БАВ. Природные биологически активные вещества
 Скачать 1.93 Mb.
|
|
Классификация В зависимости от структуры углеродного скелета АП можно разделить на 3 основные группы: I. Соединения, в основе которых лежит 1 ядро антрацена - мономеры. II. Соединения с 2 ядрами антрацена - димеры. III. Конденсированные АП. I. Мономеры, в зависимости от степени окисленности среднего кольца (В), подразделяются на 2 подгруппы: 1. Окисленные формы - производные 9,10-антрахинона:  АНТРАХИНОН 2. Восстановленные формы - производные антранола, антрона и оксиантрона:  Восстановленные формы АП очень лабильны и легко окисляются кислородом воздуха до антрахинонов. В растениях могут быть как окисленные, так и восстановленные формы. В зависимости от расположения гидроксильных групп в структуре, окисленные формы подразделяются на: 1) производные хризацина (1,8-дигидроксиантрахинона):  ХРИЗАЦИН АП группы хризацина широко представлены в растениях: эмодины, хризофанол и реин. Эмодины различаются между собой положением гидроксильных, метильных, карбоксильных и др. групп. Название эмодина изменяется в зависимости от того, в каком растении он находится, в крушине и жостере - франгула-эмодин, в ревене и щавеле - реум-эмодин. Таблица 14
Все вышеуказанные соединения и их гликозиды содержатся в крушине ольховидной, ревене тангутском, кассии остролистной, алоэ древовидном, жостере слабительном, щавеле конском, обуславливая их слабительное действие. 2) производные ализарина(1,2-дигидроксиантрахинона):  АЛИЗАРИН РУБЭРИТРИНОВАЯ КИСЛОТА Ализарин и его производные содержатся в марене красильной, обладают спазмолитическим и мочегонным действием и применяются для лечения почечно-каменной болезни. II. Димерные АП образуются при соединении двух мономеров. Чаще встречаются димеры восстановленных форм, которые соединены в димеры по среднему кольцу в положении, окисленные формы могут быть соединены в и -положениях. При конденсации одинаковых мономеров образуется соединение, называемое диантроном (диантрахинон), если разных - гетеродиантроном (гетероантрахинон). Примером диантрона может быть сеннозид А (диантрон реина), гетероанрахинона - вассианин, выделенные из видов кассии.  СЕННОЗИД А ВАССИАНИН III. Конденсированные АП состоят из двух мономеров 1, 8-дигидроксиантрахинонов, соединенных по - и положениям. Примером может служить гиперицин, выделенный из различных видов зверобоя.  ГИПЕРИЦИН В растениях АП могут находиться как в свободном виде, так и в виде гликозидов. Углеводный компонент представлен глюкозой, рамнозой, ксилозой и арабинозой и присоединен к агликону через гидроксил в или положениях. Чаще всего это О-гликозиды (например, сеннозиды А и В). Реже встречаются С-гликозиды, у которых сахара присоединяются через углерод вположении (барбалоин из алоэ).  БАРБАЛОИН По числу присоединенных остатков сахара производные антрацена могут быть монозидами, биозидами, дигликозидами. Распространение в растительном мире Известно более 200 соединений этой группы. Антраценпроизводные найдены не только в высших растениях, но и в лишайниках, грибах, насекомых и морских животных. АП типичны для семейств: Крушиновые (Rhamnaceae), Гречишные (Polygonaceae), Бобовые (Fabaceae), Мареновые (Rubiaceae), Лилейные (Liliaceae) и др. Они накапливаются главным образом: в корнях - ревень тангутский, щавель конский, в плодах - сенна остролистная, в листьях - алоэ древовидное, в траве - зверобой продырявленный. Локализация В растениях гликозиды находятся в растворенном виде в клеточном соке, а агликоны - в виде кристаллических включений, чаще в сердцевинных клетках лучей (ревень тангутский), паренхиме коры, где их можно обнаружить благодаря характерной окраске. Динамика накопления АП, заготовка, сушка сырья Динамика накопления АП связана с возрастом растений и фазой развития. С возрастом в растениях количество АП увеличивается, причем в старых растениях преобладают окисленные формы, в молодых - восстановленные. Больше восстановленных форм содержится ранней весной, к осени они переходят в окисленные. Это необходимо иметь в виду при заготовке сырья, т.