Билет 1 Элективные среды, их назначение
 Скачать 310.5 Kb.
|
|
БИЛЕТ №9 1. Дифференциально-диагностические среды. Их назначения. Дифференциально-диагностические-среды,позволяющие отличать одни виды бактерий от других по их ферментативной активности или культуральным проявлениям.В их состав входит:МПБ или МПА,определенный химический субстрат,различное отношение к которому является диагностическим признаком для данного микроба и индикатор,который свидетельствует о биохимической реакции.К таким средам относят:Среды Эндо,Плоскирева,Гисса.Среда Эндо состоит из МПА,1% лактозы и индикатора(основного фуксина,обесцвеченного сульфитом натрия).Свежеприготовленная среда имеет бледно-розовую окраску,при росте лактозоположительных бактерий(эшерехий) их колонии окрашиваются в темно-красный цвет с металлическим блеском.Лактозоотрицательные бактерии образуют бесцветные колонии.Среда Плоскирева содержит МПА,лактозу и индикатор-нейтральный красный.Является также селективной средой.Среда Гисса состоит из 1% пептонной воды,1% углевода и индикатора Андреде(кислый фуксин в 1н. растворе гидроксида натрия).В пробирку со средой опускают попловок(стеклянная трубка,один уонец которой запаян) для улавливания газообразных продуктов ,образующихся при разложении углеводов.Свежеприготовленная среда имеет слегка желтый оттенок,приразложении углеводов она приобретает красный цвет. 2.Дисмикробиоценоз. Факторы, влияющие на его формирование. 3.Стерилизация ионизирующим излучением. Стерилизация ионизирующим излучением - В настоящее время все шире используют радиационный метод (гамма-излучение, ускоренные электроны) для стерилизации перевязочного материала, хирургического инструментария, фармацевтических препаратов, сывороток, пищевых продуктов и других предметов. Гамма- и рентгеновские лучи - волны, обладают значительной проникающей способностью. Чтобы задержать лучи, необходим защитный слой, например слой бетона толщиной 60 - 70 см. Стерилизационный эффект ионизирующего излучения является результатом воздействия на обменные процессы клетки, тогда как радиоактивное и инфракрасное излучение, высокочастотные колебания оказывают свое бактерицидное действие с помощью тепла, развиваемого в обрабатываемом предмете. Любая форма облучения вызывает изменения в белках, нуклеиновых кислотах и других составных элементах клетки, обусловливающих ее жизнедеятельность. Существует много факторов, снижающих и увеличивающих чувствительность микроорганизмов к ионизирующему облучению: наличие влаги, кислорода, сульфгидрильных и других защитных соединений, высушивание, свойства субстрата, рН среды, температура и др. Применение ионизирующей радиации имеет ряд преимуществ перед тепловой стерилизацией. При стерилизации с помощью ионизирующего излучения температура стерилизуемого объекта поднимается незначительно, в связи с чем такие методы называют холодной стерилизацией. 4.Эндотоксины бактерий. Химический состав, основные свойства. Отличие от белковых токсинов. Эндотоксины- ЛПС, которые содержатся в стенке грамм- бактерий. Они более устойчивы к температуре, менее ядовиты, малоспецифичны, слабо иммуногены. Некоторые бактерии способны одновременно синтезировать как эндотоксины, так и белковые токсины. Ех: возбудитель холеры, чумы сальмонеллеза. Экзотоксины- белковые токсины- описано выше 80 различных экзотоксинов, которые различаются по молекулярной массе, химической структуре. Они обладают высокой иммуногенностью, поэтому они могут вызывать иммунный ответ. По отношению к температуре различают термолабильные и термостабильные. Все экзотоксины состоят из 2х составных частей.1 является рецептором и служит для фиксации молекулы токсина, 2- собственно токсический фрагмент – проникает внутрь клетки , блокируя жизненно важные метаболические реакции. Высокая токсичность объясняется особенностью строения токсического фрагменты, имитирующего структуру гормонов, ферментов и нейромедиаторов. Специфичность токсического действия определяется избирательной фиксацией токсина на рецепторах клеток мишеней определенных тканей. Из них выделяют 4 группы: Цитотоксины - блокируют синтез белка насубклеточном уровне, выводят из сторя фермент трансферразу 2. + дермонекротоксины (поражают клетки кожи) и энтеротоксины (поражают клетки слизистой кишечника). Мембранотоксины- повышают проницаемость мембраны эритроцитов и лейкоцитов, вызывая их гибель. Функциональные блокаторы- активизируют клеточную аденилатциклазу, приводя к повышению проницаемости стенки тонкой кишки и увеличению выхода жидкости в ее просвет.