Билет 1 Элективные среды, их назначение
 Скачать 310.5 Kb.
|
|
БИЛЕТ №11 1) Метаболизм бактерий. Конститутивные и индуцибельные ферменты бактерий. Обмен веществ и энергии в клетке - называется метаболизмом Он представляет собой совокупность двух противоположных, но взаимосвязанных процессов - катаболизма, или энергетического метаболизма, и анаболизма, или пластического метаболизма. Анаболизм - совокупность биохимических реакций, осуществляющих синтез компонентов клетки. Катаболизм - совокупность реакций, обеспечивающих клетку энергией, необходимой, в частности, для пластического обмена. У бактерий выделяют эндо и экзо ферменты. Эндо ферменты располагаются в цитоплазме и ЦПМ. Экзо ферменты выделяются в окружающую среду. У бактерий различают 3 основные гр. ферментов: 1.конститутивные - постоянно синтезируются в микробных клетках 2.индуцибельные - синтез которых индуцируется определенным субстратом. 3. репрессибельные – синтез их подавляется в результате избыточного накопления продукта реакции катализируемой данным ферментом. 2) Формирование микробных биоценозов в различные возрастные периоды. Новорожденные стерильные. Первые бактерии заселяются при прохождении по естественным родовым путям. Постепенное заселение ЖКТ при естественном ( лактобацилюс бифидус) вскармливании и искусственном ( лактобацилюс ацидофилюс).Верхние дыхательные пути и кожа заселяются микрофлорой матери и персонала. С течением времени бактерий становится все больше. 3) Пастеризация и тиндализация. Пастеризация. Метод позволяет уничтожать микроорганизмы инкубацией материала при 71,1 С в течение 15 с с последующим быстрым охлаждением (быстрая пастеризация). Медленная подразумевает более длительную экспозицию( 30 мин) при 60 С. К этому методу чувствительны не все микроорганизмы. Применят при обработке пищевых продуктов для профилактики кишечных инфекций, ЖК форм туберкулеза и Ку-лихорадки. Тиндализация- метод дробной стерилизации при низких температурах- ежедневное прогревание сред при 56-58 С в течение 5-6 сут. В результате такого дробного прогрева погибают вегетативные клетки бактерий, проросших из термостойких спор. Основной недостаток- невозможность полной элиминации микроорганизмов, так как некоторые споры не успевают прорастать во временных интервалах между сеансами прогревания, а некоторые вегетативные клетки успевают образовать термостабильные споры. Метод применяют для стерилизации сыворотки крови, асцитической жидкости и т. Д. 4) Распространение бактерий, вирусов, токсинов в организме: бактериемия, септицемия, вирусемия, токсинемия. Бактериемия - наличие бактерий в крови (не размножаются в крови) Септицемия - микробы только размножаются в крови Токсиконемия – интоксикация, вызванная циркуляцией в крови экзо и эндотоксинов Септикониемия – микробы размножаются в крови и формируются новые очаги вопспаления Сепсис - заражение крови бактериями ЗАДАЧА В бак. Лабораторию доставлена мокрота от больного туберкулёзом. Какие методы выделения чистых культур кислотоустойчивых бактерий вы знаете Каковы этапы выделения чистой культуры Как проверить частоту выделенной культуры. Метод Коха, метод Дригальского, метод Шукевича. Метод Дригальского: Первый этап. Из исследуемого материала готовят мазок, окрашивают по Граму или другим методом и микроскопируют. В случае необходимости исследуемый материал для посева разводят стерильным раствором 0,9% NaCl. Материал захватывают петлей и наносят на поверхность питательной среды. Движения петли должны производиться последовательно по всей поверхности среды, при этом крышку чашки Петри приоткрывают левой рукой ограниченно так, чтобы могла пройти только петля. Послепосева петлю прожигают в пламени спиртовки. Чашки подписывают на донышке и ставят вверх дном в термостат при температуре 37 °С на 18-24 часа. Второй этап. На следующий день посевы просматривают и изучают изолированные колонии, описывая характер роста. Изучают морфологию бактерий исследуемых колоний путем приготовления мазка, окрашенного по методу Грама. Далее для выделения и накопления чистой культуры производят пересев колонии в пробирку со скошенным МПА. Пробирки подписывают и помещают в термостат при