раб. Современной клинической лабораторной диагностике присущи следующие особенности
 Скачать 34.78 Kb.
|
|
Анализ мочи – один из древнейших способов выявления объективных признаков болезни. Первые письменные свидетельства об исследовании мочи содержатся в древнеиндийском медицинском трактате «Аюрведа» (Х–VI вв. до н.э.). В эпоху Возрождения в медицинской практике было уже обязательным анализировать у всех пациентов количество мочи и такие ее свойства, как цвет, запах, вкус. С середины XIX в., когда появились первые медицинские лаборатории, для исследования мочи стали применять различные химические методы. Непрерывно «сепарируя» кровь, почки задерживают и возвращают в кровоток все необходимые организму вещества – белки, минеральные и органические компоненты, клетки крови, большую часть воды, отделив при этом вредные для организма продукты его жизнедеятельности или избыточные количества определенных веществ и неусвоенных соединений. Этот «коктейль» способен охарактеризовать как работу самих почек, так и различных других внутренних органов и систем. Вопрос заключается в том, чтобы выявить и количественно определить тот или иной компонент, а также оценить связь этого показателя с состоянием определенного органа, ткани или биохимическим процессом. Характерная черта современного этапа развития клинической медицины- быстрое разрастание роли лабораторной диагностики. Степень развития лабораторной службы, по мнению компетентных экспертов, наряду со службами лучевой диагностики, относится к первостепенным рейтинговым критериям. Лучшие клиники мира характеризуются хорошо развитыми службами лабораторной диагностики. По данным ВОЗ, доля лабораторных исследований составляет не менее 60% общего количества различных видов исследований, проводимых во всех лечебных учреждениях мира. Современной клинической лабораторной диагностике присущи следующие особенности: - глубокое проникновение в существо и механизм патологического процесса на основе всей суммы знаний в различных областях медицинской науки - генетике, молекулярной биологии, иммунологии, биологии клетки, физиологии - применение разнообразных методологических подходов для выявления расстройств, присущих тем или иным формам патологии. - стремление к точному учету потребностей клинической практики, в достоверной лабораторной информации, что обуславливает необходимость ее понимания, обобщения и клинической трактовки Гематологические и общеклинические анализы применяются в практической медицине более 100 лет. Тем не менее, не смотря на такой длительный срок, многие из них не утратили своего значения и в настоящее время. В нашей стране в общей структуре лабораторных исследований на долю гематологических и общеклинических анализов все или почти все сказано и написано. В действительности это не совсем так. Бурное развитие современных технологий позволило добиться значительных успехов в отношении повышения клинической информативности и качества результатов гематологических и общеклинических исследований. Патология органов мочевой системы в настоящее время относится к одной из важнейших проблем медицинской науки и практики, и в структуре заболеваемости детей и взрослых Российской Федерации занимает одно из ведущих мест. Исход многих заболеваний почек - хроническая почечная недостаточность, является наиболее трагичным патологическим состоянием, нередко формирующимся уже в детском возрасте. Большие экономические потери в связи с утратой трудоспособности, инвалидизация населения, значительная стоимость лечения и реабилитации пациентов также определяют социальную значимость заболеваний органов мочевой системы и почек в частности. При диспансеризации и клинических исследованиях большое диагностическое значение приобретают лабораторные методы исследования. К ним относится исследование мочи, которое позволяет в комплексе с гематологическими и другими исследованиями диагностировать болезни почек, мочевыводящих путей, выявить нарушения обмена веществ в организме, определить возникшие осложнения, дифференцировать сходные заболевания, судить о тяжести болезни, о функциональном состоянии органов, следить за эффективностью лечения, прогнозировать заболевание. Особенно большое значение исследование мочи имеет для диагностики заболевания почек и мочевыводящих путей. С точки зрения функционального единства всего организма, единства и целостности биофизических процессов у здорового и больного