|
|
Ситуационные задачи к итоговому опросу по частной микробиологии
|
|
|
|
|
| | |
|
Ситуационные задачи к итоговому опросу по частной микробиологии.
1. У больного с подозрением на острую форму бруцеллеза была взята кровь и засеяна на питательный бульон, поставлена реакция Райта. Через сутки питательная среда осталась стерильной, реакция Райта отрицательна. На этом основании диагноз «бруцеллез» был снят. Какие методы исследования были применены? Достаточно ли обоснованы выводы врача?
Ответ:
Было проведено бактериологическое исследование и серодиагностика.
Бруцеллы характеризуются замедленным ростом на питательных средах, посевы инкубируют не менее 3-х недель при температуре 37о градусов, а в данном случае всего сутки. В сыворотке больного бруцеллезом накапливаются агглютинирующие (вначале IgM, затем IgG), неполные блокирующие (IgA, IgG) и опсонические (IgG) антитела. Для их выявления с диагностической целью используют реакцию Райта (развернутая агглютинация). Райта реакция— реакция агглютинации бруцелл (убитых нагреванием) сывороткой крови больного бруцеллезом. Положительной реакция Райта считается в разведении сыворотки от 1 : 200 и выше. В диагностических титрах она обнаруживается с 10—11-го дня болезни, учет результатов через 20-24ч после термостата. Бактериологический метод трудоемок, длителен, возможен лишь в специальных лабораториях, однако для диагноза бруцеллёза имеет решающее значение. Поэтому можно сделать вывод, что выводы врача были не достаточно обоснованы.
|
2. В лабораторию поступил материал (шерсть животного) для определения зараженности возбудителем сибирской язвы. Какой метод исследований следует применить для этой цели? Что необходимо подготовить?
|
3. Из организма степной пеструшки, отловленной в зоне природного очага чумы, бактериологически изолирована грамотрицательная культура бактерий, окрашивающихся по полюсам. Бактерии агглютинируются противочумной сывороткой. На этом основании выделенная культура идентифицирована как Yersinia pestis. Достаточно ли данных для такого вывода?
|
5. При исследовании загнивших трупов манчжурских пищух, найденных в зоне Алтайского природного очага чумы, гомогенизированные кусочки внутренних органов и кровь засеяли на питательный агар. Через сутки появился обильный рост посторонней микрофлоры, колонии чумных палочек не были обнаружены. Какой метод диагностики был применен? В чем заключается методические погрешности бактериолога?
|
6. У больного с подозрением на бубонную чуму была взята кровь для микроскопического и бактериологического исследования. На основании негативных результатов анализа диагноз «чума» был отвергнут. Ваше мнение?
|
7. Больной был госпитализирован на вторые сутки после появления признаков пневмонии с обильным отделением кровавой мокроты. За несколько дней до этого отмечалось увеличение и болезненность подчелюстных лимфоузлов. В связи с резким ухудшением состояния больного были назначены антибиотики широкого спектра действия. При микроскопическом исследовании мокроты микроорганизмы, похожие на чумные, не были обнаружены. Диагноз «чума, легочная форма» был снят. Правильно ли это?
|
9. У мужчины, занимавшегося охотой в зоне природного очага чумы, появилась головная боль, повысилась температура, стали болезненными лимфоузлы в области шеи. При микроскопировании мазков из крови больного, возбудитель чумы не обнаружен. Достаточно ли данных для того, чтобы отвергнуть диагноз «чума»?
Ответ: Данных недостаточно, так как микроскопическое исследование дает только ориентировочное заключение (по морфологии нельзя точно сказать, что это возбудитель чумы Yersinia pestis(энтеробактерия) – овоидная палочка с биполярным окрашиванием, возможна эта другая иерсиния).
Для подтверждения диагноза «чума» необходимо также произвести посев материала на пит. среды (мясопептонный агар, элективные среды, Бульон Хоттингера) – бактериологический метод ( окончательный диагноз). Инкубацию посевов проводят при 28 °С. В положительных случаях через 12 ч появляются колонии в виде характерных "кружевных платочков".
