Билет 1 Элективные среды, их назначение
 Скачать 310.5 Kb.
|
|
4. Факторы инвазивности бактерий. Основные факторы, обеспечивающие инвазивность бактерий, — подвижность (обеспечивает проникновение как в клетки, так и межклеточные пространства) и особые клеточные факторы — инвазины [от лат. invasio, проникать, атаковать], способствующие проникновению в эпителиоциты посредством эндоцитоза (например, поверхностные белки грамотрицательных бактерий). Некоторые микроорганизмы проникают за пределы эпителия либо посредством активной инвазии, либо в результате имплантации через различные повреждения кожных покровов. Как разновидность инвазии можно рассматривать способность микроорганизмов диссеми-нировать из первичного очага инфекции и циркулировать в крови. Инвазивная ценность, способность микробов проникать в организм и распространяться в нём; один из факторов, определяющих вирулентность. И. м. зависит от характера выделяемых патогенными микробами продуктов жизнедеятельности и реактивности макроорганизма (бактерицидность крови, состояние РЭС и др.). К продуктам, выделяемым микробами и способствующим И. м., относятся: 1) факторы распространения — ферменты: гиалуронидаза и мезомуциназа, а также фибринолизины, растворяющие фибрин в очаге воспаления; 2) антифагоцитарные факторы — агрессины, а также эндотоксины, подавляющие миграцию лейкоцитов. В пределах одного вида отдельные штаммы микробов обладают различной степенью инвазивности в зависимости от возраста культуры и др. факторов. Более старые культуры обладают меньшей И. м., чем развивающиеся. И. м. обусловливает возникновение, течение и исход инфекционного процесса. ЗАДАЧА Из хирургического отделения гор. Больницы № 5 в бак. Лабораторию поступил кетгут с направлением, в котором указывалось на необходимость проверить его на стерильность. После проведённых исследований было установлено, что кетгут загрязнён клостридиями. Как провести проверку стерильности кетгута Какие дифференциальные признаки при микроскопии выявлены у микроорганизмов, обнаруженных в кетгуте Стерилизация шовного материала достигается разными способами: термическим, химическим, гамма-облучением. Способ стерилизации нитей кетгута спиртовым люголев ским раствором (по Губареву).. Хранят кетгут в люголевском растворе, этиловом спирте меняя его каждые 7-10 суток. Каждую порцию кетгута подвергают обязательному бактериологическому контролю. Дифференциальные признаки микроскопии –образование колоний с типа Клостридии анаэробы, метод опред-ия чистой среды – Цейсслера, БИЛЕТ №5 1. Методы выделения аэробов. .Выделение чистой культуры аэробных бактерий используется в лабораторной практике для микробиологической диагностики инфекционных заболеваний.Чистой культурой называется популяция бактерий одного вида ,выращенная на питательной среде.Выделение чистой культуры аэробных бактерий достигается механичсеким разобщением исследуемого материала при посеве на питательные среды в присутствии кислорода.Для выделения чистых культур аэробов используется метод Дригальского ,Шукевича и биологический метод. Метод Дригальского включает три этапа.Первый этап:из исследуемого материала готовят мазок,окрашивают его по Граму и др. методом и микроскопируют.Материал наносят петлей на всю поверхность питательной среды.После посева петлю стерилизуют,чашку подписывают на донышке и ставят вверх дном в термостат при температуре 37 на 18-24 часа.Второй этап:на следующий день посевы изучают на изолированные колонии и описывают характер роста.Изучают морфологию бактерий путем приготовления мазка,окрашенного поГраму.Далее для выделения чистой культуры производят пересев колонии в пробирку со скошенным МПА.Пробирки помещают термостат при температуре 37 на 18-24 часа.Третий этап:отмечаюют рост выделенной чистой культуры.При микроскопическом исследовании мазка из чистой культуры в нем обнаруживаются морфологически и тинкториально однородные клетки. Метод Шукевича осуществляется путем засеявания исследуемого материала в конденсационную воду со скошенным МПА.Бактерии ,обладающие ползучим ростом из конденсационной воды выползают на поверхность агара.На следующий день проверяют на чистоту выделенной культуры.Из верхнего налета делают мазок,окрашивают его по Граму и микроскопируют. Для выделения чистой культуры микробов с трудом культивируемых на питательных средах используют биологический метод-заражение наиболее восприимчивых к данному виду возбудителя животных.