1 коллоквиум по микробиологии во 2 семестре. Занятие по пройденным темам с 1 по 6
 Скачать 160.25 Kb.
|
1. МорфологияГр+ полиморфные палочки, размер 1 – 6 мкм, располагаются под углом в виде V, L, образуют скопления за счёт поверхностных липидов. Имеют зерна волютина (метахроматические гранулы). Метахромазия – неравномерное окрашивание клеток за счет зерен волютина. Зёрна волютина обнаруживают при окраске по методу Лёффлера (темно-синие гранулы) и методу Нейссера (чёрно-коричневые гранулы). Спор, капсулу не образуют, неподвижные. Хемоорганотрофы. Факультативные анаэробы. Выделяясь во внешнюю среду со слюной, пленками, дифтерийные палочки способны сохранять жизнеспособность на предметах в течение нескольких дней. Хорошо переносят высушивание. Чувствительны к антибиотикам и дезинфицирующим средствам. Культуральные свойства На простых питательных средах не растут, требуют среды, богатые белком. Среда Ру (свёрнутая сыворотка) – элективная среда, высокая скорость роста, колонии формируются через 10 – 12 часов. Среда Клауберга (кровяной теллуритовый агар - КТА) – дифференциально-диагностическая среда, колонии дифтерийной палочки восстанавливают металлический теллур и окрашиваются в серый или чёрный цвет, на среде Ру(свернутая сыворотка)характерный вид шагреневой кожи.. На кровяном агаре (КА) – дают гемолиз. На жидких средах наблюдается рост в виде пленки или помутнения с осадком. Биохимические свойства: Ферментируют глюкозу и мальтозу до кислоты, не разлагают сахарозу, продуцируют уреазу и не образуют индол, образуют цистиназу( положительная проба Пизу на среде с цистином в виде почернения столбика агара). По биохимическим свойствам, характеру роста на питательных средах каринобактерии подразделяются на три биовара: 1. gravis – короткие палочки, зерен волютина мало, на КТА чёрные колонии, R- форма колоний (колонии с радиальной исчерченностью - “цветки маргаритки”), дают гемолиз на КА, ферментируют крахмал. Выделяются от больных с тяжёлыми формами дифтерии. 2. mitis - длинные палочки, зерен волютина много, S-форма колоний, чёрные или серые колонии, крахмал не ферментируют, гемолиз на КА не дают. Выделяются от больных с более лёгким течением болезни. 3. intermedius – длинные палочки, мало волютина, S- и R- форма колоний, проба на цистиназу положительная, крахмал не ферментируют, гемолиз на КА не дают . Этот биовар выделяется редко. Внутри каждого биовара встречаются токсигенные и нетоксигенные штаммы. Токсигенные штаммы всех биоваров продуцируют идентичный экзотоксин. Антигенное строение: Полисахариды клеточной стенки – дают перекрёстные реакции с микобактериями туберкулёза. Белковая микрокапсула (К-антиген) – определяют серовар, их более 10. Классификация по антигенной структуре недостаточно разработана, на практике не используется. Факторы патогенности 1. Дифтерийный гистотоксин – основной поражающий фактор, блокирует синтез белка, вызывает некроз тканей, общую интоксикацию. DLM на 1 кг массы тела человека составляет 100 нг (10-9 г). 0,001 мкг дифтерийного токсина вызывает видимую некротическую реакцию. Дифтерийный гистотоксин один из самых сильных ядов на Земле, по своей силе уступает лишь ботулиническому и столбнячному экзотоксинам. Дифтерийный гистотоксин обладает тропизмом к клеткам миокарда, нервным ганглиям, поражает ССС, кору надпочечников и почки. Токсигенные культуры дифтерийной палочки лизогенные (явление фаговой конверсии). Дифтерию вызывают только токсигенные культуры дифтерийной палочки. 2. Белки микрокапсулы - адгезия во входных воротах инфекции: зев, гортань, трахея, реже нос, ухо, конъюнктива глаза, половые органы у девочек. 3. Липиды клеточной стенки и корд-фактор (димиколат трегалозы) – разрушают митохондрии, подавляют фагоцитоз. 4. Ферменты агрессии (нейраминидаза, гиалуронидаза, фибринолизин и др.)