13 занятие. Занятие 13 Тема Микробиологическая диагностика острых респираторных вирусных инфекций (продолжение). Микробиологическая диагностика нейровирусных инфекций

• Название: Занятие 13 Тема Микробиологическая диагностика острых респираторных вирусных инфекций (продолжение). Микробиологическая диагностика нейровирусных инфекций
• Дата: 17.05.2023
• Размер: 1.3 Mb.
• Имя файла: 13 занятие.docx
• Тип: Занятие; #1137824

Занятие 13

Тема: Микробиологическая диагностика острых респираторных вирусных инфекций (продолжение). Микробиологическая диагностика нейровирусных инфекций.
Вопросы для устного опроса:

1. 
   Вирусы герпеса, ветряной оспы и опоясывающего лишая: их свойства, патогенез и профилактика вызываемых ими заболеваний.
   
2. 
   Семейство рабдовирусов: вирус бешенства, его свойства. Патогенез, профилактика и диагностика бешенства.
   
3. 
   Семейство флавивирусов: вирусы желтой лихорадки, клещевого и японского энцефалитов, омской геморрагической лихорадки (ОГЛ), их свойства, патогенез и профилактика вызываемых ими заболеваний.
   
4. 
   Семейство буньявирусов: вирусы крымской геморрагической лихорадки (КГЛ) и геморрагической лихорадки с почечным синдромом (ГЛПС), их свойства, патогенез и профилактика вызываемых ими заболеваний.
   
5. 
   Семейство аренавирусов: вирус лимфоцитарного хориоменингита (ЛХМ), свойства, патогенез и профилактика вызываемого им заболевания.
   

1. Вирусы герпеса, ветряной оспы и опоясывающего лишая: их свойства, патогенез и профилактика вызываемых ими заболеваний
Сем. Нerpesviridae

3 подсемейства:- Alphaherpesvirinae

- Betaherpesvirinae

- Gammaherpesvirinae

1) п/ сем. Alphaherpesvirinae

• 
  вирус простого герпеса - ВПГ тип 1 (Herpes simplex virus тип 1; HSV-1), или герпесвирус человека ГВЧ-1 →
  

Оральный герпес, энцефалит

• 
  вирус простого герпеса - ВПГ тип 2 (Herpes simplex virus тип 2; HSV-2), или герпесвирус человека - ГВЧ-2 →
  

Генитальный герпес, карцинома шейки матки, менингоэнцефалит,

• 
  вирус ветряной оспы-опоясывающего лишая (Varicella-zoster virus; VZV), герпесвирус человека - ГВЧ-3 →
  

Ветрянная оспа, опоясывающий лишай (герпес)
2) п/сем. Betaherpesvirinae

• 
  Цитомегаловирус   (Cytomegalovirus) - ГВЧ-5 =Цитомегалия, рак предстательной железы
  
• 
  Herpes lymphotropic virus - ГВЧ-6 = Экзантема младенцов (до 2 лет), синдром хронической усталости
  
• 
  Герпесвирус человека – 7 = ГВЧ-7
  

3) п/сем. Gammaherpesvirinae

• 
  вирус Эпштейна-Барр - ВЭБ - (Epstein-Barr virus; EBV), или герпесвирус человека -ГВЧ-4 = Инфекционный   мононуклеоз, лимфомаБеркитта, назофарингеальная карцинома
  

Структура герпесвируса

• 
  Герпесвирусы имеют овальную форму.
  
• 
  Геном - двухнитевая линейная ДНК,
  
• 
  Капсид – икосаэдрический, состоящий из162 капсомеров.
  
• 
  Снаружи - оболочка с гликопротеиновыми шипами, сформированными из внутреннего слоя ядерной мембраны.
  
• 
  Пространство между капсидом и оболочкой называется тегумент (содержит вирусные белки и ферменты, необходимые для инициации репликации).
  

Схема строения герпесвируса


Вирус простого герпеса

• 
  Род Simplexvirus.
  
