Микробиология. микра 2. Вопросы для подготовки к экзамену для студентов спо специальность Сестринское дело
 Скачать 0.68 Mb.
|
|
44. Диагностические ИБП (антигены, диагностикумы, диагностические сыворотки, комплемент), принципы их получения и применения. Идентификация вирусов, бактерий, грибов, а также диагностика инфекционных и неинфекционных заболеваний производится с помощью специальных диагностических препаратов. Такие препараты позволяют достоверно выявлять аллергические и иммунопатологические расстройства, определять иммунный статус и иммунологическую совместимость тканей. Диагностикумы представляют собой взвесь убитых бактерий, либо антигенов, которые используются в серологических исследованиях, а также для того чтобы определить наличие антител в сыворотке крови. В диагностиках содержатся в зависимости от их целевого назначения различные иммунореагенты (иммуномодуляторы, антитела, антигены, аллергены). Идентифицировать микроорганизмы можно также с помощью реакции иммунитета больного на диагностические иммунные сыворотки. В диагностических целях при обнаружении антител в сыворотке крови больных, реконвалесцентов и бактерионосителей используются серологические реакции. Для постановки таких реакций применяются диагностикумы - препараты, содержащие взвесь обезвреженных микроорганизмов или определенные антигены. Необходимость использования диагностикумов для серологических реакций связана не только с явным их преимуществом перед живыми культурами микробов (безопасность в работе), но еще и потому, что для приготовления диагностикумов подбираются штаммы микроорганизмов с высокой чувствительностью к антителам и способностью длительно сохранять антигенные свойства. Для инактивации микроорганизмов при приготовлении диагностикумов чаще всего используются химические вещества, особенно формалин, являющийся лучшим консервантом. Убитые нагреванием микробы хуже сохраняют антигенные свойства и применяются редко. В серологических реакциях (реакции агглютинации, реакции пассивной гемагглютинации, реакции связывания комплемента, реакции торможения гемагглютинации) для выявления специфических антител применяются: бактериальные, эритроцитарные и вирусные диагностикумы. Бактериальные диагностикумы могут содержать инактивированную микробную взвесь или отдельные антигенные компоненты бактерий: О, Н или Vi-антигены и используются в реакциях агглютинации. Эритроцитарные диагностикумы представляют собой эритроциты (обработанные танином или формалином) с адсорбированными на них антигенами, извлеченными из бактерий, и применяются в РПГА (реакции пассивной гемагглютинации). В том случае, когда РПГА используется для выявления антигена в выделениях больных, в тканях и др., применяют «антительные диагностикумы», т. е. эритроциты, сенсибилизированные антителами. Вирусные диагностикумы — препараты, содержащие инактированные вируссодержащие жидкости (культуральные, из куриных эмбрионов или организма животных, зараженных соответствующим вирусом), применяются в РСК (реакции связывания комплемента), реакции торможения гемагглютинации (РТГА) и реакции нейтрализации. Диагностические сыворотки. Получение и применение. Способ получения адсорбированных агглютинирующих сывороток по Кастеллани. Диагностические сыворотки (диагностикумы) представляют собой взвесь убитых бактерий определенного вида. К диагностическим специфическим сывороткам, применяемым для обнаружения в тех или иных материалах антигенов или для определения вида и даже типа микроба или вируса, относятся агглютинирующие, преципитирующие и лизирующие (комплементсвязывающие). Такая классификация основана на функциональной способности специфических гамма-глобулинов склеивать (агглютинировать), осаждать (преципитировать), растворять (лизировать) соответствующие антигены. Наиболее широко агглютинирующие сыворотки применяют при дифференциации микроорганизмов семейства Enterobacteriaceae, рода Brucella, Listeria, возбудителей риккетсиозных и вирусных инфекций. Агглютинирующие сыворотки готовят путем гипериммунизации животных различными корпускулярными антигенами, введением их парентеральным путем. В качестве антигенов используют живые или убитые различными способами культуры соответствующих микробов. Агглютинирующие сыворотки применяются при идентификации микроба в развернутой реакции агглютинации. Если изучаемый микроорганизм агглютинируется сывороткой до титра или до половины значения титра, его можно считать принадлежащим к тому виду, название которого указано на этикетке ампулы. Неадсорбированные агглютинирующие сыворотки обладают высоким титром — до 1 : 12 800 — 1 : 25 600. Для получения таких сывороток применяют метод Кастелляни — метод адсорбции, который состоит в том, что при