Билет 1 Задача 14 История кафедры хирургических болезней
 Скачать 0.51 Mb.
|
4) См. билет 1, вопр 4.Билет 4Задача 23 1) Резус-фактор. Методы определенияРезус-фактор присутствует в крови 85% людей, а у 15% отсутствует. Система антигенов резус представлена пятью основными антигенами: D, C, с, Е, e (ранее считали, что их шесть, но позже было доказано, что аллельного гена d не существует). Наиболее активен из всех антигенов Rho(D) - резус-фактор. В зависимости от его наличия или отсутствия кровь людей делят на резус- положительную (Rh+) и резус-отрицательную (Rh-). Aнтигены резус - липопротеиды. Они очень активны и способны вызывать образование иммунных антител. Резус-антитела, будучи иммунными (неполными, моновалентными, блокирующими), могут фиксироваться к резус-положительным эритроцитам, не вызывая их склеивания. Они агглютинируют эритроциты только в присутствии коллоидных растворов, протеолитических ферментов или под действием пециально приготовленной антиглобулиновой преципитирующей сыворотки. Способы определения Rh0(D) в клинической практике: используют экспресс -методы определения Rho(D) (D-фактора). Экспресс-метод определения стандартным универсальным реагентом в пробирке без подогрева. Методика проведения реакции. Исследование проводят в центрифужных пробирках объёмом не менее 10 мл. На дно пробирки вносят одну каплю стандартного универсального реагента, представляющего собой антирезусную сыворотку группы АВ(IV), разведённую 33% раствором декстрана. Затем в неё добавляют одну каплю исследуемой крови (или эритроцитов). Круговым вращением пробирки содержимое размазывают по её внутренней поверхности таким образом, чтобы содержимое растеклось по стенкам. Это значительно ускоряет агглютинацию и делает её крупнолепестковой. Агглютинация на стенках пробирки наступает , как правило, в течение первой минуты, но для образования устойчивого комплекса антиген-антитело и чёткой агглютинации наблюдать следует не менее 3 мин. Затем для исключения неспецифической агрегации эритроцитов в пробирку добавляют 2-3 мл физиологического раствора и перемешивают путём одно-двукратного перевертывания пробирки (без взбалтывания!). Трактовка результатов. Наличие агглютинации (крупные хлопья на фоне просветлённой жидкости) указывает на резус-положительную принадлежность исследуемой крови. Отсутствие агглютинации (в пробирке гомогенно окрашенная розовая жидкость) свидетельствует о резус-отрицательной принадлежности исследуемой крови. Экспресс метод на плоскости без подогрева. На белой пластинке со смачиваемой поверхностью пишут ФИО. На левом краю пластинки надпись «сыворотка-антирезус», на правом – «контрольная сыворотка». На пластинке помещают 1-2 капли (0,05-0,1 мл) реактива антирезус и контрольной сыворотки. К обеим каплям добавляют исследуемые ЭР. Замешивают сухой стеклянной палочкой, размазывая на пластинке до образования капли диаметром 1,5 см. Пластинку слегка покачивают. Через 3-4 минут к каждой капле добавляют 5-6 капель физ.раствора. Затем покачивают еще в течение 5 минут. Результат оценивают по наличию/отсутствию агглютинации невооруженным глазом. Наличие агглютинации в капле слева – Ph+ принадлежность исследуемой крови. Результат считается истинным лишь при отсутствии признаков агглютинации в правой капле. Лабораторные способы определения резус-фактора Для определения резус-принадлежности крови больного в условиях лаборатории применяют четыре основных метода. Метод агглютинации в солевой среде. Используют специальные сыворотки, содержащие полные антитела анти-резус. Эритроциты в виде 2% взвеси в изотоническом растворе хлорида натрия соединяют в пробирках с антирезусной сывороткой. Пробирки помещают на 1 ч в термостат при температуре 37С, после чего осадок эритроцитов на дне пробирки рассматривают с помощью лупы и по его форме учитывают результат. При положительном результате (Rh+) осадок имеет характерный рисунок в виде нитей или зернистости. При отрицательном (Rh-) осадок размещается равномерным слоем и имеет вид правильно очерченного круга. Метод агглютинации в присутствии желатина. B две пробирки помещают по 0,02-0,03 мл осадка исследуемых эритроцитов. Затем в первую пробирку добавляют 2 капли (0,1 мл) 10% раствора желатина и 2 капли (0,1 мл) анти-резусной сыворотки, во вторую (контрольную) пробирку - 2 капли (0,1 мл) 10% раствора желатина и 2 капли (0,1 мл) физиологического раствора. Содержимое осторожно перемешивают. Затем пробирки инкубируют в термостате при температуре 45-48С в течение 30 мин, после чего добавляют 5-8 мл физиологического раствора и переворачивают пробирки 1-2 раза для перемешивания. Результат учитывают, просматривая пробирки на свет невооружённым глазом или через лупу. Если эритроциты резус-положительны, произойдёт их агглютинация. Отсутствие агглютинации свидетельствует о том, что испытуемая кровь резус- отрицательная. B контрольной пробирке агглютинация эритроцитов должна отсутствовать. Непрямой антиглобулиновыи тест (реакция Кумбса). Эта реакция наиболее чувствительна для выявления неполных антител к ауто- и изоантигенам эритроцитов. Реакция основана на использовании антиглобулиновой сыворотки. В пробирку вносят антирезусную сыворотку и отмытые физиологическим раствором эритроциты, помещают на 1 ч в термостат при температуре 37С, после чего эритроциты тщательно отмывают. Последующий этап реакции проводят на плоскости. Каплю взвеси эритроцитов смешивают с равным количеством антиглобулиновой сыворотки и учитывают результат. Наличие агглютинации - показатель того, что исследуемый образец крови резус-положительный. Если агглютинация отсутствует, то испытуемая кровь резус- отрицательная. Реакция с анти-D-моноклональными антителами. На планшете смешивают большую каплю (0,1 мл) анти-D-моноклональных антител и маленькую каплю (0,01 мл) исследуемой крови. За реакцией наблюдают в течение 3 мин. При смешивании анти- D-MKA с образцами резус-положительных эритроцитов отмечают быстро наступающую лепестковую агглютинацию. Если кровь резусотрицательная, агглютинация отсутствует. |