• 
  Вызывает простой герпес (herpes simplex), характеризующийся:
  
• 
  везикулезными высыпаниями на коже, слизистых оболочках,
  
• 
  поражением центральной нервной системы и внутренних органов,
  
• 
  пожизненным носительством (персистенцией) и рецидивами болезни,
  
• 
  существует в организме в латентной форме до момента реактивации.
  
• 
  Вирус простого герпеса включает два типа:
  

- ВПГ-1 поражает область рта, глаз, ЦНС,

- ВПГ-2 — гениталии.


Микробиологическая диагностика простого герпеса

Исследуют содержимое герпетических везикул, слюну, соскобы с роговой оболочки глаз, кровь, сперму, мочу, цереброспинальную жидкость и мозг при летальном исходе.

• 
  1. В мазках, окрашенных по Романовскому—Гимзе, наблюдают синцитий — гигантские многоядерные клетки с увеличенной цитоплазмой и внутриядерными включениями Каудри.
  
• 
  2. Заражают культуру клеток HeLa, Нер-2, человеческих эмбриональных фибробластов. Проводят внутри- мозговое заражение куриных эмбрионов или мышей-сосунков, у которых развивается энцефалит.
  

Идентификация вируса: РИФ и ИФА с использованием моноклональных антител; ПЦР.

• 
  3.Серодиагностику проводят с помощью РСК, РИФ, ИФА и РН по нарастанию титра антител (IgM.IgG).
  

Химиотерапия инфекций, вызываемых ВПГ

• 
  а циклавир (зовиракс) токсичны
  
• 
  ф амциклавир
  
• 
  другие модифицированные нуклеозиды вырабатывается устойчиыость
  
• 
  интерферон
  
• 
  индукторы интерферона
  

Специфическая профилактика рецидивирующего герпеса

С пецифическая профилактика рецидивирующего герпеса осуществляется в период ремиссии многократным введением инактивированной культуральной герпетической вакцины
снижение частоты возникновения рецидивов
Вирус ветряной оспы и опоясывающего герпеса (Varicella-zoster virus; VZV)

• 
  Род Varicellovirus;
  
• 
  имеет самый малый геном среди герпесвирусов.
  

вызывает две болезни: ветряную оспу и опоясывающий герпес (лишай).

• 
  Ветряная оспа (varicella) встречается главным образом у детей, протекает с лихорадкой, интоксикацией, сыпью в виде везикул с прозрачным содержимым. Вирус передается воздушно-капельным путем.
  
• 
  Опоясывающий герпес (herpes zoster), или опоясывающий лишай, — эндогенная инфекция взрослых, перенесших в детстве ветряную оспу. Болезнь сопровождается везикулезной сыпью по ходу нервов, лихорадкой и неврологическими нарушениями, болезнь развивается в результате реактивации вируса, персистирующего в организме, т. е. вируса, сохранившегося после перенесенной в детстве ветряной оспы.
  

Ветряная оспа: иммунитет

- пожизненный

- не предотвращает развития опоясывающего герпеса

- сопровождается увеличением супрессорной активности (во время заболевания) ⇒ транзиторный иммунодефицит

Патогенез опоясывающего герпеса

1) ветряная оспа

2) персистенция вируса в ганглиях задних корешков спинного мозга

3) активация

4) везикулёзные высыпания по ходу межрёберных нервов
Микробиологическая диагностика ветряной оспы и опоясывающего герпеса

• 
  Исследуют содержимое высыпаний, отделяемое носоглотки и кровь.
  
• 
  Вирус выявляют в мазках-отпечатках, окрашенных по Романовскому—Гимзе, по образованию синцития и внутриядерных включений.
  
• 
  Вирус растет (после длительного инкубационного периода) в человеческих диплоидных фибробластах.
  
• 
  Идентифицируется вирус в РИФ, РСК, ИФА и реакции нейтрализации.
  

При серодиагностике применяют ИФА, РСК и реакцию нейтрализации

Специфическая профилактика ветряной оспы и опоясывающего герпеса

• 
  Разработана живая вакцина для VZV, но не применяется, т.к. может вызвать в дальнейшем нарушения иммунного статуса.
  

