная для выполнения основной функции — транспорта 02 от легких к тканям и С02 от тканей к легким, что обеспечивается за счет гемоглобина, включенного в состав клетки. Кроме того, эритроциты принимают участие в регуляции кислотно-основного равновесия (гемоглобиновый буфер), транспортируют к тканям аминокислоты, липиды, адсорбируют токсины, участвуют в раде ферментативных процессов, а также поддерживают ионное равновесие в крови и тканях Процесс образования эритроцитов — эритропоэз — протекает в красном костном мозге. Родоначальный элемент эритропоэза — эритропоэтинчувствительная клетка, которую обычными методами определить не удается. Указанная клетка далее дифференцируется в эритробласты — самые ранние распознаваемые клетки эритрона, способные синтезировать гемоглобин. В дальнейшем эритробласты созревают и дифференцируются (с 3...4 митотическими делениями). Выделяют следующие стадии развития эритроцита — базофильные, полихроматофильные и оксифильные нор-мобласты, безъядерные ретикулоциты и, наконец, (уже в периферической крови) зрелые эритроциты. Заканчивая свой жизненный цикл через 110...130 дней, эритроциты фагоцитируются ретикулярными клетками, гистиоцитами, макрофагами и полинуклеарными лейкоцитами в селезенке, печени, легких, лимфатических узлах и других органах. Под влиянием гидролитических ферментов в эритрофагосомах происходит гемолиз и интенсивный распад гемоглобина, стромы и мембраны эритроцитов вплоть до образования низкомолекулярных продуктов. Эритроциты подсчитывают под микроскопом в счетной камере Горяева после предварительного разведения крови в меланжерах (кровосмесителях) или в пробирках (метод Н. М. Николаева). Используют также специальные приборы — эритрогемометры, фотоэлектроколориметры и кондуктометрические счетчики частиц (СФЭК-Ц-0,4, Целлоскоп, Культер, Пикоскель и др.). Увеличение количества эритроцитов — эритроцитоз (полицитемия, полиглобулия) бывает симптоматическим (вторичным) — относительным и абсолютным, реже истинным (первичным). Относительный симптоматический эритроцитоз (гемоконцентраци-онный) возникает чаще у животных при обильном потении, поносах, образовании транссудатов и экссудатов (экссудативные плевриты, перитониты, водянка грудной и брюшной полостей), непроходимости кишечника (механических илиусах), ожогах, во время или после интенсивной мышечной работы (за счет быстрого перемещения плазмы из сосудов в ткани). Абсолютный симптоматический эритроцитоз — результат реактивного раздражения эритропоэза. Он развивается при подъеме на высоту (как реакция на понижение парциального давления кислорода в воздухе), при гипоксических состояниях — врожденных пороках сердца, мио-кардиодистрофии, декомпенсации сердца, а также при хронической альвеолярной эмфиземе легких, отравлениях фосфором, окисью углерода, хлором. Чаще отмечают снижение числа эритроцитов в крови — эритропению — (олигоцитемия) при анемиях, обусловленных недостаточным или неполноценным кормлением (особенно при дефиците белков, железа, меди, кобальта, марганца, витаминов С и группы В), при инфекционных заболеваниях (инфекционная анемия лошадей и др.), интоксикациях (вследствие длительных нагноительных и септических процессов), отравлениях гемолитическими ядами, инвазионных болезнях, гемоспоридиозах (пироплазмоз, нутталиоз, тейлериоз, трипанозамоз и др.), лейкозах, злокачественных новообразованиях, обильных кровопотерях. К анемиям относят и состояния, при которых количество эритроцитов не уменьшено (может быть даже увеличено), но обязательно снижено содержание гемоглобина. Подсчет лейкоцитов. Лейкоциты, или белые кровяные тельца, в организме выполняют разные функции — защитную, трофическую, транспортную и др. В эту группу клеток входят основные эффекторы иммунных и воспалительных реакций. Лейкоциты в зависимости от морфологии клеточного ядра, а также наличия цитоплазматических включений классифицируют на полиморфноядерные и мо-нонуклеары, гранулоциты и агрунолоциты. Гранулоциты. К ним относят базофилы, эозинофилы и нейтрофилы. Базофилы способны в слабой степени к фагоцитозу; содержат окислительные ферменты; предотвращают свертывание крови и лимфы в очаге воспаления, так как содержат гепарин; участвуют в жировом обмене, во взаимодействии антиген—антитело. При аллергических реакциях происходит дегрануляция этих клеток с высвобождением гистамина. Эозинофилы способны фагоцитировать комплексы антиген — антитело и некоторые микроорганизмы, их основная функция связана с участием в аллергических реакциях, при которых они нейтрализуют избыток гистамина, выделяющегося в большом количестве при аллергии. Эозинофилы переносят продукты распада белков, обладающих антигенными свойствами, предупреждая тем самым местное скопление антигенов в большом количестве. Следовательно, при аллергических реакциях эозинофилы связывают и транспортируют антигены и гистамин к обезвреживающим органам. Эти клетки участвуют в процессах тканевой регенерации и в окислительных процессах. Нейтрофилы, будучи способными к самостоятельному передвижению и обладая фагоцитарной активностью, защищают организм от инфекции (мигрируют в ткани к участкам воспаления и некроза). Эти клетки — активные ферментообразователи (лизо-цим, лактоферрин, коллагеназа, аминопептидаза, щелочная фос-фатаза, оксидаза, миелопероксидаза, пероксидаза, каталаза, амилаза, лейкопротеаза, диастаза, липаза и др.) участвуют в белковом обмене, образовании и переносе антител; стимулируют процессы регенерации тканей, свертывания крови. Все гранулоциты образуются (гранулоцитопоэз) в красном костном мозге, проходя в процессе созревания ряд стадий: коммити-рованная клетка-предшественница гранулоцитов и макрофагов (морфологически не идентифицируемых), миелобласты, промиелоциты, миелоциты (молодые), метамиелоциты (юные), гранулоциты (базофильные, нейтрофильные и эозинофильные). Продолжительность жизни гранулоцитов 9... 