температуре 37 °С на 18-24 часа. Третий этап. На следующий день отмечают характер роста выделенной чистой культуры. Визуально чистая культуры характеризуется однородным ростом. При микроскопическом исследовании мазка, приготовленного из чистой культуры, в нем обнаруживаются морфологически и тинкториально однородные клетки. Для получения чистой культуры кислотоупорных бактерий (микобактерии туберкулеза) исследуемый материал обрабатывают 2% серной кислотой, уничтожающей сопутствующую флору. БИЛЕТ №12 1)Биохимические свойства микробов. Пигмента. Биохимические свойства бактерий. Они определяются способностью синтезировать разнообразные ферменты (сахаролитические и протеолитические), образовывать пигменты, токсины.Бактерии синтезируют ферменты 6ти классов. Ферментный состав любого микроба определяется его геномом и имеет таксономическое значение, широко применяясь для их систематики и идентификации. Пигменты образуют на все бактерии. Есть белый, золотистый, лимонно-жёлтый стафиллококки, желтый кремовый микробактерии туберкулеза. Пигменты защищают микробную клетку от Уфой радиации. 2)Микрофлора кожи. Микроорганизмы подвержены действию бактерицидных факторов сального секрета, повышающих кислотность . В подобных условиях Преимущественно живут staphylococcus epidermidis, микрококки, сарцины, аэроб и анаэроб дифтероиды. Другие виды: staphylococcus aureus, стрептококки-транзиторные. основная зона локализации - эпидермис, кожные железы, верхние отделы волосяных фолликулов. Первичная колонизация при родах. на исследования берут волосы, ногти, смывы с кожи, кусок кожи при травме 3)Автоклавирование, режим стерилизации. Что подвергается стерилизации в автоклавах. Автоклавирование (стерилизация текучим паром) включает обработку горячим паром (121 С) под высоким давлением (1,2 -1,5 атм); наиболее эффективно для стерилизации термостабильных жидкостей. Термоустойчивые споры микроорганизмов погибают в течение 15 минут. Обработка больших объемов (500 мл) требует более длительной экспозиции. В лабораториях применяют специальные паровые котлы- автоклавы с горизонтальной или вертикальной загрузкой. Текучий пар нельзя применять для стерилизации сред, содержащих углеводы, молоко и желатина. стеклянную посуду, завернутую в бумагу, перевязочный материал, халаты (в биксах). Кроме того, обеззараживают микробные культуры, отработанные питательные среды, посуду. 4) Динамика развития инфекционного процесса. При развитии инфекционного процесса различают стадии:1). Проникновение микроба и его адаптация.2) Образование продуктов жизнедеятельности, нарушение гомеостаза. 3) Распространиение инфекционного агента из очага проникновения по лимфе или крови. Периоды: 1) инкубационный- между проникновением агента и проявлением клинических признаков (только для экзогенных инфекций) Размножение, накопление, выделение токсинов. Часы-сутки-года. 2) продромальный- первоначальные клинические проявления: слабость. Головные боли, чувство разбитости 24-48 часов. 3) период развития болезни: индивидуальные признаки болезни тлт общие признаки инфекционной болезни- лихорадка, воспаления. а)нарастание симптомов б)расцвет болезни в)учащение проявлений. 4)Реконвалесценция- выздоровление. Кризис (быстр) и медленный (лизис) или переход в хроническое состояние или осложнения. Микробоносительство- когда возбудитель задерживается в организме, но подвергается «сдерживающему давлению» , потому не проявляет патогенных свойств и не вызывает клиническое проявление. При этом человек выделяет патогенные микробы в окружающую среду. Острое (3 мес). Хроническое (более 6 мес). Затяжное (6 мес) микробоносительство. ЗАДАЧА Семья А. Была госпитализирована в инфекционное отделение с симптомами ботулизма. Заболевание закончилось летальным исходом. При изучении причины возникновения интоксикации в бак. Лаборатории проведены исследования остатков рыбных консервов, которые употреблялись пострадавшими в пищу. В продуктах биологическим методом был выявлен ботулотоксин. Опишите свойства этого токсина. Основными свойствами ботулотоксина являются: 1) высокая устойчивость к действию протеолитических ферментов (пепсина, трипсина); 2) устойчивость к кислотам и, в