Ставят биопробы на морских свинках и белых мышах.Для постановки биологической пробы животных заражают внутрибрюшинно. подкожно или внутрикожно, а в случае загрязнения материала посторонней микрофлорой втиранием в скарифицированную кожу. В зависимости от способа заражения и степени чувствительности к возбудителю животные погибают от чумы на 3—9-й день после инфицирования, изменения во внутренних органах в виде геморрагического воспаления, кровоизлияниям мазках- отпечатках из органов -множество чумных микроорганизмов; посевы инфицированных органов и крови дают обильный рост возбудителя.
В качестве экспресс-диагностики используют РИФ, позволяющую поставить предварительный диагноз уже через 2 часа. Метод ускоренной диагностики чумы основан на свойстве чумного бактериофага быстро (30—40 мин) размножаться в присутствии микроба чумы.
Серологическое исследование проводится постановкой РНГА, ИФА, РН антител
|
10. У больного с подозрением на бруцеллез для исследования была взята кровь (5мл), которую засеяли на печеночный бульон. После 2 суток экспозиции в термостате был сделан высев на печеночный агар, рост бруцелл не обнаружили. Диагноз «бруцеллез» был снят. Какой метод диагностики был применен? Правилен ли вывод врача?
|
11. У больного с обширной инфицированной раной для анализа было взято раневое отделяемое. Исследуемый материал засеяли на элективные плотные и жидкие среды. Через сутки в посеве на плотную среду обнаружили среднего размера желтоватые выпуклые колонии с ровными краями и блестящей поверхностью. В пробирках с бульоном образовалась равномерная муть. В окрашенных по Граму мазках из колоний обнаружили небольшие (по 2-3бактерии) группы шаровидных бактерий, окрасившихся в сине-фиолетовый цвет. Какой метод диагностики был применен? Какие элективные среды использовали? К какой группе может быть отнесен выделенный возбудитель?
Эталон ответа: бактериоскопический метод. Среды – желточно-солевой агар, питательный бульон с повышенной концентрацией хлорида натрия. Возбудитель может быть отнесен к группе патогенных кокков, скорее всего, стафилококк, но необходимы дальнейшие исследования – бактериологическое исследование.
Ответ: - Использовались бактериоскопический и бактериологический методы.
- При выделении стафилококков из исследуемого материала, содержащего различные микроорганизмы, используются элективные среды: молочно-солевой агар, желточно - солевой агар Чистовича. Повышенные концентрации хлорида натрия (5—10%), не мешая росту стафилококков, подавляют размножение сопутствующей флоры. Использовались бактериоскопический и бактериологический методы. На мясопептонном бульоне дают диффузный рост, на плотных средах образуют колонии диаметром 2—3 мм. круглые, с ровными краями, слегка выпуклые. Цвет колоний различен, в зависимости от образуемого пигмента: золотистый, лимонно-желтый, палевый.
- Возбудитель: Стафилококки имеют шаровидную форму от 0.6 до 1 мкм в диаметре. В чистой культуре располагаются в виде скоплений, напоминающих гроздья винограда. В мазках из гноя встречаются одиночные кокки, иногда диплококки и небольшие скопления (рис. 30. а). Стафилококки неподвижны, не образуют капсул и спор.
|
12. У больного, поступившего в урологическое отделение с высокой температурой, была взята для исследования моча, засеянная на кровяной агар и в сахарный бульон. Через сутки в посевах на плотную среду выявили небольшие выпуклые колонии с зоной гемолиза, в бульоне появился рост в виде скудного хлопьевидного осадка. Врач-бактериолог сделал вывод о стрептококковой инфекции. Обоснованно ли такое заключение? Какие методы нужно дополнительно использовать?
Эталон ответа: Заключение врача обосновано (культуральные свойства, факторы патогенности - гемолизины). Но необходимы дополнительные исследования: выделение чистой культуры, ее идентификация по биохимическим, антигенным свойствам, серотипирование, обнаружение токсина А, так как стрептококк - это условно-патогенный микроорганизм и может быть выделен из материала от больного ошибочно.
Эталон ответа: Заключение врача обосновано (культуральные свойства, факторы патогенности - гемолизины). Но необходимы дополнительные исследования (выделение чистой культуры, ее идентификация по биохимическим, антигенным свойствам, серотипирование, обнаружение токсина А), так как стрептококк – это условно-патогенный микроорганизм и может быть выделен из материала от больного ошибочно.