15 дней, причем большую часть этого времени они остаются в костном мозге (до 60 % всех гранулоцитов), а внутрисосудистый (здесь менее 1 % клеток) период их жизни составляет от нескольких часов до 2 дней, после чего гранулоциты мигрируют в ткани (до 40 % всех гранулоцитов), где проявляют свои основные функции. Местами гибели гранулоцитов являются желудочно-кишечный тракт, легкие, селезенка, печень и другие органы. Агранулоциты. В этой группе клеток выделяют моноциты и лимфоциты. Моноциты — самые активные фагоциты периферической крови; они способны к амебовидному движению; содержат протео-литические ферменты; участвуют в координации сложных взаимодействий в интегрированном иммунном ответе; регулируют липидный обмен; входят в индуцирующее гемопоэз микроокружение. Моноциты образуются (моноцитопоэз) в красном костном мозге, проходя следующие стадии развития: КОЕ-М — клетка-предшественница моноцитарного ростка (морфологически не дифференцируемая), монобласт, промоноцит и моноцит. В периферической крови моноциты проводят только 20 ч, а затем через стенки капилляров выходят в окружающие ткани, где трансформируются в макрофаги. Тканевые макрофаги — более крупные клетки с эксцентрично расположенным ядром, вакуолизирован-ной цитоплазмой, содержащей многочисленные включения, обладают большей фагоцитарной способностью. Макрофаги в значительном количестве пронизывают соединительную ткань (гистиоциты); образуют скопления в синусах печени (купферовы клетки), легких (альвеолярные макрофаги), селезенке (утилизируют стареющие эритроциты), лимфатических узлах, коже, костном мозге, нервной ткани (клетки микроглии), где живут до 40...60 дней. Совокупность макрофагов организма образует систему фагоцитирующих мононуклеаров. Лимфоциты периферической крови подразделяют на две основные категории: В-лимфоциты и Т-лимфоциты, разделяющиеся на популяции — Т-хелперы, Т-супрессоры и Т-эффекторы. Лимфоциты присутствуют практически во всех тканях организма животных, особенно много их на слизистых оболочках Лимфоциты участвуют в образовании гуморального (В-лимфо-циты) и тканевого (Т-лимфоциты) иммунитета; продуцируют сывороточные у-глобулины; обладают фагоцитарной способностью; содержат рад ферментов (липаза, катепсин, амилаза, лизоцим и др.); фиксируют токсины; участвуют в кишечном пищеварении, захватывая и транспортируя липиды; подают сигналы красному костному мозгу о том, какие виды клеток крови и в каком количестве необходимо продуцировать для нужд организма; Т-лимфоци-ты участвуют в регуляции пролиферации В-лимфоцитов Лимфоциты начинают развиваться в красном костном мозге из частично детерминированных клеток-предшественниц лимфопоэза. Одни из них мигрируют в тимус, где образуются Т-зависимые лимфоциты, составляющие основную массу лимфоцитов крови (около 80 % всех лимфоцитов). Т-лимфоциты — долгожители (до 200...300 дней). Из других клеток-предшественниц в костном мозге образуются клетки-предшественницы В-лимфоцитов, которые дозревают во вторичных лимфоидных органах (лимфатические узлы, селезенка, пейеровы бляшки, солитарные лимфатические узелки, глоточные ми ид ал хны). В-лимфоциты — короткоживущие клетки, составляющие меньшую часть циркулирующих в крови лимфоцитов (около 20 %). В тимусе и вторичных лимфоидных органах из клеток-предшественниц обеих разновидностей лимфоцитов образуются, проходя через стадии лимфобласта и пролимфоцита, зрелые лимфоциты. В отличие от нейтрофилов, которые после попадания в ткани, вероятно, обратно в кровяное русло не возвращаются, лимфоциты способны к рециркуляции Лейкоциты подсчитывают в счетной камере Горяева (после разведения крови в меланжерах или пробирках) или с помощью кондуктометрических счетчиков. Увеличение количества лейкоцитов в крови — лейкоцитоз, уменьшение — лейкопения. Изменение количества лейкоцитов в крови характеризует функциональное состояние кроветворных органов, причем лейкоцитоз свидетельствует об усилении лейкопоэза, а лейкопения — о его ослаблении. В этом и заключается большое значение выявления сдвигов в содержании лейкоцитов Различают относительный (перераспределительный) и абсолютный (реактивный, или органический) лейкоцитозы. При перераспределительном лейкоцитозе лейкоциты поступают в периферическую кровь из кровяных депо в результате сосудистых реакций. Реактивный лейкоцитоз появляется как реакция органов лейкопоэза на инфекцию, интоксикацию, аллергический процесс. В основе органического лейкоцитоза лежит опухолевое, лейкозное поражение аппарата лейкопоэза. Лейкоцитоз разделяют также на физиологический, медикаментозный и патологический Физиологический лейкоцитоз может быть при беременности (увеличение количества лейкоцитов главным образом за счет нейтрофилов) — незадолго до родов и сразу после них; у новорожденных животных (в основном за счет нейтрофилов в первые дни после рождения, в течение последующих двух недель