EvTeam all in the last night. Все способы оперативной неподготовке к колкам и прочее за какчество не ручаемся
 Скачать 378.5 Kb.
|
|
РОПГА – реакция обратной пассивной гемагглютинации В РОПГА применяют антительный эритроцитарный диагностикум - эритроциты, на которых адсорбированы антитела. 21. Реакция преципитации. Цели и методы постановки, учёт, оценка Применение. Реакция преципитации - РП (от лат praecipilo осаждать) - это формирование и осаждение комплекса растворимого молекулярного антигена с антителами в виде помутнения, называемого преципитатом. Он образуется при смешивании антигенов и антител в эквивалентных количествах, избыток одного из них снижает уровень образования иммунного комплекса. Реакцию преципитации ставят в пробирках (реакция кольцепреципитации), в гелях, питательных средах и др. Широкое распространение получили разновидности реакции преципитации в полужидком геле агара или агарозы, двойная иммунодиффузия по Оухтерлони, радиальная иммунодиффузия, иммуноэпектрофорез и др. Реакция кольцепреципитации. Реакцию проводят в узких преципитационных пробирках: на иммунную сыворотку наслаивают растворимый антиген. При оптимальном соотношении антигена и антител на границе этих двух растворов образуется непрозрачное кольцо преципитата. Реакция двойной иммунофиффузиии по Оухтерлони. для постановки реакции растопленный агаровый гель тонким слоем выливают на стеклянную пластинку и после затвердевания в нем вырезают лунки. В лунки геля раздельно помещают антигены и иммунные сыворотки, которые диффундируют навстречу друг другу. В месте встречи в эквивалентных соотношениях они образуют преципитат в виде белой полосы. У многокомпонентных систем между лунками с антигенами и антителами появляется несколько линий преципитата; у идентичных АГ линии преципитата сливаются; у неидентичных АГ - . пересекаются. Реакция радиальной иммунодиффузии. Иммунную сыворотку с расплавленным агаровым гелем равномерно наливают на стекло. После застывания в геле делают лунки, в которые помещают антиген в различных разведениях. Антиген, диффундируя в гель, образует с антителами кольцевые зоны преципитации вокруг лунок. Диаметр кольца преципитации пропорционален концентрации антигена. Реакцию используют для определения в сыворотке крови иммуноглобулинов различных классов, компонентов системы комплемента и др. Иммуноэлектрофорез - сочетание метода электрофореза и иммунопреципитации: смесь антигенов вносится в лунки геля и разделяется в геле с помощью электрофореза, затем в канавку параллельно зонам электрофореза вносят иммунную сыворотку, антитела которой диффундируют в гель и образуют в месте "встречи" с антигеном линии преципитации. 22. Реакция иммунофлюоресценции, прямой и непрямой методы. Применение. Реакция иммунофлюоресценции - РИФ (метод Кунса). Различают три разновидности метода
Реакция Кунса является методом экспресс-диагностики для выявления антигенов микробов или определения антител. Прямой метод РИФ основан на том, что антигены тканей или микробы, обработанные иммунными сыворотками с антителами, меченными флюорохромами, способны светиться в УФ-лучах люминесцентного микроскопа. Бактерии в мазке, обработанные такой люминесцирующей сывороткой, светятся по периферии клетки в виде каймы зеленого цвета. Непрямой метод РИФ заключается в выявлении комплекса антиген - антитело с помощью антиглобулиновой (против антитела) сыворотки, меченной флюорохромом. Для этого мазки из взвеси микробов обрабатывают антителами антимикробной кроличьей диагностической сыворотки. Затем антитела, не связавшиеся антигенами микробов, отмывают, а оставшиеся на микробах антитела выявляют, обрабатывая мазок антиглобулиновой (антикроличьей) сывороткой, меченной флюорохромами. В результате образуется комплекс микроб + антимикробные кроличьи антитела +антикроличьи антитела, меченные флюорохромом. Этот комплекс наблюдают в люминесцентном микроскопе, как и при прямом методе. 