|
|
Занятие 7е тема нарушение кровообращения и изменение обмена веществ в очаге воспаления
Оказывают бактерицидный эффект (комплемент, лактоферрин) и способствуют элиминации патогенов за счет активации иммунных механизмов и факторов неспецифической защиты. При этом СРБ и маннозосвязывающий белок выступают как своеобразные «протоантитела», т.е. как гуморальный механизм врожденного иммунитета. Будучи неспецифическим, этот механизм обладает некоторыми преимуществами перед механизмами адаптипного иммунитета и, прежде всего, быстротой развития.
Ограничивая поступление железа и цинка в ткани (гаптоглобин, лактоферрин, трансферрин, церулоплазмин), ОФР повышают антиинфекционную резистентность организма. Гипоферремия и гипоцинкемия, которые формируются при ответе острой фазы – лимитируют доступность этих микроэлементов для бактерий, для которых они служат ростовыми факторами.
Проявляя антиоксидантные свойства, ОФР (церулоплазмин, SAA, СРБ, гаптоглобин, α2 - макроглобулин, церулоплазмин) предупреждают негативные последствия избыточной активации свободнорадикального окисления для собственных тканей. Ингибируя протеазы (α1 - антитрипсин, α1 - антихимотрипсин), ОФР ограничивают протеолитическую активность лизосомальных ферментов, защищая белки от химической деградации (снижение уровней антипротеазных белков при септическом шоке или остром панкреатите – плохой прогностический признак).
Таким образом, основные функции ОФР способствуют разрушению микроорганизмов, ограничению избыточности воспаления и его альтерирующего действия в отношении собственных тканей, элиминации микроорганизмов и продуктов тканевой деструкции, предупреждению развития аутоинтоксикации и аутоиммунных реакций.
Лабораторный практикум
Задание 1. Сосудистая реакция при воспалении брыжейки кишечника лягушки
(Опыт Конгейма)
Необходимые животные и оборудование на 1 рабочее место:
1. Лягушка.
2. Резиновая пластинка с отверстиями.
3. Микроскоп (ок. 10, об. 8).
4. Препаровалъная игла.
5. Глазной пинцет.
6. Ножницы.
7. Булавки - 6 шт.
8. 0,7% раствор хлористого натрия - 10 мл.
9. Вата - 5 г.
Ход исследования:
Обездвиженную лягушку помещают на резиновую пластинку животом вниз. С правой стороны вскрывают брюшную полость и извлекают брыжейку тонкого кишечника. Брыжейку веерообразно расправляют над отверстием в резиновой пластинке и фиксируют булавками за кишечник, как показано на рис. 24. Во избежание нарушения кровообращения в сосудах брыжейки петля кишечника не должна быть перекручена и сильно растянута. Подготовленный препарат помещают на столик микроскопа и рассматривают. Просмотрев бегло весь препарат, выбирают для детального наблюдения участок брыжейки с разветвленной сетью мелких сосудов. Вследствие травмы (извлечение кишечника и расправление брыжейки) и нахождения кишечника в необычных условиях (воздушная среда) через 5 - 10 минут в брыжейке развивается острое воспаление.
В первый момент воспаления возникает сужение сосудов (остается незамеченным), в дальнейшем происходит расширение их. Ток крови ускоряется. В сосудах можно различить широкий осевой слой (форменные элементы крови) и узкий краевой (плазматический). Ускорение кровотока в последующем сменяется замедлением. Местами в артериях можно наблюдать маятникообразное движение крови. В этот период лейкоциты начинают принимать краевое стояние и прилипают к внутренней стенке сосудов (стадия краевого стояния лейкоцитов). Далее лейкоциты начинают терять округлую форму, проникают в толщу стенки и постепенно мигрируют за ее пределы в ткань.
Наблюдение проводится в течение длительного времени - 1 - 2 часа. Зарисовывают краевое стояние лейкоцитов.