содержание различных клеток белой крови выравнивается); после приема корма (пищеварительный лейкоцитоз достигает максимума через 2..,3 ч; у животных с многокамерным желудком его практически нет); после тяжелой физической нагрузки (миогенный лейкоцитоз). Медикаментозный лейкоцитоз возникает после парентерального введения животным белковых препаратов, вакцин, сывороток, адреналина, кортикостероидов и кортикотропина, гистамина, гепарина, ацетилхолина, жаропонижающих средств, эфирных масел, препаратов наперстянки, некоторых антибиотиков и сульфаниламидов, скипидара, ингаляции лекарственных препаратов, при повышенной концентрации диоксида углерода и др Патологический лейкоцитоз возникает при многих острых инфекционных заболеваниях, лихорадочно-воспалительных процессах (абсцессы, плевриты, артриты, флегмона и др.), острых и хронических лейкозах (лейкемические и сублейкемические варианты), уремии, кровепаразитарных заболеваниях, травмах, диабетической коме, аллергии, инвазиях, обширных ожогах, после обильных кровопотерь и т. д. Уменьшение количества лейкоцитов в крови — лейкопения — встречается при вирусных болезнях, паратифе телят, стахиботрио-токсикозе, истощении защитных сил организма, лучевой болезни ит. д. Необходимо отметить, что при одном и том же заболевании в зависимости от стадии болезни, состояния животного, многих других причин может развиваться и лейкоцитоз, и лейкопения. Подсчет тромбоцитов. В тромбоцитах (кровяных пластинках) содержится больше десятка факторов, принимающих участие в свертывании крови. Кроме того, тромбоциты участвуют в защитных реакциях организма, прилипая к бактериям и паразитам, захватывая токсины и микробы и транспортируя их в селезенку. Активированные тромбоциты секретируют амины и липиды, нейтральные и кислые гидролазы, которые участвуют в воспалительных процессах, а также в регулировании иммунитета. Тромбоциты образуются (тромбоцитопоэз) в красном костном мозге из тромбоцитопоэтинчувствительных клеток. Мегакарио-бласты — первые морфологически определяемые клетки этого ряда, из которых при дальнейшем созревании образуются проме-гакариоциты и мегакариоциты. В процессе отшнуровывания цитоплазмы от последних формируются кровяные пластинки. В периферической крови находятся только тромбоциты и в очень редких случаях при патологии могут встретиться мегакариоциты. Продолжительность жизни тромбоцитов 5...8 дней, они погибают главным образом в селезенке. Тромбоциты подсчитывают в счетной камере Горяева или косвенным методом по окрашенным мазкам крови (метод Фонио). Чаще всего обнаруживают уменьшение числа тромбоцитов в крови — тромбоцитопению — при большинстве бактериальных и вирусных инфекций, геморрагическом диатезе (скорбут), анемии, А-гиповитаминозе, стахиботриотоксикозе, лучевой болезни, пироплазмозе, уремии, гипотиреозе, воспалении кишечника, на клинической стадии лейкозов, после приема противомикробных средств, диуретиков, антигистаминных препаратов. Относительно реже встречается увеличение содержания тромбоцитов — тромбоцитоз, которое обнаруживают при сгущении крови, воспалении легких, плеврите, саркоме, ожогах, асфиксии, травмах с размозжением мышечной ткани, ишемической болезни сердца, на стадии выздоровления при инфекционных болезнях и после хирургических операций, при миелолейкозе. Подсчет клеток крови у птиц. У птиц эритроциты и тромбоциты овальной формы и содержат ядра. Кроме того, эритроциты не разрушаются 1...3%-м раствором уксусной кислоты, который входит в состав жидкости Тюрка для лизиса эритроцитов при сохранении целости лейкоцитов. Поэтому у птиц сначала подсчитывают в камере Горяева все виды клеток крови, а затем по окрашенным мазкам определяют (при подсчете 1000 клеток) процент эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов. После несложного пересчета определяют число клеток каждого вида в 1 мкл крови. Более простой метод — прямой подсчет в камере Горяева каждого вида клеток (эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов) после предварительного разведения крови (в меланжере или пробирке) специальными жидкостями-разбавителями, содержащими краски и соли (например, 0,1 %-й раствор азура II на 0,85%-м растворе натрия хлорида или 0,01 %-й раствор кристаллического фиолетового на 3,8%-м растворе натрия цитрата с формалином). Морфология клеток крови. Для выявления патологических изменений в эритроцитах, тромбоцитах и лейкоцитах, а также дифференциации отдельных видов лейкоцитов с целью выведения лейкограммы, определения молодых и атипичных клеток крови используют окрашенные мазки крови. При дифференциации клеток крови на окрашенных препаратах обращают внимание на следующие морфологические признаки. Размер клеток крови очень различен: от 1...4 мкм в диаметре у тромбоцитов до 50...70 мкм у мегакариоцитов. Обычно молодые клетки крупнее более зрелых, хотя есть и исключения из этого правила (промиелоциты больше миелобластов, мегакариоциты крупнее мегакариобластов). Форма клеток обычно круглая, реже неправильная (ретикулярные клетки, мегакариоциты, иногда моноциты). Важное диагностическое значение имеет изменение формы эритроцитов (звездчатые, овальные, сильнодеформированные). Соотношение ядро — цитоплазма обычно тем больше, чем моложе клетка. Особенно показательно это увеличение у бластных и злокачественных (опухолевых) клеток Форма ядра чаще всего круглая или слегка вогнутая. Только в