После гибели или появления признаков заболевания животных забивают и производят посев крови и органов на питательные среды.Далее исследование проводят по методу Дригальского 2. Микрофлора полости рта. В полости рта на микроорганизмы действует слюна, которая содержит лизоцим, смывающая их. Но в десневых кармах, щелях между зубами бактерии всегда присутствуют. В ротовой полости микроорганизмы делятся на аутохтонные и аллотохтонные. Первые это микрофлора характерная для данной области. Вторые- микробы присущие другим областям. Напр- кишечник или носоглотка. Доминируют стрептококки.streptococcus mitior – локализируется на щеках. st.salivarius-сосочки языка. St. sangius et st. mutans – поверхность зубов. В более бескислородных участках заселены анаэробы- актиномицеты, бактероиды, фузобактерии и вейлонеллы. Так же есть спирохеты, микоплазмы, кандида и разнообразные простейшие(entamoeba buccalis et dentalis) Впервые бактерии в рот полость попадают при прохождении плода по родовым путям (лактобациллы, энтеробактерии, каринобактерии, стафилококки и микрококки).через 2-7 суток эта микрофлора замещается микрофлорой матери и персонала. На исселованиематериалы с поверхности щек, зубов,слюна. 3. Физико-химические методы стерилизации. стерилизация- обеспложивание, т.е. полное уничтожение вегетативных форм микроорганизмов и их спор в различных материалах. Физические методы стерилизации: Прокаливание в пламени спиртовки или газовой горелки( применяется для стерилизации бактериологических петель, пинцетов, препаровальных игл) Стерилизация кипячением(шприцы, мелкие хирургические инструменты, предметы и покровные стекла) Стерилизация сухим жаром или суховоздушная стерилизация в сушильном шкафу (печи Пастера). (стерилизуют стеклянную посуду: чашки Петри, пробирки, пипетки и др.) Стерилизация паром под давлением в втоклаве. Стерилизация текучим паром в аппарате хоха или автоклаве. (применяется в тех случаях, когда стерилизуемый материал не выдерживает высокой температуры, например питательные среды с витаминами, углеводами. Тиндализация (применяется для стерилизации легко разрушающихся при высокой температуре в-в (сыворотка крови, витамины и др.) Пастерилизация (пастеризуют напитки и пищевые продукты (вино, пиво, соки, молоко и др.) Стерилизация УФ-лучами Механическая стерилизация фильтрование): Данный метод основан на механической задержке микроорганизмов и их спор мелкопористыми фильтрами с определенным d пор. Фильтрование используют для стерилизации жидких материалов, не выдерживают нагревания (сыворотка крови, антибиотики, для получения бактериальных токсинов, фасов разных продуктов жизнедеятельности бактерий. Химические методы стерилизации: используют различные химические вещества обладающие бактерицидным свойством, но в лабораторной практике применяют ограниченно. 4. Факторы, защищающие микроорганизмы от фагоцитоза. Функция защиты от фагоцитоза -— важнейшая в механизме противостояния иммунитету для многих возбудителей. При этом преодоление киллерных механизмов, развиваемых фагоцитом, может происходить на различных этапах и довольно часто дублируется. Несмотря на то, что механизмы, позволяющие возбудителям ускользать от действия фагоцитов, еше во многом не ясны, все-таки можно проследить какие-то обшие тенденции в этом процессе. Прежде всего, в противодействии механизмам фагоцитарной адгезии и поглощения решающую роль играют капсулы и капсулоподобные структуры микроорганизмов. Можно определить их основные функции в качестве факторов патогенности. Во-первых, капсулы экранируют иммуноактивные структуры бактериальной клетки. Во-вторых, вещества, входящие в состав капсул, обладают, как правило, сильными гидрофильными свойствами. Известно, что чем гидрофильнее объект, тем труднее он поддается фагоцитозу. Таким образом, гидрофильность, обусловленная капсулой, защищает бактерию от фагоцитоза. В-третьих, легкая отделяемость капсульных структур и слизи от бактериальной клетки обусловливает ложную связь фагоцита и возбудителя. Это происходит потому, что лиганд, связавший фагоцит с возбудителем, вернее, с его капсулой, практически не фиксируется на бактериальной клетке, и возбудитель «ускользает» от фагоцитоза. В-четвертых, капсула может защищать клетку возбудителя от токсичных продуктов респираторного взрыва, гидролитических ферментов лизосом и гранул лейкоцитов ЗАДАЧА В детском саду отмечена вспышка дизентерии. Один из работников пищеблока детсада полгода тому назад переболел дизентерией. Мог ли он явиться источником заражения ? Почему? Какие пути передачи инфекции здесь имели место? Какие методы исследования здесь необходимо провести БИЛЕТ №6 1. Культуральные свойства бактерий. Культуральные свойства бактерий характеризуют их питательные потребности,условия и характер роста на твердых и жидких питательных средах.