насыщении агглютинирующей сыворотки родственными гетерогенными бактериями происходит адсорбция групповых антител, а специфические антитела остаются в сыворотке. В зависимости от полноты истощения групповых агглютининов можно получить монорецепторные сыворотки — сыворотки, имеющие антитела только к одному рецептору-антигену или адсорбированные, поливалентные, дающие реакции агглютинации с двумя — тремя родственными бактериями, имеющими общий антиген, в отношении которого проводилась адсорбция. Адсорбированные сыворотки применяют при идентификации выделенных возбудителей в реакции агглютинации на стекле (пластинчатый метод). Преципитирующие сыворотки предпочтительно готовят для диагностики сибирской язвы. Иммунизируют внутривенным способом лошадей слабовирулентной культурой возбудителя сибирской язвы. Реакции преципитации используют в судебно-медицинской и ветеринарной экспертизе. При ряде инфекционных заболеваний образуются так называемые комплементсвязывающие антитела. При их определении в практике используются специфические диагностические сыворотки, содержащие такие антитела. Показательным примером является приготовление специфических диагностических ящурных сывороток. Идентификацию штамма циркулирующего вируса ящура проводят с помощью реакции связывания комплемента (РСК). Специфическую типовую и вариантную сыворотки получают от морских свинок, которых заражают вирусосодержащей суспензией соответствующего типа, Диагностические комплементсвязывающие сыворотки используются как контрольные при постановке РСК на бруцеллез, сап, кампилобактериоз, вирусные респираторные болезни, грипп и другие бактерийные, вирусные и паразитарные инфекции. При постановке РСК непременным условием является применение в качестве одного из ее компонентов комплемента. Комплемент-- это неспецифический фактор гуморального иммунитета, содержащийся в сыворотках крови теплокровных и холоднокровных животных. Наиболее изучен комплемент морской свинки. Поэтому при постановке РСК в качестве комплемента используют сыворотку крови морских свинок. 45.Нормальная микрофлора организма человека (определение), количественный и качественный состав микрофлоры различных биотопов организма. Микрофлора кишечника: количественный качественный состав в зависимости от возраста. Представители резидентной, факультативной и транзиторной микрофлоры кишечника, их краткая характеристика. Функции нормальной микрофлоры (защитная, метаболическая), привести примеры. Нормальная микрофлора человека – это совокупность множества микробиоценозов, характеризующихся определенными взаимосвязями и местом обитания. Дисбактериоз (дисбиоз) – это любые количественные или качественные изменения типичной для данного биотопа нормальной микрофлоры человека, возникающие в результате воздействия на макро– или микроорганизм различных неблагоприятных факторов. Микробиологическими показателями дисбиоза служат: 1) снижение численности одного или нескольких постоянных видов; 2) потеря бактериями тех или иных признаков или приобретение новых; 3) повышение численности транзиторных видов; 4) появление новых, несвойственных данному биотопу видов; 5) ослабление антагонистической активности нормальной микрофлоры. Причинами развития дисбактериоза могут быть: 1) антибиотико– и химиотерапия; 2) тяжелые инфекции; 3) тяжелые соматические заболевания; 4) гормонотерапия; 5) лучевые воздействия; 6) токсические факторы; 7) дефицит витаминов. Функции нормальной микрофлоры: 1) участвие во всех видах обмена; 2) детоксикация в отношении экзо– и эндопродуктов, трансформация и выделение лекарственных веществ; 3) участие в синтезе витаминов (группы В, Е, Н, К); 4) защита: а) антагонистическая (связана с продукцией бактериоцинов); б) колонизационная резистентность слизистых оболочек; 5) иммуногенная функция. Наибольшей обсемененностью характеризуются: 1) толстый кишечник; 2) ротовая полость; 3) мочевыделительная система; 3 4) верхние дыхательные пути; 5) кожа.   46.Дисбактериоз (дисбиоз): определение, причины развития. Классификация (клинико-лабораторные стадии) дисбактериоза. Принципы бактериологической диагностики дисбактериоза: этапы, применяемые питательные среды. Принципы лечения и профилактики дисбактериоза. Понятие о пробиотиках, примеры пробиотиков, их состав. Дисбактериоз – это количественные и качественные изменения в составе нормальной микрофлоры, которые характеризуются уменьшением или исчезновением нормальных обитателей и появлением конкурентных патогенных микроорганизмов (патогенных кокков, патогенных энтеробактерий, грибов, протея, кандид). Дисбактериоз может наступить под действием антибиотиков, антисептиков, хронических инфекционных заболеваний, радиоактивного облучения, лечения