к. более ценными фармакологическими свойствами обладают окисленные формы. Восстановленные АП часто вызывают побочные явления: тошноту, рвоту, колики. В свежесобранном сырье антрагликозиды преимущественно представлены мономерами. Однако в процессе естественной сушки восстановленные АП окисляются, превращаясь в антрахиноны, и одновременно происходит конденсация ядер антрацена в димеры и полимеры. Вследствие этих превращений изменяются и фармакологические свойства сырья. Так, например, свежесобранная кора крушины обладает рвотным действием (за счет восстановленных форм АП), высушенная при комнатной температуре и хранящаяся в течение года - слабительным (за счет антрахинонов). Для более быстрого окисления восстановленных соединений собранную кору крушины выдерживают при температуре 100-105°С в сушильном шкафу в течение одного часа, а затем высушивают. Заготовку сырья проводят в фазу наибольшего содержания АП в сроки, установленные инструкцией. Сушку осуществляют при температуре 50°С. Биологическая роль антраценпроизводных в растениях О роли АП в растениях нет единого мнения. Некоторые ученые считают, что АП выполняют защитную функцию. Другие считают, что они стимулируют накопление полисахаридов. Более вероятное предположение, что АП играют важную роль в окислительно-восстановительных процессах, протекающих в растениях. Физико-химические свойства 1. Антраценпроизводные - кристаллические вещества желтого, оранжевого или красного цвета, но встречаются и бесцветные - антранолы (восстановленные формы). 2. Имеют определенную температуру плавления. 3. Антрагликозиды хорошо растворимы в воде, в водно-спиртовых смесях (70%, 80%), в этаноле, метаноле; нерастворимы в неполярных органических растворителях: бензоле, диэтиловом эфире, хлороформе, ССl4. Агликоны растворимы в диэтиловом эфире, хлороформе, бензоле, спиртах, но не растворимы в воде. В щелочах хорошо растворяются как агликоны, так и гликозиды, образуя окрашенные в красный цвет феноляты. 4. Большинство АП - оптически активные соединения. 5. При нагревании до 210°С АП сублимируются. 6. Восстановленные формы окисляются кислородом воздуха, пергидролем и другими окислителями. 7. Окисленные АП различно относятся к щелочам: 1) антрахиноны, имеющие в качестве заместителя карбоксильную группу, растворяются в водных растворах гидрокарбонатов, карбонатов и гидроксидах щелочей, образуя окрашенные в красный цвет соли; 2) антрахиноны с гидроксилом в -положении образуют феноляты с водными растворами карбонатов и гидроксидов щелочных металлов; 3) антрахиноны, имеющие гидроксилы в -положении, образуют феноляты только с гидроксидами щелочей, так как -гидроксилы образуют внутримолекулярную водородную связь с соседней карбонильной группой, поэтому она менее реакционноспособна, чем гидроксилы в -положении. Выше изложенное можно изобразить графически. Таблица15 Растворимость АП в щелочах в зависимости от заместителей
