EvTeam all in the last night. Все способы оперативной неподготовке к колкам и прочее за какчество не ручаемся
 Скачать 378.5 Kb.
|
|
8. Фагоцитоз. Фагоциты. Стадии фагоцитоза. Механизмы внутриклеточной бактерицидное действие. Исходы (завершённый, незавершенный фагоцитоз). Хемотаксины, опсонины, происхождение и роль в противоинфекционном иммунитете. Фагоцитоз - поглощение фагоцитом крупных макромолекулярных комплексов, бактерий. Клетки-фагоциты нейтрофилы и моноциты/макрофаги. Фагоцитировать могут также эозинофилы (наиболее эффективны при антительминтном иммунитете). Процесс фагоцитоза усиливают, обволакивающие объект фагоцитоза. Опсонины - белки, усиливающие фагоцитоз: IgG, белки острой фазы (С-реакгивный протеин, маннансвязывающий лектин); липополисахаридсвязывающий протеин, компоненты комплемента -СЗЬ, С4Ь; сурфактантные протеины легких SP-A, SP-D. Моноциты составляют 5-10 %, а нейтрофилы 60-70 % лейкоцитов крови. Поступая в ткань моноциты формируют популяцию тканевых макрофагов: купферовские клетки (или звездчатые ретикулоэндотелиоциты печени), микроглия ЦНС, остеокласты костной ткани, альвеолярные и интерстициальные макрофаги. Фагоциты направленно перемещаются к объекту фагоцитоза, реагируя на хемоатграктанты: вещества микробов, активированные компоненты комплемемента (С5а, СЗа) и цитокины. Плазмалемма фагоцита обхватывает бактерии или другие корпускулы и собственные поврежденные клетки. Затем объект фагоцитоза окружается плазмалеммой и мембранная везикула (фагосома), погружается в цитоплазму фагоцита. Мембрана фагосомы сливается с лизосомой, рН закисляется до 4,5; активируются ферменты лизосомы. Фагоцитированный микроб разрушается под действием ферментов лизосом, катионных белков дефензинов, катепсина G, лизоцима и др. факторов. При окислительном (дыхательном) взрыве в фагоците образуются токсичные антимикробные формы кислорода - перекись водорода Н202, супероксиданион 02-, гидроксильный радикал ОН-, синглетный кислород. Кроме этого антимикробным действием обладают окись азота и радикал NO-. Макрофаги выполняют защитную функцию еще до взаимодействия с другими иммунокомпетентными клетками (неспецифическая резистентность). Активация макрофага происходит после разрушения фагоцитируемого микроба, его процессинга (переработки) и презентации (представлении) антигена Т-лимфоцитам. Фагоцитоз может быть завершенным, завершающимся гибелью захваченного микроба, и незавершенным, при котором микробы не погибают. Примером незавершенного фагоцитоза является фагоцитоз гонококков, туберкулезных палочек и лейшманий. 9. Методы определения показателей фагоцитоза. ИССЛЕДОВАНИЕ ФАГОЦИТАРНЫХ КЛЕТОК Изучение фагоцитарных клеток осуществляется несколькими методами: А. Прямым морфологическим методом. Микробы смешиваются с фагоцитами в пробирке или в организме лабораторных животных, через 15—120 минут из смеси приготавливаются микропрепараты на предметных стеклах, окрашиваются по Романовскому-Гимзе и подсчитываются число фагоцитирующих фагоцитов и число фагоцитированных микробов. По ним производят расчет следующих показателей: ФАГОЦИТАРНЫЙ ПОКАЗАТЕЛЕЛЬ = 100%*(число фагоцитирующих фагоцитов/общее число фагоцитов) ФАГОЦИТАРНОЕ ЧИСЛО= (число фагоцитированных микробов/число активных фагоцитов) ПОКАЗАТЕЛЬ ЗАВЕРШЕННОСТИ ФАГОЦИТОЗА= (ФЧ(через 15мин)-ФЧ(через 120мин))/ФЧ(через15мин)*100% Б. Непрямыми методами Они основаны на определении функциональной активности различных стадий фагоцитарного процесса:
10. Иммунный ответ и факторы, определяющие его выраженность. Генетический контроль гуморального и клеточного иммунного ответа. Иммунный ответ - это сложная многокомпонентная кооперативная реакция ИС организма, индуцированная антигеном и направленная на его элиминацию. Явление иммунного ответа лежит в основе иммунитета. \ Иммунный ответ зависит от: 1 Антигена - свойства, состав, молекулярная масса, доза, кратность попадания, длкгеганость контакта; 2 Состояния организма - иммунологическая реактивность; 3 Условий внешней среды. Для иммунного ответа характерно: 1 Клональность - есть клоны Т- и В-лимфоцитов, которые специфичны по отношению к определенным эпитопам (их совокупность называется детерминантной группой); 2 Специфичность; 3 Разнообразие AT и TCR; 4 Формирование в клетках и молекулах эффекторов и клеток памяти; 5 Специфические