человека функция почек стоит в теснейшей связи с состоянием и работой других органов и, прежде всего, сердца, печени, легких, органов пищеварения. При расстройстве этих органов соответственно изменяется и работа почек. Прежде всего, это относится к инфекционным и инвазионным заболеваниям, к заболеваниям обмена веществ, ряду отравлений. Поэтому данные исследования мочи имеют большое клинико-диагностическое значение при различных болезнях животных. С мочой из организма выделяется около 160 различных веществ - мочевина, мочевая кислота, креатинин, индикан, - образующихся в процессе обмена или поступивших в организм различными путями. Нарушение образования или выделения мочи в почках может привести к самоотравлению организма, особенно азотистыми продуктами обмена веществ, развивается уремия. Состав мочи может изменяться в зависимости от физического состояния организма (покой, работа, беременность, заболевание) и внешних факторов (сезон, погода). Анализируя состав и свойства мочи в динамике, можно получить информацию о состоянии различных органов и систем пациента, оценить степень тяжести заболевания, а также сделать заключение об эффективности проводимого лечения. Анализы мочи являются незаменимым методом исследования при диагностике большинства патологий мочевыводящей системы. Также они могут помочь в уточнении диагноза и при многих других заболеваниях. Сегодня наиболее распространенными, благодаря простоте и быстроте выполнения, а также невысокой стоимости, являются исследования мочи с помощью полуавтоматических оптико-электронных приборов, работающих на реагентных («мочевых») тест-полосках. Их недостатком является относительно невысокая точность и специфичность определения и невозможность исследования осадка мочи. Использование мочевых анализаторов, работающих по принципу проточной цитометрии, и автоматических анализаторов осадка мочи позволяет быстро получать более точные сведения о составе этой биологической жидкости, однако стоимость таких исследований на порядок выше и требует специально обученного персонала. Возможность при помощи проточной цитометрии определять количество в 1 мл мочи числа бактериальных клеток позволила значительно сократить частоту проведения дорогостоящих бактериологических исследований мочи. Микроскопическое исследование осадка мочи является неотъемлемой частью общеклинического исследования и часто служит основным методом диагностики заболеваний почек и мочевыводящих путей. Микроскопию осадка мочи проводят с помощью обычного ориентировочного и количественных методов. Наряду с ними существуют некоторые специальные методы исследования. Количественные методы определения осадка мочи позволяют с большей точностью определить характер мочевого осадка, что позволяет выявить скрытые формы заболевания. Общий анализ мочи как обязательное исследование при диагностике заболеваний. Общий анализ мочи включён в перечень обязательных исследований, которые следует проводить всем первично обратившимся больным независимо от предполагаемого диагноза. При общеклиническом анализе мочи оценивают ее физические свойства (цвет, прозрачность, запах, реакцию, относительную плотность), содержание некоторых веществ (белок, глюкоза, гемоглобин, желчные пигменты, кетоновые тела, уробилин), а также проводят микроскопическое исследование осадка. При этом могут быть выявлены лейкоциты, эритроциты, клетки эпителия из различных отделов мочевыделительной системы, различные цилиндры, кристаллы солей, бактерии и прочие ингредиенты. Изменение свойств мочи, повышенное содержание различных веществ и элементов позволяет врачу выявить патологические процессы, а в сочетании с общеклиническим и биохимическим анализами крови — более точно поставить диагноз заболевания (в том числе связанный с другими органами и системами). Цель работы – сравнить методы количественного подсчета форменных элементов мочи, их особенности и клиническое применение. Микроскопическое исследование осадка мочи является неотъемлемой частью общеклинического исследования и часто служит основным методом диагностики заболеваний почек и мочевыводящих путей. Микроскопию осадка мочи проводят с помощью обычного ориентировочного и количественных методов. Наряду с ними существуют некоторые специальные методы исследования. Ориентировочный метод исследования осадка мочи Ориентировочный метод является более распространенным (используется при общеклиническом анализе