8. Большинство АП флуоресцируют в УФ свете: антрахиноны - оранжевым, розовым, красным, огненно-красным цветом; антроны и антранолы - желтым, голубым и фиолетовым. 9. Гликозиды под действием ферментов и кислот гидролизуются на агликон и сахарную часть. 10. Характерным свойством всех АП является устойчивость их ядра. 11. С ионами щелочных металлов образуют соли. 12. С солями тяжелых металлов (Al, Cr, Sn) - очень устойчивые соли или комплексы (лаки). Методы выделения антраценпроизводных из ЛРС Для выделения антрагликозидов (схема 10) растительный материал экстрагируют водой, спиртами (этиловым, метиловым) или водно-спиртовыми смесями (70%, 80%). Полученное извлечение отгоняют под вакуумом до водного остатка, который обрабатывают четыреххлористым углеродом для очистки от липофильных (балластных) веществ. Затем проводят разделение суммы гликозидов хроматографически. Схема 10 Для выделения агликонов гликозиды в растительном материале подвергают кислотному или ферментативному гидролизу, после чего свободные агликоны извлекают хлороформом, диэтиловом эфиром или другими органическими растворителями. Для разделения агликонов используют их избирательную растворимость (таблица 4), а также колоночную хроматографию на полиамиде или силикагеле. Установление структуры выделенных соединений проводят с помощью физико-химических методов (УФ-, ИК-, ПМР-, масс-спектроскопия), определяют температуру плавления, удельное вращение (для гликозидов). Полученные спектры и показатели сравнивают со спектрами известных соединений. Методы обнаружения антраценпроизводных в ЛРС I. Качественные реакции 1. Наиболее характерными реакциями на антрахиноны являются реакции с раствором аммиака или с растворами едких щелочей, в результате которых феноляты окрашиваются в различные цвета в зависимости от положения гидроксильных групп: феноляты 1-8 дигидроксиантрохинонов имеют вишнево-красное окрашивание; феноляты 1-4 дигидроксиантрохинонов - пурпурное окрашивание; феноляты 1-2 дигидроксиантрохинонов - фиолетовое окрашивание. Реакцию можно провести, смачивая внутреннюю поверхность коры крушины 10% раствором гидроксида натрия или известковой водой. Появляется кроваво-красное окрашивание. Восстановленные формы со щелочами дают желтое окрашивание, но после окисления кислородом воздуха или перекисью водорода (или другими окислителями) - красное окрашивание. 2. Для обнаружения антрахинонов, имеющих хотя бы одну ОН-группу в -положении, можно использовать реакцию с 1% метанольным раствором ацетата магния, дающую различное окрашивание по аналогии. 3. Широко используют реакцию Борнтрегера (схема 11). Готовится щелочное извлечение из ЛРС (10% раствор гидроксида натрия) при нагревании. При этом происходит: 1) гидролиз антрагликозидов с образованием свободных агликонов; 2) окисление восстановленных форм до антрахинона; 3) образование фенолятов. После подкисления гидролизата агликоны извлекают органическим растворителем (диэтиловым эфиром). При встряхивании эфирного слоя с раствором аммиака образующиеся феноляты переходят в аммиачный слой и окрашивают его в вишнево-красный или фиолетовый цвета (эмодины). В случае хризофанола органический слой остается окрашенным в желтый цвет. Эта реакция лежит в основе количественного определения АП. 4. Реакция сублимации. Сырье нагревают в сухой пробирке, при этом происходит окисление восстановленных форм до антрахинонов, которые возгоняются. Сублимат конденсируется на стенках пробирки в виде желтых капель или кристаллов. От капли щелочи они окрашиваются в красный цвет. II. Хроматография При анализе ЛРС, содержащего АП, используется бумажная и тонкослойная хроматография. Для хроматографии на бумаге используют системы растворителей: Н-БУТАНОЛ - УКСУСНАЯ КИСЛОТА - ВОДА (4:1:5), МЕТАНОЛ - ЭТИЛАЦЕТАТ - МУРАВЬИНАЯ КИСЛОТА (50:5:5) и др. Для хроматографии в тонких слоях: БЕНЗОЛ - МЕТАНОЛ (8:2); ХЛОРОФОРМ - ЭТАНОЛ - ВОДА (60:30:20) и