Свой ответ: Заключение врача обосновано, так как основным методом идентификации является бактериологический метод (культуральные свойства(на агаре с кровью стрептококк образует мелкие (1—2 мм в диаметре) полупрозрачные палочки, сероватые или бесцветные, которые хорошо снимаются петлей и имеют зоны гемолиза, В жидких питательных средах для стрептококков характерен придонный, часто поднимающийся по стенкам рост. При взбалтывании зернистая или хлопьевидная взвесь.), факторы патогенности - гемолизины). Но необходимы дополнительные исследования (выделение чистой культуры, ее идентификация по биохимическим(метаболизируют глюкозу с образованием молочной и других кислот), антигенным свойствам, серотипирование, обнаружение токсина А), так как стрептококк – это условно-патогенный микроорганизм и может быть выделен из материала от больного ошибочно.
Исследуемый материал засевают на кровяной агар в чашку Петри. После инкубации при 37 °С в течение 24 ч отмечают характер колоний и наличие вокруг них зон гемолиза. Из части материала, взятого из колоний, готовят мазок, окрашивают по Граму и микроскопируют. Для получения чистой культуры 1—3 подозрительные колонии пересевают в пробирки со скошенным кровяным агаром и сахарным бульоном. На кровяном агаре Streptococcuspyogenes образует мелкие мутноватые круглые колонии. В бульоне стрептококк дает придонно-пристеночный рост в виде хлопьев, оставляя среду прозрачной. По характеру гемолиза на кровяном агаре стрептококки делятся на три группы: 1) негемолитические; 2) а-гемолитические 3) ?-гемолитические, образующие вокруг колонии полностью прозрачную зону гемолиза. Заключительным этапом бактериологического исследования является идентификация выделенной культуры по антигенным свойствам. По данному признаку все стрептококки делят на серологические группы (А, В, С, D и т. д.). Серогруппу определяют в реакции преципитации с полисахаридным преципитиногеном С. Серовар определяют в реакции агглютинации. Выявленную культуру стрептококка проверяют на чувствительность к антибиотикам методом дисков.
Серодиагностика: устанавливают наличие специфических антигенов в крови больного с помощью РСК или реакции преципитации. Антитела к О-стрептолизину определяют для подтверждения диагноза ревматизма.
|
17. У больного, поступившего в урологическое отделение с высокой температурой, была взята для исследования моча, засеянная на жидкие и плотные универсальные среды. Через 24 часа был выявлен рост в виде круглых плоских слизистых колоний на плотной среде, в виде равномерной мути в жидкой среде. Кроме того, среды окрасились в сине-зеленый цвет. Сахаролитическая активность выделенной культуры оказалась низкой (только окисление глюкозы), протеолитическая активность – высокой, чувствительность к антибиотикам – низкой (только к цефалоспоринам). Какой микроорганизм вызвал заболевание? Какие иммунобиологические препараты можно назначить для лечения?
Ответ:P.aeruginosa (синегнойная палочка) - один из основных возбудителей локальных и системных гнойно - воспалительных процессов в условиях медицинских стационаров.
патогенным потенциалом в особенно у ослабленных больных, обладают и другие виды - P.putida. P.fluorescens, P.(Xanthomonas) maltophilia
Лечение и специфическая профилактика. Специфической профилактики нет. При пищевых токсикоинфекциях и дисбактериозах кишечника, вызванных синегнойной палочкой, эффективен комплексный интести - бактериофаг, в состав которого входит псевдомонадный фаг. Интести-бактериофаг жидкий (лат. Bacteriophagum intestinalis fluidum) — антибактериальный иммунобиологический препарат для лечения заболеваний желудочно-кишечного тракта.
Действующее вещество интести-бактериофага: стерильные фильтраты фаголизатов шигелл (Shigella flexneri I, II, III, IV и VI типов и Shigella sonnei),сальмонелл (Salmonella paratiphiA и В, Salmonella tiphimurium, Salmonella infantis, Salmonella cholerasuis, Salmonella oranienburg, Salmonella enteritidis), этиологически значимых серотипов энтеропатогенных Escherichia coli,протеев Proteus vulgaris и Proteus mirabilis, энтерококков,стафилококков,псевдомонад Pseudomonas aeruginosa. Из антибактериальных препаратов чаще применяют аминогликозиды, цефалоспорины и хинолоны.