Задание 2. Сосудистая реакция и эмиграция лейкоцитов при развитии острого воспаления мочевого пузыря лягушки
Необходимые животные и оборудование на 1 рабочее место:
1. Лягушка та же, что и в предыдущем опыте.
2. Оборудование то же.
Дополнительно:
1. Канюля с резиновой трубкой и стеклянным наконечником.
2. Покровное стекло.
3. Спирт - 5 мл.
Ход исследования:
Опыт ставят на лягушке, использованной в предыдущем эксперименте. В задний проход лягушки вставляют стеклянную канюлю с резиновой трубкой, через которую мочевой пузырь слегка раздувают. Мочевой пузырь извлекают из брюшной полости через боковой разрез, прикрывают покровным стеклом и рассматривают под микроскопом (рис. 29).
В стенке мочевого пузыря под влиянием атмосферного воздуха развивается воспаление, при котором особенно рельефно выступают явления краевого стояния и эмиграции лейкоцитов.
Зарисовывают краевое стояние лейкоцитов и рассматривают механизм развития сосудистых изменений при воспалении.
Задание 3. Определение протеолитической активности ферментов гноя
Необходимое оборудование на 1 рабочее место:
1. Отстой гноя (№ 1)- 5 мл.
2. Штатив с пробирками (6 шт.).
3. 1% раствор казеина - 6 мл.
4. Реактив на белок (смесь 5 мл ледяной уксусной кислоты, 45 мл 960 спирта с 50 мл дистиллированной воды) - 2,0 мл.
5. Пипетка объемом 1,0 мл.
6. Глазная пипетка - 2 шт.
7. Термостат.
Ход исследования:
В 6 пробирок (диаметр 0,5 - 0,7 мм) наливают по 1 мл раствора белка (казеина) и во все пробирки, кроме первой, добавляют отстой гноя (№ 1) в возрастающем количестве (2 - 4 - 6 - 8 и 10 капель). Содержимое пробирок встряхивают и помещают в термостат на 30 минут при температуре 370С. По истечении этого срока пробирки извлекают из термостата и добавляют по 2 капли реактива на белок.
Реактив на белок, взаимодействуя с казеином, дает мутное кольцо или хлопья. При наличии в гное протеолитических ферментов произойдет расщепление белка, и кольцо не будет образовано или будет слабо выражено.
Полученные результаты заносят в таблицу 10.
Таблица 10
|
1
|
2
|
3
|
4
|
5
|
6
| |
|
Раствор казеина в мл
|
1
|
1
|
1
|
1
|
1
|
1
|
Гной № 1 в каплях
|
-
|
2
|
4
|
6
|
8
|
10
|
Реактив на белок
|
+
|
+
|
+
|
+
|
+
|
+
|
Появление кольца
|
|
|
|
|
|
|
Оценка реакции производится знаком +; ++; +++, в зависимости от величины кольца (или интенсивности появления хлопьев). Знаком - обозначается отсутствие кольца или хлопьев.
Задание 4. Определение амилолитической активности ферментов гноя
Необходимое оборудование на 1 рабочее место:
1. Отстой гноя (№ 2) - 5,0 мл.
2. Штатив с пробирками (6 шт.).
3. 1% раствор крахмала - 6,0 мл.
4. Реактив на крахмал - раствор Люголя (1 часть йода, 2 части йодида калия и 17 частей воды) - 2,0 мл.
5. Пипетка объемом 1,О мл.
б. Глазная пипетка (2 шт.).
7. Термостат.
Ход исследования:
В 6 пробирок наливают по 1 мл раствора крахмала во все пробирки, кроме первой, добавляют отстой гноя (М 2) в возрастающем количестве (2 - 4 - б - 8 - 10 капель). Содержимое пробирок встряхивают и помещают, в термостат на 30 минут при температуре 370 С. После извлечения пробирок из термостата в каждую добавляют по 1 капле реактива на крахмал (раствор Люголя). различной окраске содержимого пробирок отмечают результаты переваривания крахмала амилолитическими ферментами гноя. Результаты исследования заносят в таблицу 11.