др. Спиртовое извлечение из ЛРС наносят на пластинку с тонким слоем силикагеля, хроматографируют в системе ЭТИЛАЦЕТАТ - МЕТАНОЛ - ВОДА (100:17:13), затем высушивают. Зоны сорбции АП обнаруживают по окраске в видимом и УФ-свете до и после проявления 5% спиртовым раствором щелочи. Наблюдают различно окрашенные пятна от желтой до огненно-, кирпично-красной и даже фиолетовой окраски. Количественное определение Для количественного определения АП в ЛРС используют оптические методы: колориметрические и спектрофотометрические. Схема 11 Схема реакции Борнтрегера Щелочное извлечение Фильтрация (отработанное сырье на выброс) Подкисление гидролизата Агликоны извлекают диэтиловым эфиром Эфирный слой желтого цвета Обработка эфирного слоя аммиаком Образующиеся феноляты переходят в аммиачный слой, окрашивая его в вишнево-красный цвет - эмодины Эфирный слой остается окрашенным в желтый цвет (хризофанол) 1. Колориметрический метод основан на реакции Борнтрегера, которая заключается в том, что окисленные формы антраценпроизводных при растворении в щелочах образуют красную окраску, а восстановленные - желтую. Реакция является положительной для антрахинонов хризацинового ряда. Антроны, антранолы, диантроны и их гликозиды дают красное окрашивание после гидролиза и окисления. Существует множество модификаций этого метода, но чаще используют метод, принятый ГФ ХI (вып. 2, ст. 2) для определения АП в коре крушины (схема 12). При определении необходимо учитывать, что производные антрацена могут быть представлены С-гликозидами, как у алоэ и сенны. В этих соединениях углеводные компоненты не отщепляются ни при кислотном, ни при щелочном гидролизе. Таким образом, этот метод не позволяет с достаточной точностью определять сумму антраценпроизводных или содержание отдельных антрахинонов. 2. Спектрофотометрический метод. 3. Хромато-спектрофотометрический метод. 4. Денситофлуориметрический метод. 5. Кислотно-основное титрование в неводных растворителях. 6. Полярографический метод и др. Фармакологическая активность АП и применение в медицине При всей близости химической структуры антраценпроизводных они резко отличаются друг от друга по фармакологическим свойствам. Например, разница в структуре хризацина и ализарина состоит в расположении одной -ОН группы: у хризацина она в положении С8, а у ализарина - в положении С2 ядра антрацена. Сырье, содержащее производные хризацина (кассия остролистная, крушина ольховидная, ревень тангутский, щавель конский, жостер слабительный), применяется как слабительное средство. Слабительный эффект наступает через 8 - 10 часов после приема препаратов. Это связано с тем, что сами по себе антрагликозиды не активны. Они медленно гидролизуются ферментами и бактериальной флорой толстых кишок в щелочной среде с высвобождением агликонов. Последние раздражают рецепторы нижнего отдела толстого кишечника, в результате чего усиливается перистальтика - проявляется слабительное действие. Схема 12 Поэтапная схема количественного определения АП в коре крушины Подготовка ЛРС (измельчение, просеивание, взятие навески) Кислотный гидролиз (ледяная уксусная кислота) Экстракция агликонов хлороформом Обработка хлороформного слоя щелочно-аммиачным раствором Образующиеся феноляты переходят в щелочно-аммиачный раствор, окрашивая его в красный цвет (определенный объем колбы - 250 мл) Стабилизация окраски Окисление восстановленных форм (t° + O2) Определение оптической плотности на колориметре Расчет результатов Препараты слабительного действия: Рамнил (из крушины), Кафиол, Регулакс, Глаксена, Сенаде, Пурсеннид(из сенны) и др. Препараты антрагликозидов не рекомендуется