лекции токса. Лекции по токсикологической химии
 Скачать 5.01 Mb.
|
Экспресс-метод определения лекарственных веществ на основехроматографического скрининга (ХТС) Точное установление природы яда невозможно без применения химических и физико-химических методов анализа. Особую актуальность среди них имеют методы скрининга. Скрининг представляет собой систему поиска в биологических жидкостях неизвестного токсического вещества. Он является ведущим диагностическим тестом в затруднительных случаях клинической диагностики состояний интоксикации, таких, как коматозное состояние, комбинированное применение лекарств, подозрения на отравление. Скрининг позволяет за минимальное время выявить из большого круга лекарственных средств одно или несколько веществ и в дальнейшем более целенаправленно вести анализ, либо исключить наличие яда. Для скрининга лекарственных веществ в клинической практике наиболее приемлем метод хроматографии в тонком слое, который в сочетании с детектирующими реагентами и комплексом подтверждающих тестов является достаточно информативным и отличается экспрессностью. Простота выполнения делает метод доступным для большинства клинико-диагностических лабораторий. Известно, что в живом организме любое лекарственное средство подвергается метаболизму, в результате чего могут появиться более активные в фармакологическом отношении соединения. Однако, большинство лекарственных средств, несмотря на метаболические превращения, обнаруживаются в биологических жидкостях (в основном в моче) в нативном состоянии. Метаболиты, сопутствующие неизмененным ядам, в большинстве случаев не мешают их обнаружению ввиду достаточно четкого разделения при хроматографировании. В ХТС-скрининг, применительно к анализу мочи. входит:
- для веществ кислого, нейтрального и слабоосновного характера - CHCl3 - ацетон (9:1). - для веществ основного характера - толуол - ацетон - этанол - 25% раствор NH4OH (47,5:45:7,5:2,5), которая может быть использована и для веществ первой подгруппы. Возможно использование и других универсальных систем. Для обнаружения на хроматограмме веществ кислотного характера (барбитуратов, салицилатов), а также веществ слабоосновного характера (фенотиазинов, производных пиразолона) проводят последовательное опрыскивание хроматограмм растворами ДФК, HgSO4 и FeCl3. Для обнаружения веществ основного характера хроматограмму обрабатывают реактивом Драгендорфа. Для усиления окраски и проявления некоторых веществ слабоосновного характера (кофеин) пластинку обрабатывают 20% раствором H2SO4. Идентификацию веществ проводят по величинам Rf относительно метчиков ( используя таблицы с величинами Rf). Заключение о присутствии тех или иных веществ делают на основании результатов ХТС-исследования и подтверждающих химических реакций, из которых наиболее чувствительны реакции хромогенные и микрокристаллические. При обнаружении лекарственных средств проводят их количественное определение, в основном спектрофотометрическим и фотоэлектроколориметрическим методами. Количественное определение токсических веществ в биологических жидкостях, в частности в крови, дает возможность установить тяжесть отравления и контролировать эффективность лечения в условиях клиники. Токсические и смертельные концентрации различных лекарственных веществ в плазме крови человека приведены в справочных таблицах. ГРУППА ВЕЩЕСТВ, ИЗОЛИРУЕМЫХ ЭКСТРАКЦИЕЙ НЕПОЛЯРНЫМИ РАСТВОРИТЕЛЯМИ. ПЕСТИЦИДЫ
В настоящее время химия и технология пестицидов - одна из самых динамичных областей хозяйственной деятельности человека. Пестициды - общее название всех химических соединений, которые применяются в сельском хозяйстве для защиты культурных растений от вредных организмов (англ. Pestis - паразиты, cide - уничтожать). Главной их сферой применения является растениеводство. Ежегодно половину мировых запасов продовольствия съедают или повреждают насекомые, микроорганизмы, преимущественно плесневые микрогрибы, грызуны, птицы и другие вредители: они уничтожают урожай и в поле, и при уборке и отгрузке, и во время хранения. Считают, что в случае успешной борьбы с насекомыми, микроорганизмами болезнями, которые поражают зерновые культуры в поле, ежегодная прибавка урожая составила бы около 200 млн. тонн зерна, которой хватило бы для пропитания 1 млрд. человек. Применение пестицидов в экономически развитых странах прочно вошло в практику возделывания основных сельскохозяйственных культур. Оборот пестицидов в мире возрос за 5 лет на 17%, с 26,8 млрд. $ в 1991г. до 31,3 млрд. $ в 1996 г. К 2001 году оборот пестицидов составил 