частности, к кислому содержимому желудка; 3) слабая устойчивость и быстрая инактивация щелочами; 4) сравнительно небольшая устойчивость к нагреванию; 5) высокая устойчивость к низким температурам. БИЛЕТ №13 1) Бактериологический метод лабораторной диагностики. бактериологический — заключается в посеве исследуемого материала на питательные среды. Этот метод позволяет выделить возбудителя в чистом виде и изучить его морфологические признаки, ферментативную активность и идентифицировать его. Выделение чистой культуры аэробных бактерий. Метод Цейсслера. Первый этап. Из исследуемого материала готовят мазок, окрашивают по Граму или другим методом и микроскопируют. При обнаружении подозрительных на анаэробы микробов исследуемый материал засевают на среду Китта-Тароцци. В случае необходимости предварительно исследуемый материал разводят стерильным 0,9% раствором NaCl. Пробирки заливают слоем вазелинового масла или парафина, подписывают и ставят в термостат при температуре 37 °С на 18-24 ч. Второй этап. На следующий день посевы просматривают и описывают характер роста. Приготавливают мазки, окрашивают по Граму, микроскопируют, описывая морфологические и тинкториальные свойства бактерий. Затем производят пересев в чашки Петри на сахарно-кровяной агар, для получения изолированных колоний. Чашки помещают в анаэростат и термостатируют при температуре 37 °С 18-24 ч. Третий этап. Просматривают посевы, изучают изолированные колонии и описывают характер роста. Морфологию бактерий исследуют приготовлением мазка из колонии, окрашенного по методу Грама. Далее для выделения и накопления чистой культуры производят пересев подозрительной колонии в пробирку со средой Китта-Тароцци. Пробирки термостатируют 18-24 часа при температуре 37 °С. Четвертый этап. Отмечают визуальный характер роста чистой культуры Проводят проверку чистоты выделенной культуры, для чего ее микроскопируют (чистая культура морфологически и тинкториально однородна). Метод Вейнберга Первый этап проводят так же, как и при методе Цейсслера. Затем исследуемый материал, подращенный на среде Китта-Тароцци, последовательно разводят в пробирках с расплавленным и остуженным сахарным МПА. После чего его переносят в 3-5 пастеровских пипетки (трубки Виньяла). Засеянные пробирки быстро охлаждают холодной водой, при этом агар застывает и фиксирует разобщенное положение отдельных микробных клеток в глубине столбика агара. Пробирки термостатируют при температуре 37 °С 18-24 ч. Второй этап. Выросшие в узких пробирках колонии изучают с помощью лупы. На месте отобранной подозрительной колонии делают распил пробирки. колонию отбирают и пересевают на среду Китта-Тароцци. Пробирки культивируют в термостате 18-24 ч при температуре 37 °С. Третий этап. Через сутки проверяют чистоту выделенной культуры. Методы культивирования аэробных бактерий. Проблему выделения чистых культур решил Р.Кох. Он предложил исследуемый материал последовательно разводить в пробирках с расплавленным и остуженным до температуры 45-50 °С МПА (количество разведении зависит от исходной обсемененности материала). Затем содержимое каждой пробирки выливают в стерильную чашку Петри, которые помещают в термостат. На следующий день посевы изучают. Отбирают подозрительные колонии, изучают их макроскопически и микроскопически в окрашенных препаратах. Далее производят пересев колонии в пробирку со скошенным МПА. На следующий день проверяют чистоту выделенной культуры визуально и микроскопически. В настоящее время метод Коха применяется, в основном, для подсчета количества микробов в исследуемом материале. Метод Дригальского. Первый этап. Из исследуемого материала готовят мазок, окрашивают по Граму или другим методом и микроскопируют. В случае необходимости исследуемый материал для посева разводят стерильным раствором 0,9% NaCl. Материал захватывают петлей и наносят на поверхность питательной среды. Движения петли должны производиться последовательно по всей поверхности среды, при этом крышку чашки Петри приоткрывают левой рукой ограниченно так, чтобы могла пройти только петля. Послепосева петлю прожигают в пламени спиртовки. Чашки подписывают на донышке и ставят вверх дном в