Микробиология. микра 2. Вопросы для подготовки к экзамену для студентов спо специальность Сестринское дело
 Скачать 0.68 Mb.
|
Физические методыКипячение среды – наиболее простой способ удаления, растворенного в ней кислорода. Для этого непосредственно перед посевом материала пробирки с питательными средами кипятят на водяной бане в течение 10-20 мин, в результате чего из среды вытесняется воздух и, следовательно, удаляется кислород. Свежепрокипячённую среду быстро охлаждают под струёй холодной воды, чтобы не произошло насыщение ее кислородом воздуха. Среду засевают материалом и заливают сверху вазелиновым маслом. Посев в среды, содержащие редуцирующие и легко окисляемые вещества. В качестве редуцирующих веществ используют глюкозу, аскорбиновую кислоту, цистеин. Активно связываются с кислородом воздуха животные ткани паренхиматозных органов (печени, селезенки). Можно применять и ряд неорганических восстановителей: сульфиды, сероводород, цитрат титана. Редуцирующие вещества должны вводиться в концентрациях, не угнетающих рост микроорганизмов. На свойстве животных клеток поглощать кислород основано применение сред: Китта-Тароцци. Эта среда широко применяется для культивирования анаэробов. В её состав входят: мясо-пептониый бульон, печень животного (обычно говяжья). Бульон сверху заливают слоем вазелинового масла и стерилизуют в автоклаве или 0, 5 атм. -30мин. Среду Вильсона-Блера готовят из мясопептонного агара к которому добавляют глюкозу, Na2SОз, хлористое железо-- FeC1з. На этой среде анаэробные микроорганизмы, возбудители газовой анаэробной инфекции, столбняка, ботулизма растут в глубине агара. При этом осуществляется восстановление сернистокислого натрия до сернистого, последний же вступает в реакцию с хлорным железом, переводя его в сернистое железо, имеющее черный цвет. Наблюдается в пробирках и разрыв среды, свидетельствующий об газообразовании. Метод Вейон-Виньяла Заключается в том, что расплавленный в пробирке и охлаждённый до 50 ° питательный агар засевают исследуемым материалом, тщательно перемешивают и натягивают его в пипетку Пастера. После застывания среды запаивают пипетку с обоих концов или заливают концы парафином и помещают в термостат. Внутри трубки развиваются отдельные колонии анаэробов. Для выделения колонии трубку надрезают напильником, соблюдая правила асептики, на уровне колонии, ломают, а колонию захватывают стерильной петлёй и переносят в пробирку с питательной средой для дальнейшего выращивания и изучения в чистом виде. Создание вакуума в специальных аппаратах (анаэростатах) Вакуумные условия для выращивания анаэробов создают в анаэростате. Анаэростаты - это воздушные эксикаторы, они представляют собой металлические цилиндрические сосуды с герметически закрывающейся крышкой. Они снабжены манометром, который показывает степень разряженности воздуха и краном для присоединения к вакуумному насосу из анаэростата вакуумным насосом откачивается воздух. Анаэростаты способны сохранять высокие разряжение в течение длительного времени. Пробирки и чашки Петри с анаэробными микроорганизмами сразу после посева помещают в анаэростат. Колонии анаэробов в вакуумных условиях растут на поверхности плотной питательной среды. Методы культивирования анаэробных микроорганизмов Выращивание анаэробов более сложно, чем культивирование аэробных микроорганизмов. Для выращивания анаэробов необходимо создать определённые условия, сущность которых заключается в удалении молекулярного кислорода из питательной среды и внешнего. Другим обязательным условием, обеспечивающим выделение анаэробов из исследуемого материала, является внесение большого количества посевного материала в питательную среду. Для культивирования анаэробов применяют физические, химические и биологические методы. Физические методы Кипячение среды – наиболее простой способ удаления, растворенного в ней кислорода. Для этого непосредственно перед посевом материала пробирки с питательными средами кипятят на водяной бане в течение 10-20 мин, в результате чего из среды вытесняется воздух и, следовательно, удаляется кислород. Свежепрокипячённую среду быстро охлаждают под струёй холодной воды, чтобы не произошло насыщение ее кислородом воздуха. Среду засевают материалом и заливают сверху вазелиновым маслом. Посев в среды, содержащие редуцирующие и легко окисляемые вещества