гормонами, иммунодепрессантами, после нахождения в экстремальных ситуациях (в космосе, подводных лодках), после стрессовых воздействий. При дисбактериозе нарушаются функции, присущие нормальной микрофлоре (т. е. антагонистическая, ферментативная и др.), в результате ухудшается колонизационная резистентность. Аномально размножившиеся организмы продуцируют токсические продукты метаболизма – индол, скатол, аммиак, сероводород. Это приводит к преобладанию гнилостных, бродильных процессов, возникают диарея, метеоризм, нарушается пристеночное пищеварение, появляются аллергические реакции, снижается сопротивляемость организма, стерильные полости заселяют микроорганизмы, создаются хорошие условия для развития и роста гриба Candida, возникает местный и генерализованный кандидомикоз. Принципы лечения и профилактики дисбактериоза включают отмену препаратов, вызывающих дисбактериоз; назначение витаминов, стимуляторов иммуногенеза, противоаллергических средств, ферментов, проводят назначение эубиотиков – бактерийных препаратов из живых бактерий симбиотической микрофлоры кишечника (бифидобактерии, молочнокислые бактерии, кишечная палочка). Колибактерин – содержит живые кишечные палочки штамма М-17, антагонистически активные из-за колицинов в отношении шигелл, энтеропатогенных кишечных палочек (ЭПКП), сальмонелл. Колибактерин применяют при нарушении аэробной микрофлоры кишечника, но при условии, если отсутствуют гемолитические формы этих бактерий. Бифидумбактерин – содержит живые бифидобактерии. При их применении создается кислая реакция в кишечнике, улучшается всасывание солей кальция, железа, витамина D. Бифидобактерин показан при отсутствии или уменьшении количественного содержания бифидобактерий. Назначают при нарушении аэробной и анаэробной микрофлоры. Бификол – сочетает в себе оба препарата (колибактерин и бифидумбактерин). В состав лактобактерина входят L. fermentum и L. plantarum. Оказывают антагонистическое действие на энтеропатогенные кишечные палочки, гемолитические стафилококки. Назначают при снижении количества лактобактерий. Фимелан – изготовлен из высокоадгезивных штаммов лактобактерий, назначают женщинам в последнем триместре беременности с целью коррекции вагинальной микрофлоры. Бактисубтил (флонивин) – содержит Bacillus subtilis, обладает противомикробными и ферментативными свойствами, тормозит рост патогенных микробов, вызывает деградацию токсинов, подавляет гнилостные процессы, т. к. препарат имеет активные ферментативные системы, с помощью которых разлагает белки, жиры, углеводы и др. органические вещества. Эубиотики не рекомендуется назначать при обнаружении в фекалиях грибов Candida, так как они могут спровоцировать усиленную пролиферацию этих микроорганизмов. Бактерийные препараты назначают через 5 дней после антибиотикотерапии для восстановления нормальной микрофлоры. Существует ряд принципов комбинированной коррекции микроэкологического дисбаланса кишечника: коррекция моторно-секреторной функции желудочно-кишечного тракта (ферментотерапия, витаминотерапия, антидиарейные средства, средства, стимулирующие регенерацию); энтеросорбция (смекта и др.); селективная деконтаминация патогенной и условно-патогенной микрофлоры кишечника (бактериофаги, фитонциды); коррекция нормальной микрофлоры кишечника с помощью эубиотиков Диагноз дисбактериоза устанавливают на основании многократного бактериологического исследования количественного и качественного состава микроорганизмов. Эти результаты сопоставляют с нормой при обязательном учете возраста. Предложен новый биохимический экспресс-метод диагностики дисбактериоза, который основан на электрофоретическом исследовании фекалий, позволяющий выявить низкомолекулярные продукты микробного происхождения. Выявление в пробах фекалий фруктозолизина свидетельствует о снижении колонизационной резистентности пищеварительного тракта – это ранний признак дисбактериоза. При тяжелой форме дисбактериоза отмечаются глубокие нарушения микробного биоценоза. Для изучения нормальной микрофлоры создана гнотобиология – наука о безмикробных или заселенных каким-либо определенным видом микроба животных. В стерильных боксах животных искусственно родоразрешают путем кесарева сечения, затем выращивают в стерильных условиях, обеспечивают стерильным воздухом, питанием и т. д. Оказалось, что у таких животных наблюдаются расширение слепой кишки; гипертрофия надпочечников; лейкопения; уменьшение усвоения железа; угнетение иммуногенеза; авитаминоз. Если гнотобионту ввести E. coli, бифидобактерии или других нормальных обитателей, то постепенно вышеперечисленные признаки исчезают. Гнотобионтов используют для изучения вопросов экологии, апробации препаратов для лечения дисбактериоза, новых лекарственных веществ, для изучения метаболизма. 