В очагах ветряной оспы ослабленным детям можно вводить препараты иммуноглобулина


2. Семейство рабдовирусов: вирус бешенства, его свойства. Патогенез, профилактика и диагностика бешенства.

Семейство: Rhabdoviridae

• 
  Vesiculovirus (вирус везикулярного стоматита – арбовирус)
  
• 
  Lyssavirus (вирус бешенства)
  

Рабдовирусы: структура

• 
  Вирусы имеют форму цилиндра с полукруглым и плоским концами, отсюда и их название — Rhabdoviridae (греч. rhabdos — прут, палка).
  
• 
  Пулевидная форма характерна для вирусов, поражающих позвоночных, а бациллярная, с округленными концами — для вирусов везикулярного стоматита.
  
• 
  Вирион рабдовирусов состоит из оболочки и рибонуклеопротеина (нуклеокапсида) спиральной симметрии, содержит транскриптазу.
  

Геном — однонитевая нефрагментированная линейная минус-РНК




Культивирование

Культивируют в мозговой ткани белых мышей, сирийских хомячков, кроликов, крыс и тд. Развивается паралич с дальнейшей смертью.
Вирус бешенства

• 
  Вызывает бешенство (rhabies, синонимы — водобоязнь, гидрофобия), развивающееся после укуса или ослюнения раны инфицированным животным.
  
• 
  Поражается ЦНС с развитием симптомов возбуждения, параличом дыхательной и глотательной мускулатуры; заканчивается летально.
  

• 
  Различают два вируса бешенства:
  

• 
  дикий (уличный) вирус, циркулирующий среди животных, патогенный для человека;
  
• 
  фиксированный (virus fixe), полученный Л. Пастером в качестве антирабической вакцины многократным пассированием дикого вируса через мозг кроликов, утративший патогенность для человека, не образующий включений, не выделяющийся со слюной.
  
• 
  Оба вируса идентичны по антигенам.
  

Вирус-фикс (virus fixe)

• 
  Пастер (+ Ру и Шамберлан)
  
• 
  пассирование в мозге кролика до одинакового («фиксированного») инкубационного периода
  
• 
  мозг кролика, высушенный в парах КОН = вакцина Пастера (первое применение – 1885 г.)
  
• 
  идентичен по антигенному составу «уличному вирусу»
  

Свойства вируса бешенства

• 
  мало устойчив во внешней среде
  
• 
  репродуцируется в цитоплазме (включения Бабеша-Негри)
  

Бешенство: патогенез

1) укус или ослюнение

2) первичная репликация

• 
  мышечная ткань
  
• 
  соединительная ткань
  

3)миграция по аксонам периферических нервов

4) базальные ганглии и ЦНС

5) репликация в сером веществе с дегенеративным поражением нейронов

6) миграция по центробежным нейронам в различные ткани (в т.ч. слюнные железы)
Бешенство: периоды болезни

1. 
   инкубационный (от 7 дней до года)
   
2. 
   продромальный (1 – 3 дня)
   
3. 
   период возбуждения (2 – 3 дня, редко – до 6 дней)
   
4. 
   паралитический период
   

Общая продолжительность болезни 5 - 14 дней


Современные препараты для профилактики бешенства

1. 
   Антирабические вакцины
   
   • 
     вирус выращен в мозговой ткани животных
     
     • 
       аттенуированные
       
       • 
         Ферми
         
       • 
         Хемпта
         
     • 
       инактивированные
       
       • 
         Семпла
         
       • 
         Хемпта-Николича
         
   • 
     вирус выращен на культурах клеток
     
     • 
       Внуково-32
       
     • 
       на линии клеток W1-38
       
2. 
   Антирабический гаммаглобулин
   
   • 
     удлиняет инкубационный период (повышает эффективность вакцинации)
     
   • 
     снижает вероятность развития поствакцинальных осложнений
     

3. Семейство флавивирусов: вирусы желтой лихорадки, клещевого и японского энцефалитов, омской геморрагической лихорадки (ОГЛ), их свойства, патогенез и профилактика вызываемых ими заболеваний

Строение

• Флавивирусы имеют сферическую форму.

