Главная страница

13 занятие. Занятие 13 Тема Микробиологическая диагностика острых респираторных вирусных инфекций (продолжение). Микробиологическая диагностика нейровирусных инфекций


Скачать 1.3 Mb.
НазваниеЗанятие 13 Тема Микробиологическая диагностика острых респираторных вирусных инфекций (продолжение). Микробиологическая диагностика нейровирусных инфекций
Дата17.05.2023
Размер1.3 Mb.
Формат файлаdocx
Имя файла13 занятие.docx
ТипЗанятие
#1137824

Занятие 13

Тема: Микробиологическая диагностика острых респираторных вирусных инфекций (продолжение). Микробиологическая диагностика нейровирусных инфекций.
Вопросы для устного опроса:

  1. Вирусы герпеса, ветряной оспы и опоясывающего лишая: их свойства, патогенез и профилактика вызываемых ими заболеваний.

  2. Семейство рабдовирусов: вирус бешенства, его свойства. Патогенез, профилактика и диагностика бешенства.

  3. Семейство флавивирусов: вирусы желтой лихорадки, клещевого и японского энцефалитов, омской геморрагической лихорадки (ОГЛ), их свойства, патогенез и профилактика вызываемых ими заболеваний.

  4. Семейство буньявирусов: вирусы крымской геморрагической лихорадки (КГЛ) и геморрагической лихорадки с почечным синдромом (ГЛПС), их свойства, патогенез и профилактика вызываемых ими заболеваний.

  5. Семейство аренавирусов: вирус лимфоцитарного хориоменингита (ЛХМ), свойства, патогенез и профилактика вызываемого им заболевания.



1. Вирусы герпеса, ветряной оспы и опоясывающего лишая: их свойства, патогенез и профилактика вызываемых ими заболеваний
Сем. Нerpesviridae

3 подсемейства:- Alphaherpesvirinae

- Betaherpesvirinae

- Gammaherpesvirinae

1) п/ сем. Alphaherpesvirinae

  • вирус простого герпеса - ВПГ тип 1 (Herpes simplex virus тип 1; HSV-1), или герпесвирус человека ГВЧ-1

Оральный герпес, энцефалит

  • вирус простого герпеса - ВПГ тип 2 (Herpes simplex virus тип 2; HSV-2), или герпесвирус человека - ГВЧ-2

Генитальный герпес, карцинома шейки матки, менингоэнцефалит,

  • вирус ветряной оспы-опоясывающего лишая (Varicella-zoster virus; VZV), герпесвирус человека - ГВЧ-3

Ветрянная оспа, опоясывающий лишай (герпес)
2) п/сем. Betaherpesvirinae

  • Цитомегаловирус   (Cytomegalovirus) - ГВЧ-5 =Цитомегалия, рак предстательной железы

  • Herpes lymphotropic virus - ГВЧ-6 = Экзантема младенцов (до 2 лет), синдром хронической усталости

  • Герпесвирус человека – 7 = ГВЧ-7


3) п/сем. Gammaherpesvirinae

  • вирус Эпштейна-Барр - ВЭБ - (Epstein-Barr virus; EBV), или герпесвирус человека -ГВЧ-4 = Инфекционный   мононуклеоз, лимфомаБеркитта, назофарингеальная карцинома


Структура герпесвируса

  • Герпесвирусы имеют овальную форму.

  • Геном - двухнитевая линейная ДНК,

  • Капсид – икосаэдрический, состоящий из162 капсомеров.

  • Снаружи - оболочка с гликопротеиновыми шипами, сформированными из внутреннего слоя ядерной мембраны.

  • Пространство между капсидом и оболочкой называется тегумент (содержит вирусные белки и ферменты, необходимые для инициации репликации).

Схема строения герпесвируса


Вирус простого герпеса

  • Род Simplexvirus.

