Определение коагулазоположительных стафилококков. Нормативным документом является: ГОСТ 9958-81 Изделия колбасные и продукты из мяса. Методы бактериологического анализа Сущность метода заключается в определении морфологии, характера роста на питательных средах и в способности отдельных стафилококков ферментировать лецитиназу и коагулировать цитратную плазму крови кролика под воздействием фермента коагулазы. Из разведения анализируемой взвеси продукта (1/10) проводят посевы на молочно-солевой агар, содержащий 6,5% хлористого натрия, для выявления пигмента или желточно-солевой агар, содержащий 6,5% хлористого натрия, для выявления лецитиназной активности. Взвесь наносят на поверхность агара в количестве 0,2 куб.см и равномерно растирают по всей поверхности агаровой среды. Посевы термостатируют в течение 24 ч при температуре 37° С и 24 ч выдерживают при комнатной температуре. На поверхности питательной среды колонии стафилококка имеют вид плоских или слегка выпуклых блестящих колоний с ровным краем. При этом на молочно- солевом агаре лучше выявляется пигмент (эмалево-белый или золотистый), а на желточно-солевом агаре колонии стафилококков могут образовывать «радужный венчик», что является одним из признаков их патогенности. Из подозрительных колоний готовят препараты, которые окрашивают по Граму. При наличии стафилококков в препарате обнаруживаются грамположительные мелкие кокки, располагающиеся неправильными гроздьями. Для подтверждения признаков патогенности стафилококков ставят реакцию плазмокоагуляции. В пробирку с 0,5 куб.см цитратной плазмы крови кролика, разведенной физиологическим раствором в соотношении 1:5, вносят петлю чистой суточной культуры стафилококка и ставяти в термостат при температуре37°С. Реакцию плазмокоагуляции учитывают через 3-4 ч (не встряхивая пробирку) и оставляют в термостате на сутки для окончательного учета через 24 ч. Для постановки реакции плазмокоагуляции можно использовать также сухую цитратную плазму крови кролика.Реакцию считают положительной, если плазма коагулируется в сгусток. Для определения количества стафилококков учитывают колонии стафилококков, давшие положительную реакцию плазмокоагуляции. При расчете на 1 г продукта количество подсчитанных колоний умножают на степень разведения и делят на количество посевного материала. Определение клостридий перфрингенс (сульфит-восстановителей). Нормативным документом для выделения клостридий является ГОСТ 29185-91 Продукты пищевые. Методы выявления и определенияя количества сульфитредуцирующих клостридий. Сущность метода заключается в специфическом росте клостридий перфрингенс в средах СЦС или Вильсон-Блера, на которых в результате восстановления сернистокислого натрия в сернокислый натрий происходит взаимодействие с хлористым железом и образуется почернение среды за счет сернистого железа. Проведение анализа на среде Вильсон-Блера. В пробирки, содержащие по 9 куб.см расплавленной и охлажденной до температуры 45° С среды Вильсон-Блера, вносят стерильной пипеткой по 1 куб.см десятикратных разведений (от1:10 до 1:1000000) взвеси испытуемого продукта. Посевной материал и среду тщательно перемешивают. Посевы помещают в термостат с температурой 46° С на 8-12 ч. Появление в среде черных колоний или почернение всей среды указывает на присутствие сульфит-редуцирующих клостридий. За положительный титр клостридий (сульфит-восстановителей) принимают то максимальное разведение суспензий, в посеве которого произошло почернение среды. Определение B. сereus. Нормативным документом для определения B. сereus является ГОСТ 10444.8-88 Продукты пищевые. Метод определения Bacillus cereus. Сущность метода заключается в выделении B. сereus из колоний, полученных при поверхностном посеве продукта на селективных средах и изучении их морфологических и биохимических свойств. Подготовка проб проводится в соответствии с ГОСТ 26669, масса навески не менее 10,±0,1г (см. куб) Исходное разведение продукта готовят с использованием пептонной воды или физиологического раствора. Из пробы готовят ряд разведений в соответствии с допустимым количеством B. сereus, указанном в нормативно-технической документации. Культуральную жидкость разводят так, чтобы получить при высеве раздельные колонии. Для проведения испытания отбирают объем 0,1-0,2 см подготовленной пробы продукта, его разведения или разведения культуральной жидкости Подготовленную пробу продукта, его разведения или разведения культуральной жидкости высевают поверхностным методом по ГОСТ 26670 параллельно в две чашки Петри с предварительно подсушенной селективной средой (селективный агар, . желточный агар с хлористым натрием, полимиксин В или полимиксин М сульфатом и 2, 3, 5-трифенилтетразолиум хлоридом или желточный агар с маннитом, полимиксин В или полимиксин М сульфатом и феноловым красным .). Посевы на чашках Петри термостатируют при (30±1) °С в течение 24-48 ч. Через 24 ч посевы просматривают и выбирают чашки Петри, на которых выросло от 15 до 150 колоний, характерных для В. cereus. Через 48 ч уточняют число обнаруженных колоний. Корректировку подсчета количества В. cereus проводят после изучения морфологических и биохимических особенностей микроорганизмов из колоний, характерных для В. cereus. Для подтверждения принадлежности подсчитанных колоний к колониям, образуемым В. cereus, микроорганизмы из пяти колоний пересевают на скошенный мясо-пептонный агар и термостатируют 18-24 ч при 30±1 °С. |
Скачать 1.22 Mb.