клетках гранулоцитарного, мегакариоцитарного и моноцитарного рядов ядро вытянутое, сегментированное или полиморфное. Хроматиновая структура ядра имеет большое значение для дифференциации клеток крови. При окраске оксихроматин приобретает светло-фиолетово-коричневый цвет, а базихроматин — темно-фиолетово-коричневый. Чем моложе клетка, тем больше в ядре ок-сихроматина, поэтому ядро окрашивается светлее, чем в зрелых клетках. По мере созревания в ядре увеличивается количество ба-зихроматина и оно окрашивается в более темный цвет. У молодых (бластных) клеток базихроматин образует тонкую мелкопористую сетку, расположенную на гомогенном светлом ок-сихроматиновом фоне. В процессе созревания клетки в узлах стенки базихроматин образует утолщения. В дальнейшем сетка исчезает, а базихроматин сливается в большие комки, которые окрашиваются в темно-фиолетовый цвет (участки ядра или все целиком). Ядрышки (нуклеолы) содержатся в ядрах молодых, зародышевых клеток крови (бластах). Они круглой или овальной формы и окрашиваются в светло-синий или светло-фиолетовый цвет. В ядре зрелых клеток нуклеол нет. Цитоплазма молодых (бластных) клеток базофильна. При созревании клеток она меняет свой цвет соответственно виду клетки. Цитоплазма лишена структуры, у эритробластов она пористая, у лимфоцитов и плазмоцитов дает вокруг ядра зону просветления. В цитоплазме моноцитов, ретикулярных клеток и плазмоцитов могут присутствовать вакуоли. У других клеток вакуолизация цитоплазмы и ядра встречается при патологии. В цитоплазме некоторых моноцитов, ретикулярных клеток, мегакариоцитов находят фагоцитированные элементы (паразиты, пигментные зерна, эритроциты, лейкоциты, тромбоциты и их обломки). Зернистость в цитоплазме гранулоцитов может быть базофиль-ной, эозинофильной или нейтрофильной. В промиелоцитах, моноцитах и иногда в лимфоцитах заметна азурофильная зернистость розово-фиолетового цвета, которую обозначают как неспецифическую. Выведение лейкограммы. Определение количества лейкоцитов хотя и имеет большое диагностическое значение, однако не дает представления о соотношении между отдельными видами лейкоцитов и их качественных изменениях. Эти дополнительные данные можно получить при выведении лейкограммы и учете морфологических изменений в лейкоцитах на окрашенных мазках. Лейкограмма (лейкоцитарная формула, дифференциальная формула) — это процентное соотношение между отдельными видами лейкоцитов крови, записанное в определенном порядке. Лейкограмму выводят по окрашенным мазкам крови под иммерсионной системой микроскопа. Применяют дифференциальный подсчет 100 (или 200) лейкоцитов с помощью четырехпольного (Шиллинга) или трехпольного метода (Филиппченко). Для регистрации каждого вида лейкоцитов, обнаруженных при исследовании мазка крови, используют одиннадцатиклавишные счетчики. Наряду с установлением процентного соотношения между отдельными видами лейкоцитов важное клиническое значение имеет определение их абсолютного числа, т. е. количества каждого вида белых кровяных телец в 1 мкл крови. Выражение лейкограммы не только в процентах, но и в абсолютных величинах позволяет выяснить характер видового лейкоцитоза (например, нейтрофилии, лимфоцитоза) — является он абсолютным или относительным Особое значение имеет учет возрастного состава нейтрофилов, которые при патологических состояниях наиболее подвержены количественным и качественным изменениям. С этой целью определяют индекс сдвига ядер нейтрофилов: ИС (индекс сдвига) = М(%) + Ю(%) + П(%) / С(%). В норме для каждого вида животных характерен свой индекс сдвига: у крупного рогатого скота он составляет около 1/3, а у лошадей — 1/12. При увеличении процента молодых форм нейтрофилов (палочкоядерных, юных, миелоцитов) возрастает числитель, что означает сдвиг ядра влево. Если повышается процент старых форм нейтрофилов (сегментоядерных), то увеличивается знаменатель, что соответствует сдвигу ядра вправо. Изменения лейкограммы. У здоровых животных в циркулирующей крови основная масса клеток представлена зрелыми формами, которые непрерывно обновляются: на смену распадающимся клеткам (физиологическая дегенерация) из органов гемопоэза поступают новые (физиологическая регенерация). Указанное динамическое равновесие в смене клеток крови нарушается вследствие усиленных процессов разрушения кровяных клеток. Организм стремится возместить эти потери, причем характер его реакции зависит от силы и продолжительности воздействия отрицательно действующего фактора (от силы раздражения), а также от состояния кроветворных органов. При незначительной силе раздражителя и функциональной полноценности органов гемопоэза пополнение обеспечивается за счет клеток, поступающих из кровяных депо, так что изменения морфологического состава крови слабо или совсем не выражены. Сильные раздражители вызывают значительное разрушение клеток в периферической крови, при котором органы гемопоэза не справляются с выработкой зрелых форменных элементов, в результате чего появляются молодые формы. Особенно четко прослеживаются изменения в степени зрелости клеток среди нейтрофилов, когда в крови появляются их молодые разновидности — палочкоядерные, юные (метамиелоциты) и даже миелоциты Следует также отметить, что при лейкоцитозах обычно увеличивается содержание не всех видов лейкоцитов, а какой-то одной разновидности этих клеток — нейтрофилов, лимфоцитов, эозинофи-лов, моноцитов