- колонизация и инвазия возбудителя во входных воротах инфекции Патогенез. Источник инфекции – больной человек или носитель токсигенной культуры дифтерийной палочки. Пути передачи - воздушно-капельный (основной), контактный (через предметы, игрушки), реже алиметарный (через инфицированные продукты, например, молоко). Дифтерийная палочка в окружающей среде устойчива к высушиванию, на предметах окружающей среды сохраняя жизнеспособность до 5 месяцев. К дезинфектантам чувствительна. Для дифтерии характерна сезонность заболевания – осенне-зимний период. Пики заболевания регистрируются каждые 7 – 9 лет. Входные ворота инфекции – слизистые оболочки зева, носа, дыхательных путей и т.д. На месте входных ворот наблюдается фибринозное воспаление, образуется характерная дифтерическая плёнка, которая с трудом отделяется от подлежащих тканей. Экзотоксин, выделяемый бактериями, попадает в кровь, в результате чего развивается токсинемия. Токсин поражает миокард, почки, надпочечники, нервную систему. Существуют разнообразные по локализации формы дифтерии: дифтерия зева, носа, гортани, глаз, половых органов, кожи, ран и др. В 85 -90% случаев наблюдается дифтерия зева. Инкубационный период от 2 до 10 дней. Заболевание начинается с повышения температуры тела, появления боли при глотании, плёнки на миндалинах, увеличение лимфатических узлов. У взрослых дифтерия может протекать как лакунарная ангина. У детей раннего возраста нередко одновременно с зевом и носом в патологический процесс вовлекается гортань, и в результате отёка гортани развивается дифтерийный круп, который может привести к асфиксии и смерти. Другие тяжёлые осложнения, которые могут явиться причиной смерти, - токсический миокардит, острая недостаточность гипофизарнонадпочечниковой системы, паралич дыхательных мышц. ИММУНИТЕТ : После перенесения дифтерии формируется антитоксический иммунитет, возможны повторные заболевания в 6 – 7% случаев. Невосприимчивость к дифтерии зависит от содержания антитоксических антител в крови. Достаточно продолжительным является поствакцинальный иммунитет (до 3 – 5 лет). Микробиологическая диагностика Исследованию подлежат: 1) лица с подозрением на дифтерию; 2) больные с различными заболеваниями лор-органов. 1. Микроскопический – дает предварительный результат. В окрашенных микроскопических препаратах обнаруживают палочки, имеющие типичную морфологию. 2. Бактериологический – основной.Материалом для исследования является слизь из очагов воспаления. слизистые оболочки носа, зева, половых органов, кожа в составе нормальной микрофлоры содержат различных представителей рода Carinobakterium. Они условно-патогенны, объединены понятием дифтероиды. У ослабленных больных могут вызывать различные гнойно-воспалительные процессы. В ходе бактериологического исследования надо дифференцировать каринобактерии дифтерии от дифтероидов. Отличия дифтероидов от возбудителей дифтерии: Принадлежность к роду коринебактерий определяют по морфологическим (дифтероиды в мазках расплагаются беспорядочно или в виде палисада. В цитоплазме зера волютина отсутствуют) , вид – по биохимическим свойствам (проба на цистиназу, неспособность расщеплять мочевину). Токсигенность (определяют в реакции преципитации на питательном агаре, 1) биологическая проба – морским свинкам внутрикожно вводится бульонная культура, 3) использование ДНК-зондов, с помощью которых определяется наличие токсического оперона в геноме выделенной культуры), культуральные свойства не отличаются. Для ускоренного обнаружения дифтерийного токсина в культуре или в сыворотке крови применяют РНГА с антительным эритроцитарным диагностикумом, реакцию нейтрализации антител, ИФА, ПЦР. 3.Серологический – определяют наличие антитоксического иммунитета ставят РПГА с сывороткой крови пациента и дифтерийным эритроцитарным диагностикумом. Титры антител 1:20 являются защитными. Лечение. Этиотропная терапия: антитоксическая противодифтерийная сыворотка; вводится в дозе 10 000—50 000 АЕ (в зависимости от возраста и тяжести заболевания). 