  • Вызывает простой герпес (herpes simplex), характеризующийся:

  • везикулезными высыпаниями на коже, слизистых оболочках,

  • поражением центральной нервной системы и внутренних органов,

  • пожизненным носительством (персистенцией) и рецидивами болезни,

  • существует в организме в латентной форме до момента реактивации.

  • Вирус простого герпеса включает два типа:

- ВПГ-1 поражает область рта, глаз, ЦНС,

- ВПГ-2 — гениталии.


Микробиологическая диагностика простого герпеса

Исследуют содержимое герпетических везикул, слюну, соскобы с роговой оболочки глаз, кровь, сперму, мочу, цереброспинальную жидкость и мозг при летальном исходе.

  • 1. В мазках, окрашенных по Романовскому—Гимзе, наблюдают синцитий — гигантские многоядерные клетки с увеличенной цитоплазмой и внутриядерными включениями Каудри.

  • 2. Заражают культуру клеток HeLa, Нер-2, человеческих эмбриональных фибробластов. Проводят внутри- мозговое заражение куриных эмбрионов или мышей-сосунков, у которых развивается энцефалит.

Идентификация вируса: РИФ и ИФА с использованием моноклональных антител; ПЦР.


Химиотерапия инфекций, вызываемых ВПГ

  • а циклавир (зовиракс) токсичны

  • ф амциклавир

  • другие модифицированные нуклеозиды вырабатывается устойчиыость

  • интерферон

  • индукторы интерферона


Специфическая профилактика рецидивирующего герпеса

С пецифическая профилактика рецидивирующего герпеса осуществляется в период ремиссии многократным введением инактивированной культуральной герпетической вакцины
снижение частоты возникновения рецидивов
Вирус ветряной оспы и опоясывающего герпеса (Varicella-zoster virus; VZV)

  • Род Varicellovirus;

  • имеет самый малый геном среди герпесвирусов.

вызывает две болезни: ветряную оспу и опоясывающий герпес (лишай).

  • Ветряная оспа (varicella) встречается главным образом у детей, протекает с лихорадкой, интоксикацией, сыпью в виде везикул с прозрачным содержимым. Вирус передается воздушно-капельным путем.

  • Опоясывающий герпес (herpes zoster), или опоясывающий лишай, — эндогенная инфекция взрослых, перенесших в детстве ветряную оспу. Болезнь сопровождается везикулезной сыпью по ходу нервов, лихорадкой и неврологическими нарушениями, болезнь развивается в результате реактивации вируса, персистирующего в организме, т. е. вируса, сохранившегося после перенесенной в детстве ветряной оспы.


Ветряная оспа: иммунитет

- пожизненный

- не предотвращает развития опоясывающего герпеса

- сопровождается увеличением супрессорной активности (во время заболевания) транзиторный иммунодефицит

Патогенез опоясывающего герпеса

1) ветряная оспа

2) персистенция вируса в ганглиях задних корешков спинного мозга

3) активация

4) везикулёзные высыпания по ходу межрёберных нервов
Микробиологическая диагностика ветряной оспы и опоясывающего герпеса

  • Исследуют содержимое высыпаний, отделяемое носоглотки и кровь.

  • Вирус выявляют в мазках-отпечатках, окрашенных по Романовскому—Гимзе, по образованию синцития и внутриядерных включений.

  • Вирус растет (после длительного инкубационного периода) в человеческих диплоидных фибробластах.

  • Идентифицируется вирус в РИФ, РСК, ИФА и реакции нейтрализации.

При серодиагностике применяют ИФА, РСК и реакцию нейтрализации

Специфическая профилактика ветряной оспы и опоясывающего герпеса

  • Разработана живая вакцина для VZV, но не применяется, т.к. может вызвать в дальнейшем нарушения иммунного статуса.

В очагах ветряной оспы ослабленным детям можно вводить препараты иммуноглобулина


2. Семейство рабдовирусов: вирус бешенства, его свойства. Патогенез, профилактика и диагностика бешенства.