В качестве редуцирующих веществ используют глюкозу, аскорбиновую кислоту, цистеин. Активно связываются с кислородом воздуха животные ткани паренхиматозных органов (печени, селезенки). Можно применять и ряд неорганических восстановителей: сульфиды, сероводород, цитрат титана. Редуцирующие вещества должны вводиться в концентрациях, не угнетающих рост микроорганизмов. На свойстве животных клеток поглощать кислород основано применение сред: Китта-Тароцци. Эта среда широко применяется для культивирования анаэробов. В её состав входят: мясо-пептониый бульон, печень животного (обычно говяжья). Бульон сверху заливают слоем вазелинового масла и стерилизуют в автоклаве или 0, 5 атм. -30мин. Среду Вильсона-Блера готовят из мясопептонного агара к которому добавляют глюкозу, Na2SОз, хлористое железо-- FeC1з. На этой среде анаэробные микроорганизмы, возбудители газовой анаэробной инфекции, столбняка, ботулизма растут в глубине агара. При этом осуществляется восстановление сернистокислого натрия до сернистого, последний же вступает в реакцию с хлорным железом, переводя его в сернистое железо, имеющее черный цвет. Наблюдается в пробирках и разрыв среды, свидетельствующий об газообразовании. Метод Вейон-Виньяла Заключается в том, что расплавленный в пробирке и охлаждённый до 50 ° питательный агар засевают исследуемым материалом, тщательно перемешивают и натягивают его в пипетку Пастера. После застывания среды запаивают пипетку с обоих концов или заливают концы парафином и помещают в термостат. Внутри трубки развиваются отдельные колонии анаэробов. Для выделения колонии трубку надрезают напильником, соблюдая правила асептики, на уровне колонии, ломают, а колонию захватывают стерильной петлёй и переносят в пробирку с питательной средой для дальнейшего выращивания и изучения в чистом виде. Создание вакуума в специальных аппаратах (анаэростатах) Вакуумные условия для выращивания анаэробов создают в анаэростате. Анаэростаты - это воздушные эксикаторы, они представляют собой металлические цилиндрические сосуды с герметически закрывающейся крышкой. Они снабжены манометром, который показывает степень разряженности воздуха и краном для присоединения к вакуумному насосу из анаэростата вакуумным насосом откачивается воздух. Анаэростаты способны сохранять высокие разряжение в течение длительного времени. Пробирки и чашки Петри с анаэробными микроорганизмами сразу после посева помещают в анаэростат. Колонии анаэробов в вакуумных условиях растут на поверхности плотной питательной среды. 7.Понятие о дезинфекции (определение), виды дезинфекции, примеры дезинфектантов, механизмы их действия. Дезинфекция-уничтожение или удаление возбудителей инфекционных болезней из объектов внешней среды, которые могут послужить факторами передачи заразного начала. Виды дезинфекции • Механическая - удаление микроорганизмов с объектов или их обеззараживание путем встряхивания, протирания, проветривания, вентиляции,стирки, мытья, очистки • Физическая – воздействие ультрафиолетового облучения, сухого горячего воздуха, водяного пара, кипячения • Химическая (галоидосодержащие, кислородосодержащие, поверхностноактивные вещества, гуанидины, альдегидосодержащие, спирты, фенолосодержащие, кислоты) У каждого дезинфектанта есть определенный спектр антимикробной активности, который определяет эффективность дезинфицирующего средства. Сочетание нескольких химических агентов расширяет антимикробный спектр действия препарата (эффект синергизма или потенцирования). Определяющее действие обеспечивается основным химическим веществом Основные требования к современным дезинфектантам • микробиологическая эффективность • безопасность применения для персонала и пациентов • совместимость с обрабатываемыми материалами • экономичность • скорость действия (требуемая экспозиция) • наличие запаха • отсутствие воспламеняемости и взрывоопасности • простота в приготовлении, применении, удалении 8.