или базофилов. Увеличение в лейкограмме процента одного вида лейкоцитов могут наблюдать и при нормальном числе лейкоцитов и даже при лейкопении. Течение патологического процесса в организме накладывает существенный отпечаток на лейкограмму крови, в которой отмечают определенные сдвиги Первое изменение, которое удается выявить в лейкограмме, — это увеличение содержания какого-либо вида лейкоцитов, что обозначают как видовой лейкоцитоз: нейтрофилия, лимфоцитоз, эозинофилия, моноцитоз, базофилия, или уменьшение их содержания в крови — видовые лейкопении: нейтропения, лимфоцито-пения, эозинопения, моноцитопения Увеличение или уменьшение количества отдельных видов лейкоцитов может быть абсолютным и относительным. В том случае, если наряду с увеличением процента определенного вида лейкоцитов в лейкограмме наблюдают и абсолютное увеличение их количества в 1 мкл крови, тогда говорят об абсолютном видовом лейкоцитозе (например, абсолютный лимфоцитоз). При одновременном уменьшении процента того или иного вида лейкоцитов в лейкограмме и абсолютного количества этих клеток в 1 мкл крови говорят об абсолютной видовой лейкопении (например, абсолютная лимфоцитопения) Относительный видовой лейкоцитоз — изменение в лейкограмме, при котором увеличение процента какого-либо вида лейкоцитов сочетается со снижением их общего количества, в результате чего абсолютное количество лейкоцитов этого вида в 1 мкл крови будет нормальным. Относительная видовая лейкопения бывает, когда процент определенного вида лейкоцитов в лейкограмме понижен, но в связи с некоторым повышением общего числа лейкоцитов в крови абсолютное содержание этого вида лейкоцитов в 1 мкл крови находится в пределах нормы Второе изменение, которое может быть установлено в лейкограмме, — появление молодых незрелых форм лейкоцитов. Среди нейтрофилов при ряде патологических состояний увеличивается число палочкоядерных форм, а помимо зрелых форм — сегментоядерных клеток — обнаруживают юные и миелоциты. В связи с тем, что молодые клетки из числа нейтрофилов в лейкоцитарной формуле записывают левее зрелых сегментоядерных форм, принято такое состояние обозначать сдвигом ядра влево. Если же увеличивается процент сегментоядерных нейтрофилов с гиперсегментацией ядра при уменьшении процента палочкоядерных форм, тогда подобное изменение в соотношении нейтрофилов в лейкограмме обозначают как сдвиг ядра вправо Третье изменение, которое может быть выявлено при исследовании лейкограммы, — наличие патологических форм лейкоцитов Довольно типичные изменения в составе крови наблюдают при септических процессах, в течении которых можно различать следующие три фазы (по Шиллингу): 1-ю —фазу нейтрофильной борьбы; 2-ю — фазу моноцитарной защиты и преодоления процесса; 3-ю — лимфоцитарную фазу завершения процесса и выздоровления В 1-ю, или начальную, фазу борьбы организма с инфекцией увеличивается количество лейкоцитов в крови и повышается процент нейтрофилов в лейкограмме за счет молодых форм (резкий сдвиг ядра влево); процент других лейкоцитов уменьшен Во 2-ю фазу наблюдают перелом в течении болезни, при котором уменьшаются число лейкоцитов в крови (но оно выше нормы) и процент нейтрофилов; процент моноцитов резко возрастает; повышается и количество лимфоцитов В 3-ю фазу, когда животное выздоравливает, количество моноцитов и эозинофилов увеличивается; процент нейтрофилов остается в пределах нормы почти без сдвига ядра влево; общее количество лейкоцитов незначительно повышено Анализ лейкограммы дает ценную дополнительную информацию, которую нужно рассматривать совместно с другими показателями крови, данными клинического и специальных методов исследования животного. Лейкограмма, как и другие показатели крови, изменяется в процессе заболевания и поэтому должна быть тесно увязана с клинической картиной болезни и ее особенностями (осложнения, обострения и т. д.) Из видовых лейкоцитозов в клинической практике чаще всего встречаются нейтрофилии, лимфоцитозы и эозинофилии Нейтрофилия (нейтрофилез). Этот вид лейкоцитоза наиболее типичен для гнойно-воспалительных процессов, причем по характеру сдвига ядра (степени «омоложения» нейтрофилов) и выраженности нейтрофильной реакции можно судить о тяжести процесса и стадии заболевания. По степени регенерации нейтро-фильный лейкоцитоз разделяют на следующие четыре разновидности Нейтрофилия с простым регенеративным сдвигом проявляется повышением процента палочкоядерных нейтрофилов (до 10...13%) при незначительном увеличении общего количества лейкоцитов. Ее наблюдают при легком, доброкачественном течении гнойновоспалительных процессов и некоторых нетяжелых инфекционных болезнях Нейтрофилия с резким регенеративным (гиперрегенеративным) сдвигом характеризуется появлением в лейкограмме юных и даже миелоцитов, повышением процента палочкоядерных нейтрофилов при значительном лейкоцитозе. Эта разновидность нейтрофилии встречается при тяжелых септических инфекциях и гнойновоспалительных процессах, протекающих в организме с хорошей сопротивляемостью. Выраженная нейтрофилия с незначительным лейкоцитозом сопровождает тяжелые септические инфекции при ослабленной сопротивляемости организма. Высокий нейтрофилез при уменьшении количества лейкоцитов свидетельствует о наличии тяжелой инфекции при плохой иммунной сопротивляемости организма Нейтрофилия с дегенеративным (гипопластическим) сдвигом имеет