мочи), но менее точным и дает лишь приблизительное представление о содержании элементов в осадке. Полученные результаты зависят от количества мочи, взятой для центрифугирования, количества оборотов центрифуги, правильного приготовления препаратов. Микроскопическое исследование должно проводиться не позднее, чем через 2 часа после сбора мочи; при низкой относительной плотности (меньше 1010) рекомендуется производить микроскопию непосредственно после ее сбора, так как при стоянии лейкоциты и гиалиновые цилиндры быстро растворяются. Исследование начинают со снятия осадка при помощи пипеток или стеклянных трубок диаметром 5 - 6 мм с оплавленными краями. На пипетку надевают баллон и осторожно погружают ее на дно склянки. Передвигая пипетку по дну склянки, набирают жидкость с осадком в пипетку, не допуская попадания ее в баллон. Из пипетки мочу (10 – 15 мл) переносят в центрифужную пробирку. Перед каждым сбором осадка мочи пипетку следует промывать дистиллированной водой, чтобы не занести элементы осадка одного анализа в другой. Пробирки с мочой центрифугируют 5 – 7 мин при 1500 – 2000 об/мин. После центрифугирования пробирку быстро опрокидывают для удаления надосадочной жидкости, затем переводят в исходное положение так, чтобы осадок остался на дне. Осадок размешивают пипеткой (лучше пастеровской с тонким концом и маленьким резиновым баллоном). Небольшую каплю осадка помещают на предметное стекло и покрывают покровным, не допуская попадания пузырьков воздуха. При соблюдении этих правил препарат всегда имеет более или менее одинаковые размеры (площадь и высоту). Приготовленный препарат является нативным (неокрашенным). Не рекомендуется: 1) проводить микроскопию препаратов без покровных стекол, так как при этом портится оптическая система микроскопа (при переводе на большое увеличение объектив нередко смачивается мочой); 2) готовить препараты из всего осадка (произвольный размер препарата не дает правильного представления о количестве форменных элементов). Осадок мочи оценивают сначала под малым увеличением (окуляр 10х, объектив 8х), а затем переводят на большое увеличение (окуляр 10х, объектив 40х, при опущенном конденсоре). Под малым увеличением делают общий обзор препарата. При этом обнаруживают и подсчитывают цилиндры, составляют общее представление о количестве солей, слизи и др. Под большим увеличением детализируют отдельные элементы осадка, приблизительно подсчитывают количество лейкоцитов и эритроцитов в поле зрения, составляют окончательное суждение об осадке в целом. Для этого необходимо просмотреть не менее 10 – 15 полей зрения. Результат такого исследования заносят в бланк. Среднее цифровое выражение найденного количества элементов (например, эритроцитов, лейкоцитов, цилиндров) дают приблизительно, указывая, сколько их в поле зрения при большом увеличении микроскопа. При малом количестве элементов осадка указывают их число в препарате. Для других элементов (эпителиальные клетки, кристаллы и др.) принято давать оценку: «большое», «небольшое» и «незначительное» количество. Элементы мочевого осадка, видимые под микроскопом, разделяются на неорганизованные (различные соли, органические соединения и лекарственные вещества, осевшие в моче в виде кристаллов или аморфных тел) и организованные (цилиндры и все клеточные элементы – эритроциты, лейкоциты, эпителиальные клетки; среди организованных осадков могут также встречаться уретральные нити, сперматозоиды и элементы новообразований). Методы количественного определения форменных элементов в моче При обычном микроскопическом исследовании осадка мочи не всегда удается выявить патологию, особенно в начальных стадиях заболевания. Несоблюдение стандартных условий при проведении данного исследования, когда не учитывается количество выделенной мочи, объем мочи, взятой для центрифугирования, площадь поля зрения микроскопа, толщина слоя мочи и другие моменты, значительно снижает ценность анализа и ограничивает возможность динамического наблюдения за патологическим процессом. Поэтому методы количественного определения форменных элементов в моче, позволившие в значительной мере объективизировать исследование мочи, получили значительное распространение. Количественные методы микроскопического исследования осадка мочи по сравнению с ориентировочным методом обладают следующими преимуществами: строго стандартизованы, подсчет элементов производится в счетной камере, подсчет