Микробиология. 1. отличия понятий контаминации и деконтаминации, дезинфекции и стерилизации, асептики и антисептики. Деконтаминация
 Скачать 1.85 Mb.
|
|
"HELPER" - https://vk.com/fastmedhelp 1. ОТЛИЧИЯ ПОНЯТИЙ КОНТАМИНАЦИИ И ДЕКОНТАМИНАЦИИ, ДЕЗИНФЕКЦИИ И СТЕРИЛИЗАЦИИ, АСЕПТИКИ И АНТИСЕПТИКИ. Деконтаминация – процесс уничтожения микробов на/в каких-либо объектах; то есть удаление. Контаминация - 1) попадание потенциально опасных для здоровья человека микроорганизмов на неживые объекты внешней среды (напр., продукты питания, лекарственные препараты), которые могут послужить фактором передачи болезни человеку; 2) внесение (попадание) микроорганизмов окружающей среды в чистые культуры микробов, питательные среды, исследовательский материал. Дезинфекция – комплекс мер, направленных на уничтожение на/в объектах конкретных патогенных микробов – возбудителей инфекционных болезней. Примеры патогенных микробов: стафилококк, энтерококк, стрептококк и другие резидентные виды бактерий, а также грибы рода Candida. Стерилизация – уничтожение всех микроорганизмов в веществе и на поверхности стерилизуемого объекта. Асептика – система профилактических мероприятий, направленных на предотвращение попадания микроорганизмов в рану, лекарственные препараты, питательные среды и другие объекты. Антисептика – комплекс мероприятий, направленных на уничтожение микробов, попавших в рану, лекарственный препарат или другой объект. (виды: механическая, физическая, химическая, биологическая) 2. СОВРЕМЕННЫЕ ТЕХНОЛОГИИ СТЕРИЛИЗАЦИИ И АППАРАТУРА. o Физические методы Действие высокой температуры, ионизирующего излучения, фильрование. ГЛАСС-ПЕРЛЕН (температура до 250 ° С). Изделия мед. Назначения подвергают дезинфекции и предстерилизационной очистке – направлены на профилактику ВБИ. o Газовая стерилизация Требует спец.оборудования и применяется для обработки оптики, кардиостимуляторов, сложной техники, изделий из полимеров, стекла, металлов, наконечников турбин стом.установок. Используют окись этилена или смесь ОБ [окись этилена+бромистый метил], озон и пары раствора формальдегида в этиловом спирте. Для поддержания температуры 35 °С или 55°С АНАЭРОСТАТЫ помещают в термостат или водяную баню. Для упаковки используют полиэтиленовую плёнку – два слоя – пергамент и спец.упаковосный материал. Стерилизованные газом изделия применяют после их выдержки – в течение 1-21 суток – в вентилируемом мопещении. Срок хранения стирильности – 5 лет, пергамнета или бумаги – 20 суток. Контроль процесса ведут по показаниям приборов! o Плазменная стерилизация Преимущества: § Высокая эффективность эрадикации микроорганизмов разных групп; "HELPER" - https://vk.com/fastmedhelp § Возможна эффективная комбинация с химической обработкой; кратковременная экспозиция от 10 до 15 минут; § Малые габариты аппарата, удобные для обработки стом.инструментов; компьютерное программирование режима стерилизации. 3. ВОЗДЕЙСТВИЕ ХИМИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ. АНТИСЕПТИКИ И ДЕЗИНФЕКТАНТЫ. Дезинфектанты – используются для обработки помещений, изделий или материалов. Антисептики – применяют для обработки кожи и слизистых оболочек человека, поэтому они не должны быть токсичными в используемых концентрациях. Факторы, определяющие выбор антимикробного агента: 1) Свойства химического вещества: эффективность действия антимикробного агента определяется его химической природой, концентрацией, температурой, рН, продолжительность контакта с зараженным объектом. 2) Характер микробиоты: чувствительность микроорганизма к веществу и уровень микробной контаминации определяют эффективность его действия. 3) Влияние факторов окружающей среды: - • Вода обеспечивает проникновение антимикробных веществ в клетку; • Органические вещества снижают активность антимикробных агентов за счет адсорбции, инактивации; • Некоторые полимерные материалы (ткани, резина) адсорбируют антимикробные агенты, снижая их концентрацию. Требования, предъявляемые к химическим дезинфектантам и антисептикам: § Хорошая растворимость или способность смешиваться с водой с образованием стойких смесей; § Низкая токсичность и отсутствие раздражающего действия на кожу и слизистые оболочки персонала; § Широкий спектр антимикробной активности, ее проявление в максимально короткое время; § Способность хорошо смачивать объекты и не оказывать на них коррозирующего или другого разрушающего действия; § Возможность удаления следов веществ из объекта; § Стабильность в процессе хранения; § Наличие разрешения на использование вещества в качестве дезинфектанта. 