13 занятие. Занятие 13 Тема Микробиологическая диагностика острых респираторных вирусных инфекций (продолжение). Микробиологическая диагностика нейровирусных инфекций
Скачать 1.3 Mb.
|
Занятие 13 Тема: Микробиологическая диагностика острых респираторных вирусных инфекций (продолжение). Микробиологическая диагностика нейровирусных инфекций. Вопросы для устного опроса: Вирусы герпеса, ветряной оспы и опоясывающего лишая: их свойства, патогенез и профилактика вызываемых ими заболеваний. Семейство рабдовирусов: вирус бешенства, его свойства. Патогенез, профилактика и диагностика бешенства. Семейство флавивирусов: вирусы желтой лихорадки, клещевого и японского энцефалитов, омской геморрагической лихорадки (ОГЛ), их свойства, патогенез и профилактика вызываемых ими заболеваний. Семейство буньявирусов: вирусы крымской геморрагической лихорадки (КГЛ) и геморрагической лихорадки с почечным синдромом (ГЛПС), их свойства, патогенез и профилактика вызываемых ими заболеваний. Семейство аренавирусов: вирус лимфоцитарного хориоменингита (ЛХМ), свойства, патогенез и профилактика вызываемого им заболевания. 1. Вирусы герпеса, ветряной оспы и опоясывающего лишая: их свойства, патогенез и профилактика вызываемых ими заболеваний Сем. Нerpesviridae 3 подсемейства:- Alphaherpesvirinae - Betaherpesvirinae - Gammaherpesvirinae 1) п/ сем. Alphaherpesvirinae вирус простого герпеса - ВПГ тип 1 (Herpes simplex virus тип 1; HSV-1), или герпесвирус человека ГВЧ-1 → Оральный герпес, энцефалит вирус простого герпеса - ВПГ тип 2 (Herpes simplex virus тип 2; HSV-2), или герпесвирус человека - ГВЧ-2 → Генитальный герпес, карцинома шейки матки, менингоэнцефалит, вирус ветряной оспы-опоясывающего лишая (Varicella-zoster virus; VZV), герпесвирус человека - ГВЧ-3 → Ветрянная оспа, опоясывающий лишай (герпес) 2) п/сем. Betaherpesvirinae Цитомегаловирус (Cytomegalovirus) - ГВЧ-5 =Цитомегалия, рак предстательной железы Herpes lymphotropic virus - ГВЧ-6 = Экзантема младенцов (до 2 лет), синдром хронической усталости Герпесвирус человека – 7 = ГВЧ-7 3) п/сем. Gammaherpesvirinae вирус Эпштейна-Барр - ВЭБ - (Epstein-Barr virus; EBV), или герпесвирус человека -ГВЧ-4 = Инфекционный мононуклеоз, лимфомаБеркитта, назофарингеальная карцинома Структура герпесвируса Герпесвирусы имеют овальную форму. Геном - двухнитевая линейная ДНК, Капсид – икосаэдрический, состоящий из162 капсомеров. Снаружи - оболочка с гликопротеиновыми шипами, сформированными из внутреннего слоя ядерной мембраны. Пространство между капсидом и оболочкой называется тегумент (содержит вирусные белки и ферменты, необходимые для инициации репликации). Схема строения герпесвируса Вирус простого герпеса Род Simplexvirus. Вызывает простой герпес (herpes simplex), характеризующийся: везикулезными высыпаниями на коже, слизистых оболочках, поражением центральной нервной системы и внутренних органов, пожизненным носительством (персистенцией) и рецидивами болезни, существует в организме в латентной форме до момента реактивации. Вирус простого герпеса включает два типа: - ВПГ-1 поражает область рта, глаз, ЦНС, - ВПГ-2 — гениталии. Микробиологическая диагностика простого герпеса Исследуют содержимое герпетических везикул, слюну, соскобы с роговой оболочки глаз, кровь, сперму, мочу, цереброспинальную жидкость и мозг при летальном исходе. 1. В мазках, окрашенных по Романовскому—Гимзе, наблюдают синцитий — гигантские многоядерные клетки с увеличенной цитоплазмой и внутриядерными включениями Каудри. 2. Заражают культуру клеток HeLa, Нер-2, человеческих эмбриональных фибробластов. Проводят внутри- мозговое заражение куриных эмбрионов или мышей-сосунков, у которых развивается энцефалит. Идентификация вируса: РИФ и ИФА с использованием моноклональных антител; ПЦР. 3.