Таблица
№ пробирок
|
1
|
2
|
3
|
4
|
5
|
6
| |
|
Раствор крахмала в мл
|
1
|
1
|
1
|
1
|
1
|
1
|
Гной № 2 в каплях
|
-
|
2
|
4
|
6
|
8
|
10
|
Раствор Люголя
|
+
|
+
|
+
|
+
|
+
|
+
|
Цвет
|
|
|
|
|
|
|
Задание 5. Определение кислотности (рН) в гнойном экссудате и в лизате из здоровой мышцы
Необходимое оборудование на 1 рабочее место:
1. Отстой гноя (№ 3).
2. Лизат из здоровой мышцы (№ 4).
3. Предметное стекло
4. Универсальный индикатор (1% спиртовой раствор паранитрофенола).
5. Глазная пипетка (3 шт.).
Ход исследования:
На один конец лакмусовой бумаги наносят каплю отстоя гноя (№ 3), на другой - лизат мышечной ткани (№ 4). Сравнивают цвет с эталоном.
Рассматривают механизм развития кислой реакции в воспаленной ткани.
Контрольные вопросы:
1. Определение понятия "воспаление", причины воспаления, классификация. Местные признаки воспаления. Представление об изначально защитной сущности воспаления как типового патологического процесса. Особенности воспалительной реакции (саморазвитие, множественность "участников", цепной и каскадный характер вовлечения гуморальных и клеточных механизмов), значимость ингибиторов, удерживающих меру реакции в рамках ее физиологического защитного значения.
Основные стадии развития воспалительной реакции. Первичная и вторичная альтерация. Изменения обмена веществ при воспалении, физико-химические изменения в очаге воспаления.
Клеточно-молекулярные механизмы воспаления: полиморфно-ядерные лейкоциты и клетки моноцитарно-макрофагальной системы; молекулы адгезии (основные группы); провоспалительные и противовоспалительные цитокины; эйкозоноиды и ФАТ; система комплемента (классический и альтернативный пути активации), роль протеаз в активации системы комплемента, понятие об анафилотоксинах; биогенные амины; роль фактора Хагемана в кининогенезе, фибринолизе и активации системы комплемента. Оксид азота. Представление об острофазовых реактантах (ОФР), основные группы ОФР, их роль в развитии воспаления.
Нарушение микроциркуляции в очаге воспаления. Механизмы формирования артериальной гиперемии. Особенности линейного кровотока при артериальной гиперемии в очаге воспаления. Факторы, определяющие переход артериальной гиперемии в венозную при воспалении.
Адгезия лейкоцитов. Сосудистые и лейкоцитарные факторы, участвующие в адгезии. Роль селектинов, интегринов, иммуноглобулинподобных молекул в реализации начальных и конечных этапов адгезии и в приобретении лейкоцитами локомоторного фенотипа. Инвазия лейкоцитами сосудистой стенки, механизмы инвазии.
Хемотаксис лейкоцитов, механизм, значение в формировании воспалительного инфильтрата.
ЛИТЕРАТУРА
Адо А. Д., Петров И. Р. Патологическая физиология (учебник). М., 1957, стр. 176 - 188.
Мечников И. И. Лекции по сравнительной патологии воспаления. М., 1947.
Методические рекомендации к практическим занятиям по патологической физиологии. Под редакцией Е.П.Кожевниковой. Оренбург, 1980.
Учебник - Патологическая физиология. Под редакцией А.Д. Адо, В.В.Новицкого. Томск. Изд-во Томского ун-та, 1994.
Патофизиология (курс лекций). Под ред. проф. И.Ф.Литвицкого. М. “Медицина” , 1996.
|
|
|
Скачать 1.05 Mb.