лейкоцитов, эритроцитов и цилиндров производится в определенном объеме (1 мл) или за определенное время (сутки, час, минута). Методы количественного определения форменных элементов в моче позволяют определить точное количество эритроцитов, лейкоцитов и цилиндров, выделенных с мочой; выявляют скрытую (не обнаруживаемую при ориентировочной микроскопии) лейкоцитурию, которая часто наблюдается при хронических, скрытых и вялотекущих формах гломерулонефрита и пиелонефрита; помогают в диагностике заболеваний почек (для многих болезней почек характерно определенное соотношение между клеточными элементами, их диссоциация: при хроническом пиелонефрите количество лейкоцитов, как правило, преобладает над числом эритроцитов (характерное соотношение может отсутствовать при калькулезном пиелонефрите), а при хроническом гломерулонефрите и артериосклерозе почек отмечается обратная зависимость); позволяют проводить динамическое наблюдение за течением заболевания и осуществлять контроль за проводимым лечением. К методам количественного определения форменных элементов в моче относятся: метод Каковского-Аддиса, метод Нечипоренко, метод Амбурже. Метод Нечипоренко Метод Нечипоренко в отечественной лабораторной диагностике является наиболее распространенным методом количественного определения форменных элементов в моче. Этот метод наиболее прост, доступен любой лаборатории и удобен в амбулаторной практике, а также имеет ряд преимуществ перед другими известными количественными методами исследования осадка мочи. По методу Нечипоренко определяют количество форменных элементов (эритроцитов, лейкоцитов и цилиндров) в 1 мл мочи. Подготовка пациента Специальной подготовки для исследования мочи по методу Нечипоренко не требуется. Сбор мочи Для исследования мочи по методу Нечипоренко собирается только средняя порция (в середине мочеиспускания) первой утренней мочи (достаточно 15 - 20 мл). На это обязательно следует указать пациенту. При этом необходимо соблюдать основные правила сбора мочи. Моча сразу же доставляется в лабораторию. В стационаре для уточнения топической диагностики для исследования мочи по методу Нечипоренко может быть использована моча, полученная при раздельной катетеризации мочеточников. Оборудование, необходимое для проведения исследования мочи по методу Нечипоренко, включает в себя мерную центрифужную пробирку, пипетку на 10 мл, счетную камеру (Горяева, Фукса-Розенталя или Бюркера), стеклянную палочку и микроскоп. Порядок проведения исследования по методу Нечипоренко. Доставленную мочу хорошо перемешивают, отливают 5 - 10 мл в центрифужную градуированную пробирку и центрифугируют 3 минуты при 3 500 об/мин. Отсасывают верхний слой мочи, оставляя 1 мл вместе с осадком. Хорошо перемешивают осадок и заполняют камеру Горяева или любую счетную камеру. Обычным способом во всей сетке камеры подсчитывают число форменных элементов (раздельно лейкоцитов, эритроцитов и цилиндров) в 1 мм3 осадка мочи (x). Установив эту величину и подставив ее в формулу, получают число форменных элементов в 1 мл мочи по формуле N = x*(1000/V), где: N - число лейкоцитов, эритроцитов или цилиндров в 1 мл мочи, x - число подсчитанных лейкоцитов, эритроцитов или цилиндров в 1 мм3 (1 мкл) осадка мочи (при подсчете в камере Горяева и Бюркера x = H/0,9, где H - количество подсчитанных в камере клеток, а 0,9 - объем камеры, а при подсчете в камере Фукс- Розенталя x = H/3,2, так как объем камеры 3,2 мм3), V - количество мочи, взятой для исследования (если моча берется катетером из лоханки, то V обычно меньше 10), 1000 - количество осадка (в кубических миллиметрах). Изучение счетной камеры Горяева и подготовка ее к работе. Для подсчета количества эритроцитов и лейкоцитов используют счетную камеру Горяева. Она представляет собой толстое прямоугольное прозрачное стекло обычно с двумя сетками, выгравированными нанесенные основные показатели и название счетной камеры. Сетки отделены от стеклянных прямоугольных пластинок, которым притирают шлифованные покровные стекла; поверхность этих стеклянных прямоугольных пластинок находится на 0,1мм выше участков камеры, на которых нанесена сетка. Сетка камеры Горяева образована системой разграничительных линий, проведенных взаимно перпендикулярно. В ней имеются 3600 малых квадратов: сторона 1/20мм, площадь 1/400 мм2, объем 1/400 мкл; 225 больших квадратов: сторона 1/5 мм, площадь 1/25 мм2, объем 1/250 мкл. Сторона всей сетки 