Серодиагностику проводят с помощью РСК, РИФ, ИФА и РН по нарастанию титра антител (IgM.IgG). Химиотерапия инфекций, вызываемых ВПГ а циклавир (зовиракс) токсичны ф амциклавир другие модифицированные нуклеозиды вырабатывается устойчиыость интерферон индукторы интерферона Специфическая профилактика рецидивирующего герпеса С пецифическая профилактика рецидивирующего герпеса осуществляется в период ремиссии многократным введением инактивированной культуральной герпетической вакцины снижение частоты возникновения рецидивов Вирус ветряной оспы и опоясывающего герпеса (Varicella-zoster virus; VZV) Род Varicellovirus; имеет самый малый геном среди герпесвирусов. вызывает две болезни: ветряную оспу и опоясывающий герпес (лишай). Ветряная оспа (varicella) встречается главным образом у детей, протекает с лихорадкой, интоксикацией, сыпью в виде везикул с прозрачным содержимым. Вирус передается воздушно-капельным путем. Опоясывающий герпес (herpes zoster), или опоясывающий лишай, — эндогенная инфекция взрослых, перенесших в детстве ветряную оспу. Болезнь сопровождается везикулезной сыпью по ходу нервов, лихорадкой и неврологическими нарушениями, болезнь развивается в результате реактивации вируса, персистирующего в организме, т. е. вируса, сохранившегося после перенесенной в детстве ветряной оспы. Ветряная оспа: иммунитет - пожизненный - не предотвращает развития опоясывающего герпеса - сопровождается увеличением супрессорной активности (во время заболевания) ⇒ транзиторный иммунодефицит Патогенез опоясывающего герпеса 1) ветряная оспа 2) персистенция вируса в ганглиях задних корешков спинного мозга 3) активация 4) везикулёзные высыпания по ходу межрёберных нервов Микробиологическая диагностика ветряной оспы и опоясывающего герпеса Исследуют содержимое высыпаний, отделяемое носоглотки и кровь. Вирус выявляют в мазках-отпечатках, окрашенных по Романовскому—Гимзе, по образованию синцития и внутриядерных включений. Вирус растет (после длительного инкубационного периода) в человеческих диплоидных фибробластах. Идентифицируется вирус в РИФ, РСК, ИФА и реакции нейтрализации. При серодиагностике применяют ИФА, РСК и реакцию нейтрализации Специфическая профилактика ветряной оспы и опоясывающего герпеса Разработана живая вакцина для VZV, но не применяется, т.к. может вызвать в дальнейшем нарушения иммунного статуса. В очагах ветряной оспы ослабленным детям можно вводить препараты иммуноглобулина 2. Семейство рабдовирусов: вирус бешенства, его свойства. Патогенез, профилактика и диагностика бешенства. Семейство: Rhabdoviridae Vesiculovirus (вирус везикулярного стоматита – арбовирус) Lyssavirus (вирус бешенства) Рабдовирусы: структура Вирусы имеют форму цилиндра с полукруглым и плоским концами, отсюда и их название — Rhabdoviridae (греч. rhabdos — прут, палка). Пулевидная форма характерна для вирусов, поражающих позвоночных, а бациллярная, с округленными концами — для вирусов везикулярного стоматита. Вирион рабдовирусов состоит из оболочки и рибонуклеопротеина (нуклеокапсида) спиральной симметрии, содержит транскриптазу. Геном — однонитевая нефрагментированная линейная минус-РНК Культивирование Культивируют в мозговой ткани белых мышей, сирийских хомячков, кроликов, крыс и тд. Развивается паралич с дальнейшей смертью. Вирус бешенства Вызывает бешенство (rhabies, синонимы — водобоязнь, гидрофобия), развивающееся после укуса или ослюнения раны инфицированным животным. Поражается ЦНС с развитием симптомов возбуждения, параличом дыхательной и глотательной мускулатуры; заканчивается летально. Различают два вируса бешенства: дикий (уличный) вирус, циркулирующий среди животных, патогенный для человека; фиксированный (virus fixe), полученный Л. Пастером в качестве антирабической вакцины многократным пассированием дикого вируса через мозг кроликов, утративший патогенность для человека, не образующий включений, не выделяющийся со слюной. Оба вируса идентичны по антигенам. Вирус-фикс (virus fixe) Пастер (+ Ру и Шамберлан) пассирование в мозге кролика до одинакового («фиксированного») инкубационного периода мозг кролика, высушенный в парах КОН = вакцина Пастера (первое применение – 1885 г.) идентичен по антигенному составу «уличному вирусу» Свойства вируса бешенства мало устойчив во внешней среде репродуцируется в цитоплазме (включения Бабеша-Негри) Бешенство: патогенез 1) укус или ослюнение 2) первичная репликация мышечная ткань соединительная ткань 3)миграция по аксонам периферических нервов 4) базальные ганглии и ЦНС 5) репликация в сером веществе с дегенеративным поражением нейронов 6) миграция по центробежным нейронам в различные ткани (в т.