47. Классификация антимикробных препаратов (по происхождению, химическому строению, механизму и спектру действия). По типу взаимодействия с микробной клеткой антимикробные препараты делятся на: бактерицидные – необратимо нарушают функции микробной клетки либо ее целостность, вызывая немедленную гибель микроорганизма, применяются при тяжелых инфекциях и у ослабленных больных, бактериостатические – обратимо блокируют репликацию или деление клетки, применяются при нетяжелых инфекциях у неослабленных больных. По спектру активности антимикробные препараты делятся на: антибактериальные, антигрибковые и антипротозойные. Кроме того, все антимикробные средства делят на препараты узкого и широкого спектра действия. К препаратам узкого спектра действия преимущественно на грамположительные микроорганизмы относятся, например, природные пенициллины, макролиды, линкомицин, фузидин, оксациллин, ванкомицин, цефалоспорины I поколения. К препаратам узкого спектра действия преимущественно на грамотрицательные палочки относятся полимиксины и монобактамы. К препаратам широкого спектра действия относятся тетрациклины, левомицетин, аминогликозиды, большинство полусинтетических пенициллинов, цефалоспорины начиная со 2 поколения, карбопенемы,фторхинолоны.  48. Механизмы действия антимикробных препаратов: подавление синтеза пептидогликана клеточной стенки, синтеза белка, нуклеиновых кислот, дезорганизация цитоплазматической мембраны. Понятие о бактерицидном (фунгицидном) и бактериостатическом (фунгиостатическом) действии антимикробных препаратов. Их побочное действие на макроорганизм: токсическое действие препарата, дисбиозы, аллергическое, иммунодепрессивное воздействие. Формирование антибиотико-резистентных форм микробов. Пути преодоления лекарственной устойчивости бактерий. Методы изучения антибиотикочувствительности бактерий (метод серийных разведений, дискодиффузионный метод, эллипс-тест). По механизму действия на микроорганизмы антибактериальные химиопрепараты делятся на: ингибирующие синтез клеточной стенки; вызывающие повреждение цитоплазматической мембраны; подавляющие белковый синтез; ингибирующие синтез нуклеиновых кислот. Антибиотики, ингибирующие синтез клеточной стенки. Пептидогликан — основа клеточной стенки бактерий — уникален и жизненно необходим для прокариот, он есть у большинства бактерий, за исключением не имеющих клеточной стенки. Синтез предшественников пептидогликана начинается в цитоплазме. Затем они транспортируются через ЦПМ, где происходит их объединение в гликопептидные цепи (эту стадию ингибируют гликопептиды). Образование полноценного пептидогликана происходит на внешней поверхности ЦПМ. Этот этап совершается при участии белков-ферментов, которые называют пенициллинсвязывающими белками, так как именно они служат мишенью для пенициллина и других бета-лактамных антибиотиков. Ингибирование пенициллинсвязывающих белков приводит к накоплению предшественников пептидогликана в бактериальной клетке. В результате ненормально большое количество этих предшественниковзапускает в бактериальной клетке систему их уничтожения — аутентические ферменты,которые в норме расщепляют пептидогликан при делении бактериальных клеток. В результате действия аутолитических ферментов и происходит лизис бактериальной клетки. Поскольку пептидогликана нет в стенках животных клеток, то эти антибиотики обладают очень низкой токсичностью для макроорганизма, и их можно применять в высоких дозах (мегатерапия). бета-лактамные антибиотики — пенициллины, цефалоспорины, монобактамы и карбопенемы гликопептиды — ванкомицин, клиндамицин Антибиотики, вызывающие повреждение цитоплазматической мембраны (блокирование фосфолипидных или белковых компонентов, нарушение проницаемости клеточных мембран, изменение мембранного потенциала и т. д.). ЦПМ есть у всех живых клеток, но у прокариот (бактерий) и эукариот ее структура различна. У грибов больше общего с клетками макроорганизма, хотя есть и различия. Поэтому противогрибковые препараты — антимикотики — более токсичны для организма человека, так что лишь немногие препараты из этой группы допустимо принимать внутрь. Число антибиотиков, специфическидействующих на мембраны бактерий, невелико. Наиболее известны полимиксины (полипептиды), к которым чувствительны только грамотрицательные бактерии. Они лизируют клетки, повреждая фосфолипиды клеточных мембран. Из-за токсичности они применялись лишь для лечения местных процессов и не вводились парентерально. В настоящее время на практике не используются. Противогрибковые препараты (антимикотики) повреждают эргостеролы (полиеновые антибиотики) и ингибируют один из ключевых ферментов биосинтеза эргостеролов (имидазолы). |