3 мм, площадь 9 мм2, объем 0,9 мкл; высота камеры, создающаяся при притирании шлифованного покровного стекла- 0,1 мм. Сетку камеры Горяева изучают при увеличении (окуляр 10х, объектив 8х) с опущенным конденсором. Камеру устанавливают на предметный столик микроскоп. Наблюдая в окуляр, отыскивают сетку камеры, четко фокусируют ее изображение, устанавливают в поле зрения верхний левый угол сетки. Передвигая стекло левой рукой, последовательно изучают отдельные малые и большие квадраты, рассматривают их группировки, при этом должна быть изучена вся площадь сетки. Техника заполнения камеры Горяева Камеру перед заполнением моют водопроводной водой, насухо вытирают, так же точно подготавливают шлифованное покровное стекло. Камеру Горяева берут в левую руку. На участок камеры, где нанесены сетки, укладывают шлифованное покровное стекло. Теперь стекло берут и правой рукой. При этом нижняя поверхность камеры находится на двух III пальцах, и придерживают ее спереди. Свободными двумя I пальцами притирают шлифованное покровное стекло, продвигают его по поверхности прямоугольных стеклянных пластин плавно до появления цветных колец Ньютона в месте соприкосновения покровного стекла с поверхностью прямоугольных пластинок камеры. Для подсчета цилиндров необходимо просмотреть не менее 4 камер Горяева (или Бюркера) или 1 камеру Фукса-Розенталя. Количество цилиндров, сосчитанное в 4 камерах Горяева или Бюркера, затем следует разделить на 4, а уже потом полученное число можно вставлять в формулу для определения количества цилиндров в 1 мкл осадка мочи. Нормальные значения форменных элементов для метода Нечипоренко Для метода Нечипоренко нормальным считается содержание в 1 мл мочи лейкоцитов до 2000, эритроцитов - до 1000, цилиндры отсутствуют или обнаруживаются в количестве не более одного на камеру Фукса-Розенталя или на 4 камеры Горяева. Цифры одни и те же для взрослых и детей, для лоханочной и пузырной мочи. Преимущества метода Нечипоренко - технически прост, удобен, доступен; не обременителен для обследуемого и персонала, так как не требует дополнительной подготовки пациента, сбора мочи за строго определенное время; - для исследования может быть использована средняя порция мочи (что исключает необходимость катетеризации мочевого пузыря) и моча, полученная из почек при раздельной катетеризации мочеточников для уточнения топической диагностики; - не требует большого количества мочи - определение лейкоцитурии можно проводить в небольшом количестве мочи, полученной из почки; по количественным показателям не уступает другим методам; - легко выполним в динамике; - является унифицированным методом. Недостаток метода Нечипоренко При исследовании мочи по методу Нечипоренко не учитываются суточные колебания выделения форменных элементов с мочой. Клиническое значение метода Нечипоренко - Метод Нечипоренко позволяет выявить скрытую лейкоцитурию, которая часто наблюдается при хронических, скрытых и вялотекущих формах гломерулонефрита и пиелонефрита и не обнаруживается при ориентировочной микроскопии осадка мочи. - Метод используется для диагностики заболеваний почек. Так, преобладание эритроцитов над лейкоцитами характерно для хронического гломерулонефрита и артериосклероза почек, а преобладание лейкоцитов - для хронического пиелонефрита. Необходимо помнить, что при наличии калькулезного пиелонефрита в осадке могут преобладать эритроциты. - Неоднократное проведение исследования мочи по методу Нечипоренко в процессе лечения позволяет судить об адекватности назначенной терапии и помогает в случае необходимости скорректировать ее. - При диспансерном наблюдении метод Нечипоренко позволяет следить за течением заболевания и своевременно назначать терапию в случае обнаружения отклонений от нормы. Метод Нечипоренко в модификации Пытель А. Я. В детской и урологической практике, при диспансеризации широко применяется метод Нечипоренко в модификации Пытель А. Я. Сбор мочи и оборудование те же, что и при обычном методе Нечипоренко, отличие заключается в самом подсчете форменных элементов (подсчет форменных элементов осуществляется в камере Горяева, но не во всей, а только в 100 больших квадратах), в связи с чем нормальное количество лейкоцитов для данного метода отличается от такового при классическом методе Нечипоренко и это следует учитывать врачу при интерпретации полученных данных. Ход исследования Мочу хорошо перемешивают, наливают 10 мл в