На жидких питательных средах бактерии могут образовывать следующие формы роста:1) равномерное помутнение и осадок на дне(большинство патогенных бактерий), 2) пленку на поверхности среды(холерный вибрион,коринебактерии дифтерии,микобактерии туберкулеза, 3)пленку с отходящими в глубь среды нитями-сталактитами( возбудитель чумы), 4)придонно-пристеночный рост(стрептококки), 5)в виде комочка ваты( сибиреязвенная палочка). На плотных питательных средах бактерии образуют колонии различного размера, окраса,консистенции,формы.Различают колонии S и R типа.S-типа колонии круглые,гладкие,блестящие,выпуклые,с ровными краями,влажные.R-типа колонии более крапные,плоские,шероховатые,матовые,непрвильной формы,с исчерченными краями.Большинство бактерий S типа.Колонии R типа образуют: 1) Возбудитель сибирской язвы,чумы,туберкулеза,дифтерии ,а также микоплазмы. 2.Микрофлора ЖКТ. В желудке практически нет, т.к. есть желудочный сок. Есть тока helicobacter pylori. Общее кол-во не больше 103 мл. Верхние отделы тонкой кишки- candida, стрептококки и лактобациллы.так же 103 мл.т.к. щелочная рН и есть ферменты. Нижние отделы и толстая к-ка. Кол-во 1012 в 1 гр фекалии.их очень много:энтеробактерии, энтерококки, стафилококки, кишечные палочки. На исследование- из желудка-желудочный сок, к-к- с помощью ректомоноскопии 3.Механизмы избирательного действия на микробы различных дезинфицирующих веществ. Дезинфицирующие вещества, отличающиеся по химической природе, проникая внутрь клетки, оказывают различное избирательное действие. Так, окислители (хлор, хлорсодержащие препараты, перекись водорода) вступают во взаимодействие с белками клетки, вызывают реакцию окисления. Минеральные кислоты и щелочи, действуя с помощью водородных и гидроксильных ионов, вызывают гидролиз. Фенольные препараты вызывают реакцию коагуляции белков клетки. Такое схематическое, понятие о механизме действия не исчерпывает всех сложных путей воздействия на микробную клетку, например, влияние дезинфектантов на ферментативную деятельность (дыхание, питание, рост и др.). Таким образом при химическом обеззараживании необходимо обязательно учитывать специфические особенности возбудителей, свойства выделений, свойства предметов, подлежащих воздействию химическими средствами. В практике чаще используют влажный метод с применением дезинфицирующих растворов или аэрозолей. Погружением в растворы обрабатывают белье, посуду, игрушки, орошением - стены, мебель, протиранием - картины, полированные вещи и др. Аэрозоли применяют прежде всего для обеззараживания воздуха и поверхностей. При дезинфекции используется большое количество бактерицидов, которые относятся к различным группам химических соединений: галоидосодержащие вещества, окислители, спирты, фенолы, моющие средства, кислоты, щелочи (гидроксиды) и и др. 4.Микробные токсины. Их характеристика. Токсические вещества по своей химической природе относятся к белкам (экзотоксины) и ЛПС (эндотоксины) Эндотоксины- ЛПС, которые содержатся в стенке грмм- бактерий. Они более устойчивы к температуре, менее ядовиты, малоспецифичны, слабо иммуногены. Некоторые бактерии способны одновременно синтезировать как эндотоксины, так и белковые токсины. Ех: возбудитель холеры, чумы сальмонеллеза. Экзотоксины- белковые токсины- описано выше 80 различных экзотоксинов, которые различаются по молекулярной массе, химической структуре. Они обладают высокой иммуногенностью, поэтому они могут вызывать иммунный ответ. По отношению к температуре различают термолабильные и термостабильные. Все экзотоксины состоят из 2х составных частей.1 является рецептором и служит для фиксации молекулы токсина, 2- собственно токсический фрагмент – проникает внутрь клетки , блокируя жизненно важные метаболические реакции. Высокая токсичность объясняется особенностью строения токсического фрагменты, имитирующего структуру гормонов, ферментов и нейромедиаторов. Специфичность токсического действия определяется избирательной фиксацией токсина на рецепторах клеток мишеней определенных тканей. Из них выделяют 4 группы: Цитотоксины - блокируют синтез белка насубклеточном уровне, выводят из сторя фермент трансферразу 2. + дермонекротоксины (поражают клетки кожи) и энтеротоксины (поражают клетки слизистой кишечника). Мембранотоксины- повышают проницаемость мембраны эритроцитов и лейкоцитов, вызывая их гибель. Функциональные блокаторы- активизируют клеточную аденилатциклазу, приводя к повышению проницаемости стенки тонкой кишки и увеличению выхода жидкости в ее просвет.