механизмы действия совместимы с неспецифичными; 6 Контролирование геномом, 7 Деление на естественный и искусственный; Компоненты иммунного ответа: 1 Антигены; 2 Антигенперерабатывающие и антигенпрезентирующие клетки (имакрофаги); 3 Антигенраспознающие клетки (В- и Т-лимфоциты и их субпопуляции), 4 Антигенраспознающие молекулы (ВЦР, молекулы главного комплекса гистосовместимости); 5 Цитокины - гемопоэтические, ростовые, регуляторные, рецепторные. Иммунный ответ развивается в периферических лимфоидных органах. ВИО участвуют макрофаги, Т- и В-лимфоциты, фибробласты, ретикулярные клетки. Макрофаги. Зрелые макрофаги имеют рецепторы к антигенам (Fc), СЗЬ-рецепторы, антигены гистосовместимости. Макрофаги участвуют как в естественном, так и в специфическом ИО. На ранней стадии ИО макрофаги выполняют функцию презентации антигена - в результате фагоцитоза антиген расщепляется, а его эпитоп выносится на мембрану в комплексе с белком МНСП. На конечной стадии ИО макрофаг активируется лимфокинами. В-лимфоциты - распознают антигены, участвуют в гуморальном ИО, имеют рецепторы к эритроцитам мышей, Fc, СЗЬ, к антигенам гистосовместимости. Они не имеют специфичных антигенраспознающих рецепторов, разделяются на огромное количество клонов. Антиген-распознающим рецептором является молекула иммуноглобулина. Т- лимфоциты - разделяются на четыре основные субпопуляции - Т-хелперы, Т-супрессоры, Т-киллеры, и Т -эффекторы. Все они имеют рецепторы к эритроцитам барана, к иммуноглобулинам, белкам системы комплемента (но не имеют рецепторов к СЗЬ), к интерферонам, к антигенам, имеют антигены MHCI и МНСП. Субпопуляции Т-лимфоцитов неоднородны, так, Т-хелперы разделяются на две группы - Т-хелперы 1 и, Т-хелперы 2 . Первые являются активаторами КИО, а вторые - ГИО. Т-лимфоциты обеспечивают клеточный, антивирусный, антибактериальный иммунитет, ГЗТ. В зависимости от путей реализации иммунный ответ разделяется на гуморальный (ГИО) и клеточный (КИО), однако в чистом виде ни один из них не проявляется ГИО контролируется красным костным мозгом, а КИО - тимусом. 11. Гуморальный иммунный ответ, этапы. Отличительные черты первичного и вторичного иммунного ответа. Гуморальный иммунный ответ контролируется красным костным мозгом, развивается на растворимые агенты - белки, ЛПС, экзотоксины, на внеклеточных паразитов. Ответ иммунный первичный (ПИО) — реакция иммунной системы организма на первое поступление (введение) антигена, вакцины. Отличается непродолжительностью и низкой специфичностью. Сопровождается биосинтезом преимущественно специфических антител IgM класса. При этом антитела IgM и IgA классов продуцируются значительно быстрее, нежели антитела IgG изотипа. Этот тип иммунитета можно рассматривать как экстренное реагирование иммунной системы на воздействие инфекции. В динамике его развития различают три фазы — индуктивную (латентную), продуктивную и затухания. Первая длится 6-7 дней. В этот период антиген подвергается переработке в фагоцитарных и других АПК и презентируется клонам Т- и В- лимфоцитов. Последние затем трансформируются в лимфобласты, пролиферируют, дифференцируются и превращаются в плазматические клетки, эффекторные и регуляторные Т-клетки, синтезирующие антитела и клетки памяти, специфичные к данному антигену. Во время продуктивной фазы осуществляются биосинтез антигенспецифических антител, цитокинов и накопление их в биологических жидкостях (в сыворотке крови, слюне, секретах, цереброспинальной жидкости). При этом уровень специфических антител возрастает экспоненциально и после того как он достигнет максимума, формируется плато. Данный процесс длится от 4 дней до 4 недель. Обычно его пик приходится на 14—21-й день. Максимальное продуцирование антител к белковым антигенам (анатоксинам) длится 3 недели. После этого наступает фаза затухания, а продуктивный период постепенно завершается. Причем процесс снижения уровеня антител вначале идет быстро, затем замедляется. Ответ иммунный вторичный (ВИО) — иммунный ответ на повторное введение антигена в организм. В его основе лежат механизмы иммунологической памяти и прогрессивная клональная селекция антигенспецифических клонов В- и Т- лимфоцитов. В отличие от первичного, возникает на действие антигена в меньшей дозе, развивается быстрее (короче индуктивная фаза) и, как