ч. слюнные железы) Бешенство: периоды болезни инкубационный (от 7 дней до года) продромальный (1 – 3 дня) период возбуждения (2 – 3 дня, редко – до 6 дней) паралитический период Общая продолжительность болезни 5 - 14 дней Современные препараты для профилактики бешенства Антирабические вакцины вирус выращен в мозговой ткани животных аттенуированные Ферми Хемпта инактивированные Семпла Хемпта-Николича вирус выращен на культурах клеток Внуково-32 на линии клеток W1-38 Антирабический гаммаглобулин удлиняет инкубационный период (повышает эффективность вакцинации) снижает вероятность развития поствакцинальных осложнений 3. Семейство флавивирусов: вирусы желтой лихорадки, клещевого и японского энцефалитов, омской геморрагической лихорадки (ОГЛ), их свойства, патогенез и профилактика вызываемых ими заболеваний Строение • Флавивирусы имеют сферическую форму. Диаметр - 40-60нм • Вирион состоит из оболочки, капсида и генома — однонитевой линейной плюс-РНК. • Шипы оболочки состоят из двух белков, изних (Е1) является гемагглютинином. Нуклеокапсид окружен суперкапсидом Репродукция Проникают путем рецепторного эндоцитоза • происходит в цитоплазме • свыше 20 часов • отпочковывание от мембран эндоплазматического ретикулума (выход из клетки – путём экзоцитоза) – клетка долго остаётся жизнеспособной Культивирование 1.куриный эмбрион 2.культура клеток (симпласты) Эпидемиология Вызывают природно очаговые заболевания Механизм передачи - трансмиссивный Резервуар и источник - кровососущие членистоногие Человек - «тупиковое звено»( кроме лихорадки денге и желтой лихорадки городского типа) Патогенез 1) укус 2) Кровь 3) Лихорадка с сыпью или без. Поражение печени. Геморрагический синдром. Развитие энцефалитов Микробиологическая диагностика 1. Диагностика основана на выделении вирусов путем интрацеребрального заражения мышей, культур клеток, куриных эмбрионов. Материал - кровь, смж, внутренние органы погибших животных 2. Обнаружение АТ в сыворотках с помощью РТГА, РСК, ИФА, РИА, 3. Экспресс-диагностика 4. ПЦР Лечение и профилактика Противовирусные препараты - рибвирин, интерферон, реаферон, биназу Для профилактики применяют гетерогенные и гомологичные IG Вакцинопрофилактика I. Жёлтая лихорадка • особо опасная карантинная инфекция, • один серотип вируса, • поражается: – печень (основное место репродукции) - желтуха – почки - жировое перерождение – миокард - дегенеративные изменения • Механизм заражения – трансмиссивный, • типы: – джунглевая (лесная) – комарами от обезьян – городская (классическая) – комарами от людей Патогенез желтой лихорадки • Размножается в регионарных лимфатических узлах → кровь → вирусемия → печень, почки, селезенка, головной мозг → дистрофия и некроз гепатоцитов • Поражается клубочковый и канальцевый аппараты почек Микробиологическая диагностика Выделение вируса из крови (не позднее 3-4 дня болезни ) Определение нарастания титра в сыворотках с помощью РТГА,РСКА и ИФА Экспресс-диагностика Лечение и профилактика Лечение не разработана. Для профилактики можно использовать вакцину. II. Флавивирусные инфекции умеренного пояса = группа клещевого энцефалита • клещевой энцефалит • японский (русский, осенний) энцефалит • омская геморрагическая лихорадка Возбудитель • изменчив (антигенные и биологические свойства) • нейротропность • устойчив в кислой