длительно назначать во избежание нарушений водно-солевого обмена и нарушения питания организма. Кроме того, препараты противопоказаны при воспалительных процессах в брюшной полости и острых лихорадочных состояниях. Сырье, содержащее производные ализарина (марена красильная), оказывает спазмолитическое и мочегонное действие, способствует растворению и выведению из организма фосфатов, уратов и оксалатов. Применяется в виде препаратов: Цистенал, Марелин, экстракт марены красильной. Конденсированные производные антрацена обуславливают антибактериальную активность препаратов зверобоя. Настойка,Новоиманин применяются при инфицированных ранах, ожогах, язвах. Таблица 16 Химический состав фармакологическая активность и использование ЛРС, содержащего антраценпроизводные
ТЕМА 14. ДУБИЛЬНЫЕ ВЕЩЕСТВА Дубильными веществами, или таннидами, называется комплекс высокомолекулярных природных полифенольных соединений, способный превращать сырые шкуры животных в прочный, неподдающийся гниению продукт - кожу. Термин "дубильные вещества" был впервые использован французским исследователем Сегеном в 1796 г. Дубильные вещества (ДВ) получили свое название из-за способности дубить шкуры и делать их непроницаемыми для воды. Обычно для этой цели использовали кору дуба, отсюда и процесс назвали дублением, а вещества - дубильными. Дубление - сложный физико-химический процесс образования устойчивой структуры за счет возникновения водородных, ковалентных и электровалентных связей между молекулами коллагена и фенольными группами дубильных веществ. Но такие связи могут образовываться только тогда, когда молекулы достаточно велики. В процессе дубления участвуют вещества с молекулярной массой от 500 до 3000. Низкомолекулярные соединения имеют только вяжущий вкус, но не способны к дублению. Классификация Согласно классификации К.Фрейденберга, дубильные вещества подразделяют на две большие группы: I. Гидролизуемые ДВ при действии кислоты или ферментов подвергаются гидролизу на составные части. К ним относят: 1. галлотаннины; 2. эллаготаннины; 3. несахаридные эфиры карбоновых кислот или депсиды. II. Конденсированные ДВ при действии кислот подвергаются дальнейшему уплотнению и конденсации, а образующиеся красно-коричневые продукты конденсации называют флобафенами. Они представлены полимерами: 1. катехинов (флаван-3-олов); 2. лейкоантоцианидинов (флаван-3,4-диолов); 3. гидроксистильбенов. 1. Галлотаннины - сложные эфиры гексоз (обычно D-глюкоза) и галловой кислоты. Встречаются моно-, ди-, три-, тетра-, пента- и полигаллоильные эфиры. Представителем этой группы является китайский таннин. Впервые структура китайского таннина была описана в 1914 - 1919 гг. Э.Фишером и К.Фрейденбергом, которые предложили для него строение -пента-м-дигаллоил-D-глюкозы. Только в 1961 - 1963 гг. В.Хеуорсом была установлена структура:  R1 = R3 - галловая кислота R2 = R4 - м-дигалловая кислота R5 = H - м-тригалловая кислота КИТАЙСКИЙ ТАННИН  ГАЛЛОВАЯ КИСЛОТА М-ДИГАЛЛОВАЯ КИСЛОТА Китайский таннин получают из листьев сумаха полукрылатого. 2. Эллаготаннины - сложные эфиры D-глюкозы и гексагидроксидифеновой, хебуловой и других кислот, имеющих биогенетическое родство с эллаговой кислотой. Эллаготаннины найдены в корке плодов гранатника, кожуре грецкого ореха, коре дуба, соплодиях ольхи.  ЭЛЛАГОВАЯ КИСЛОТА ГЕКСАГИДРОКСИДИФЕНОВАЯ КИСЛОТА В растениях присутствует не эллаговая кислота, а гексагидроксидифеновая. При кислотном гидролизе дубильных веществ происходит ее превращение в дилактон - эллаговую кислоту. 