градуированную центрифужную пробирку и центрифугируют в течение 5 мин при 2000 об/мин. Удаляют верхний слой, оставляя 1 мл мочи вместе с осадком. Хорошо перемешивают осадок, заполняют камеру Горяева и производят подсчет раздельно лейкоцитов, эритроцитов и цилиндров в 100 больших квадратах (1600 малых квадратов). Учитывая, что объем малого квадрата равен 1/4000 мм3. Подсчет форменных элементов в 1 мм3 производят по следующей формуле: x = (a*4000)/(b*c), где: x - количество форменных элементов в 1 мм3 мочи, a - количество форменных элементов в 100 больших квадратах, b - количество малых квадратов, в которых производился подсчет, c - количество мочи, взятой для центрифугирования (в миллилитрах). При умножении полученного числа на 1000, узнают количество форменных элементов в 1 мл мочи: K = (a*4000*1000)/ (1600*10) = a*250, где: K - количество форменных элементов в 1 мл мочи, a - количество форменных элементов в 100 больших квадратах. При получении небольшого количества мочи в случае катетеризации мочеточника число форменных элементов подсчитывают в 1 мл не центрифугированной мочи, используя ту же формулу, но исключая в знаменателе c. Тогда формула будет иметь следующий вид: K = (a*4000*1000)/b = (a*4000*1000)/1600=a*2500. Нормальные значения В норме при подсчете форменных элементов в моче по методу Нечипоренко в модификации Пытель А.Я. в 1 мл мочи содержится лейкоцитов - до 4000, эритроцитов - до 1000, цилиндров - до 20. Метод Каковского-Аддиса Метод Каковского-Аддиса является унифицированным методом количественного определения форменных элементов в суточном объеме мочи. Этот наиболее трудоемкий и имеющий много недостатков метод все реже применяется на практике в последнее время. Подготовка пациента При исследовании мочи по методу Каковского-Аддиса во избежание получения заниженных данных, обусловленных распадом форменных элементов в нейтральной или щелочной моче, а также в моче с низким удельным весом, пациенту в течение суток, предшествовавших исследованию, назначают мясную диету и ограничивают прием жидкости. При этих условиях обычно стандартизуется удельный вес мочи и ее pH. Сбор мочи Классический вариант исследования мочи по методу Каковского-Аддиса требует строго соблюдать правила сбора мочи и ее хранения в течение длительного времени. При этом мочу собирают в течение суток: утром больной освобождает мочевой пузырь, а затем в течение 24 часов собирает мочу в сосуд с 4 - 5 каплями формалина или 2 - 3 кристаллами тимола, мочу следует хранить в холодильнике. Однако на практике чаще пользуются другим, более простым способом сбора мочи - мочу собирают за 10 - 12 часов. При этом способе страдает точность результата. При данном варианте сбора мочи для метода Каковского-Аддиса перед сном больной опорожняет мочевой пузырь и отмечает это время. Утром, через 10 - 12 часов после вечернего мочеиспускания, пациент мочится в приготовленную посуду, вся моча отправляется в лабораторию для исследования. На бланке направления должно быть указано, в течение какого времени была собрана моча. При невозможности удержать мочу в течение 10 - 12 часов пациент собирает ее в несколько приемов, соблюдая условия ее хранения. У женщин мочу собирают катетером. Оборудование необходимое для проведения исследования по методу Каковского-Аддиса включает в себя мерную центрифужную пробирку, пипетку на 10 мл, счетную камеру (Горяева, Фукса-Розенталя или Бюркера), стеклянную палочку и микроскоп. Ход исследования: Доставленную мочу тщательно перемешивают, измеряют ее количество и отбирают для исследования количество, соответствующее 12 минутам или 1/5 часа. Это количество определяют по формуле Q = V/(t*5),где Q - количество мочи (в мл), выделенное за 12 минут, V - общий объем собранной мочи (в мл), t - время (в часах), за которое собрана моча,5 - число для расчета объема мочи, выделенной за 12 минут. Рассчитанное количество мочи помещают в градуированную центрифужную пробирку и центрифугируют 3 мин при 3500 об/мин, или 5 минут при 2000 об/мин. Отсасывают верхний слой, оставляя 0,5 мл мочи вместе с осадком. Если осадок превышает 0,5 мл, то оставляют 1 мл мочи. Осадок с над осадочной жидкостью тщательно перемешивают и заполняют камеру Горяева (или другую счетную камеру). В этой камере подсчитывают раздельно количество лейкоцитов, эритроцитов и цилиндров (эпителиальные клетки мочевыводящих путей не считают). Для подсчета цилиндров необходимо