среде Антигенные варианты вируса 1) передаётся клещами Ixodes perculcatus (таежный) → тяжёлая форма инфекции на Дальнем Востоке 2) передаётся клещами Ixodes ricinus (лесной)→ более лёгкая форма инфекции У клещей происходит трансовариальная и трансфазовая передача вируса Прокормители клещей: • Грызуны, • Птицы, • Дикие и домашние животные. Природно-очаговое заболевание. Патогенез • Трансмиссивно (укус клеща) •Алиментарно (сырое коровье и козье молоко) => кровь => первичная репликация (лимфоциты гепатоциты клетки селезёнки эндотелий сосудов) => генерализация (гематогенная лимфогенная) => вторичная репликация (двигательные нейроны передних рогов шейного сегмента спинного мозга, мозжечок, мягкая оболочка головного мозга) Клинические формы 1.лихорадочная 2.менингеальная 3.очаговая (наиболее тяжёлая: – параличи шеи и верхних конечностей) Иммунитет • напряжённый Динамика появления антител: • через неделю после заражения – антигемагглютинины (РТГА) • через 2 недели после заражения – комплементсвязывающие (РСК) • через месяц после заражения – вирус нейтрализующие (РН) Микробиологическая диагностика 1.Экспресс-диагностика –Ag в крови (РНГА, ИФА) / –геном вируса в крови (ПЦР) 2.Вирусологический метод кровь, ликвор => интрацеребральное заражения мышей-сосунков => 3 – 4 пассажа => Ag в мозговой ткани ( –РНГА –РСК –РН (наиболее специфичная реакция) 3.Серологический метод –парные сыворотки (в зависимости от динамики появления антител) Профилактика: 1.Вакцина: - культуральная инактивированная формалином, -FISME immun-inject – культуральная очищенная концентрированная, Австрия, -Энцепур-К - очищенная концентрированная инактивированная, ФРГ 2. Специфический иммуноглобулин –Донорский (из плазм доноров, проживающих на территории природных очагов), –Гетерологичный лошадиный III.Вирус японского энцефалита • РНК-содержащий вирус рода Flavivirus семейства Flaviviridae, • Обладает нейротропностью, размножается в нейронах ЦНС (вызывая их гибель) Японский энцефалит • полиморфное заболевание – от бессимптомного до тяжелейшего: лихорадки, интоксикации, менинго- энцефалита • передаётся комарами (от человека – лишь при массовых эпидемиях) • Природный резервуар и источник = комары, птицы, дикие млекопитающие, свиньи Для профилактики: – культуральная инактивированная сорбированная вакцина из штамма Пекин-1, - Живая аттенуированная вакцина из дикого штамма SA14 Лечение – в первые дни сыворотка переболевших или гетерологичный иммуноглобулин IV. Вирус омской геморрагической лихорадки (ОГЛ) • По антигенным свойствам близок вирусу клещевого энцефалита, • Отличие – не проявляет нейротропных свойств, • Размножается в культуре клеток без ЦПД, исключение клетки эмбриона свиньи (разрушение монослоя) Эпидемиология • Природно-очаговое заболевание, • Встречается на территории Западной Сибири, • Характерна сезонность: - весенне-осенняя лихорадка связана с движением клещей, - осенне-зимний период – отлов ондатр, • Природный хозяин и переносчик –клещ (норовый болотный и пастбищный), • Естественный резервуар птицы, грызуны, особенно ондатра, • Человек – тупиковое звено. Пути передачи: • Укус клеща, • Снятие шкурок, • Через инфицированную вирусом воду. Патогенез Поражение эндотелия кровеносных капилляров, нервной системы и надпочечников. лихорадка, интоксикация, геморрагический синдром, менингоэнцефалит Диагностика Выделение вируса из крови больных путем внутримозгового заражения белых мышей или культуры клеток эмбриона свиньи с последующей идентификацией в серологических реакциях, а также на обнаружении антител в парных сыворотках с помощью РПГА, РСК и ИФА Лечение Специфический гетерологический IG Профилактика - вакцина 4. Семейство буньявирусов: вирусы крымской геморрагической лихорадки (КГЛ) и геморрагической лихорадки с почечным синдромом (ГЛПС), их свойства, патогенез и профилактика вызываемых ими заболеваний. Буньявирусы: классификация Bunyaviridae