38,5 млрд., что соответствует ежегодному приросту на 4,2%. Этот рост, главным образом, обусловлен увеличением потребления пестицидов в США, Западной Европе, Японии. В 1996 г. в мире было произведено 2,4 млн. тонн пестицидов. Основными производителями и потребителями пестицидов являются страны Северной Америки (30% оборота), Западной Европы (26%), Япония и Китай (24%). Оборот пестицидов в странах Восточной Европы и бывшего СССР составил около 5%. В мире ежегодно подвергается испытаниям около 500 тыс. различных химических соединений на пестицидную активность, причем из этого огромного числа практический выход получают всего 10-15 новых пестицидов. Показательны также объемы затрат на научно-исследовательские работы в этой области. В экономически развитых странах они составляют 2 млрд. $, что соответствует 10-15% от суммы реализации готовой продукции. За последние годы в России в области поиска химических средств защиты растений объединены усилия около 150 научных организаций страны. Это позволило осуществить синтез и провести биологические испытания более 60000 химических соединений. Во всем мире в среднем за год применяется около 3,2 млн. тонн гербицидов, фунгицидов и инсектицидов (в среднем, по 0,5 кг на одного жителя планеты). Наряду с безусловно полезными свойствами пестицидов следует отметить отрицательные стороны их применения. Перечень неблагоприятных последствий широкого применения пестицидов велик - загрязнение воды, почвы, продуктов питания, хронические заболевания и острые отравления, врожденные аномалии развития, детская смертность и т.д. Применение химических средств защиты растений ставит четыре острые проблемы: Первая из них связана с тем, что определенные пестициды, например, ДДТ и ртутьорганические соединения, имеют тенденцию накапливаться в живых организмах. В некоторых случаях пестициды не только накапливаются в организме в количестве большем, чем в окружающей среде, но их концентрация возрастает по мере продвижения по пищевым цепям. Это явление называют эффектом биологического усиления. ДДТ служит примером биологически усиливающегося пестицида. Когда в организм животного попадает ДДТ с водой, с остатками уже обработанных растений или насекомыми, которые питались такими растениями, он концентрируется в жировых тканях, так как ДДТ растворим в жирах. Из жировых тканей ДДТ выводится очень медленно. Если какой-то другой организм в пищевой цепи поедает первый, то он в этом случае поглощает уже более высокую дозу ДДТ. Биологическое усиление ДДТ в пищевой цепи
Организмы, находящиеся на вершинах пищевых цепей (например, человек или хищные птицы), поедают пищу, в которой ДДТ содержится в значительно более высоких концентрациях, чем обычно в окружающей среде. Одним из последствий накопления ДДТ в организме птиц является то, что они откладывают яйца со значительно более тонкой скорлупой. Тонкая скорлупа легко разбивается и не может защитить развивающегося в яйце птенца. ДДТ широко мигрирует по земному шару. Заметные количества ДДТ обнаружены в моллюсках, рыбах, птицах и тюленях Северного и Балтийского морей, а также в антарктических рыбах, птицах и ластоногих. Пингвины Антарктиды, например, содержат в своем теле ДДТ в концентрации 0,024 мг/кг. Накопление ДДТ в фитопланктоне мирового океана уже при нескольких мкг/л из-за ничтожно низкой растворимости его в воде в значительной степени ингибирует процесс фотосинтеза. При широком использовании этого пестицида последствия этого явления могут стать непредсказуемыми, так как фитопланктон производит около 70% земного кислорода. Взрослый житель ФРГ в среднем содержит в своем организме 4 мг ДДТ на 1 кг жира, житель США - примерно в 2,5 раза больше, накапливаясь прежде всего в жировой ткани органов, где присутствуют жироподобные (липидные) вещества, то есть в печени, сердце, нервной системе и клетках мозга. Вторая проблема связана с продолжительностью сохранения пестицидов в почве или на культурных растениях после обработки. Хлорированные углеводороды, такие как ДДТ, и пестициды, содержащие мышьяк, свинец или ртуть, относятся к группе устойчивых, они не разрушаются за время одного вегетационного сезона под действием солнца, экзоферментов или микроорганизмов. Период полужизни у ДДТ, например, может продолжаться до 20 лет. За этот период только половина первоначально использованного ДДТ разложится до простых соединений. Широкий спектр воздействия и устойчивость ДДТ способствовали его накоплению в пищевых цепях, что оказывало губительное действие на их концевые звенья. Когда в США концентрация ДДТ в