|
16. При микроскопировании мазков, приготовленных из раневого отделяемого, были выявлены крупные палочки с центрально расположенной спорой. Материал затем был посеян на питательный агар в чашки Петри. Через трое суток был обильный рост посторонней микрофлоры, колоний клостридий не было обнаружено, на основании чего диагноз «клостридиальная раневая инфекция» был отвергнут. Правилен ли вывод врача? Какой метод диагностики был применен? В чем заключается методические погрешности?
|
15. У больного с подозрением на менингококковую инфекцию были сделаны мазки со слизистой оболочки верхних отделов носоглотки. В мазках выявили многочисленные грамотрицательные диплококки и поставили диагноз «менингит». Дальнейшее исследование было решено не проводить. Достаточно ли результатов бактериоскопического исследования для окончательного заключения? Прав ли врач-бактериолог?
Ответ: Бактериоскопического метода недостаточно для постановки диагноза, так как некоторые другие микроорганизмы могут иметь сходную морфологию. Необходимо провести Бактериологическое исследование с целью выделения и идентификации чистой культуры менингококка подвергают носоглоточную слизь, кровь и ликвор. Посев материала для получения чистой культуры производят на плотные или полужидкие питательные среды, содержащие сыворотку, кровь или асцитическую жидкость. Культуры инкубируют в течение 18-24 ч при 37 "С в сосуде со свечой или в специальном термостате с повышенным содержанием (8—10 %) СО2. Идентификацию выделенной культуры проводят на основании следующих свойств: круглые бесцветные нежные колонии маслянистой консистенции, не дает гемолиза
• оксидазаположительные колонии • образованием уксусной кислоты при ферментации глюкозы и мальтозы (но не лактозы, сахарозы и фруктозы);* принадлежность к серогруппам определяют в реакции агглютинации (РА).
|
14. В бактериологическую лабораторию поступило несколько образцов кожи КРС для определения зараженности возбудителем сибирской язвы. Какой экспресс-метод исследований следует применить для этой цели? Что необходимо иметь в наличии в лаборатории? Каковы действия в случае положительного заключения?
Ответ: По эпидемиологическим показаниям исследуют различные объекты внешней среды, а также шерсть и щетину животных. Все образцы помещают в герметичные сосуды и транспортируют закупоренными в опломбированных боксах или деревянных ящиках в лаборатории особо опасных инфекций.
Микробиологическую диагностику проводят с соблюдением правил техники безопасности как при особо опасных инфекциях. Для диагностики применяют все пять методов микробиологической диагностики.
Первоначально готовят мазки и окрашивают их по Граму и для обнаружения капсул (по Романовскому Гимзе) и спор (по Ауэске). Наличие в мазках крупных грам-положительных стрептобацилл, окруженных капсулой, дает возможность поставить предварительный диагноз. Люминесцентная микроскопия применяется как дополнительный метод диагностики сибирской язвы, при этом сибиреязвенные бациллы, обработанные люминесцирующей сывороткой - палочки с ободком, светящиеся зеленоватым светом. Для выделения ЧК исследуемый засевают на МПА и МПБ, а также заражают лабораторных животных (белые мыши, морские свинки). Выделенную чистую культуру идентифицируют но общепринятой схеме с учетом морфологии, характера роста на МПА и МПБ, разжижения желатина в виде перевернутой елочки, отсутствия подвижности, положительного теста «жемчужного ожерелья» и лизиса сибиреязвенным бактериофагом «ВА-9» и «Саратов». Дополнительно определяют лецитиназную, фосфатазную и гемолитическую активность. В биопробе патологический материал или испытуемую культуру вводят подкожно: морским свинкам в паховой области, мышам в корень хвоста. Обычно мыши погибают через 1-2 суток, морские свинки — через 2-4 суток. Наблюдение за животными продолжают в течение 10 дней. У павших животных исследуют печень, селезенку, лимфатические узлы, почки, кровь из полостей сердца, места введения исследуемого материала. О наличии возбудителя сибирской язвы
свидетельствуют типичная патолог о-анатомическая картина у подопытных животных: отек в месте введения исследуемого материала, темная не свернувшаяся кровь, кровоизлияния в клетчатке, рыхлая селезенка и плотная красная печень. В мазках-отпечатках из органов и крови — наличие грамположительных капсулированных палочек. Серодиагностика проводится в тех случаях, когда не удается обнаружить возбудителя в материале. Для определения антител в сыворотке крови больного используют реакцию латексной агглютинации или РПГА с прогективным сибиреязвенным АГ. Сибиреязвенные антигены определяют в РИФ, ИФА, РСК, РИГА, РП в геле и реакции термопреципитации по Асколи. Реакция Асколи имеет большое значение, гак как позволяет обнаружить возбудитель при отрицательных результатах бактериологического исследования. Наличие сибиреязвенного антигена в разложившемся или мумифицированном трупе животного, коже (свежей, сухой, выделанной) и изделиях из нее, шкурках, мехе, шерсти определяют с помощью реакции термопреципитации но Асколи. Однако для прижизненной диагностики она не дает серьезных преимуществ перед бактериологическим и серологическим методами.