Диаметр - 40-60нм

• Вирион состоит из оболочки, капсида и генома — однонитевой линейной плюс-РНК.

• Шипы оболочки состоят из двух белков, изних (Е1) является гемагглютинином.

Нуклеокапсид окружен суперкапсидом


Репродукция

Проникают путем рецепторного эндоцитоза

• происходит в цитоплазме

• свыше 20 часов

• отпочковывание от мембран эндоплазматического ретикулума (выход из клетки – путём экзоцитоза) – клетка долго остаётся жизнеспособной
Культивирование

1.куриный эмбрион

2.культура клеток (симпласты)
Эпидемиология

Вызывают природно очаговые заболевания

Механизм передачи - трансмиссивный

Резервуар и источник - кровососущие членистоногие

Человек - «тупиковое звено»( кроме лихорадки денге и желтой лихорадки городского типа)
Патогенез

1) укус

2) Кровь

3) Лихорадка с сыпью или без. Поражение печени. Геморрагический синдром. Развитие энцефалитов
Микробиологическая диагностика

1. Диагностика основана на выделении вирусов путем интрацеребрального заражения мышей, культур клеток, куриных эмбрионов.

Материал - кровь, смж, внутренние органы погибших животных

2. Обнаружение АТ в сыворотках с помощью РТГА, РСК, ИФА, РИА,

3. Экспресс-диагностика

4. ПЦР
Лечение и профилактика

Противовирусные препараты - рибвирин, интерферон, реаферон, биназу
Для профилактики применяют гетерогенные и гомологичные IG

Вакцинопрофилактика
I. Жёлтая лихорадка

• особо опасная карантинная инфекция,

• один серотип вируса,

• поражается:

– печень (основное место репродукции) - желтуха

– почки - жировое перерождение

– миокард - дегенеративные изменения

• Механизм заражения – трансмиссивный,

• типы:

– джунглевая (лесная) – комарами от обезьян

– городская (классическая) – комарами от людей
Патогенез желтой лихорадки

• Размножается в регионарных лимфатических узлах → кровь → вирусемия → печень, почки, селезенка, головной мозг → дистрофия и некроз гепатоцитов

• Поражается клубочковый и канальцевый аппараты почек
Микробиологическая диагностика

Выделение вируса из крови (не позднее 3-4 дня болезни )

Определение нарастания титра в сыворотках с помощью РТГА,РСКА и ИФА

Экспресс-диагностика
Лечение и профилактика

Лечение не разработана. Для профилактики можно использовать вакцину.
II. Флавивирусные инфекции умеренного пояса = группа клещевого энцефалита

• клещевой энцефалит

• японский (русский, осенний) энцефалит

• омская геморрагическая лихорадка
Возбудитель

• изменчив (антигенные и биологические свойства)

• нейротропность

• устойчив в кислой среде
Антигенные варианты вируса

1) передаётся клещами Ixodes perculcatus (таежный) → тяжёлая форма инфекции на Дальнем Востоке

2) передаётся клещами Ixodes ricinus (лесной)→ более лёгкая форма инфекции

У клещей происходит трансовариальная и трансфазовая передача вируса
Прокормители клещей:

• Грызуны,

• Птицы,

• Дикие и домашние животные.

Природно-очаговое заболевание.
Патогенез

• Трансмиссивно (укус клеща)

•Алиментарно (сырое коровье и козье молоко) => кровь => первичная репликация (лимфоциты гепатоциты клетки селезёнки эндотелий сосудов) => генерализация (гематогенная лимфогенная) => вторичная репликация (двигательные нейроны передних рогов шейного сегмента спинного мозга, мозжечок, мягкая оболочка головного мозга)
Клинические формы

1.лихорадочная

2.менингеальная

3.очаговая (наиболее тяжёлая: – параличи шеи и верхних конечностей)
Иммунитет

• напряжённый

Динамика появления антител:

• через неделю после заражения – антигемагглютинины (РТГА)

• через 2 недели после заражения – комплементсвязывающие (РСК)

• через месяц после заражения – вирус нейтрализующие (РН)
Микробиологическая диагностика