ту особенность, что в нейтрофнл ах обнаруживают признаки дегенерации, а в лейкограмме — значительное увеличение процента палочкоядерных нейтрофилов при уменьшении процента сегментоядерных. Наблюдают эту разновидность нейтрофилии при длительных тяжелых септических состояниях, осложненных вторичным процессом, протекающих с выраженным токсическим воздействием на органы гемопоэза Нейтрофилия со сдвигом вправо характеризуется увеличением процента сегментоядерных форм при нормальном или пониженном числе палочкоядерных нейтрофилов; встречается после кро-вопотерь, у старых и истощенных животных Давая оценку различным разновидностям нейтрофилии, необходимо принимать во внимание изменение количества и других форм лейкоцитов. Например, уменьшение числа нейтрофилов и незначительный сдвиг ядра влево в сочетании с появлением эози-нофилов и увеличением количества лимфоцитов при умеренном лейкоцитозе указывают на благоприятное течение патологии. Если же сдвиг ядра влево значителен, в лейкограмме отсутствуют эозинофилы, появляется лимфоцитопения, то делают вывод об усилении болезненного процесса Нейтропения. Этот вид лейкопении указывает на наличие функционального или органического угнетения гранулоцитопоэза в костном мозге. Встречается на стадии выздоровления при острых инфекционных болезнях, алиментарной дистрофии, поражениях ионизирующей радиацией Лимфоцитоз. Он чаще бывает относительным и реже абсолютным. Лимфоцитозом при нормальном или повышенном количестве лейкоцитов в сочетании с нейтропенией сопровождаются хронический туберкулез, бруцеллез, лимфолейкоз, сап, инфекционная анемия, инфлюэнца, пироплазмоз лошадей, чума свиней, сильные ожоги кожи, стахиботриотоксикоз, сахарный диабет, тиреотоксикоз, процесс выздоровления при острых инфекционных заболеваниях Отмечена определенная взаимозависимость между числом лимфоцитов и эритроцитов в крови. Наличие лимфоцитоза в сочетании с нормальным содержанием эритроцитов следует рассматривать как благоприятный симптом. Если же лимфоцитоз сопровождается снижением количества красных кровяных телец, то это оценивают как неблагоприятный признак, указывающий на усиление интоксикации организма и снижение деятельности органов гемопоэза Лимфоцитопения. Она часто бывает относительной, появляясь при нейтрофильных лейкоцитозах. Может встречаться при сепсисе, ботулизме, кровопятнистой болезни, на начальной стадии чумы свиней. Усиливающуюся лимфоцитопению наряду с лейкопенией следует рассматривать как прогностически неблагоприятный признак. Увеличение числа лимфоцитов, а также эозинофилов и моноцитов считают благоприятным симптомом Эозинофилия. Она встречается, как правило, при различных аллергических заболеваниях (сывороточная болезнь, крапивница, бронхиальная астма и т. д.), а также при инвазиях (фасциолез, эхинококкоз, финноз, кокцидиоз и т. д.), кожных заболеваниях паразитарного происхождения. Небольшую эозинофилию отмечают в период выздоровления при воспалительных и инфекционных заболеваниях (на фоне снижения нейтрофилии), при микозах (стахиботриотоксикоз), хронической альвеолярной эмфиземе легких, хроническом бронхите, роже свиней, миелолейкозе Эозинопения. Может возникать при острых септических заболеваниях и интоксикациях, вирусных болезнях, уремии, пироплазмозе, на терминальной стадии лимфолейкоза. При инфекционных и воспалительных заболеваниях обнаружение эозинопении в сочетании с выраженной нейтрофилией (лейкоцитозом и сдвигом ядра влево) указывает на прогрессирование процесса и хорошую реакцию органов гемопоэза на патологический раздражитель. Если же при указанных состояниях наблюдают эозинопению вместе с лейкопенией (нейтропенией) или со слабой нейтрофилией, то это следует рассматривать как неблагоприятный признак. Уменьшение содержания эозинофилов до полного исчезновения (анэозинофилия) служит неблагоприятным признаком при острых септических заболеваниях, а появление этих клеток рассматривают как благоприятный симптом, свидетельствующий о наступлении перелома в течении болезни Моноцитоз. Его чаще наблюдают при нормальном или уменьшенном количестве лейкоцитов и значительно реже при выраженном лейкоцитозе. Моноцитоз может быть при иммунизации животных, скрыто протекающих заболеваниях, при болезнях, вызванных слабовирулентным возбудителем, протозоозах (пироплазмоз, нутталиоз, трипаносомоз), злокачественных новообразованиях, ретикулезах, хронической инфекционной анемии, туберкулезе, листериозе, ботулизме, выздоровлении при острых воспалительных и инфекционных заболеваниях, а также при хронических септических состояниях. Увеличение количества моноцитов при сдвиге ядра влево может указывать на скрыто протекающую хроническую инфекцию. При гематологическом контроле за развитием острых инфекций обнаружение моноцитоза, сочетающегося с нейтрофилией и лейкоцитозом, расценивают как благоприятный признак. Моноцитопения. Встречается в первую фазу острых инфекционных и септических заболеваний. Отсутствие моноцитов при наличии выраженной нейтрофилии считают неблагоприятным признаком. Базофилия. Этот вид лейкоцитоза встречается нечасто; может быть при миелолейкозе, гемофилии, гельминтозах (одновременно с эозинофилией), миоглобинурии лошадей (в фазу выздоровления), голодании, чуме свиней Патологические изменения лейкоцитов. В клетках периферической крови при различных патологических состояниях (септических, токсических и