Для ретроспективной диагностики при эпидемиологических исследованиях ставят кожные аллергические пробы с антраксином. Антраксин вводят внутрикожно объемом 0,1 мл, результаты учитывают через 24—48 ч. Пробу считают положительной при наличии гиперемии диаметром более 16 мм и инфильтрата.
Дтя экстренной профилактики назначают сибиреязвенный иммуноглобулин. Не специфическая профилактика санитарно-ветеринарным мероприятиям:
• Изоляция больных и подозрительных животных.
• Сжигание трупов погибших животных и зараженных объектов (подстилка, навоз).
• Обеззараживание мест содержания больных животных.
• Очистка водопоев.
• Осушение заболоченных участков (перепахивание, хлорирование).
• Организация скотомогильников. При невозможности сжигания трупов их хоронят на отдельных сухих и пустынных участках; глубина ямы должна быть не меньше 2 м, труп кладут на толстый слой хлорной извести и засыпаю! ею сверху слоем до 10 см. Все мероприятия по захоронению следует проводить с соблюдением санитарных норм.
• Санитарный надзор за предприятиями, занятыми переработкой животного сырья. Все поступающее сырье проверяют в реакции термопреципитации по Асколи, меховые изделия изготовляют только из сырья, давшего отрицательный результат в этой реакции.
Реакция термопреципитации но Асколи. основана на обнаружении термостабильных антигенов Bacillus anthracis, которые экстрагируют физиологическим раствором из исследуемого материала. Сыворотку для осаждения (преципитации) получают при гипериммуннизации лошадей убитой культурой сибиреязвенного микроба. Если в исследуемом экстракте имеется антиген, то на границе его контакта с раствором сыворотки появляется тонкое кольцо помутнения.
|
18. При бактериоскопическом исследовании окрашенных по Граму мазков слизи из носоглотки больного морфологически специфичных микроорганизмов не было обнаружено. Так как состояние больного ухудшилось, повторно взятую мокроту засеяли на среду Клауберга и Борде-Жангу. На среде Клауберга через 36 часов появились прозрачные и беловатые мелкие колонии, на среде Борде-Жангу – мелкие колонии с ртутным блеском. Какие микроорганизмы являются вероятными возбудителями заболевания? Какова дальнейшая тактика врача-бактериолога?
Бактериологический метод
1. (коклюш)
Ответ: Возбудитель коклюша — Bordetella pertussis —был выделен из мокроты
S-форма, или 1 фаза по Лесли и Гарднеру, растут только на питательной среде, состоящей из картофельно-глицеринового агара с добавлением крови {среда Барде- Жангу).
Колонии палочки коклюша гладкие, блестящие, прозрачные, куполообразные с жемчужным или ртутным оттенком, размером около 1 мм в диаметре. Колонии бактерии паракоклюша по внешнему виду очень похожи на бактерии коклюша, но они более- крупные по размерам и появляются раньше, чем коклюшные колонии.
Колонии коклюшных и паракоклюшных микробов на среде Борде-Жангу окружены характерной зоной гемолиза.
Дифференциальными признаками бактерии пертуссис и бактерии параапертуссис служат данные серологических исследований (реакция агглютинации и биохимическая характеристика). Основные отличительные признаки, позволяющие дифференцировать коклюшные и паракоклюшные культуры: паракоклюшные растут при первых пересевах на простом агаре (без крови), на казеиново-угольном агаре и мясо-пептонном агаре
(особенно с добавлением тирозина), а также на кусочке картофеля, образуя коричневый пигмент, расщепляют мочевину, утилизируют цитраты.