1.Экспресс-диагностика –Ag в крови (РНГА, ИФА) / –геном вируса в крови (ПЦР)

2.Вирусологический метод

кровь, ликвор => интрацеребральное заражения мышей-сосунков => 3 – 4 пассажа => Ag в мозговой ткани ( –РНГА –РСК –РН (наиболее специфичная реакция)

3.Серологический метод –парные сыворотки (в зависимости от динамики появления антител)

Профилактика:

1.Вакцина:

- культуральная инактивированная формалином,

-FISME immun-inject – культуральная очищенная концентрированная, Австрия,

-Энцепур-К - очищенная концентрированная инактивированная, ФРГ

2. Специфический иммуноглобулин

–Донорский (из плазм доноров, проживающих на территории природных очагов),

–Гетерологичный лошадиный
III.Вирус японского энцефалита

• РНК-содержащий вирус рода Flavivirus семейства Flaviviridae,

• Обладает нейротропностью, размножается в нейронах ЦНС (вызывая их гибель)
Японский энцефалит

• полиморфное заболевание – от бессимптомного до тяжелейшего: лихорадки, интоксикации, менинго- энцефалита

• передаётся комарами (от человека – лишь при массовых эпидемиях)

• Природный резервуар и источник = комары, птицы, дикие млекопитающие, свиньи
Для профилактики:

– культуральная инактивированная сорбированная вакцина из штамма Пекин-1,

- Живая аттенуированная вакцина из дикого штамма SA14
Лечение – в первые дни сыворотка переболевших или гетерологичный иммуноглобулин
IV. Вирус омской геморрагической лихорадки (ОГЛ)

• По антигенным свойствам близок вирусу клещевого энцефалита,

• Отличие – не проявляет нейротропных свойств,

• Размножается в культуре клеток без ЦПД, исключение клетки эмбриона свиньи (разрушение монослоя)
Эпидемиология

• Природно-очаговое заболевание,

• Встречается на территории Западной Сибири,

• Характерна сезонность:

- весенне-осенняя лихорадка связана с движением клещей,

- осенне-зимний период – отлов ондатр,

• Природный хозяин и переносчик –клещ (норовый болотный и пастбищный),

• Естественный резервуар птицы, грызуны, особенно ондатра,

• Человек – тупиковое звено.

Пути передачи:

• Укус клеща,

• Снятие шкурок,

• Через инфицированную вирусом воду.
Патогенез

Поражение эндотелия кровеносных капилляров, нервной системы и надпочечников. лихорадка, интоксикация, геморрагический синдром, менингоэнцефалит
Диагностика

Выделение вируса из крови больных путем внутримозгового заражения белых мышей или культуры клеток эмбриона свиньи с последующей идентификацией в серологических реакциях, а также на обнаружении антител в парных сыворотках с помощью РПГА, РСК и ИФА
Лечение

Специфический гетерологический IG

Профилактика - вакцина
4. Семейство буньявирусов: вирусы крымской геморрагической лихорадки (КГЛ) и геморрагической лихорадки с почечным синдромом (ГЛПС), их свойства, патогенез и профилактика вызываемых ими заболеваний.

Буньявирусы: классификация

Bunyaviridae

1. 
   Bunyavirus – комариные энцефалиты
   
2. 
   Phlebovirus – москитные лихорадки
   
3. 
   Nairovirus (Nairobivirus) – вирус крымской геморрагической лихорадки (иксодовые клещи)
   
4. 
   Hantavirus – вирус ГЛПС (робовирус)
   

Структура

• 
  Вирион буньявирусов — сферический,
  
• 
  окружен оболочкой с двумя гликопротеинами (G1, G2);
  
• 
  включает три уникальные кольцевые минус однонитевые РНК, связанные с N-белком (нуклеокапсиды).
  
• 
  Симметрия капсида спиральная.
  
• 
  Нуклеокапсиды включают большую (L), среднюю (М) и малую (S) нити РНК, связанные с РНК-зависимой РНК-пол имеразой (L-белок), и два неструктурных белка (NSs, NSm).
  

В отличии от других однонитевых минус-РНК-вых вирусов, буньявирусы не имеют матриксного белка.