1 АЕ – это такое минимальное количество сыворотки, которое нейтрализует 100 DLF дифтерийного токсина. Серотерапия эффективна в ранний период болезни, пока токсин не фиксирован клетками организма и ткани существенно не повреждены. Профилактика: 1) активная иммунизация населения вакцинами: АКДС (адсорбированная коклюшно-дифтерийностолбнячная вакцина) или АДС (адсорбированный дифтерийно-столбнячный анатоксин). Ревакцинацию проводят с помощью АДС-анатоксина не только в детском возрасте, но и взрослым людям каждые 10 лет. В нашей стране трёхкратная иммунизация детей с 3-месячного возраста (до этого возраста у детей сохраняется плацентарный иммунитет). При контакте с больным человеком людям, не имеющим напряжённого антитоксического иммунитета, вводят дифтерийный анатоксин (АД). Помимо данных препаратов, выпускают АКДС-М, АД-М – анатоксины, содержащие малое количество антигена и используют для иммунизации людей с предрасположенностью к аллергии, однако эти препараты являются менее иммуногенными. 2) пассивная. Проводится в очагах заболевания антитоксической противодифтерийной сывороткой, доза которой определяется формой и тяжестью заболевания. 17. Микобактерии, классификация, характеристика биологических свойств возбудителя туберкулеза, виды микобактерий, факторы патогенности. Иммунитет, его особенности, методы микробиологической диагностики, специфическая профилактика туберкулеза. Туберкулез-хроническое заболевание человека, сопровождающееся поражением органов дыхания, лимфатических узлов, кишечника, костей и суставов, глаз, кожи, почек и мочевыводящих путей, половых органов, центральной нервной системы. Отдел Firmicutes, род Mycobacterium. Виды: M.tuberculosis, M. bovis, M. africanum. Родовой признак - кислото, спирто- и щелочеустойчивость. Морфология полиморфные палочки, Они имеют форму длинных, тонких (М.tuberculosis) или коротких, толстых (M.bovis), прямых или слегка изогнутых палочек с гомогенной или зернистой цитоплазмой; грамположительны, неподвижны, спор не образуют, имеют микрокапсулу. Для их выявления применяют окраску по Цилю-Нильсену (окрашиваютс в красный цвет). Микобактерии могут образовывать различные морфовары (L-формы бактерий), которые длительно персистируют в организме и индуцируют противотуберкулезный иммунитет. Культуральные свойства М.tuberculosis относятся к аэробам. Возбудители туберкулеза характеризуются медленным ростом, требовательны к питательным средам (картофельно-глицериновых средах с добавлением малахитового зеленого( элективная среда Левенштейна-Йенсена) . На жидких питательных средах дают рост в виде сухой пленки кремового цвета. При внутриклеточном развитии, а также при росте на жидких средах выявляется характерный корд-фактор, благодаря которому микобактерии растут в виде «жгутов». На плотных средах рост в виде кремового, сухого чешуйчатого налета с неровными краями (R-формы). По мере роста колонии приобретают бородавчатый вид. Под влиянием антибактериальных средств возбудители изменяют культуральные свойства, образуя гладкие колонии (S-формы). M.bovis -растут на средах медленнее, чем M.tuberculosis, пируватзависимы; на плотных питательных средах образуют мелкие шаровидные, серовато-белые колонии (S-формы). Ферментная активность. Высокая каталазная и пероксидазная активность. Каталаза термолабильна. М.tuberculosis в большом количестве синтезирует ниацин, который накапливается в культуральной среде и определяется в пробе Конно. Факторы патогенности: Патогенность микобактерий туберкулеза определяется их химическими компонентами: липидами, белками и полисахаридами. Липиды способствуют образованию специфической при туберкулезе воспалительной гранулемы, интоксикации, препятствуют фагоцитозу, вместе с белками вызывают ГЗТ, определяют кислотоустойчивость, адьювантные свойства. Белки могут вызывать ГЗТ, ГНТ и выявлять аллергию немедленного типа. Полисахариды являются факторами инвазии, обладают адьювантным действием. Антигенная структура: В ходе заболевания к антигенам образуются антипротеиновые, антифосфатидные и антиполисахаридные антитела, свидетельствующие об активности процесса. Резистентность. Наличие липидов - устойчивы к действию неблагоприятных факторов. Высушивание мало влияет. Погибают при кипячении. Лабораторная диагностика 1. Бактериоскопическое исследование. Материал от больного( мокрота, моча, испражнения, спинномозговая жидкость, гной) для повышения вероятности обнаружения микобактерий туберкулеза подвергают центрифугированию, чтобы увеличить концентрацию бактерий, а также люминесцентной микроскопии. 