Коклюшный микроб на простом агаре не растет, пигмента не образует и мочевину не расщепляет. Кроме того, антительной сывороткой коклюшные и паракоклюшные возбудители агглютинируются примерно до Vio титра. Также ставят пробу на уреазу — в пробирку с исследуемой культурой добавляют мочевину и фенолфталеин, пробирку встряхивают и ставят в термостат. Реакция (изменение цвета) может наступить через 15— 20 мин. Окончательный результат учитывается через 2 ч. Положительная реакция — окрашивание жидкости в малиновый цвет — свойственна культурам паракоклюшных бактерий.
|
19. В бактериологическую лабораторию поступил мазок с задней стенки глотки ребенка с подозрением на коклюш или паракоклюш. В связи с отсутствием реактивов для проведения РИФ материал методом кашлевых пластинок был засеян на питательный агар, КУА и среду Борде-Жангу. Через 24 часа обнаружили средних размеров бесцветныесеровато-кремовые (на КУА) и похожие на капельки ртути с небольшой зоной гемолиза (на среде Борде-Жангу) колонии. Среда КУА приобрела буро-коричневую окраску. Какой микроорганизм вызвал заболевание? Какие методы исследования следует провести, чтобы поставить окончательный диагноз?
1. ? (паракоклюш).
Ответ: Колонии палочки коклюша гладкие, блестящие, прозрачные, куполообразные с жемчужным или ртутным оттенком, размером около 1 мм в диаметре. Колонии бактерии паракоклюша по внешнему виду очень похожи на бактерии коклюша, но они более- крупные по размерам и появляются раньше, чем коклюшные колонии.
Бактерии коклюша. так же как атипичные и паракоклюшные. растут на обычных питательных средах. На полусинтетической среде — казеиново-угольном агаре (КУА) - колонии коклюшных микробов мелкие (0,5—1 мм), выпуклые, четко контурированные, блестящие, гладкие, серовато-кремового цвета и вязкой консистенции.
Колонии коклюшных и паракоклюшных микробов на среде Борде-Жангу окружены характерной зоной гемолиза (зона нерезко отграничена и распространяется диффузно в окружающую среду). Коклюшные микробы не редуцируют сахара, не образуют индола, не редуцируют нитратов и не используют цитратов. Коклюшный микроб - факультативный аэроб. Оптимальные условия культивирования 35-36 °С.
Дифференциальными признаками бактерии пертуссис и бактерии парапертуссис служат данные серологических исследований (реакция агглютинации и биохимическая характеристика). Проводят для подтверждения. Основные отличительные признаки, позволяющие дифференцировать коклюшные и паракоклюшные культуры: паракок-люшные растут при первых пересевах на простом агаре (без крови), на казеиново-угольном агаре и мясо-пептонном агаре
(особенно с добавлением тирозина), а также на кусочке картофеля, образуя коричневый пигмент, расщепляют мочевину, утилизируют цитраты.
Бактериологическеое исследование( окончательный ответ)
Коклюшный микроб на простом агаре не растет, пигмента не образует и мочевину не расщепляет. Кроме того, антительной сывороткой коклюшные и паракоклюшные возбудители агглютинируются примерно до Vio титра. Также ставят пробу на уреазу — в пробирку с исследуемой культурой добавляют мочевину и фенолфталеин, пробирку встряхивают и ставят в термостат. Реакция (изменение цвета) может наступить через 15— 20 мин. Окончательный результат учитывается через 2 ч. Положительная реакция — окрашивание жидкости в малиновый цвет — свойственна культурам паракоклюшных бактерий
|
18. В материале, полученном от больного, обнаружили грамположительные, расположенные под углом друг к другу, палочковидные бактерии с несколько утолщенными концами. Для каких патогенных микроорганизмов характерна подобная морфология? Какие дополнительные методы окрашивания можно предложить для уточнения морфологических особенностей возбудителя? Необходимо ли проведение дальнейшего исследования (да)?