4. КЛАССИФИКАЦИЯ ИНСТРУМЕНТОВ, ПРИБОРОВ, СПОСОБОВ ОБРАБОТКИ И СРЕДСТВ ВОЗДЕЙСТВИЯ. "HELPER" - https://vk.com/fastmedhelp 5. СПОСОБЫ КОНТРОЛЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ ДЕЗИНФЕКЦИИ И СТЕРИЛИЗАЦИИ. ð КОНТРОЛЬ ЭФФЕКТИВНОСТИ ДЕЗИНФЕКЦИИ Контроль текущей и заключительной дезинфекции в очагах кишечных инфекций основан на обнаружении в исследуемом материале кишечной палочки; после дезинфекции в исследуемом материале кишесная палочка должна отсутствовать. Для контроля работы дезинфекторных камер используют эталонные культуры – стафилококк, споры антракоидной палочки. Качество – должны отсутствовать золотистый стафилококк, синегнойная палочка, бактерии группы кишечной палочки. Дезинфекция считается эффективной, если через 48 часов на чашках не вырастают колонии указанных микроорганизмов. • Физический метод: контролируется температурный режим (при помощи максимального термометра) и давление в камере парового стерилизатора (при помощи мановакуумметра). Максимальные термометры закладываются в контрольные точки стерилизационной камеры, количество которых зависит от объема камеры. • Бактериологический метод: контролируется эффективность воздействия на споры тест культуры в биотесте. В качестве биологических индикаторов для паровых стерилизаторов используется биотест со спорами тест-культуры Bacillus stearotermophilus (для паровых стерилизаторов), Bacillus licheniphormis (для воздушных стерилизаторов) • Химический метод: контролируется температура в стерилизационной камере при помощи химических индикаторов. ð КОНТРОЛЬ ЭФФЕКТИВНОСТИ СТЕРИЛИЗАЦИИ Несколько методов. 1) По показаниям приборов – мановауумметров, термометров, таймеров – максимальные термометры, физико-химические и биотесты помещают в определённые точки аппарата. 2) С использованием физико-химических тестов – вместе со стерилизуемым материалом в аппарат закладывают ампулы с кристаллами веществ или специальные бумажные термохимические индикаторы; при нужной температуре вещества расплавляются, а индикаторы меняют цвет. 3) Биологические тесты – в аппарат помещают флакончики с салфетками или бумажными дисками, пропитанными взвесью термостойкого спорообразующего микроба и после стерилизации их инкубируют в МПБ. 4) Молекулярно-генетические методы контроля- геноиндикация – используются в случае оценки стерилизации в отношении трудно-культивируемых бактерий или вирусов. ПОКАЗАТЕЛЬ ЭФФЕКТИВНОЙ РАБОТЫ СТЕРИЛИЗАЦИОННОЙ АППАРАТУРЫ – отсутствие роста тест-культуры в сочетании с удовлетворительными результатами физического и химического контроля либо отсутствие маркерных генов по данным ПЦР и гибридизации ДНК. 6. ПОНЯТИЕ О ВНУТРИБОЛЬНИЧНОЙ ИНФЕКЦИИ (ВБИ). ПРИМЕРЫ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ И ПУТЕЙ ПЕРЕДАЧИ. Инфекция считается внутрибольничной, если она впервые проявляется через 48 часов или более после нахождения в больнице, при условии отсутствия клинических проявлений этих инфекций в момент поступления и исключения вероятности инкубационного периода "HELPER" - https://vk.com/fastmedhelp • В зависимости от путей и факторов передачи ВБИ: o Воздушно-капельные (аэрозольные); o Вводно-алиментарные; o Контактно-бытовые; o Контактно-инструментальные; o Постинъекционные; o Постоперационные; o Послеродовые; o Посттрансфузионные; o Постэндоскопические; o Посттрансплантационные; o Постдиализные; o Постгемосорбционные; o Посттравматические инфекции; • От характера и длительности течения: o Острые; o Подострые; o Хронические. • По степени тяжести: o Тяжелые; o Средне-тяжелые; o Легкие формы клинического течения. • В зависимости от степени распространения инфекции: o Генерализованные инфекции: бактериемия (виремия, микемия), септицемия, септикопиемия, токсико-септическая инфекция (бактериальный шок и др.). o Локализованные инфекции o Инфекции кожи и подкожной клетчатки (ожоговых, операционных, травматический ран, постинъекционные абсцессы, омфалит,рожа, пиодермия, абсцесс и флегмона подкожной клетчатки, парапроктит, мастит, дерматомикозы и др.); o Респираторные инфекции (бронхит, пневмония, легочный абсцесс и гангрена, плеврит, эмпиема и др.); o Инфекции глаза (конъюнктивит, кератит, блефарит и др) Примеры ВБИ: туберкулёз, гастроэнтерит, синегнойная палочка, золотистый стафилококк. Для упаковки стерилизуемых изделий медицинского назначения применяют специальные виды бумаги, стерилизационные коробки/биксы, двойную мягкую упаковку из бязи и т.