3. Депсиды представляют собой эфиры галловой кислоты с хинной, хлорогеновой, кофейной, гидроксикоричной кислотами, а также флаванами. Эфиры галловой кислоты и катехинов находятся в листьях чая. Из листьев зеленого чая выделен теогаллин:  ТЕОГАЛЛИН Преимущественно гидролизуемые ДВ содержат: скумпия кожевенная, сумах дубильный, горец змеиный, бадан толстолистный, кровохлебка лекарственная, ольха черная и серая. Конденсированные дубильные вещества представляют собой олигомеры и полимеры катехинов, лейкоантоцианидинов и гидроксистильбенов, где все фрагменты связаны друг с другом углерод-углеродными связями (С - С) в положениях С2 - С6; С2 - С8; С4 - С8; С5' - C2'; C2' - C6' и др. Например, образование конденсированных дубильных веществ происходит в результате окислительной конденсации катехинов. При этом пирановое ядро катехиновой молекулы разрывается и С2-атом соединяется углерод - углеродной связью с С6-атомом другой молекулы.  КАТЕХИН ЛЕЙКОАНТОЦИАНИДИН  Преимущественно конденсированные ДВ содержат: дуб обыкновенный, лапчатка прямостоячая, черника обыкновенная, черемуха обыкновенная. Распространение в растительном мире Дубильные вещества широко распространены в растительном мире. Они обнаружены у покрыто- и голосеменных, папоротниках, плаунах, лишайниках, грибах и в водорослях. Низкое содержание отмечено у злаков. ДВ накапливаются в растениях семейств: Буковые (Fagaceae), Сумаховые (Anacardiaceae), Бобовые (Fabaceae), Розоцветные (Rosaceae), Миртовые (Myrtaceae), Вересковые (Ericaceae) и др. Древесные формы богаче дубильными веществами, чем травянистые. Чаще всего в растениях встречается смесь гидролизуемых и конденсированных ДВ с преобладанием соединений той или иной группы. Локализация. В большом количестве они накапливаются: - в подземных органах - лапчатка прямостоячая, бадан толстолистный, кровохлебка лекарственная; - в коре - дуб обыкновенный. Могут накапливаться: - в листьях - сумах дубильный, скумпия кожевенная; - в траве - зверобой продырявленный; - в плодах - черника обыкновенная, черемуха обыкновенная, ольха клейкая и серая. Наибольшее содержание ДВ в галлах (патологические наросты на листьях) турецких, китайских, фисташковых, где содержание достигает до 60-80%. Физико-химические свойства 1. ДВ - аморфные вещества желтого или бурого цвета. 2. Обладают вяжущим вкусом. 3. Природные ДВ имеют среднюю молекулярную массу 500 - 4000, хотя могут быть соединения с молекулярной массой до 20 000. 4. При нагревании до 180 - 200°С ДВ, не плавясь, обугливаются, выделяя пирогаллол или пирокатехин. 5. Хорошо растворимы в воде, лучше в горячей; растворимы в ацетоне, этаноле, бутаноле, отчасти в диэтиловом эфире (катехины), этилацетате (лейкоантоцианидины), пиридине; нерастворимы в хлороформе, петролейном эфире, бензоле и других неполярных растворителях. 6. При растворении в воде дают коллоидные растворы слабокислой реакции. 7. Легко окисляются на воздухе, образуя темноокрашенные продукты. 8. Присутствие щелочей сильно ускоряет процессы окисления. 9. Многие ДВ - оптически активные соединения. 10. Гидролизуемые ДВ под действием кислот или ферментов гидролизуются на кислоту и глюкозу. 11. ДВ осаждаются растворами белка, алкалоидов. 12. С солями тяжелых металлов образуют окрашенные комплексы. Выделение дубильных веществ из ЛРС ДВ - это смесь различных полифенолов, имеющих сложную структуру, и очень лабильных, поэтому выделение и анализ индивидуальных компонентов представляет собой большие трудности. Для получения суммы ДВ (схема 13) ЛРС экстрагируют горячей водой, а затем охлаждают. Водный экстракт обрабатывают последовательно: 1. Петролейным эфиром (или бензолом) - для очистки от хлорофилла, терпеноидов и липидов. 