23. Иммуноферментный анализ Ингредиенты, постановка, учёт, оценка. Области применения. I. Радиоиммунный анализ. Радиоиммунный метод, или анализ (РИА) - высокочувствительный метод, основанный на реакции антиген - антитело с применением антигенов или антител, меченных радионуклидом (125J, 14С, ЗН, 51Сг и др.). После их взаимодействия отделяют образовавшийся радиоактивный иммунный комплекс и определяют его радиоактивность в соответствующем счетчике (бета- или гамма-излучение). Интенсивность излучения прямо пропорциональна количеству связавшихся молекул антигена и антител. Иммуноферментный анализ, или метод (ИФА) - выявление антигенов с помощью соответствующих им антител, конъюгированных с ферментом-меткой (пероксидазой хрена, бета-галактозидазной и или щелочной фосфатазой). После соединения антигена с меченой ферментом иммунной сывороткой в смесь добавляют субстрат/хромоген. Субстрат расщепляется ферментом и изменяется цвет продукта реакции - интенсивность окраски прямо пропорциональна количеству связавшихся молекул антигена и антител. ИФА применяют для диагностики вирусных, бактериальных и паразитарных болезней, в частности для диагностики сальмонеллеза, микоплазмозов и др., а также определения гормонов, ферментов, лекарственных препаратов и других биологически активных веществ, содержащихся в исследуемом материале в минорных концентрациях-1010 -1012 г/л. Твердофазный ИФА - вариант теста, когда один из компонентов иммунной -реакции (антиген или антитело) сорбирован на твердом носителе, напр., в лунках планшеток из полистирола. Компоненты выявляют добавлением меченых антител или антигенов. При положительном результате изменяется цвет хромогена. Каждый раз после добавления очередного компонента из лунок удаляют не связавшиеся реагенты путем промывания. добавляют сыворотку крови больного, антиглобулиновую сыворотку, меченную ферментом и субстрат/хромоген для фермента.
24. Реакции иммунного лизиса, применение. Реакция связывания комплемента. Ингредиенты, постановка, учёт, оценка. Применение. Реакция связывания комплемента (РСК) заключается в том, что при соответствии друг другу антигенов и антител они образуют иммунный комплекс, к которому через Fc-фрагмент антител присоединяется комплемент (С), т.е. происходит связывание комплемента комплексом антиген - антитело. Если же комплекс антиген - антитело не образуется, то комплемент остается свободным. РСК проводят в две фазы :
В 1-й фазе реакции при образовании комплекса антиген - антитело происходит связывание им комплемента, и тогда во 2-й фазе гемолиз сенсибилизированных антителами эритроцитов не произойдет (реакция положительная). Если антиген и антитело не соответствуют друг другу (в исследуемом образце нет антигена или антитела), комплемент остается свободным и во 2-й фазе присоединится к комплексу эритроцит - антиэритроцитарное антитело, вызывая гемолиз (реакция отрицательная). 25. Динамика формирования клеточного иммунного ответа, его проявления. Иммунологическая память. Клеточный имунный ответ (КИО) — сложная, многокомпонентная кооперативная реакция иммунной системмы, индуцированная чужеродным антигеном (Т-клеточными эпитопами). Реализуется Т-системой иммунитета. Этапы КИО:
Проявления КИО:
26. Характеристика регуляторных и эффекторных субпопуляций Т-лимфоцитов. Основные маркёры. Т-клеточный рецептор (ТКР). Генетический контроль разнообразия ТКР Т-лимфоциты представляют вторую важную популяцию лимфоцитов, предшественники которых образуются в костном мозге и затем мигрируют для дальнейшего созревания и дифференцировки в тимус (название "Т-лимфоцит" отражает тимусзависимость, как основное место раннего этапа созревания). По спектру биологической активности Т-лимфоциты являются регуляторными и эффекторными клетками, обеспечивающими адаптационную функцию Т-системы иммунитета. Они не продуцируют