д. 7. МЕТАБОЛИЗМ БАКТЕРИЙ. АНАБОЛИЧЕСКИЕ И КАТАБОЛИЧЕСКИЕ ПРОЦЕССЫ В КЛЕТКЕ. В процессе метаболизма выделяют два вида обмена: пластический/конструктивный (анаболизм – с затратой энергии – и катаболизм – с выделением энергии) и энергетический (дыхание и брожение). "HELPER" - https://vk.com/fastmedhelp Анаболизм включает реакции, обеспечивающие синтез макромолекул органических соединений, из которых строится тело микробной клетки, и протекает с поглощением энергии. В процессе катаболизма происходит расщепление крупных молекул до более простых соединений, при этом рвутся химические связи и освободившаяся энергия этих связей идёт на процессы ж/д или запасается в клетке в виде фосфосодержащих органических соединений (АТФ, УДФ, волютин). Особенность метаболизма бактерий – высокая интенсивность. Это обусловлено тем, что: 1) Интенсивность метаболизма прямопропорциональна отношению величины площади ЦПМ к объёму клетки – правило Рубнера. 2) Бактерии – самые ферментативно насыщенные биологические системы. Они синтезируют до 3000 белков, основная часть которых ферменты. 3) Клеточная стенка и ЦПМ характеризуются высокой проницаемостью. 4) Бактерии обладают способностью выделять ферменты в окр.среду – внеклеточное расщепление субстрата. 8. КЛАССИФИКАЦИЯ БАКТЕРИЙ ПО ТИПАМ ПИТАНИЯ. ИСТОЧНИКИ УГЛЕРОДА По типу питания: • АВТОТРОФЫ – способны строить сложные соединения углерода из CO 2 и H 2 O. Нитрифицирующие бактерии, железобактерии. • ГЕТЕРОТРОФЫ- нуждаются в готовых соединениях. Подразделяются на: § САПРОФИТЫ – используют готовые орг.соединения, но НЕ ЗАВИСЯТ от других организмов. Примеры: микробы, вызывающие процессы гниения и брожения. § ПАРАЗИТЫ – это микробы, зависимые в получении питательных веществ от макроорганизма. Виды: облигатные – способны размножаться только в живой клетке, они не растут на питательных средах – и факультативные. Риккетсии и хламидии. ИСТОЧНИКИ АЗОТА o ПРОТОТРОФЫ – микробы, способные синтезировать все необходимые орг.соединения из глюкозы и солей аммония. o АУКСОТРОФЫ – микробы, нуждающиеся в готовых факторах роста – аминокислотах, витаминах, пуриновых и пиримидиновых основаниях. ИСТОЧНИКИ ЭНЕРГИИ ð ФОТОТРОФЫ – способны использовать энергию солнечного света; ð ХЕМОТРОФЫ – получают энергию за счёт хим.реакций. a) Хемолитотрофы – получают энергию при расщеплении неорг. соединений. b) Хемоорганотрофы – получают энергию при расщеплении орг.соединений; 9. ОСНОВНЫЕ МЕХАНИЗМЫ ПОСТУПЛЕНИЯ ПИТАТЕЛЬНЫХ ВЕЩЕСТВ В БАКТЕРИАЛЬНУЮ КЛЕТКУ. 1) ПРОСТАЯ ДИФФУЗИЯ – вещества поступают в клетку ПО градиенту концентраций БЕЗ затрат энергии. Так в клетку поступает вода и ограниченное число веществ. 2) ОБЛЕГЧЕННАЯ ДИФФУЗИЯ – вещества поступают ПО градиенту концентраций, БЕЗ затрат энергии, НО ПРИ УЧАСТИИ ферментоподобных белков переносчиков – пермеаз. "HELPER" - https://vk.com/fastmedhelp 3) АКТИВНЫЙ ТРАНСПОРТ –вещества поступают ПРОТИВ градиента концентраций с участием пермеаз. Концентрация веществ в микробной клетке выше, чем в питательной среде => с затратом энергии. 4) ТРАНСЛОКАЦИЯ –похож на активный, но переносимая молекула видоизменяется в процессе переноса. 10. ТРЕБОВАНИЯ К ПИТАТЕЛЬНЫМ СРЕДАМ. Питательные среды являются основой микробиологической работы, и их качество нередко определяет результаты всего исследования. Среды должны создавать оптимальные (наилучшие) условия для жизнедеятельности микробов. Среды должны соответствовать следующим условиям: 1) Быть питательными, т.е. содержать в легко усвояемом виде все вещества, необходимые для удовлетворения пищевых и энергетических потребностей. Ими являются источники органогенов и минеральных (неорганических) веществ, включая микроэлементы. Ми- неральные вещества не только входят в структуру клетки и активизируют ферменты, но и определяют физико-химические свой- ства сред (осмотическое давление, рН и др.). При культивировании ряда микроорганизмов в среды вносят факторы роста − витамины, некоторые аминокислоты, которые клетка не может синтезировать; 2) Иметь оптимальную концентрацию водородных ионов − рН, так как только при оптимальной реакции среды, влияющей на проницаемость оболочки, микроорганизмы могут усваивать питательные вещества.