правило, интенсивнее. Кроме того, он более специфичный (синтезируются преимущественно антитела IgG), более напряженный и более зрелый (выше аффинность антител); а вызываемый им протективный эффект сохраняется дольше. Причем динамика процесса антителообразования также носит экспоненциальный характер, но развивается он быстрее, а затухает значительно медленнее. Повторное введение антигена в, организм с высоким уровнем антител к нему может не дать эффекта усиления иммунного ответа. Существует два варианта ГИО. Если ответ происходит на Т - независимые антигены, то это т. н. простой ответ, он возможен потому, что некоторые антигены способны сами активировать Т-лимфоциты. В этом случае синтез IgM не сопровождается образованием клеток памяти. В случае, если ответ формируется в ответ на Т- зависимые антигены, происходит кооперация Т- и В-лимфоцитов. Выделяют следующие стадии: распознавание антигена; презентация антигена - макрофаг поглощает антиген, расщепляет, соединяет с белками МНС I и МКС II и переносит на мембрану; передача информации на Т- хелпер; бласттрансформация В- лимфоцитов, дифференцировка бластов в плазмациты и В- клетки памати; синтез антител и элиминация антигена. Функция антител: активация системы комплемента, нейтрализация токсинов, опсонизация антигенов, преципитация мелких антигенов. 12. В-лимфоциты. Характеристика. Основные маркёры. В-клеточный-рецептор. Методы определения содержания и функциональной активности В-лимфоцитов. В-лимфоциты называются так потому, что они впервые выявлены у птиц в специальном центральном органе иммунитета, который называется "сумка Фабрициуса" (bursa of Fabricius) и в котором они проходят стадию созревания. У животных данный орган отсутствует, и ранние стадии созревания В-лимфоциты проходят в костном мозге (bone marrow). Таким образом, термин "В- лимфоцит" обусловлен названием сумки Фабрициуса или костного мозга. В- лимфоцитами являются лимфоциты, способные синтезировать антитела. Большинство образованных в костном мозге пре-В- лимфоцитов (> 95%) погибают там же в результате процесса селекции клеток. Зрелые В-лимфоциты из костного мозга мигрируют в кровь, а затем во вторичные лимфоидные органы (селезенку, лимфатические узлы, лимфоидные ткани желудочно-кишечного тракта и слизистых). Они имеют антигенспецифический В-клеточкый рецептор (ВКР) в виде мембраносвязанных молекул антител, а также ряд поверхностных CD антигенов и рецепторов. В-лимфоциты могут узнавать нативный антиген в свободном состоянии. Взаимодействие антигена с В-клеточным антигенспецифическим рецептором приводит к активации В-лимфоцитов и их развитию(дифференцировке) в эффекторные клетки, специализирующиеся в биосинтезе антител. Большинство В-лимфоцитов периферической крови экспрессирует на поверхности клетки два изотипа иммуноглобулинов- IgM и IgD. Очень небольшое количество циркулирующих клеток экспрессирует иммуноглобулины G, А или Е изотопов. Характеристика CD антигенов В- лимфоцитов C  D 19CD20 основные дифференцировочные и идентификационные маркеры CD22 CD21 рецептор для СЗд фрагмента системы комплемента CD 23 рецептор для Fc фрагмента lgE CD25 рецептор для ИЛ 2 CD32 рецептор для Fc фрагмента IgG CD35 рецептор для СЗб и С4б белков комплемента CD 45RB + участие в трансдукции сигнала CD 49d + рецептор для связывания молекул адгезии -VCAM-1 CD 71 + рецептор для трансферрина CD 74 + антиген II класса гистосовместимости CD антигены выполняют три основные функции: а) рецепция молекул цитокинов и адгезинов; б) передача внутриклеточного сигнала; в) осуществление клеточно-клеточных взаимодействий. В-лимфоциты человека способны связывать эритроциты мыши и образовывать с ними розетки (Вм-розетки), а также формировать розетки с эритроцитами, сенсибилизированными молекулами антител (IgG) и молекулами СЗб фрагмента системы комплемента, что используется в лабораторной практике. Эти свойства совместно с экспрессией CD 5 молекул позволяют выявить субпопуляцию В-лимфоцитов, иммуноглобулиновый репертуар которых комплементарен аутоантигенам, включая ДНК, Fc фрагмент IgG, фосфолипиды и компоненты цитоскелета, и они играют существенную роль в развитии аутоиммунных процессов. В периферической крови процент В-лимфоцитов составляет 10 -15, в лимфатических узлах - 20-25 и в селезенке - 40-45. Антигенраспознающий В-клеточный