т. д.) наблюдают патологические изменения, выявляемые как в цитоплазме, так и в ядре У нейтрофилов отмечают анизоцитоз, т. е. появление клеток различных размеров. Обнаруживают токсогенную зернистость, вакуоли и пятна светло-синего цвета (тельца Князькова—Деле) в цитоплазме. В ядре выявляют вакуолизацию, полисегментацию (вместо 2...5 сегментов насчитывают больше), кариорексис (разрыв), пик-ноз (сморщивание), потерю связи между сегментами. У лимфоцитов цитоплазма приобретает сероватый оттенок и содержит вакуоли; ядро окрашивается неравномерно, оно разрыхленное, по краям с выбухтовываниями и лопастями У моноцитов вакуолизированная цитоплазма диффузно-серого цвета с желтоватым оттенком; ядро сильно изрезанное, полиморфное, разрыхленное; размер клеток больше обычного У эозинофилов в цитоплазме наряду с круглыми содержатся также и овальные гранулы, которые окрашиваются в красно-фиолетовый цвет; ядро гиперсегментировано, неправильно окрашено Патологические изменения эритроцитов. Наблюдаемые чаще при анемиях, они характеризуются изменением размера, формы, окраски эритроцитов и появлением различных включений. Изменение размера эритроцитов — анизоцитоз. При этом наряду с клетками нормальных размеров (нормоциты) встречаются мелкие (микроциты), большие (макроциты) и очень крупные (мегалоциты) эритроциты. Это состояние наблюдают при разных видах анемий и функциональной недостаточности костного мозга. Изменение формы эритроцитов называется пойкилоцитозом. В мазках крови некоторые клетки принимают грушевидную, овальную (эл-липтоциты), звездчатую (астроциты), шлемовидную и треугольную (шистоциты) или неопределенную форму (пойкилоциты). Могут встречаться фрагменты эритроцитов либо дегенеративно измененные клетки неправильной формы диаметром 2,0...3,0 мкм. Выраженный пойкилоцитоз наблюдается при анемиях, тяжелых септических заболеваниях, он свидетельствует о дегенерации эритроцитов. Изменения формы могут быть и при неправильном изготовлении мазка, приводящем к травматизации эритроцитов. Нарушение содержания гемоглобина в эритроцитах обусловливает изменение окрашивания — анизохромию. При недостаточном насыщении эритроцитов гемоглобином они слабо воспринимают окраску, становятся гипохромными, что бывает при постгеморраги-ческих анемиях, особенно хронических, железодефицитных, лей-кемоидных и раковых. Интенсивно окрашенные эритроциты обнаруживают в случаях большего содержания в них гемоглобина, при этом у клеток отсутствует просветление в центре. Такое явление называется гиперхромазией, а эритроциты считаются гипер-хромными. Наблюдают это при дефиците витамина В12, гемолитической анемии. Незрелые эритроциты, окрашивающиеся кислыми и основными красителями, называются полихроматофильными, а явление — полихромазией, или полихроматофилией. При одновременном поглощении кислых и основных красок полихромато-фильные эритроциты окрашиваются в сероватый, слабо-фиолетовый, бледно-синий, серовато-сиреневый или синевато-розовый цвет. В нормальной крови полихроматофильные эритроциты встречаются в небольшом количестве — 1...4 на 1000 эритроцитов. При суправитальной окраске бриллианткрезилблау или нильблау-сульфатом выявляют ретикулоциты, или гранулофилоциты, содержащие зернисто-сетчатую субстанцию. Число полихроматофиль-ных эритроцитов и ретикулоцитов увеличивается в крови в период активизации эритропоэза в костном мозге при кровопотерях, гемолитических анемиях. При недостаточной эритропоэтической функции костного мозга в кровь поступают и более незрелые элементы красной крови. Ядросодержащие эритроциты (нормобласты) и эритробласты обнаруживают при анемиях. Различают нормобласты базофиль-ные с большим округлым ядром, гранулярной хроматиновой структурой и синего цвета цитоплазмой, окружающей узкой каймой ядро; нормобласты полихроматофильные с более грубым, плотным ядром и цитоплазмой от слабо-синего до слабо-розового цвета; нормобласты оксифильные, или ортохромные, со сморщенным, пикнотичным ядром, нередко расположенным эксцентрично и с цитоплазмой розового цвета. Единичные, редкие нормобласты встречаются у здоровых свиней, собак, кошек. При резко выраженных анемиях в крови обнаруживают проэритробласты и эритробласты — родоначальные клетки эритроидного ряда. У проэритробластов крупное, округлое или овальное ядро, окрашенное в темно-фиолетовый цвет, и резко базофильная цитоплазма, в которой иногда видна перинуклеарная зона просветления. В ядре 1...3 нуклеолы синего цвета, трудно различимые. Эритробласты сохраняют почти такую же структуру ядра и базофилию цитоплазмы, но отличаются от проэритробластов несколько меньшими размерами и отсутствием нуклеол в ядре. При созревании в патологических условиях у эритроцитов могут сохраняться остатки ядра. Круглые хроматиновые образования диаметром 1...2мкм, окрашивающиеся в вишнево-красный цвет, называют тельцами Жолли. Остатки оболочки ядра вишнево красного цвета в форме колечек, восьмерки, несколько раз перекрученного кольца носят название колец Кабо. Их обнаруживают в нормо-, макроцитах, ортохромных, полихроматофильных, базо-фильных эритроцитах при тяжело протекающих анемиях. Патологические изменения тромбоцитов. Часто отмечают плохую агглютинацию кровяных пластинок, при этом в мазках они лежат отдельно друг от друга. Часть тромбоцитов приобретает большие размеры (гигантские пластинки), развивается анизоцитоз (появление значительно