Коринобактерии дифтерии
|
20. У больного с подозрением на дифтерию были взяты мазки со слизистой оболочки зева и носа. Микроскопически выявили грамположительные, расположенные под углом друг к другу, палочковидные бактерии с несколько утолщенными концами. Далее на среде Клауберга была выделена чистая культура Corynebacterium diphtheriae, на основании чего было дано положительное заключение о дифтерийной инфекции. Достаточно ли данных для подтверждения диагноза дифтерии? Если нет, то какие исследования еще можно провести?
Бактериоскопический, бактериологический
Ответ: Возбудитель дифтерии Corynebacterium diphtheriae (от coryne - булава, diphthera пленка) относится к роду Corynebacterium.
Дифтерийные бактерии — тонкие слегка изогнутые палочки длиной 3—5 мкм, шириной 0,3 мкм с характерным расположением в мазках: попарно, под углом друг к другу, напоминая цифру V. Концы палочек имеют булавовидные утолщения, содержащие зерна волютина (тельца Бабеша—Эрнста).
Для бактериологического исследования берут материал из- под пленки, а если ее нет (или при обследовании на носительетво) — слизь из зева и носа двумя тампонами раздельно. Предварительную бактериоскопию мазка с тампона проводят только по требованию лечащего врача. Посев делают на избирательные питательные среды параллельно: на свернутую сыворотку и среду Клауберга. Наличие роста и обнаружение при окраске по Леффлеру коринебактерии с характерной морфологией и расположением позволяют проводить дальнейшую идентификацию по биохимическим, антигенным свойствам и определению токсигенности. Последнее исследование имеет особенно важное значение при изучении культур, выделенных от бактерионосителей. Носители чаще всего выделяют нетоксигенные штаммы; заболевание же вызывают только токсигенные дифтерийные палочки.
Определяют токсигенность по методу Оухтерлони преципитацией в агаре.
Выделенную культуру в виде «бляшки» или штрихом засевают на поверхность агаровой среды в чашке Петри рядом с полоской фильтровальной бумаги, пропитанной дифтерийной антитоксической сывороткой (расположенной по диаметру чашки). Если культура токсигенна, то через 24—48 ч диффундирующий в питательную среду токсин в местах, где он «встречается» с сывороткой, также диффундирующей в агар, образует линии преципитации белого цвета.
|
21. В гнойном материале, полученном от больного, микроскопически выявлены грамотрицательные диплококки, вызывающие незавершенный фагоцитоз. При посеве на элективные среды (КДС, сывороточный агар) наблюдали рост колоний, напоминающих капли росы. Выделенная чистая культура возбудителя обладала низкой биохимической активностью (ферментировала только глюкозу). Какой возбудитель был выделен? Какие экспресс-методы диагностики можно было использовать?
1. (Гонококки)
Метод – экспресс: применяют встречный иммуноэлектрофорез. В качестве антигенов берут отделяемое из мочеиспускательного канала или шейки матки обследуемых. Источником антител служит гипериммунная антигонококковая сыворотка.
Ответ: Возбудитель- гонококк ( Neisseria gonorrhoeae). Для диагностики применяют бактериоскопический ( окраска.по Граму и метилен.синим),бактериологический (проводят когда гонококки в мазках не обнаруживают или находят атипичные, измененные формы), и серологический (используют при хронической гонорее, при отсутствии у больного выделений. Проводят РСК по Борде-Жангу, которая бывает положительной с 3-4 недели болезни. В качестве АГ для РСК применяют гоновакцину или АГ из убитых гонококков) методы. Метод – экспресс: применяют встречный иммуноэлектрофорез. В качестве антигенов берут отделяемое из мочеиспускательного канала или шейки матки обследуемых. Источником антител служит гипериммунная антигонококковая сыворотка.
(Суть метода встречного иммуноэлектрофореза заключается в следующем:
- исследуемые антигены и смесь антител помещают в лунки, расположенные на противоположных концах пластины с гелем;
- вдоль линии, соединяющей лунки, пропускают постоянный электрический ток;
- в электрическом поле антитела и антигены быстро перемещаются по направлению друг к другу;
- в месте связывания антигенов с антителами образуются линии преципитации.
Встречный иммуноэлектрофорез применяют, когда антигены и антитела обладают разной электрофоретической подвижностью. Этот метод позволяет быстро определить антитела в пробе и применяется в экспресс диагностике инфекционных заболеваниях.)
| | |
|
|
Скачать 85.67 Kb.