(холероен)+ токсикоблокаторы (инактивируютаденилатциклазу.Ех.сибиреязвенной и чумныепалочки) + нейротоксины ( блокуруют передачу нервных импульсов) Эксфолиатины (золотистый стафиллоккок) и эритрогенины (скарлатинозный стрептоккок) влияют на процессы межклеточного взаимодействия. АНАТОКСИНЫ.Некоторые токсины (столбнячный, дифтерийный, ботулинистический, гангренозный) под действием формалина утрачивают свою ядовитость, сохраняя при этом иммуногенные свойства. ЗАДАЧА У больного пневмонией в мокроте обнаружены грамположительные кокки скоплениями в виде виноградной грозди. Какой микроорганизм вызвал пневмонию. Какие питательные среды необходимо использовать для выделения чистой культуры этого микроба. Какую группу по типу питания относится данный микроорганизм Каковы этапы выделения чистой культуры. Стафилококки. В большинстве же случаев для точного установления патогенности обнаруженных стафилококков требуется выделить эти микроорганизмы в чистой культуре путем посева исследуемого материала на плотные питательные среды. Стрептококки плохо растут на простых питательных средах. Обычно используют среды с кровью или сывороткой крови. Чаще применяют сахарный бульон и кровяной агар, содержащий 5% дефибринированной крови. На плотных средах чаще образуют очень мелкие колонии. На плотных средах стрептококки группы А образуют колонии трех типов:- мукоидные (напоминают капельку воды) - характерны для вирулентных штаммов, имеющих капсулу;- шероховатые - плоские, с неровной поверхностью и фестончатыми краями - характерны для вирулентных штаммов, имеющих М- антигены;- гладкие - характерны для маловирулентных штаммов .Предпочитают газовую смесь с 5% СО2. Способны образовывать L- формы. Для выделения чистой культуры микробов, с трудом культивируемых на питательных средах, в частности, пневмококков, используют биологический метод- заражение наиболее восприимчивых к данному виду возбудителя животных. После гибели или появления признаков заболевания животных забивают и производят посев крови и органов на питательные среды и микроскопическое исследование мазков-отпечатков из органов. Далее исслед-е проводят как в методе Дригальского. Метод Дригальского включает три этапа.Первый этап:из исследуемого материала готовят мазок,окрашивают его по Граму и др. методом и микроскопируют.Материал наносят петлей на всю поверхность питательной среды.После посева петлю стерилизуют,чашку подписывают на донышке и ставят вверх дном в термостат при температуре 37 на 18-24 часа.Второй этап:на следующий день посевы изучают на изолированные колонии и описывают характер роста.Изучают морфологию бактерий путем приготовления мазка,окрашенного поГраму.Далее для выделения чистой культуры производят пересев колонии в пробирку со скошенным МПА.Пробирки помещают термостат при температуре 37 на 18-24 часа.Третий этап:отмечаюют рост выделенной чистой культуры.При микроскопическом исследовании мазка из чистой культуры в нем обнаруживаются морфологически и тинкториально однородные клетки. По типу питания- анаэробы БИЛЕТ №10 1) Питание бактерий. Источники углерода, азота, минеральных веществ. Механизм переноса питательных веществ в бактериальной клетке. В качестве питательных веществ бактерии используют различные органические и минеральные вещества.Свою потребность в воде и водороде бактерии удовлетворяют через воду.1) По способу углеродного питания бактерии делят на две группы -автотрофы и гетеротрофы. Автотрофы - организмы, которые полностью удовлетворяют свои потребности в углероде за счет СО2. Гетеротрофы - которые удовлетворяют свои потребности в углерода за счет готовых органических соединений. ( Сапрофиты - гетеротрофы, источником питания которых служат мертвые органические субстраты. Паразиты - живут за счет живых организмов). В зависимости от источника энергии бактерии подразделяются: 1)Фототрофы - способны использовать энергию солнечного света (сапрофитные микроорганимы, цианобактерии (сине-зеленые водоросли), пурпурные и зеленые бактерии и архебактерии. Хемотрофы - организмы, получающие энергию за счет окислительно- восстановительных реакций. В зависимости от того, какими донорами электронов пользуются бактерии, их разделяют на литотрофы и органотрофы. Литотрофы - организмы, использующие неорганические доноры электронов Н2. NH3, Н2S, Fe и др. Органогрофы - организмы, в качестве доноров электронов использующие органические соединения. По способу углеводного питания : 1. Фотолитотрофы - организмы, источником энергии для которых служит солнечный свет. донорами электронов - неорганические соединения. 