Семейство: Rhabdoviridae

    • Vesiculovirus (вирус везикулярного стоматита – арбовирус)

    • Lyssavirus (вирус бешенства)


Рабдовирусы: структура

  • Вирусы имеют форму цилиндра с полукруглым и плоским концами, отсюда и их название — Rhabdoviridae (греч. rhabdos — прут, палка).

  • Пулевидная форма характерна для вирусов, поражающих позвоночных, а бациллярная, с округленными концами — для вирусов везикулярного стоматита.

  • Вирион рабдовирусов состоит из оболочки и рибонуклеопротеина (нуклеокапсида) спиральной симметрии, содержит транскриптазу.

Геном — однонитевая нефрагментированная линейная минус-РНК




Культивирование

Культивируют в мозговой ткани белых мышей, сирийских хомячков, кроликов, крыс и тд. Развивается паралич с дальнейшей смертью.
Вирус бешенства

  • Вызывает бешенство (rhabies, синонимы — водобоязнь, гидрофобия), развивающееся после укуса или ослюнения раны инфицированным животным.

  • Поражается ЦНС с развитием симптомов возбуждения, параличом дыхательной и глотательной мускулатуры; заканчивается летально.

  • Различают два вируса бешенства:

  • дикий (уличный) вирус, циркулирующий среди животных, патогенный для человека;

  • фиксированный (virus fixe), полученный Л. Пастером в качестве антирабической вакцины многократным пассированием дикого вируса через мозг кроликов, утративший патогенность для человека, не образующий включений, не выделяющийся со слюной.

  • Оба вируса идентичны по антигенам.


Вирус-фикс (virus fixe)

  • Пастер (+ Ру и Шамберлан)

  • пассирование в мозге кролика до одинакового («фиксированного») инкубационного периода

  • мозг кролика, высушенный в парах КОН = вакцина Пастера (первое применение – 1885 г.)

  • идентичен по антигенному составу «уличному вирусу»


Свойства вируса бешенства

  • мало устойчив во внешней среде

  • репродуцируется в цитоплазме (включения Бабеша-Негри)


Бешенство: патогенез

1) укус или ослюнение

2) первичная репликация

  • мышечная ткань

  • соединительная ткань

3)миграция по аксонам периферических нервов

4) базальные ганглии и ЦНС

5) репликация в сером веществе с дегенеративным поражением нейронов

6) миграция по центробежным нейронам в различные ткани (в т.ч. слюнные железы)
Бешенство: периоды болезни

  1. инкубационный (от 7 дней до года)

  2. продромальный (1 – 3 дня)

  3. период возбуждения (2 – 3 дня, редко – до 6 дней)

  4. паралитический период

Общая продолжительность болезни 5 - 14 дней


Современные препараты для профилактики бешенства

  1. Антирабические вакцины

    • вирус выращен в мозговой ткани животных

      • аттенуированные

        • Ферми

        • Хемпта

      • инактивированные

        • Семпла

        • Хемпта-Николича

    • вирус выращен на культурах клеток

      • Внуково-32

      • на линии клеток W1-38

  2. Антирабический гаммаглобулин

    • удлиняет инкубационный период (повышает эффективность вакцинации)

    • снижает вероятность развития поствакцинальных осложнений


3. Семейство флавивирусов: вирусы желтой лихорадки, клещевого и японского энцефалитов, омской геморрагической лихорадки (ОГЛ), их свойства, патогенез и профилактика вызываемых ими заболеваний

Строение

• Флавивирусы имеют сферическую форму.

Диаметр - 40-60нм

• Вирион состоит из оболочки, капсида и генома — однонитевой линейной плюс-РНК.

• Шипы оболочки состоят из двух белков, изних (Е1) является гемагглютинином.