просмотреть не менее 4 камер Горяева (или Бюркера) или 1 камеру Фукса-Розенталя. Количество цилиндров, сосчитанное в 4 камерах Горяева или Бюркера, затем следует разделить на 4, а уже потом полученное число можно вставлять в формулу для определения количества цилиндров в 1 мкл осадка мочи. Рассчитывают количество форменных элементов в 1 мкл осадка мочи (x). При подсчете в камере Горяева и Бюркера x = H/0,9, где H - количество подсчитанных в камере клеток, а 0,9 - объем камеры. При подсчете в камере Фукс- Розенталя x = H/3,2, так как объем камеры 3,2 мм3. Затем, исходя из того, что для исследования было взято 0,5 мл, или 500 мм3, полученные количества форменных элементов в 1 мм3 умножают на 500 (а при осадке в 1 мл - на 1000), и получают количество форменных элементов, выделенных с мочой за 12 минут. В пересчете на 1 час это количество умножают на 5, а при расчете за сутки - еще на 24. Так как, 500, 5 и 24 являются постоянными числами, то соответственно полученное количество эритроцитов, лейкоцитов и цилиндров (x) умножают на 60 000, если в пробирке для исследования было оставлено 0,5 мл мочи, или на 120 000, если осадок был обильный и был оставлен 1 мл. Нормальные значения форменных элементов для метода Каковского-Аддиса Число Каковского-Аддиса для нормальной мочи составляет до 1 000 000 для эритроцитов, до 2 000 000 для лейкоцитов, до 20 000 для цилиндров. Некоторые авторы указывают другие цифры для метода Каковского-Аддиса: эритроцитов - до 2 000 000 - 3 000 000, лейкоцитов - до 4 000 000, цилиндров - до 100 000. Преимущество метода Каковского-Аддиса Преимущество метода заключается в том, что при сборе мочи за 24 часа учитываются суточные колебания выделения форменных элементов с мочой. Недостаток метода Каковского-Аддиса - не каждый больной может удержать мочу в течение 12 часов, особенно при никтурии; - не каждый пациент может самостоятельно полностью опорожнить мочевой пузырь (аденома, рак предстательной железы); - получение мочи путем катетеризации возможно лишь в лечебном учреждении; - метод Каковского-Аддиса трудно применим в детской практике; - повышение показателей при данном исследовании может наблюдаться не только при патологии почек, но и при хронических гнойных процессах, воздействии ядов (отравление сулемой, угарным газом), гепаринотерапии; главный недостаток метода - более низкая информативность: при сборе мочи за 12 или 24 часа частями необходимость длительного хранения мочи ведет к частичному лизису форменных элементов (особенно лейкоцитов) за счет щелочного брожения, что приводит к ложным результатам; - метод непригоден при одностороннем поражении почек (предоставляет суммарный результат). Метод Амбурже Метод Амбурже относится к методам количественного определения форменных элементов в моче. При этом определяется количество форменных элементов, выделенных с мочой за 1 минуту. Подготовка больного. Больному ограничивают прием жидкости днем и исключают ночью. Сбор материала осуществляется в соответствии с основными правилами сбора мочи, отличительной особенностью сбора мочи для метода Амбурже является то, что утром больной опорожняет мочевой пузырь, замечает время и ровно через 3 часа собирает мочу для исследования. Мочу сразу отправляют в лабораторию на исследование. Оборудование: мерная центрифужная пробирка, пипетка на 10 мл, счетная камера (Горяева, Фукса-Розенталя или Бюркера), стеклянная палочка, микроскоп. Ход исследования: доставленную порцию мочи измеряют, хорошо перемешивают и отливают 10 мл в градуированную центрифужную пробирку. Центрифугируют 5 мин при 2000 об/мин, затем осторожно отсасывают верхний слой, оставляя точно 1 мл вместе с осадком. Осадок с над осадочной жидкостью перемешивают и взвесью заполняют счетную камеру. Раздельно подсчитывают число лейкоцитов и эритроцитов во всей камере. Производят подсчет клеток в 1 мкл осадка мочи (x). Если подсчет производился в камере Горяева или Бюркера x=H/0,9, где H - количество подсчитанных в камере клеток (отдельно лейкоцитов и эритроцитов), а 0,9 – объем камеры. При подсчете в камере Фукс- Розенталя x=H/3,2, так как объем камеры 3,2 мм3. Расчет числа форменных элементов, выделенных за 1 минуту, проводят по формуле A=x•(1000•V)/(S•t), где A – количество клеток, выделенных с мочой за минуту, x – число клеток в 1 мкл осадка (раздельно для лейкоцитов и эритроцитов), 1000 – объем осадка (в кубических миллиметрах), V – объем мочи, выделенной