Асептика и антисептика (определения). Антисептические средства: классификация, примеры препаратов, механизм действия, применение. Виды и способы обеззараживания рук медицинского персонала. Общие требования к кожным антисептикам для обеззараживания рук. Асептика - комплекс профилактических мероприятий, направленных на предупреждение попадания микроорганизмов на (в) какой-либо объект (микробиологический бокс, производственное помещение, препарат). Асептика включает: • стерилизацию инструментов, материалов, сред, приборов, оборудования; • обработку рук персонала; • соблюдение особых правил и приемов работы при проведении манипуляций; • дезинфекцию помещений. Антисептика - комплекс лечебнопрофилактических мероприятий с применением химических веществ (антисептиков), направленных на уничтожение микробов, находящихся в контакте с макроорганизмом (на кожных покровах, в ране, патологическом очаге или организме в целом). Антисептики (anti — против, sepsis — гниение) это дезинфицирующие средства, которые уничтожают микроорганизмы или ингибируют их рост на живых тканях, не вызывая повреждений при нанесении на поверхности тела или обрабатываемые ткани Антисептические средства (АС) используют для антимикробной обработки поверхности человеческого тела или его полостей, лечения инфицированных ран В соответствии с классификацией по химическому составу АС подразделяют на: Галогенсодержащие (препараты йода и хлора) – - их активность пропорциональна способности отщеплять элементарные галогены. Обработка рук делится на три уровня: • Бытовой уровень (механическая обработка рук) • Гигиенический уровень (обработка рук с применением кожных антисептиков) • Хирургический уровень (особая последовательность манипуляций при обработке рук с последующим надеванием стерильных перчаток) Для обработки рук персонала • этиловый спирт 70% • раствор хлоргексидина биглюконата 0,5% в этиловом спирте 70% • йодопирон 1% (йодонат, йодовидон) • раствор хлорамина Б 0,5% • При обеззараживании рук спиртосодержащими препаратами, руки необходимо вымыть с мылом и тщательно высушить, а затем протереть марлевой салфеткой, смоченной раствором (сочетают с дублением кожи) • При использовании растворов хлоргексидина или иодофоров препарат наносят на ладони в количестве 5 - 8 мл и втирают в кожу рук • При обработке рук раствором хлорамина их погружают в раствор и моют в течение 2 минут, затем дают рукам высохнуть Требования к кожным антисептикам • Широкий спектр антимикробного действия за короткое время (бактерицидная, туберкулоцидная, фунгицидная, вирулицидная активность) • Инактивировать транзиторную микрофлору и снижать количество резидентной микрофлоры • Обеспечивать обеззараживание кожных покровов в течение от 30 с до 5 мин, в зависимости от назначения • Обладать пролонгированным антимикробным остаточным действием в пределах от 1 до 3 часов • Быть безопасным в рекомендованных режимах применения при многократном использовании • Выпускаться в виде готовых к применению растворов, концентратов, салфеток, аэрозолей, гелей, кремов, мыл 9. Понятие о стерилизации. Физические методы стерилизации (прокаливание, стерилизация сухим жаром, текучим паром, паром под давлением, УФО, фильтрование, стерилизация ультразвуком). Химическая стерилизация (окись этилена, формальдегид, фенол, хлороформ). Механическая стерилизация (фильтрование). Стерилизация - процесс полного уничтожения или удаления из объекта всех жизнеспособных форм микроорганизмов. Стерилизация может быть проведена одним методом или их комбинацией. • Комбинирование методов допускается, чтобы обеспечить эффективность процесса и целостность продукта, упаковки и укупорочных средств. МЕТОДЫ СТЕРИЛИЗАЦИИ Термические методы: • насыщенным водяным паром под давлением (автоклавирование), • горячим воздухом (воздушная стерилизация). Химические методы: • газами, • растворами антисептиков. Стерилизация фильтрованием - через фильтры с требуемым размером пор) Радиационный метод стерилизации Стерилизация УФ Термическая стерилизация Объекты: • оборудование, коммуникации, арматура; • питательные среды, лабораторная посуда; • готовые лекарственные средства (в форме растворов для инъекций и инфузий); • первичная упаковка (ампулы, флаконы); • установки для стерилизующего фильтрования; • технологическая и лабораторная одежда. Виды термической стерилизации: Стерилизация в пламени (прожигание, прокаливание) • стерилизация шпателей, • микробиологических петель, • поверхности стола в микробиологическом боксе Сухожаровая стерилизация • стерилизация сухим горячим стерильным, очищенным от механических частиц воздухом в сухожаровых шкафах, оснащенных устройством для принудительной циркуляции воздуха Объекты: • лабораторная посуда и другие изделия из стекла (первичная упаковка – ампулы, флаконы), • металлические инструменты. Т.