Свойства:

• 
  репродукция в цитоплазме (отпочковывание через аппарат Гольджи, выход путём экзоцитоза или при лизисе клетки-хозяина)
  

I. Крымская геморрагическая лихорадка (КГЛ): патогенез



Профилактика и лечение:

Инактивированная мозговая вакцина. Для лечения используют рибовирин, интерферон, специфический иммуноглобулин.
II. Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом (ГЛПС):

• 
  резервуар инфекции – мышевидные грызуны
  
• 
  инфицирование: контакт (кожи и слизистых) с их экскрементами
  
• 
  основное место репродукции вируса – эндотелий сосудов (преимущественно – мозгового слоя почек)
  
• 
  большинство больных выздоравливает, но при геморрагическом нефрозонефрите смертность (в среднем 5-10%) может достигать 44%
  

Профилактика:

Неспецифическая: предупреждение или прекращение контакта с грызунами; учет и контроль за численностью грызунов, выявление среди них циркуляции возбудителя и дератизационные мероприятия; соблюдение мер предосторожности при сельскохозяйственных работах и при нахождении на территории природных очагов (гигиенические мероприятия, ватно-марлевые маски, своевременная уборка соломы и т.д.); целенаправленное санитарное просвещение населения.
Микробиологическая диагностика

• 
  Вирусы культивируют путем внутримозгового заражения новорожденных белых мышей, крыс и хомячков.
  

• 
  Для определения антигенов вирусов или антител в крови применяют РСК, РТГА, РН, ИФА, РИА. Маркерные гены определяют в ПЦР.
  

5. Семейство аренавирусов: вирус лимфоцитарного хориоменингита (ЛХМ), свойства, патогенез и профилактика вызываемого им заболевания.

электронно-плотные гранулы (рибосомальные агрегаты клетки-хозяина)

- 5 фрагментов РНК (2 – вирусоспецифические)

- 2 антигенные группы (РСК, внутри – РН)

1. 
   Старого Света
   
   • 
     вирус лимфоцитарного хориоменингита
     
   • 
     вирус Ласса
     

2. 
   Нового Света
   
   • 
     вирус Хунин
     
   • 
     вирус Мачупо
     
• 
  робовирусы
  

вызывают (кроме ВЛХ) тяжелейшие заболевания со смертностью до 70%

Структура

• 
  Вирион, имеет сферическую или овальную форму.
  
• 
  Снаружи окружен оболочкой с булавовидными гликопротеиновыми шипами GР1 и GP2.
  
• 
  Под оболочкой расположены 12-15 клеточных рибосом, похожих на песчинки, что отражено в названии семейства.
  
• 
  Капсид — спиральный.
  
• 
  Геном представлен 2 сегментами (L, S) однонитевой минус-РНК;
  
• 
  кодирует 5 белков, в частности, L-, Z-, N-, G-белки.
  
• 
  Вирион содержит транскриптазу (L-белок, РНК-полимераза).
  

Репродукция

— в цитоплазме;

• 
  после сборки и включения в вирион рибосомоподобных частиц происходит его почкование через плазматическую мембрану клетки.
  

Микробиологическая диагностика

• 
  1) Вирусологический метод: вирус выделяют из крови, отделяемого глотки, из плевральной, цереброспинальной жидкости, мочи при заражении культуры клеток или мышей-сосунков, хомячков. Вирусы идентифицируют в РСК, РН, РИФ, ИФА; применяют ПЦР.
  
• 
  2) Серологический метод: антитела в сыворотке крови выявляют в РСК, РИФ, ИФА.
  

Специфическая профилактика

• 
  Для специфической профилактики разрабатываются живые вакцины.
  

Вирус лимфоцитарного хориоменингита (ЛХМ)

• 
  вызывает лимфоцитарный хориоменингит, протекающий в виде гриппоподобного заболевания или тяжелых форм в виде серозного менингита или менингоэнцефалита с лейко- и тром- боцитоленией.
  
• 
  ЛХМ распространяется с выделениями домашних мышей, загрязняющих продукты питания, воду и воздух.