(холероен)+ токсикоблокаторы (инактивируютаденилатциклазу.Ех.сибиреязвенной и чумныепалочки) + нейротоксины ( блокуруют передачу нервных импульсов) Эксфолиатины (золотистый стафиллоккок) и эритрогенины (скарлатинозный стрептоккок) влияют на процессы межклеточного взаимодействия. АНАТОКСИНЫ.Некоторые токсины (столбнячный, дифтерийный, ботулинистический, гангренозный) под действием формалина утрачивают свою ядовитость, сохраняя при этом иммуногенные свойства. ЗАДАЧА В лабораторию КНИИТО доставлена отёчная жидкость из раны больного с подозрением на газовую гангрену. Укажите в какую группу по типу дыхания относятся возбудители газовой гангрены. Какие методы культивирования применяются для выращивания данных микробов Возбудителями газовой гангрены являются Cl. perfringens, Gl. novyi, Cl. septicum, Cl. histolyticum, Cl. sordclli, относящиеся к семейству Bacillaceae. По типу дыхания- анаэробы. Выделение чистых культур анаэробных бактерий В практических лабораториях обычно для. выделения чистых культур анаэробов используются методы Цейселера или Вейнберга. Процесс выделения чистой культуры можно разделить на несколько этапов. Метод Вейнберга.Первый этап:из исследуемого материала готовят мазок,окрашивают по Граму и микроскопируют.При обнаружении подозрительных на анаэробы микробов исследуемый материал засевают на среду Китта-ТароцциПробирки заливают вазелиновым маслом или парафином и ставят в термостат на 18-24 часа при температуре 37 гр.Далее разводят в пробирках с расплавленным и остуженным сахарным МПА.Засеянные пробирки охлаждают,агар застывает и фиксирует микробы в глубине столбика.Пробирки помещают в термостат на 18-24 часа при температуре 37 гр.Второй этап:при обнаружении подозрительных колоний в столбике ,делают распил пробирки,колонию отбирают и делают пересев на среду Китта-Тароцци.после чего чего пробирки помещают в термостат на 18-24 часа при температуре 37 гр. Третий этап:через сутки проверяют на чистоту выделенной культуры. Метод Вейнберга Первый этап проводят гак же, как и при методе Цейсслера. Затем исследуемый материал, подращенный на среде Китга-Гаронци, последовательно разводят в пробирках с расплавленным и остуженным сахарным МПА. После чего его переносят в 3-5 пастеровских пипетки (трубки Виньяла). Засеянные пробирки быстро охлаждают холодной водой, при этом агар застывает и фиксирует разобщенное положение отдельных микробных клеток в глубине столбика агара Пробирки термостатируют при температуре 37 "С 18-24 ч. Второй этап. Выросшие в узких пробирках колонии изучают с помощью лупы. На месте отобранной подозрительной колонии делают распил оробирки. колонию отбирают и пересевают на среду Китта-Тароцци. 5 (робиркн культивируют в термостате 18-24 ч при температуре 37 "С Третий этап. Через сутки проверяют чистоту выделенной культуры. Методы культивирования анаэробов. Для культивирования анаэробов необходимо понизить окислительно-восстановительный потенциал среды, создать условия анаэробиоза, т. е. пониженного содержания кислорода в среде и окружающем ее пространстве. Это достигается применением физических, химических и биологических методов. Механические методы: 1. Посев уколом в столбик сахарного агара. 2. Метод Виньял-Вейона: в расплавленный и остуженный до 50° С агар вносят исследуемую анаэробную культуру, перемешивают и засасывают в пастеровскую пипетку, конец которой запаивают. Через 24 — 48 часов столбике агара вырастают ясно видимые колонии микробов — анаэробов. 3. Метод Перетца. Исследуемый материал вносят в 3 пробирки с физиологическим раствором, а затем в 3 пробирки с остуженным до 50° С МПА. Содержимое пробирок перемешивают и выливают в 3 стерильные чашки Петри, на дно которых предварительно кладут стерильное предметное стекло, через 18-20 часов инкубации в термостате под пластинками стекла вырастают анаэробы. |