2. Хемолитотрофы - организмы, получающие энергию за счет окислительно- восстановительных реакций, донорами электронов которых служат неорганические соединения. К данной группе относятся сапрофитные бактерии. 3. Хемоорганотрофы - организмы, получающие энергию за счет окислительно- восстановительных реакций, донорами электронов которых служат органические соединения. Большинство патогенных бактерий относится к данной группе. По способу азотного питания: Аминоавтотрофы - организмы, способные полностью удовлетворять свои потребности в азоте, необходимым главным образом для синтеза белков и нуклеиновых кислот, с помощью атмосферного или минерального азота. К их числу относятся азотфиксирующие бактерии, свободно живущие в почве и нитрофицирующие бактерии, которые в качестве основного источника азота используют соли аммиака, азотистой и азотной кислот. Аминогетеротрофы - организмы, для роста и размножения нуждающиеся в различных органических азотистых соединениях. Пассивная диффузия происходит в направлении от большей концентрации к меньшей (по градиенту концентрации). Не требует затраты энергии. Таким путем в клетку проникает и покидает ее вода вместе с растворенными в ней различными мелкими молекулами, способными проходить через поры мембраны. Облегченная диффузия протекает с участием специфичных белков - пермиаз, локализованных в мембране. Пермиазы распознают и связывают молекулу субстрата на внешней стороне мембраны и осуществляют ее перенос через мембрану На внутренней стороне мембраны комплекс пермеаза-субстрат диссоциирует, освободившаяся молекула субстрата включается в общий метаболиз клетки, а пермеаза вновь готова повторить цикл переноса своего субстрата. Облегченная диффузия происходит только по градиенту концентрации, поэтому она не требует затраты энергии. Активный транспорт осуществляется специфическими пермиазами против градиента концентрации, поэтому он требует затраты энергии. Большинство веществ проникает в клетку именно этим путем. В процессе переноса может происходить химическая модификация веществ - например фосфорилирование углеводов. Так при участии фосфотрансферазной системы транспортируются многие сахара и их производные в процессе переноса фосфорилируются и поступают в клетку в виде сахофосфатов 2)Микрофлора организма человека и её роль в нормальных физиологических процессах и патология. Термин «Нормальная микрофлора» объединяет микроорганизмы, более или менее часто выделяемые из организма здорового человека. Нормальная микрофлора играет важную роль в защите организма от патогенных микробов, например стимулируя иммунную систему, принимая участие в реакциях метаболизма. Нормальная микрофлора оказывает постоянное антигенное «раздражение» иммунной системы. Аr представителей нормальной микрофлоры вызывают образование АТ в низких титрах. Они представлены IgA, выделяющимися на поверхность слизистых оболочек. IgA составляют основу местной невосприимчивости к проникающим возбудителям и не дают возможности комменсалам проникать в глубокие ткани. Вклад в метаболизм: 1) Обеспечение всасывания. 2) Обмен витаминами и минеральными веществами. Обеспечение организма ионами Fe+, Са+, витаминами К, Д, группы ВЮ никотиновой, фолиевой, пантотеновой кислотами. Эта флора также способна привести к развитию инфекционных заболеваний. Неограниченная колонизация любым видом бактерий, способном выживать в организме человека, может приводить к развитию инфекционной патологии. Различные члены микробных сообществ проявляют патогенные свойства разного порядка. 3)Методы контроля стерилизации высокой температурой. Стерилизация- обеспложивание, т.е. полное уничтожение вегетативных форм микроорганизмов и их спор в различных материалах. Пастеризация. Метод позволяет уничтожать микроорганизмы инкубацией материала при 71,1 С в течение 15 с с последующим быстрым охлаждением (быстрая пастеризация). Медленная подразумевает более длительную экспозицию( 30 мин) при 60 С. К этому методу чувствительны не все микроорганизмы. Применят при обработке пищевых продуктов для профилактики кишечных инфекций, ЖК форм туберкулеза и Ку-лихорадки. Стерилизация сухим жаром. Проводят в сухожаровых шкафах при 160 С в течение 2 ч; метод позволяет уничтожать не только вегетирующие клетки ( погибают в теч.