е. объекты, которые не теряют своих качеств при высокой температуре !!! Принцип действия: пиролиз - термическое разложение органических и многих неорганических соединений стандартные условиями для метода воздушной стерилизации являются нагревание при температуре не менее 160 °С в течение не менее 2 ч Стерилизация насыщенным паром под давлением (автоклавирование) • осуществляют при температуре 120 – 122°С под давлением 120 кПа (1,5 атмосферы) в течение 8–15 мин • при температуре 130 – 132°С под давлением 200 кПа ( 2 атмосферы) в течение 8–15 мин 10. Правила поведения и техника безопасности при работе в бактериологической лаборатории. Правила работы на кафедре микробиологии Категорически запрещается: 1. Входить на кафедру в уличной одежде или приносить ее с собой (в пакетах, сумках и т. д.) 2. Входить в учебные лаборатории без халатов, бахил (сменной обуви) и шапочек, выпускать из-под спецодежды волосы, воротнички, тесемки, капюшоны… 3. Принимать пищу (воду) в учебных лабораториях и на территории кафедры. 4. Класть на столы и подоконники портфели, сумки, головные уборы. Войдя на кафедру, студенты обязаны надеть бахилы, шапочку, медицинский халат, аккуратно застегнув его на все пуговицы. Войдя в учебную комнату, студенты обязаны: 1.Портфели, книги, головные уборы и другие личные вещи положить в специально отведенный отдел шкафа. 2.Проверить состояние рабочего стола. Дежурный обязан: Проверить состояние учебной комнаты и рабочих мест перед занятием и после его окончания. Устранить дефекты уборки рабочих мест студентов. Обязанности студентов во время работы: • Содержать рабочее место в образцовом порядке и чистоте. • Бережно обращаться с микроскопом, посудой, инструментами и другим оснащением лаборатории. • Проявлять максимальное внимание ко всем этапам работы с культурами бактерий, строго выполняя рекомендации преподавателя. • Во время практической работы не разговаривать и не ходить по учебной лаборатории. • Использованные пипетки, стекла, тампоны после окончания работы опускать в дезинфицирующий раствор. Обязанности студентов по окончании работы: 1. Привести в порядок рабочее место. 2. Все засеянные пробирки и чашки сдать преподавателю по счѐту для помещения в термостат. 4. Отработанный материал по счѐту сдать преподавателю. 5. Привести в порядок микроскоп и поставить его в отведѐнное место. 6. Тщательно обработать руки тампоном с 70º этиловым спиртом, вымыть руки с мылом. В случае загрязнения заразным материалом кожи рук и лица, халата, поверхности стола и других предметов, немедленно сообщить о случившемся преподавателю 11. Классификация питательных сред по составу, консистенции, назначению, требования, предъявляемые к ним. Примеры различных групп питательных сред. Классификация питательных сред по составу: 1. Простые среды (МПБ, МПА, желатин, пептонная вода). Мясо-пептонный бульон (МПБ) является белковой основой всех сред. Существует несколько способов приготовления МПБ: а) на мясной воде с добавлением готового пептона (продукт неполного переваривания белка) – это так называемый мясопептонный бульон; б) на переварах продуктов гидролиза исходного сырья при помощи ферментов (трипсина – бульон Хоттингера, пепсина – бульон Мартена). Мясо-пептонный агар (МПА) – получают путей добавления к МПБ arap-arapa(l,5-3%). Если МПА распределен по диагонали пробирки или флакона – это скошенный агар. Если среда распределена в пробирке вертикально высотой 5-7 см, это агар столбиком. МПА, застывший в чашках Петри в виде пластинки – пластинчатый агар. Если среда имеет вертикальный слой высотой 2-3 см, и диагональный слой такой же величины, это полускошенный агар. 2. Сложные средыготовятся на основе простых с определенными добавками (углеводы, кровь, желчь, яйца, сыворотка, молоко, соли, факторы роста и т.п.) Классификация питательных сред по консистенции: среды бывают жидкие(среды без агара),полужидкие (с агаром до 1%),плотные(агаровые – 1,5-2,5%). Жидкие среды чаще применяют для изучения физиолого-биохимических особенностей микроорганизмов, для накопления биомассы и продуктов обмена. Полужидкие среды обычно используют для хранения культур, плотные — для выделения микроорганизмов, изучения морфологии колоний, диагностических целей, количественного учета, определения антагонистических свойств и др. |