молекул антител. ТКР является мембранной молекулой, отличающейся от ВКР, но структурно и функционально близкой к антителам. TCR – АГ-специф. рецептор. Это главная молекула, относящаяся к суперсемейству Ig. Она имеет 3 части: надмембранную, мембранную и цитоплазматическую. Хвост TCR формируют 2-е глобулярные молекулы альфа и бета, которые имеют вариабульные и константные домены (Vα и Vβ, Сα и Сβ). Vα и Vβ формируют активный комплекс TCR. Там есть 3 гипервариабельных участка – константнодетерминированные области (КДО). Функция КДО - распознавание и связывание Т-клеточных пептидов, т.е. детерминантных групп АГ. TCR плотно сидит на клетке и его цитоплазматический хвост, его цитоплазматическая часть, учавствует в проведении инф. В ядро при его взаимодействии с АГ. Примерно 90 % TCR. Несут цепи альфа и бета, а примерно 10% несут цепи гамма и дельта. TCR кодируется генетически. α и γ цепи по аналогии с легкими цепями ИГ кодируются V,G и C – генами, а β и δ по аналогии с тяжелыми цепями ИГ - V,G,E. α и γ в 7-й хромосоме, а β и δ в 14. CD-3 рецептор – это комплементарная структура, Ig молекула. Она образована 3-мя трансмембранными белками: εδ, εγ и димер-дзета., надмембранный, vембранный и цитозолный хвост. Они с TCR представляют единый комплекс, Который обеспечивает проведение АГ –специфических сигналов в ядро клетки СD4 и СD8. Они экспрессируют или одновременно с TCR или отдельно от него. Играют функцию ко-рецепторов. Они усиливают адгезию с АГ-презентирующей клеткой. Обеспечивают проведение АГ-специфического сигнала в ядро клетки. Т-лимфоциты разделены по типу разпозн, МОЛЕКУЛ: СD4 распозн. Пептид ГКГ 2-го класса СD8 пептид + ГКГ 1-го класса СD2 Характеристика основных субпопуляций Т-лимфоцитов: популяцию Т-лимфоцитов можно классифицировать на три класса: A. Хелперы, эффекторы ГЗТ (CD 4+) и Супрессоры-цитотоксические (CD 8+); B. Нестимулированные (CD 45 RA+) и клетки памяти (CD 45 RO+); C. Тип 1 - (ИЛ-2, ИНФ-гамма, ТНФ-бэта продуцирующие); Тип 2 - (ИЛ-4, ИЛ-5, ИЛ-6, ИЛ9, ИЛ 10 продуцирующие). 27. Активация Т-лимфоцинтов. Костимуляция. Модель двух сигналов. Анергия. Апоптоз 1. Мембранные процессы, связ. с разпозн. Т-лимф. Пептид+ГКГ Iили II. 2. Цитозольные хвосты связаны с протеинкиназами. Сигнал при расп. АГ с мембр. клетки усиливается, запускается каскад протеинкиназ, вовлекается фосфолипаза С, идет активация белкв, которые связаны с ДНК Т-лимфоцита. 3. Клетки вырабатывают ИЛ-2 под действием которого примерно через 12 часов клетки трансформируются в бласты. Пролиферация идет дальше и бласты дифференцируются в зрелые Т-лимфоцитные клетки. Анергия — полная или частичная утрата организмом специфической иммунологической реактивности (обычно в форме гиперчувствительности замедленного типа). Выявляется с помощью внутрикожных тестов на анамнестические антигены. Дает отрицательные результаты, к примеру, при ВИЧ-инфекции, у больных туберкулезом, лепрой, у онкобольных. При анергии отмечается отрицательный или сниженный пролиферативный ответ CD4+ Т-лимфоцитов на специфические антигены и митогены in vitro и in vivo. Различают центральную и периферическую анергию. Последняя выражается полной или частичной утратой способности ИКК к активации вследствие блокирования антигенспецифических рецепторов, повреждения механизмов костимуляции Апоптоз —механизм запрограммированной гибели одной клетки или группы клеток многоклеточного организма. Сигналы, запускающие механизмы апоптоза, активируют ферменты, которые вызывают фрагментацию ДНК на участки 50-300 п.