различающихся по размерам тромбоцитов). У тромбоцитов также нередки вакуолизация гиаломера, уменьшение или отсутствие грануломера. Гемобластозы (лейкозы). К числу патологий, при диагностике которых исследование морфологического состава крови имеет нередко решающее значение, относят гемобластозы — опухолевые заболевания кроветворной ткани. Источником опухолевого роста служат ближайшие потомки стволовой клетки — предшественники отдельных ростков кроветворения. Первоначально процесс локализован в костном мозге, но затем клетки выходят в кровяное русло, перемещаются по всему организму, вновь фиксируются в кроветворной ткани, продолжая там свое развитие. Генез гемобластозов — сложный процесс, обусловленный сочетанным воздействием многообразных внешних и внутренних факторов. К числу этих факторов относят ионизирующую радиацию, некоторые химические вещества (пестициды, нитраты, ароматические углеводороды и многие другие), лекарственные препараты (левомицетин, цитостатики — уретан, циклофосфан, мелфалан и др.), лейкозогенные вирусы, эндогенные лейкозогенные вещества (метаболиты триптофана и тирозина) и др. Эти заболевания особенно часто встречаются у крупного рогатого скота, собак, кошек и кур. У крупного рогатого скота различают следующие разновидности гемобластозов: лейкозы — лимфолейкоз, миелолейкоз, острый лейкоз (гемоцитобластоз), моноцитарный лейкоз и ретикулезы — лимфосаркоматоз, ретикулосаркоматоз, лимфогранулематоз, системный ретикулез Прижизненная диагностика гемобластозов основана прежде всего на результатах гематологических исследований и данных клинического обследования животного. При анализе морфологического состава крови учитывают количество эритроцитов, лейкоцитов, данные лейкограммы, обращают особое внимание на появление молодых, малодифференцированных, родоначальных, а также атипичных и ретикулярных клеток Обычно при гемобластозах число лейкоцитов повышается до сублейкемического уровня (10...40тыс/мкл), реже до лейкемичес-кого (свыше 40 тыс/мкл); еще реже встречаются случаи с алейке-мическим (4,5... 10 тыс/мкл) или лейкопеническим уровнем (меньше 4,5 тыс/мкл). Лимфолейкоз (лимфаденоз) обычно протекает по сублейкемическому или лейкемическому варианту с лимфоцитозом (75...99 %), чаще по зрелоклеточному типу. Заболевание сопровождается лимфоидной гиперплазией (лимфатические узлы, селезенка), метаплазией костного мозга, лимфоидной инфильтрацией других органов и тканей. В периферической крови отмечают относительный, а затем и абсолютный лейкоцитоз. Среди зрелых лимфоцитов могут появиться ридеровские формы и двухъядерные клетки, при прогрессировании болезни увеличивается количество средних и больших лимфоцитов. При значительном увеличении содержания лейкоцитов находят незрелые разновидности лимфоцитов — пролимфоциты и лимфобласты, а также лимфоциты с митозом ядра; возрастает количество разрушенных лейкоцитов — тел Боткина— Гумпрехта; в цитоплазме лимфоцитов почти не встречаются азурофильные зерна. На ранних этапах заболевания количество эритроцитов и уровень гемоглобина находятся на нижней границе нормы. На поздних стадиях параллельно с прогрессированием лей-козного процесса развивается заметная анемия Миелолейкоз (миелоз) сопровождается миелоидной гиперплазией костного мозга за счет незрелых гранулоцитов и миелоидной метаплазией селезенки, печени, лимфатических узлов и других органов. В периферической крови заболевание проявляется суб-лейкемическим и лейкемическим уровнем лейкоцитов; в лейког-рамме преобладают молодые формы нейтрофилов, эозинофилов или базофилов — метамиелоциты (юные), миелоциты, промиелоциты и миелобласты с положительной оксидазной реакцией (у лимфоидных клеток она отрицательная). Наиболее распространен нейтрофильный вариант миелолейкоза. Эритропоэз подавлен, поэтому заметно снижены число эритроцитов, уровень гемоглобина, количество тромбоцитов. Острый лейкоз (гемоцитобластоз) характеризуется сублейкемическим и лейкемическим уровнем, наличием в лейкограмме большого количества недифференцированных клеток — пролимфоцитов, лимфобластов и других бластных, а также ретикулярных клеток. Опухолевые клетки тотально замещают клетки костного мозга, распространяются в селезенке, лимфатических узлах, печени и других органах. В периферической крови уровень лейкоцитов колеблется в пределах 15,6...560 х 109/л. Количество эритроцитов и уровень гемоглобина резко снижены. Заболевание протекает особенно остро у молодых животных (до 3 лет). Моноцитарный лейкоз сопровождается увеличением содержания моноцитов и моноцитоподобных клеток в периферической крови. Встречается достаточно редко. Заболевание может протекать с алейкемическим, сублейкемическим и лейкемическим составом крови. Показатели красной крови часто остаются без изменений, оставаясь в пределах физиологических значений Ретикулезы могут протекать в виде лимфосаркоматоза, ретику-лосаркоматоза и других форм. Прижизненно дифференцировать отдельные формы ретикулезов на основании клинических и гематологических исследований очень трудно, необходимы дополнительные исследования пунктатов и биоптатов костного мозга, селезенки, лимфатических узлов. При ретикулезах число лейкоцитов в крови находится на сублейкемическом или алейкемическом уровне. В лейкограмме выявляют ретикулярные, лимфоретикулярные, атипичные клетки, процент эозинофилов в норме или повышен; может быть небольшой лимфоцитоз. |