2. Биологический метод предполагает заражение морских свинок, чрезвычайно чувствительных к микобактериям туберкулеза ( заражающая доза составляет несколько клеток). 3. Бактериологический метод остается решающим в диагностике туберкулеза. Он необходим не только для подтверждения диагноза, но и для оценки чувствительности микобактерий к противотуберкулезным препаратам, диагноза рецидива туберкулеза, степени освобождения организма от туберкулезных бактерий, выявления L-форм. Исследуемый материал обрабатывают слабым раствором серной кислоты, для устранения сопутствующей микрофлоры. Время необходимое для выделения и идентификации туберкулезной культуры 6-8недель, для определения чувствительности необходимо еще 2-3 недели. Для ускоренной бактериологической диагностики используют метод микрокультур по Прайсу, автоматизированные коммерческие системы бульонного культивирования BACTEC MGIT 960 и MB/BacT. 4. Аллергический метод проводят с помощью постановки внутрикожной туберкулиновой пробы( проба Манту), а также ставят, диаскинтест.Они используются для контроля эффективности противотуберкулезной вакцинации. Положительная туберкулиновая проба ( уплотнение в месте введения от 5 до 9 мм) свидетельствует об инфицировании организма туберкулезными палочками, а следовательно о наличии к ней приобретенного иммунитета. Лица, отрицательно прореагировавшие на туберкулин , подлежат ревакцинации. Диаскинтест содержит синтетические антигены ( CFP10 и ESAT 6), аналогичные белкам возбудителя туберкулеза. Реакция на Диаскинтест возникает только в том случае, когда в организме есть активные микобактерии туберкулеза. Он не чувствителен к другим микобактериям, в отличие от туберкулиновой пробы. Вводят в/к в ладонную поверхность предплечья, учитывают результат через 72 часа. 5. При серологической диагностике ставят РСК, РПГА, ИФА, которые в связи с низкой чувствительностью и специфичностью имеют второстепенное значение. 6. Молекулярно-генетические методы: ПЦР, микробиочипы (Он представляет собой твердую подложку с небольшими ячейками. В каждой ячейке иммобилизовано (закреплено) собственное веществореагент, которое служит зондом (щупом, пробой) для проведения той или иной реакции. Все реагенты расположены в определенном порядке и взаимодействуют с анализируемым образцом по принципу комплементарности) Эпидемиология. Источником инфекции являются больные люди с открытой формой туберкулеза, реже больные животные (крупный рогатый скот). Пути передачи: воздушно-капельный и воздушно-пылевой, контактный, алиментарный, редко внутриутробный. Патогенез и клиника. Первичный очаг формируется в легких или в мезентериальных лимфатических узлах. Первичный очаг туберкулеза – это поражение бронхов и легких с проникновением бактерий в регионарные лимфоузлы. Судьба его различна: 1. Если резистентность организма высокая - очаг окружается соединительнотканной капсулой и пропитывается солями кальция, что означает формирование приобретенного нестерильного иммунитета, так как микобактерии в нем сохраняются долгие годы. 2. Если резистентность снижена, то происходит творожистый распад очага, его увеличение, что ведет к развитию казеозной пневмонии, которая может стать причиной легочной чахотки Иммунитет. Противотуберкулезный иммунитет нестерильный инфекционный (клеточный иммунитет проявляется только в инфицированном организме), обусловлен наличием в организме L-форм микобактерий. Лечение. По степени эффективности противотуберкулезные препараты делят на группы: группа А - изониазид, рифампицин; группа В - пиразинамид, стрептомицин, флоримицин; группа С – ПАСК, тиоацетозон. При наличии сопутствующей микрофлоры и множественной лекарственной устойчивости микобактерий применяют фторхинолоны и альдозон. Профилактика. Специфическую профилактику проводят путем введения живой вакцины - BCG(БЦЖ), внутрикожно на 2-5-й день после рождения ребенка. Проводят последующие ревакцинации. Предварительно ставят пробу Манту для выявления туберкулиннегативных лиц, подлежащих ревакцинации. |