н. и разрушение клетки. После этого начинаются фагоцитоз и элиминация апоптозных телец макрофагами. Признаками апоптоза являются уменьшение размеров клетки, уплотнение и фрагментация хроматина, скопление его возле ядерной мембраны, уменьшение объема цитоплазмы. При этом гибель клеток не сопровождается воспалением и повреждением тканей. Апоптоз индуцируется большинством веществ (в малых концентрациях), вызывающих некроз, а также сигналами, поступающими от регуляторных клеточных молекул (гормонов, цитокинов, антигенов, суперантигенов, моноклонштьных антител). Противоположным апоптозу процессом является некроз — повреждение нормальных тканей 28. Методы определения количества и функциональной активности Т-лимфоцитов 1. определение Е-розеток основано на наличии на мембране Т-лимфорецепторов к эритроцитам барана При смешивании лимфоцитов крови человека и эритроцитов барана образуются "розетки" - лимфоцит с прилипшими к нему 3 и более эритроцитами 2. кожно-аллергические пробы с соответствующими антигенами или веществами, имитирующими антигены (фитогемагглютинин), которые названы мутагенами; 3. реакция бластной трансформации лимфоцитов с фитогешгглютинлном или соответствующими антигенам проявляется в превращении лимфоцитов в более крупные молодые клетки - бласты, число которых подсчитывается в препарате на 200 лимфоцитов. 4. реакция подавления миграции макрофагов или гранулоцитов под действием фактора, продуцируемого Т-лямфоцитами при взаимодействии со специфическим антигеном. Лимфоциты человека смешивают с предполагаемым антигеном, а через 18 часов в каплю полученной культуральной жидкости опускают капилляр, наполненный подвижными макрофагами или гранулоцитами и через, сутки измеряют степень их миграции из опытного и контрольного (без антигена) капилляров. Их отношение называется индексом подавления миграции. 5. определение цитотоксичности Т-киллеров выявляется при взаимодействии лимфоцитов больного с клетками-мишенями, т.е. клетками, выдавшими их образование. Подсчитывается количество погибших клеток. 29. Местный иммунитет, значение Основные компоненты. Иммунная система слизистой оболочки (ИССО) является особым и самостоятельным компонентом иммунной системы организма человека и отличается от лимфоидной ткани периферических отделов тем, что способствует проникновению в циркуляторное русло различных изотопов антител. Более того, регуляция ИССО отличается от таковой в периферической лимфатической ткани (последнюю часто называют «системной иммунной системой»). В ИССО можно выделить индукторные зоны, где антиген или вакцина распознаются, фагоцитируются и презентируются В- и Т-клеткам, и другие области организма, в которых иммунокомпетентные клетки выполняют свои функции (мукозальные эффекторные ткани) ). В-клетки отвечают за выработку иммуноглобулина A (IgA), главного изотипа ИССО, который, как принято считать, появляется в индукторных зонах в ответ на вдыхаемые антигены. Кроме того, при помощи Т-хелперов (Th) и цитокинов эти В-клетки в процессе иммунного ответа претерпевают изменения, заключающиеся, в частности, в их дифференцировке в клетки памяти. После миграции в эффекторные зоны, такие как собственная пластинка слизистой оболочки (СПСО) кишечника, верхних дыхательных путей (ВДП) и мочеполовой системы, В-клетки быстро трансформируются в IgA-продуцирующие плазматические клетки. Считается, что антиген-специфичные Th, такие как CD8+ цитотоксичные Т-лимфоциты (ЦТЛ) могут циркулировать между индукторными и эффекторными зонами слизистых оболочек. Специалисты, занимающиеся изучением ИССО, называют эту систему общей иммунной системой слизистых оболочек (ОИССО). 30. Аллергия. Стадии аллергии. Типы аллергических реакций. АЛЛЕРГИЯ (от греч. аllos - другой) - форма иммунного ответа, специфическая повышенная чувствительность организма к аллергену (антигену) в результате неадекватной реакции иммунной системы на повторный контакт с аллергеном, что приводит к повреждению тканей. СТАДИИ АЛЛЕРГИЧЕСКОЙ РЕАКЦИИ
ГИПЕРЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ ЗАМЕДЛЕННОГО ТИПА (IV ТИП)
31. Аллергены, определение, классификация, характеристика. АЛЛЕРГЕНЫ –химические в-ва любой природы, которые при попадании в организм вызывают сенсибилизацию к ним. |