за 3 часа (в миллилитрах), S – количество мочи, взятой для центрифугирования (в миллилитрах), t – время, за которое собрали мочу (в минутах). Нормальные значения. В норме количество лейкоцитов в минутном объеме мочи составляет 2000, эритроцитов – 1000. Иногда в литературе можно встретить другие цифры нормы: лейкоцитов в минутном объеме мочи – 2500, эритроцитов – 2000. При необходимости цифры минутного объема можно рассчитать на 24 часа и таким образом получить число Каковского-Аддиса. Преимущества метода Амбурже: - более приемлем в условиях амбулаторной практики; - его считают более точным, так как аутолиз клеток маловероятен в условиях сбора мочи за короткий срок. Недостатки метода Амбурже: необходимость ограничения приема жидкости для пациента; не каждый больной может удержать мочу в течение 3 часов; не каждый пациент может самостоятельно полностью опорожнить мочевой пузырь (аденома, рак предстательной железы); метод Амбурже непригоден при одностороннем поражении почек (дает суммарный результат). Метод выявления активных лейкоцитов и клеток Штернгеймера-Мальбина В основе метода лежит суправитальная (прижизненная) окраска лейкоцитов с целью выявления их качественных особенностей. Активные лейкоциты — это нейтрофилы, которые, как считают, проникают в мочу из воспалительного очага (в почках, простате). К этим клеткам применяется также термин клетки Штернгеймера — Мальбина. Активные лейкоциты встречаются при остром и хроническом пиелонефрите (в 79–95 % случаев), их количество увеличивается при обострениях. Однако они могут обнаруживаться (не чаще, чем в 10 % случаев) при гломерулонефритах, волчаночном нефрите, миеломной болезни, а также при хроническом простатите. Подчеркивается особенно частое выявление этих клеток при хронической почечной недостаточности, независимо от этиологии уремии, что связывают с изостенурией. При циститах обнаружение активных лейкоцитов не характерно. Активные лейкоциты (клетки Штернгеймера — Мальбина) не окрашиваются многими реактивами, поэтому на фоне хорошо прокрасившихся обычных лейкоцитов они выглядят как бледно-серые (бледно-синие), увеличенные в размере клетки, в которых обнаруживается броуновское движение гранул. Для их выявления в цент рифугате утренней мочи можно использовать различные реактивы. Реактив Штернгеймера — Мальбина (водно-спиртовая смесь 3 частей генцианового фиолетового и 97 частей сафранина) окрашивает ядра обычных лейкоцитов в красный цвет, а ядра клеток Штерн геймера — Мальбина — в бледно-синий. Раствор метиленового синего (водный 1%) не окрашивает активные лейкоциты, окрашивая ядра остальных лейкоцитов в синий цвет. Препараты рассматривают при увеличении в 40 раз или с иммерсионной системой. В настоящее время сочетают подсчет лейкоцитов в камере с одновременным определением числа активных лейкоцитов, которое может быть выражено в процентах (соотношение активных и неактивных лейкоцитов) и в виде абсолютного числа их в 1 мл мочи. Считают, что в моче здорового человека активных лейкоцитов либо нет, либо их число не превышает 200 в 1 мл. Провокационные тесты Используются для выявления скрытой лейкоцитурии (для диагностики латентно протекающего хронического пиелонефрита). Эти методы выявляют лейкоцитурию, вызывая кратковременное обострение воспалительного процесса (преднизолоновый и пирогеналовый тест) или механически вымывая лейкоциты из воспалительного очага (тест с водной нагрузкой). Преднизолоновый тест: через час после того, как больной сдал контрольную порцию мочи, вводится медленно внутривенно 30 мг преднизолона (в 10 мл изотонического раствора хлорида натрия), после чего больной сдает 4 порции мочи: первые 3 — каждый час, четвертую — спустя сутки. В каждой порции определяют общее количество лейкоцитов по методу Нечипоренко, число активных лейкоцитов (клеток Штернгеймера — Мальбина). Тест считается положительным, если хотя бы в одной из 4-х порций (по сравнению с контрольной) в 2 раза возрастает общее количество лейкоцитов или активных лейкоцитов. Важно отметить, что преднизолоновый тест недостаточно специфичен, может быть положительным при хроническом простатите, уретрите, хронических гломерулонефритах. В связи с этим при проведении преднизолонового теста целесообразно определять степень бактериурии. Раздельное взятие мочи из правой и левой почки при выполнении преднизолонового теста также существенно повышает его специфичность и информативность. |