Нуклеокапсид окружен суперкапсидом


Репродукция

Проникают путем рецепторного эндоцитоза

• происходит в цитоплазме

• свыше 20 часов

• отпочковывание от мембран эндоплазматического ретикулума (выход из клетки – путём экзоцитоза) – клетка долго остаётся жизнеспособной
Культивирование

1.куриный эмбрион

2.культура клеток (симпласты)
Эпидемиология

Вызывают природно очаговые заболевания

Механизм передачи - трансмиссивный

Резервуар и источник - кровососущие членистоногие

Человек - «тупиковое звено»( кроме лихорадки денге и желтой лихорадки городского типа)
Патогенез

1) укус

2) Кровь

3) Лихорадка с сыпью или без. Поражение печени. Геморрагический синдром. Развитие энцефалитов
Микробиологическая диагностика

1. Диагностика основана на выделении вирусов путем интрацеребрального заражения мышей, культур клеток, куриных эмбрионов.

Материал - кровь, смж, внутренние органы погибших животных

2. Обнаружение АТ в сыворотках с помощью РТГА, РСК, ИФА, РИА,

3. Экспресс-диагностика

4. ПЦР
Лечение и профилактика

Противовирусные препараты - рибвирин, интерферон, реаферон, биназу
Для профилактики применяют гетерогенные и гомологичные IG

Вакцинопрофилактика
I. Жёлтая лихорадка

• особо опасная карантинная инфекция,

• один серотип вируса,

• поражается:

– печень (основное место репродукции) - желтуха

– почки - жировое перерождение

– миокард - дегенеративные изменения

• Механизм заражения – трансмиссивный,

• типы:

– джунглевая (лесная) – комарами от обезьян

– городская (классическая) – комарами от людей
Патогенез желтой лихорадки

• Размножается в регионарных лимфатических узлах → кровь → вирусемия → печень, почки, селезенка, головной мозг → дистрофия и некроз гепатоцитов

• Поражается клубочковый и канальцевый аппараты почек
Микробиологическая диагностика

Выделение вируса из крови (не позднее 3-4 дня болезни )

Определение нарастания титра в сыворотках с помощью РТГА,РСКА и ИФА

Экспресс-диагностика
Лечение и профилактика

Лечение не разработана. Для профилактики можно использовать вакцину.
II. Флавивирусные инфекции умеренного пояса = группа клещевого энцефалита

клещевой энцефалит

• японский (русский, осенний) энцефалит

• омская геморрагическая лихорадка
Возбудитель

• изменчив (антигенные и биологические свойства)

• нейротропность

• устойчив в кислой среде
Антигенные варианты вируса

1) передаётся клещами Ixodes perculcatus (таежный) → тяжёлая форма инфекции на Дальнем Востоке

2) передаётся клещами Ixodes ricinus (лесной)→ более лёгкая форма инфекции

У клещей происходит трансовариальная и трансфазовая передача вируса
Прокормители клещей:

• Грызуны,

• Птицы,

• Дикие и домашние животные.

Природно-очаговое заболевание.
Патогенез

• Трансмиссивно (укус клеща)

•Алиментарно (сырое коровье и козье молоко) => кровь => первичная репликация (лимфоциты гепатоциты клетки селезёнки эндотелий сосудов) => генерализация (гематогенная лимфогенная) => вторичная репликация (двигательные нейроны передних рогов шейного сегмента спинного мозга, мозжечок, мягкая оболочка головного мозга)
Клинические формы

1.лихорадочная

2.менингеальная

3.очаговая (наиболее тяжёлая: – параличи шеи и верхних конечностей)
Иммунитет

• напряжённый

Динамика появления антител:

• через неделю после заражения – антигемагглютинины (РТГА)

• через 2 недели после заражения – комплементсвязывающие (РСК)

• через месяц после заражения – вирус нейтрализующие (РН)
Микробиологическая диагностика

1.Экспресс-диагностика –Ag в крови (РНГА, ИФА) / –геном вируса в крови (ПЦР)

