производственный контроль. Учебное пособие подготовлено в соответствии с рабочими программами по ветсанэкспертизе и производственному ветеринарносанитарному контролю для специальностей 110501 Ветеринарносанитарная экспертиза
 Скачать 1.22 Mb.
|
На скошенном мясо-пептонном агаре В. cereus образует сплошной налет белого цвета, иногда с мучнистой поверхностью.Со скошенного мясо-пептонного агара готовят препараты, окрашивают по Граму по ГОСТ 30425, а также определяют подвижность клеток при микроскопировании методом висячей капли.В мазках, приготовленных со скошенного агара, В. cereus имеет вид крупных грамположительных палочек размером 1,0-1,2x3,0-5,0 мкм со слегка закругленными концами, лежащих в виде цепочек или штакетообразных скоплений, реже отдельно друг от друга. В. cereus образует субтерминальные или центральные споры. В висячей капле клетки подвижны, однако могут встречаться штаммы со слабо выраженной подвижностью. Для доказательства анаэробной ферментации глюкозы культуры со скошенного агара высевают уколом в питательную среду с индикатором бромкрезоловым пурпуровым и глюкозой. Посевы инкубируют при температуре 30±1 °С в течение 24 ч. В. cereus растет, окрашивая среду в желтый или желто-коричневый цвет по всей длине укола. Для определения способности В. cereus ферментировать маннит культуры со скошенного агара пересевают на питательную среду с индикатором бромкрезоловым пурпуровым и маннитом . Посевы термостатируют при 30±1 °С в течение 24 ч. При развитии В. cereus на среде с маннитом цвет среды не изменяется. Для постановки реакции на образование ацетилметилкарбинола культуры со скошенного агара пересевают на пептонную среду с глюкозой с рН 7,0. Посевы термостатируют при 30±1 °С в течение 24 ч. В чистую пробирку отбирают 1 см3 культуры, добавляют 0,2 см3 раствора гидроокиси калия массовой концентрацией 400 г/дм и 0,6 см3 свежеприготовленного по ГОСТ 10444.1 раствора 1-нафтола и несколько кристаллов креатина. Допускается реакцию на образование ацетилметилкарбинола проводить без применения креатина.После добавления каждого раствора содержимое пробирки тщательно встряхивают, а затем оставляют на 1 ч при комнатной температуре.В. cereus образует ацетилметилкарбинол, поэтому окраска среды меняется в розовый цвет. При отрицательной реакции культуральную жидкость термостатируют дополнительно 24 ч, после чего делают окончательное заключение. Если при изучении культуральных, морфологических и биохимических свойств микроорганизмов, выделенных из колоний, обнаружены подвижные, грамположительные, нитратредуцирующие, спорообразующие палочки, способные образовывать ацетилметилкарбинол, ферментировать в анаэробных условиях глюкозу и не способные ферментировать маннит, то дают заключение о том, что обнаруженные микроорганизмы относятся к В. cereus.Результаты испытаний пересчитывают на 1 г продукта и записывают в соответствии с требованиями ГОСТ 26670. Выделение и определение Listeria monocytogenes. Основными нормативными документами для выделения листерий являются: - МУК 4.2.1122-02 Организация контроля и методы выявления бактерий Listeria monocytogenes в пищевых продуктах; - ГОСТ Р 51921-2002 Продукты пищевые. Методы выявления и определения бактерий Listeria monocytogenes. Сущность метода заключается в высеве определенного количества продукта в жидкую селективную питательную среду (с предварительным обогощением), последующем пересеве на агаризованные селективно-диагностические среды, культивировании посевов при оптимальных условиях и определении принадлежности выявленных колоний к Listeria monocytogenes по биологическим свойствам. Подготовка проб проводится в соответствии с ГОСТ 26669, масса навески не менее 25±0,1г (см. куб).Навеску пищевого продукта вносят в 225 см.куб. одной из жидких сред для обогащения (ПБЛ 1, бульон Фразера полуконцентрированный). Содержимое встряхивают, посевы культивируют при Т 30±1°С в течение 24 часов. После инкубирования делают посев бактериологической петлей из культуральной жидкости на поверхность одной из агаризованных сеплективно-диагностических сред (среда ПАЛ, Оксфордский агар, ПАЛКАМ –агар), штрихом, посевы инкубируют при Т 37±1°С в течение 24-48 часов. После инкубирования чашки с посевами просматривают и отмечают рост характерных колоний (на среде ПАЛ – мелкие серовато-желтые колонии с черным ореолом с диаметром от 1 до 2 мм; на ПАЛКАМ агаре - мелкие серовато-зеленые или оливково-зеленые колонии с черным ореолом с диаметром от 1до 1,5 мм, иногда с черным центром; на Оксфордском агаре – мелкие, сероватые, окруженные черным ореалом, диаметром 1 мм). Для определения принадлежности характерных колоний к роду Listeria отдельные колонии пересевают на МПА с 1% глюкозой или TSYEA, TSA, TSYEB, TSB, посевы инкубируют при Т 37±1°С в течение 24часа и микроскопируют. Бактерии рода Listeria являются Гр+ короткими палочками, спор и капсул не образуют, являются каталазоположительными, не восстанавливают нитраты до нитритов( за исключением непатогенной L.grayi) Подвижность листерий завсит от температуры. Обнаружение в посевах грамположительных коротких тонких палочек, каталазоположительных. Не восстанавливающих нитраты до нитритов, подвижных при 22±1°С , не подвижные или слабо подвижные при 37±1°С, |