Для большинства патогенных бактерий оптимальна слабощелочная среда (рН 7,2−7,4). Исключение составляют холерный вибрион − его оптимум находится в щелочной зоне (рН 8,5−9,0) и возбудитель туберкулеза, нуждающийся в слабокислой реакции (рН 6,2−6,8). Чтобы во время роста микроорганизмов кислые или щелочные продукты их жизнедеятельности не изменили рН, среды должны обладать буферностью, т.е. содержать вещества, нейтрализующие продукты обмена; 3) Быть изотоничными для микробной клетки, т.е. осмотическое давление в среде должно быть таким же, как внутри клетки. Для большинства микроорганизмов оптимальна среда, соответствующая 0,5 % раствору натрия хлорида; 4) Быть стерильными, так как посторонние микробы препятствуют росту изучаемого микроба, определению его свойств и изменяют свойства среды (состав, рН и др.); 5) Плотные среды должны быть влажными и иметь оптимальную для микроорганизмов консистенцию; 6) Обладать определенным окислительно-восстановительным потенциалом, т.е. соотношением веществ, отдающих и принимающих электроны, выражаемым индексом RH2. Этот потенциал показывает насыщение среды кислородом. Для одних микроорганизмов нужен высокий потенциал, для других − низкий. Например, анаэробы размножаются при RH2 не выше 5, а аэробы − при RH2 не ниже 10. Окислительно- восстановительный потенциал большинства сред удовлетворяет требованиям к нему аэробов и факультативных анаэробов; 7) Быть по возможности унифицированным, т.е. содержать постоянные количества отдельных ингредиентов. Так, среды для культивирования большинства патогенных бактерий должны содержать 0,8−1,2 мл аминного азота NH2, т.е. суммарного азота аминогрупп аминокислот и низших полипептидов; 2,5−3,0 гл общего азота N; 0,5 % хлоридов в пересчете на натрия хлорид; 1 % пептона. Желательно, чтобы среды были прозрачными − удобнее следить за ростом культур, легче заметить загрязнение среды посторонними микроорганизмами. 11. КЛАССИФИКАЦИЯ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД, ИХ ПРИМЕНЕНИЕ. "HELPER" - https://vk.com/fastmedhelp Потребность в питательных веществах и свойствах среды у разных видов микроорганизмов неодинакова. Это исключает возможность создания универсальной среды. Кроме того, на выбор той или иной среды влияют цели исследования. • Исходные компоненты. По исходным компонентам различают натуральные и синтетические среды. § Натуральные среды готовят из продуктов животного и растительного происхождения. В настоящее время разработаны среды, в которых ценные пищевые продукты (мясо и др.) заменены непищевыми: костной и рыбной мукой, кормовыми дрожжами, сгустками крови и др. Несмотря на то, что состав питательных сред из натуральных продуктов очень сложен и меняется в зависимости от исходного сырья, эти среды нашли широкое применение. § Синтетические среды готовят из определенных химически чистых органических и неорганических соединений, взятых в точно указанных концентрациях и растворенных в дважды дистиллированной воде. Важное преимущество этих сред в том, что состав их постоянен (известно, сколько и какие вещества в них входят), поэтому эти среды легко воспроизводимы. • Консистенция (степень плотности). Среды бывают жидкие, плотные и полужидкие. Плотные и полужидкие среды готовят из жидких веществ, к которым для получения среды нужной консистенции прибавляют обычно агар-агар или желатин. Агар-агар − полисахарид, получаемый из определенных сортов морских водорослей. Он не является для микроорганизмов питательным веществом и служит только для уплотнения среды. В воде агар плавится при 80−100 °С, застывает при 40−45 °С. Желатин − белок животного происхождения. При 25−30 °С желатиновые среды плавятся, поэтому культуры на них обычно выращивают при комнатной температуре. Плотность этих сред при рН ниже 6,0 и выше 7,0 уменьшается, и они плохо застывают. Некоторые микроорганизмы используют желатин как питательное вещество — при их росте среда разжижается. Кроме того, в качестве плотных сред применяют свернутую сыворотку крови, свернутые яйца, картофель, среды с селикагелем. • |