Bunyavirus – комариные энцефалиты Phlebovirus – москитные лихорадки Nairovirus (Nairobivirus) – вирус крымской геморрагической лихорадки (иксодовые клещи) Hantavirus – вирус ГЛПС (робовирус) Структура Вирион буньявирусов — сферический, окружен оболочкой с двумя гликопротеинами (G1, G2); включает три уникальные кольцевые минус однонитевые РНК, связанные с N-белком (нуклеокапсиды). Симметрия капсида спиральная. Нуклеокапсиды включают большую (L), среднюю (М) и малую (S) нити РНК, связанные с РНК-зависимой РНК-пол имеразой (L-белок), и два неструктурных белка (NSs, NSm). В отличии от других однонитевых минус-РНК-вых вирусов, буньявирусы не имеют матриксного белка. Свойства: репродукция в цитоплазме (отпочковывание через аппарат Гольджи, выход путём экзоцитоза или при лизисе клетки-хозяина) I. Крымская геморрагическая лихорадка (КГЛ): патогенез Профилактика и лечение: Инактивированная мозговая вакцина. Для лечения используют рибовирин, интерферон, специфический иммуноглобулин. II. Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом (ГЛПС): резервуар инфекции – мышевидные грызуны инфицирование: контакт (кожи и слизистых) с их экскрементами основное место репродукции вируса – эндотелий сосудов (преимущественно – мозгового слоя почек) большинство больных выздоравливает, но при геморрагическом нефрозонефрите смертность (в среднем 5-10%) может достигать 44% Профилактика: Неспецифическая: предупреждение или прекращение контакта с грызунами; учет и контроль за численностью грызунов, выявление среди них циркуляции возбудителя и дератизационные мероприятия; соблюдение мер предосторожности при сельскохозяйственных работах и при нахождении на территории природных очагов (гигиенические мероприятия, ватно-марлевые маски, своевременная уборка соломы и т.д.); целенаправленное санитарное просвещение населения. Микробиологическая диагностика Вирусы культивируют путем внутримозгового заражения новорожденных белых мышей, крыс и хомячков. Для определения антигенов вирусов или антител в крови применяют РСК, РТГА, РН, ИФА, РИА. Маркерные гены определяют в ПЦР. 5. Семейство аренавирусов: вирус лимфоцитарного хориоменингита (ЛХМ), свойства, патогенез и профилактика вызываемого им заболевания. электронно-плотные гранулы (рибосомальные агрегаты клетки-хозяина) - 5 фрагментов РНК (2 – вирусоспецифические) - 2 антигенные группы (РСК, внутри – РН) Старого Света вирус лимфоцитарного хориоменингита вирус Ласса Нового Света вирус Хунин вирус Мачупо робовирусы вызывают (кроме ВЛХ) тяжелейшие заболевания со смертностью до 70% Структура Вирион, имеет сферическую или овальную форму. Снаружи окружен оболочкой с булавовидными гликопротеиновыми шипами GР1 и GP2. Под оболочкой расположены 12-15 клеточных рибосом, похожих на песчинки, что отражено в названии семейства. Капсид — спиральный. Геном представлен 2 сегментами (L, S) однонитевой минус-РНК; кодирует 5 белков, в частности, L-, Z-, N-, G-белки. Вирион содержит транскриптазу (L-белок, РНК-полимераза). Репродукция — в цитоплазме; после сборки и включения в вирион рибосомоподобных частиц происходит его почкование через плазматическую мембрану клетки. Микробиологическая диагностика 1) Вирусологический метод: вирус выделяют из крови, отделяемого глотки, из плевральной, цереброспинальной жидкости, мочи при заражении культуры клеток или мышей-сосунков, хомячков. Вирусы идентифицируют в РСК, РН, РИФ, ИФА; применяют ПЦР. 2) Серологический метод: антитела в сыворотке крови выявляют в РСК, РИФ, ИФА. Специфическая профилактика Для специфической профилактики разрабатываются живые вакцины. Вирус лимфоцитарного хориоменингита (ЛХМ) вызывает лимфоцитарный хориоменингит, протекающий в виде гриппоподобного заболевания или тяжелых форм в виде серозного менингита или менингоэнцефалита с лейко- и тром- боцитоленией. ЛХМ распространяется с выделениями домашних мышей, загрязняющих продукты питания, воду и воздух. |