рецептор В-лимфоцитов (BcR - англ. B-cel I Receptor) построен из молекулы мембранного иммуноглобулина (mlg, состоящий из двух одинаковых тяжелых Н- и двух одинаковых легких - L-цепеи) и двух молекул CD79 (Iga, IgP) - BcR имеет трансмембранные и внутрицитоплазматические сегменты, передающие внутриклеточные сигналы. Определение функциональной характеристики В-лимфоцитов и количества иммуноглобулинов различных классов. При исследовании количества и функционального состояния В-лимфоцитов, В-клетки обнаруживаются в периферической крови по их рецепторному аппарату, а именно: а) по наличию рецепторов к иммуноглобулинам и 3-ей фракции комплемента - реакция ЕАС-розеткообразования; б) по наличию иммуноглобулиновых рецепторов - реакция иммунофлюоресценцяи ; в) по наличию рецепторов к эритроцитам мыши - реакция МЕ-розеткообразования. Методика проведения реакции: Количественное определение: а) Реакция ЕАС-роэеткообразования ставится в 2 этапа: вначале готовят реагент, состоящий из эритроцитов быка, антител к ним и комплемента, затем этот образовавшийся комплекс добавляют к лимфоцитамкрови человека. Образуется розетка, которая внешне ничем не отличается от Е-розеток, но метод получения указывает на выявление именно В-лимфоцитов. б) Реакция иммунофлюоресценции позволяет обнаружить на поверхности В-лимфоцита иммуноглобулиновые рецепторы. Для этого используются антиглобулиновые сыворотки, меченые люминофорами. в) Реакция роэеткообразования с мышиными эритроцитами появляется в результате смешивания последних с лимфоцитами периферической крови. Функциональная характеристика: 1 - Чаще других используется метод радиальной иммунодиффузии в агаре: 1.на стеклянную пластину наливают расплавленный агар, содержаций антитела к даннному классу иммуноглобулинов. 2. агаре выбивают лунки, в которые вносят образцы изучаемых сывороток. В результате иммунонреципитации, образуются радиальные полоски, диаметр которых зависит от концентрации соответствующего иммуноглобулина. 2 - Определение антител к аутоантигенам или к микробам нормальной микрофлоры. 3 - Определение титра специфических антител, вырабатывающихся в организме человека после иммунизации его вакцинами (АВДСДС и др.) 13. Антигены: структура, классификация, характеристика. Антиген - генетически чужеродные вещества, которые при внедрении в организм способны стимулировать иммунный ответ (клеточную реакцию, образование антител, аллергию, толерантность) и специфически реагировать с образовавшимися антителами как in vivo, так in vitro. Эпитоп (антигенная детерминанта) - отличительная часть молекулы антигена, обусловливающая специфичность антител и эффекторных Т- лимфоцитов при иммунном ответе. Эпитоп комплементарен активному центру антител или Т-клеточному рецептору. Аллергенами называются антигены, вызывающие аллергию, Толерогенами называются антигены, вызывающие иммунологическую толерантность. Аутоантигены. Иногда белки собственных тканей (сердца, печени, почек и др.) при соединении с бактериальным белком, токсинами и ферментами бактерий, лекарственными веществами, под влиянием физических факторов (облучение, ожог и др.) изменяют свои физико-химические свойства и становятся чужеродными для собственного организма. На эти антигены организм вырабатывает антитела, возникают аутоиммунные болезни. Антигены бактерий по локализации подразделяют на:
Капсульные антигены представлены белками, полисахаридами
Расположены не только в цитоплазме, а в основном на поверхности микробной клетки, имеют разнообразный химический состав, отличаются термостабильностю. В практике для обнаружения О-антигенов микроорганизмы подвергают температурной обработке.
Представляют собой термолабильные белковые комплексы жгутиков, обладающих у многих энтеробактерий специфической и неспецифической (групповой) фазой.
Среди бактериальных антигенов выделяют так называемые протективные или антигены главного действия, защитные антигены. Выработанные на них антитела защищают организм от данного микроба. Очищенные протективные антигены могут быть "идеальными" вакцинными препаратами. Гаптен - неполноценный антиген в виде небольшой химической группы; обуславливает специфичность антител при иммунизации комплексом белок-таптен. Самостоятельно гаптен не вызывает образования антител, но может взаимодействовать с антителами. |