2.Вирусологический метод

кровь, ликвор => интрацеребральное заражения мышей-сосунков => 3 – 4 пассажа => Ag в мозговой ткани ( –РНГА –РСК –РН (наиболее специфичная реакция)

3.Серологический метод –парные сыворотки (в зависимости от динамики появления антител)

Профилактика:

1.Вакцина:

- культуральная инактивированная формалином,

-FISME immun-inject – культуральная очищенная концентрированная, Австрия,

-Энцепур-К - очищенная концентрированная инактивированная, ФРГ

2. Специфический иммуноглобулин

–Донорский (из плазм доноров, проживающих на территории природных очагов),

–Гетерологичный лошадиный
III.Вирус японского энцефалита

• РНК-содержащий вирус рода Flavivirus семейства Flaviviridae,

• Обладает нейротропностью, размножается в нейронах ЦНС (вызывая их гибель)
Японский энцефалит

• полиморфное заболевание – от бессимптомного до тяжелейшего: лихорадки, интоксикации, менинго- энцефалита

• передаётся комарами (от человека – лишь при массовых эпидемиях)

• Природный резервуар и источник = комары, птицы, дикие млекопитающие, свиньи
Для профилактики:

– культуральная инактивированная сорбированная вакцина из штамма Пекин-1,

- Живая аттенуированная вакцина из дикого штамма SA14
Лечение – в первые дни сыворотка переболевших или гетерологичный иммуноглобулин
IV. Вирус омской геморрагической лихорадки (ОГЛ)

• По антигенным свойствам близок вирусу клещевого энцефалита,

• Отличие – не проявляет нейротропных свойств,

• Размножается в культуре клеток без ЦПД, исключение клетки эмбриона свиньи (разрушение монослоя)
Эпидемиология

• Природно-очаговое заболевание,

• Встречается на территории Западной Сибири,

• Характерна сезонность:

- весенне-осенняя лихорадка связана с движением клещей,

- осенне-зимний период – отлов ондатр,

• Природный хозяин и переносчик –клещ (норовый болотный и пастбищный),

• Естественный резервуар птицы, грызуны, особенно ондатра,

• Человек – тупиковое звено.

Пути передачи:

• Укус клеща,

• Снятие шкурок,

• Через инфицированную вирусом воду.
Патогенез

Поражение эндотелия кровеносных капилляров, нервной системы и надпочечников. лихорадка, интоксикация, геморрагический синдром, менингоэнцефалит
Диагностика

Выделение вируса из крови больных путем внутримозгового заражения белых мышей или культуры клеток эмбриона свиньи с последующей идентификацией в серологических реакциях, а также на обнаружении антител в парных сыворотках с помощью РПГА, РСК и ИФА
Лечение

Специфический гетерологический IG

Профилактика - вакцина
4. Семейство буньявирусов: вирусы крымской геморрагической лихорадки (КГЛ) и геморрагической лихорадки с почечным синдромом (ГЛПС), их свойства, патогенез и профилактика вызываемых ими заболеваний.

Буньявирусы: классификация

Bunyaviridae

  1. Bunyavirus – комариные энцефалиты

  2. Phlebovirus – москитные лихорадки

  3. Nairovirus (Nairobivirus) – вирус крымской геморрагической лихорадки (иксодовые клещи)

  4. Hantavirus – вирус ГЛПС (робовирус)


Структура

  • Вирион буньявирусов — сферический,

  • окружен оболочкой с двумя гликопротеинами (G1, G2);

  • включает три уникальные кольцевые минус однонитевые РНК, связанные с N-белком (нуклеокапсиды).

  • Симметрия капсида спиральная.

  • Нуклеокапсиды включают большую (L), среднюю (М) и малую (S) нити РНК, связанные с РНК-зависимой РНК-пол имеразой (L-белок), и два неструктурных белка (NSs, NSm).

