Глик Молекулярная биотехнология. Глик Б., Пастернак Дж. Молекулярная биотехнология. Принципы и применение. Пер с англ. М. Мир, 2002. 589 с
 Скачать 9.74 Mb.
|
ГЛАВА 9. | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Таблица 9,1, Сравнение некоторых методов диагностики инфекционных заболеваний, вызванных паразитическими микроорганизмами1' | ||
| Метод | Преимущества | Недостатки |
| Mикроскопическое | Простота | Трудоемкость, длительность |
| исследование | Прямое выявление паразитических | Низкая чувствительность |
| | микроорганизмов | Невозможность разграничения сходных |
| | Возможность разграничения | м икроорганизмов |
| | микроорганизмов по морфологическим | Необходимость высокой квалификации |
| | признакам | для интерпретации результатов |
| Культивирование in vitro | Обнаружение только жизнеспособных | Длительность анализа, высокая стоимость |
| и иммунизация мышей | паразитических микроорганизмов | Разные породы животных лают разные ответы |
| | Возможность определения вирулентности | Потеря жизнеспособности в организме животного |
| | и инфекционности | Использование животных |
| Определение антител в | Простота, непродолжительность анализа | Не всегда специфичен |
| сыворотке | Возможность автоматизации | Невозможность разграничения острой и латентной |
| | Возможность тестирования большого | форм инфекции |
| | числа образцов | |
| Гибридизация и ПЦР | Быстрота, высокие чувствительность и | Высокая стоимость анализов, многоэтапность |
| | специфичность | Невозможность различить живые и мертвые |
| | Прямое обнаружение паразитических | микроорганизмы |
| | м и к роорган измо в | Возможность получения лож неположительных |
| | Возможность разграничения разных видов | и ложноотрицательных результатов |
| | Независимость результатов от предыдущих | |
| | инфекций | |
| | Не требуют жизнеспособности | |
| | паразитов | |
| | Возможность автоматизации | |
| 1) По данным работы Weiss, Clin. Microbiol. Rev. 8: 113-130, 1995. | ||
182 ГЛАВА 9
хо растут в культуре либо вообще не поддаются культивированию. В качестве примера можно привести облигатных внутриклеточных паразитов Chlamydiatrachomatis, которые вызывают хламидиоз, болезнь, передающуюся половым путем и распространенную в Северной Америке и Европе, Хламидиоз трудно диагностировать, поскольку для этого необходима перевиваемая культура клеток. При этом часто получают ложноотрицательные результаты (т. е. ошибочно диагностируют отсутствие микроорганизма), в результате чего не проводится адекватное лечение. Безусловно, если для выявления микроорганизма необходимо выращивать его в культуре, то рутинной может стать идентификация лишь нескольких из всех известных патогенных микроорганизмов. Чтобы устранить это принципиальное ограничение, были разработаны методы молекулярной диагностики, в основе которых лежат иммунологические подходы или методы обнаружения специфической ДНК.
Любой метод выявления патогенных микроорганизмов должен быть достаточно простым и обладать высокой специфичностью и чувствительностью. Специфичный диагностический тест должен давать положительный ответ только на микроорганизм- или молекулу-мишень, чувствительный — обнаруживать очень малые количества такой мишени даже на фоне других микроорганизмов или молекул, загрязняющих образец. Простота метода подразумевает, что он является достаточно продуктивным, эффективным и недорогим для рутинного применения.
По оценкам специалистов, объем мирового рынка иммунодиагностических тестов в 1993 г. составил 3,4 млрд. долл. США и в ближайшие 10—15 лет будет возрастать на 5—10% ежегодно. В 1994г. объем мирового рынка ДНК-диагностических тестов был равен примерно 80 млн. долл., к 2000 г. он, по-видимому, составит 600 млн. долл., а к 2004 г. — 2 млрд. долл. В этой главе мы обсудим принципы некоторых методов молекулярной диагностики и сферу их применения.