нескольких минут), но и споры микроорганизмов ( 2 ч). Такие воздействия разрушают структуру большинства органических соединений, и ведут к значительному испарению жидкостей (воды из питательных сред). Автоклавирование (стерилизация текучим паром) включает обработку горячим паром (121 С) под высоким давлением (1,2 -1,5 атм); наиболее эффективно для стерилизации термостабильных жидкостей. Термоустойчивые споры микроорганизмов погибают в течение 15 минут. Обработка больших объемов (500 мл) требует более длительной экспозиции. В лабораториях применяют специальные паровые котлы- автоклавы с горизонтальной или вертикальной загрузкой. Текучий пар нельзя применять для стерилизации сред, содержащих углеводы, молоко и желатина. Тиндализация- метод дробной стерилизации при низких температурах- ежедневное прогревание сред при 56-58 С в течение 5-6 сут. В результате такого дробного прогрева погибают вегетативные клетки бактерий, проросших из термостойких спор. Основной недостаток- невозможность полной элиминации микроорганизмов, так как некоторые споры не успевают прорастать во временных интервалах между сеансами прогревания, а некоторые вегетативные клетки успевают образовать термостабильные споры. Метод применяют для стерилизации сыворотки крови, асцитической жидкости и т. Д. Физические методы стерилизации: Прокаливание в пламени спиртовки или газовой горелки( применяется для стерилизации бактериологических петель, пинцетов, препаровальных игл) Стерилизация кипячением(шприцы, мелкие хирургические инструменты, предметы и покровные стекла) Стерилизация сухим жаром или суховоздушная стерилизация в сушильном шкафу (печи Пастера). (стерилизуют стеклянную посуду: чашки Петри, пробирки, пипетки и др.) Стерилизация текучим паром в аппарате хоха или автоклаве. (применяется в тех случаях, когда стерилизуемый материал не выдерживает высокой температуры, например питательные среды с витаминами, углеводами. Тиндализация (применяется для стерилизации легко разрушающихся при высокой температуре в-в (сыворотка крови, витамины и др.) Пастеризация (пастеризуют напитки и пищевые продукты (вино, пиво, соки, молоко и др.) Стерилизация УФ-лучами Механическая стерилизация фильтрование): Данный метод основан на механической задержке микроорганизмов и их спор мелкопористыми фильтрами с определенным d пор. Фильтрование используют для стерилизации жидких материалов, не выдерживают нагревания (сыворотка крови, антибиотики, для получения бактериальных токсинов, фасов разных продуктов жизнедеятельности бактерий. Химические методы стерилизации: используют различные химические вещества обладающие бактерицидным свойством, но в лабораторной практике применяют ограниченно. 4)Пути проникновения микроба в организм. Входные ворота. Место проникновения патогенных микробов в организм называется входными воротами инфекции. ....В естественных условиях заражение происходит через пищеварительный тракт (алиментарный путь) , когда в пищу или в воду попадают патогенные микроорганизмы. ....Болезнетворное начало может проникать через поврежденные, а при некоторых инфекционных болезнях (бруцеллез) и неповрежденные слизистые оболочки рта, носа, глаз, мочеполовых путей и кожу. Любая инфекционная болезнь, представляет собой заболевание всегоорганизма. Если патогенные микробы проникли в кровеносные сосуды и начинают размножаться в крови, то они очень быстро проникают во все внутренние органы и ткани. Она характеризуется быстротой и злокачественностью течения и нередко заканчивается смертельным исходом. ЗАДАЧА В инфекционную больницу поступил больной с подозрением на дизентерию. При посеве испражнений больного на среду Плоскирева были получены колонии, имеющие различную окраску: одни колонии были крупные, розового цвета, другие-мелкие, бесцветные. Из этих колоний были получены чистые культуры. К какой группе сред относится среда Плоскирева и каково её назначение Какие дополнительные исследования необходимо провести для дифференциации возбудителя дизентерии от других палочковидных бактерий, находящихся в испражнениях больного. Агар Плоскирева — селективная среда для выделения шигелл и сальмонелл. Готовая средапрозрачна, имеет розовато-желтоватый цвет. Среда Плоскирева относится к плотным средам для выделения чистых культур. В состав среды Плоскирева входят ингибирующие вещества (желчные соли, бриллиантовый зеленый, йод) серологическое исследование — постановка реакции агглютинации с сывороткой больного и различными диагностикумами из дизентерийных микробо, внутрикожная аллергическая проба с дизентерином. |