термостат при температуре 37 °С на 18-24 часа. Второй этап. На следующий день посевы просматривают и изучают изолированные колонии, описывая характер роста. Изучают морфологию бактерий исследуемых колоний путем приготовления мазка, окрашенного по методу Грама. Далее для выделения и накопления чистой культуры производят пересев колонии в пробирку со скошенным МПА. Пробирки подписывают и помещают в термостат при температуре 37 °С на 18-24 часа. Третий этап. На следующий день отмечают характер роста выделенной чистой культуры. Визуально чистая культуры характеризуется однородным ростом. При микроскопическом исследовании мазка, приготовленного из чистой культуры, в нем обнаруживаются морфологически и тинкториально однородные клетки. Например для выделения протея, обладающего «ползучим» ростом, используют метод Шукевича. Исследуемый материал засевают в конденсационную воду скошенного МПА. Бактерии обладающие ползучим ростом из конденсационной воды вползают на поверхность агара. На следующий день проверяют чистоту выделенной культуры. Из верхнего края налета делают мазок, окрашивают по Граму и микроскопируют. 2)Микрофлора ротовой полости. тут на микроорганизмы действует слюна, которая содержит лизоцим, смывающая их. Но в десневых кармах, щелях между зубами бактерии всегда присутствуют. В ротовой полости микроорганизмы делятся на аутохтонные и аллотохтонные. Первые это микрофлора характерная для данной области. Вторые- микробы присущие другим областям. Напр- кишечник или носоглотка. Доминируют стрептококки.streptococcus mitior – локализируется на щеках. st.salivarius-сосочки языка. St. sangius et st. mutans – поверхность зубов. В более без кислородных участках заселены анаэробы- актиномицеты, бактероиды, фузобактерии и вейлонеллы. Так же есть спирохеты, микоплазмы, кандида и разнообразные простейшие(entamoeba buccalis et dentalis) Впервые бактерии в рот полость попадают при прохождении плода по родовым путям (лактобациллы, энтеробактерии, каринобактерии, стафилококки и микрококки).через 2-7 суток эта микрофлора замещается микрофлорой матери и персонала. На исселованиематериалы с поверхности щек, зубов,слюна. 3) Стерилизация текучим паром. Стерилизация текучим паром проводится в текучепаровом стерилизаторе (рис. 6) или в автоклаве с открытым краном. Через 10—15 мин. после включения прибора вода прогревается, и пар начинает выходить из открытого крана полной струей. С этого момента ведется отсчет времени стерилизации, которая продолжается 30—60 минут. Затем выключают обогрев, открывают крышку, дают прибору слегка охладиться и вынимают стерилизованные предметы еще горячими во избежание излишнего увлажнения. Аппарат освобождают от воды и оставляют в сухом виде. Текучим паром стерилизуют такие материалы, которые портятся или разлагаются при стерилизации паром под давлением: некоторые питательные среды, растворы углеводов. 4) Формы инфекции: экзогенная, эндогенная, очаговая, генерализованная, смешанная Экзогенные инфекции развиваются в результате проникновения в организм патогенных микробов из внешней среды. Эндогенные инфекции обычно развиваются в результате активации и проникновения (реже) условно-патогенных микроорганизмов нормальной микрофлоры из нестерильных полостей во внутреннюю среду организма. Очаговая (региональная)- инфекционный процесс протекает в каком либо ограниченном, местном очаге и не распространяется по организму. Генерализованные – развиваются в результате диссеминирования возбудителя из первичного очага, обычно по лимфатическим путям и через кровоток. Смешанные - развиваются в результате заражения несколькими видами микроорганизмов. Характеризует более тяжелое течение. ЗАДАЧА В посёлке Н. была зарегистрирована вспышка дифтерии. С целью профилактики был введён дифтерийный анатоксин. Какой иммунитет он создаст Из чего получают этот препарат 1) Содержит обезвреженный дифтерийный экзотоксин. Принцип приготовления: обезвреживание экзотоксина действием формалина, температуры и времени с последующей адсорбцией на гидрокси- де алюминия. Используется для профилактики дифтерийной инфекции, при этом создается искусственно-приобретенный активный антитоксический иммуни тет. |