2. Диэтиловым эфиром, который извлекает катехины, оксикоричные кислоты и др. фенольные соединения. 3. Этилацетатом, в который переходят лейкоантоцианидины, эфиры оксикоричных кислот и др. Оставшееся водное извлечение с дубильными веществами и другими фенольными соединениями и фракции диэтилового эфира и этилацетата разделяют на индивидуальные компоненты с помощью различных видов хроматографии. Используют адсорбционную хроматографию на колонках целлюлозы, полиамида (иногда вместо полиамида используют гольевой порошок); распределительную хроматографию на колонках силикагеля; ионообменную; гель-фильтрацию на колонках сефадекса и др. Идентификация индивидуальных компонентов ДВ основана на хроматографических методах (хроматография на бумаге и тонкослойная), спектральных исследованиях, качественных реакциях и изучении продуктов расщепления. Схема 13 Качественный анализ Качественные реакции можно подразделить на 2 группы: I. Общие реакции осаждения - для обнаружения ДВ. II. Групповые - для установления принадлежности ДВ к определенной группе. Для проведения качественных реакций готовят водное извлечение из ЛРС. I. Для обнаружения дубильных веществ проводят реакции: 1) с 1% раствором желатина в 10% растворе натрия хлорида. Появляется муть, исчезающая при добавлении избытка желатина. Реакция специфична; 2) осаждение ДВ солями алкалоидов (сульфат хинина). Образуется белый осадок; 3) с 5% раствором бихромата калия. Образуется коричневый осадок или муть. (Это и гистохимическая реакция обнаружения локализации ДВ в сырье); 4) с раствором основного ацетата свинца. Образуется белый осадок. II. Определение групповой принадлежности ДВ: 1) с 1% раствором железоаммониевых квасцов гидролизуемые ДВ дают черно-синее окрашивание, а конденсированные - черно-зеленое; 2) 10% раствор среднего ацетата свинца в уксуснокислом растворе (10%) осаждает гидролизуемые ДВ, конденсированные остаются в растворе, которые с железоаммониевыми квасцами дают черно-зеленое окрашивание; 3) при нагревании извлечения с бромной водой конденсированные ДВ выпадают в осадок; 4) смесь 40% раствора формальдегида и концентрированной хлористоводородной кислоты осаждает конденсированные ДВ, а гидролизуемые остаются в растворе. Реакция на катехины: с 1% раствором ванилина в концентрированной хлористоводородной кислоте образуется ярко-красное окрашивание. Лейкоантоцианидины можно обнаружить, нагревая извлечение с раствором хлористоводородной кислоты - появляется красное окрашивание за счет образования антоцианов. Количественный анализ Все методы количественного определения ДВ в ЛРС можно разделить на гравиметрические, объемные и физико-химические. 1. Гравиметрические методы: 1) Ранее использовали осаждение ДВ желатином или ацетатом меди. В настоящее время эти методики потеряли свое значение. 2) В кожевенной промышленности применяется весовой единый метод (ВЕМ). Метод основан на свойстве ДВ давать необратимые соединения с коллагеном кожи. Получают водное извлечение из ЛРС, делят его на 2 равные части. Одну часть упаривают, высушивают и взвешивают (Р). Вторую часть обрабатывают кожным (гольевым) порошком, фильтруют. Фильтрат упаривают досуха, высушивают и взвешивают (Р1). По разности сухих остатков в контроле (Р) и в опыте (Р1) определяют содержание ДВ. 2. Объемные методы: 1) В ГФ ХI (вып. 1, с. 286) принят оксидиметрический метод определения ДВ (схема 14). Схема 14 Схема количественного определения ДВ в ЛРС Подготовка ЛРС (измельчение, просеивание, взятие навески) Экстракция ДВ водой при нагревании Фильтрация На выброс - охлаждение отработанное сырье Окислительно-восстановительное титрование | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||