В отличии от других однонитевых минус-РНК-вых вирусов, буньявирусы не имеют матриксного белка.


Свойства:

  • репродукция в цитоплазме (отпочковывание через аппарат Гольджи, выход путём экзоцитоза или при лизисе клетки-хозяина)



I. Крымская геморрагическая лихорадка (КГЛ): патогенез



Профилактика и лечение:

Инактивированная мозговая вакцина. Для лечения используют рибовирин, интерферон, специфический иммуноглобулин.
II. Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом (ГЛПС):

  • резервуар инфекции – мышевидные грызуны

  • инфицирование: контакт (кожи и слизистых) с их экскрементами

  • основное место репродукции вируса – эндотелий сосудов (преимущественно – мозгового слоя почек)

  • большинство больных выздоравливает, но при геморрагическом нефрозонефрите смертность (в среднем 5-10%) может достигать 44%


Профилактика:

Неспецифическая: предупреждение или прекращение контакта с грызунами; учет и контроль за численностью грызунов, выявление среди них циркуляции возбудителя и дератизационные мероприятия; соблюдение мер предосторожности при сельскохозяйственных работах и при нахождении на территории природных очагов (гигиенические мероприятия, ватно-марлевые маски, своевременная уборка соломы и т.д.); целенаправленное санитарное просвещение населения.
Микробиологическая диагностика

  • Вирусы культивируют путем внутримозгового заражения новорожденных белых мышей, крыс и хомячков.

  • Для определения антигенов вирусов или антител в крови применяют РСК, РТГА, РН, ИФА, РИА. Маркерные гены определяют в ПЦР.


5. Семейство аренавирусов: вирус лимфоцитарного хориоменингита (ЛХМ), свойства, патогенез и профилактика вызываемого им заболевания.

электронно-плотные гранулы (рибосомальные агрегаты клетки-хозяина)

- 5 фрагментов РНК (2 – вирусоспецифические)

- 2 антигенные группы (РСК, внутри – РН)

    1. Старого Света

      • вирус лимфоцитарного хориоменингита

      • вирус Ласса




    1. Нового Света

      • вирус Хунин

      • вирус Мачупо

  • робовирусы

вызывают (кроме ВЛХ) тяжелейшие заболевания со смертностью до 70%

Структура

  • Вирион, имеет сферическую или овальную форму.

  • Снаружи окружен оболочкой с булавовидными гликопротеиновыми шипами GР1 и GP2.

  • Под оболочкой расположены 12-15 клеточных рибосом, похожих на песчинки, что отражено в названии семейства.

  • Капсид — спиральный.

  • Геном представлен 2 сегментами (L, S) однонитевой минус-РНК;

  • кодирует 5 белков, в частности, L-, Z-, N-, G-белки.

  • Вирион содержит транскриптазу (L-белок, РНК-полимераза).



Репродукция

— в цитоплазме;

  • после сборки и включения в вирион рибосомоподобных частиц происходит его почкование через плазматическую мембрану клетки.


Микробиологическая диагностика

  • 1) Вирусологический метод: вирус выделяют из крови, отделяемого глотки, из плевральной, цереброспинальной жидкости, мочи при заражении культуры клеток или мышей-сосунков, хомячков. Вирусы идентифицируют в РСК, РН, РИФ, ИФА; применяют ПЦР.

  • 2) Серологический метод: антитела в сыворотке крови выявляют в РСК, РИФ, ИФА.


Специфическая профилактика

  • Для специфической профилактики разрабатываются живые вакцины.

Вирус лимфоцитарного хориоменингита (ЛХМ)

  • вызывает лимфоцитарный хориоменингит, протекающий в виде гриппоподобного заболевания или тяжелых форм в виде серозного менингита или менингоэнцефалита с лейко- и тром- боцитоленией.

  • ЛХМ распространяется с выделениями домашних мышей, загрязняющих продукты питания, воду и воздух.


написать администратору сайта