молоке кормящих матерей в результате передачи этого вещества через пищевые цепи достигла уровня в 4 раза выше предельно допустимого, применение ДДТ было запрещено. Далее ДДТ был запрещен в Новой Зеландии, СССР, Венгрии, Швеции, Дании, Финляндии и в других странах. Правда, не всегда запреты были полными и неограниченными. Например, в СССР вначале не могли отказаться от использования ДДТ в борьбе с клещами - переносчиками таежного энцефалита, так как не было другого подходящего акарицида. Позже ВОЗ разрешила применение ДДТ в беднейших развивающихся странах для борьбы с переносчиками болезней - малярийными комарами и мухами. До сих пор ДДТ используют в Австралии, Китае, Индии для опрыскивания садов. При этом индийское правительство считает, что новый подъем заболеваемости малярией - это следствие запрета или ограничения на применение ДДТ. Экспериментально было установлено, что ДДТ может вызвать генетические изменения в человеческом организме. Другие компоненты пестицидов - ртуть и мышьяк практически никогда полностью не инактивируются: они циркулируют в экосистеме или оказываются захороненными в иле. Еще в 1962 году вышла книга «Безмолвная весна», написанная американской писательницей-биологом Рэчел Карсон. Книга привлекла внимание широкой общественности к возрастающему отравлению окружающей среды инсектицидами и гербицидами. Впервые было высказано предположение, что со временем ядовитые и чужеродные химические вещества могут настолько насытить поверхность Земли, что сделают ее непригодной для жизни. «В округе стала распространяться какая-то загадочная болезнь, чье чумное дыхание начало преображать все вокруг...» - такими словами начинается одна из глав книги. «Над городом словно тяготело какое-то проклятие. Загадочные болезни уносили кур, коровы и овцы чахли и гибли. На все легла тень смерти...». Эту главу, Карсон закончила тогда словами: «Такого города в действительности не существует». Но не прошло и 15 лет, как он появился. Это произошло 10 июля 1976 г. В небольшом городке Севезо на севере Италии, в 30 км от Милана, произошел взрыв на химическом заводе по выработке пестицидов. Вещество, вырвавшееся при взрыве, было одним из самых страшных ядов, какие только известны химикам. Его научное название - 2,3,7,8-тетрахлордибензо-р-диоксин, сокращенно ТХДД. В атмосферу его попало всего около 2 кг. ТХДД ядовитее цианистого калия в 67 тыс. раз и в 500 раз - стрихнина. Смертельная доза ТХДД для человека составляет около 0,03 миллионных частей грамма на 1 кг массы тела. Только на 17 день после взрыва из-за того, что фирма попыталась скрыть состав выброса, началась эвакуация населения. Пало около 3 тыс. животных и 75 тыс. пришлось забить. Яд особенно сильно действовал на детей, игравших в момент взрыва на улице. Безобразные оспины, которые яд оставил на их коже, - пожизненное клеймо диоксина. Однако площадь отравленной зоны далеко не ограничилась городком Севезо. Хотя ТХДД практически нерастворим в воде, ветер и весенний разлив реки сделали его весьма подвижным. Через 2 года попытались очистить отравленную зону: сняли и удалили 20 см верхнего слоя почвы. Несмотря на это, в окружающей среде были неожиданно найдены большие концентрации диоксина. До сих пор г. Севезо остается опасной зоной. С лета 1987 г. и по настоящее время зараженная местность города является «экологическим полигоном» для изучения влияния диоксина на окружающую среду. Длительная устойчивость пестицидов является основным фактором в процессе вторичного загрязнения, когда объекты, никогда не подвергавшиеся обработке пестицидами, тем не менее их содержат. Циркуляция пестицидов может происходить по следующим схемам: воздух растения почва растения травоядные животные человек; почва вода зоофитопланктон рыба человек. Ирригационные воды Кубанских оросительных систем с остатками пестицидов после их использования сбрасываются в Приазовские лиманы, в воде которых токсиканты отсутствуют или обнаруживаются в незначительных количествах, но повсеместно и в больших концентрациях они присутствуют в донных осадках, водорослях и отдельных органах промысловых рыб. Таким образом, пестициды, являясь важным фактором воздействия человека на окружающую среду, опасны тем, что могут оказывать на нее различные отдаленные побочные воздействия. Отдаленные воздействия пестицидов на окружающую среду
Обследование, проведенное во Франции в начале 80-х годов, показало, что в большинстве случаев нагрузка хлорорганических и фосфорорганических пестицидов создается из-за поступления их в организм человека с продуктами растительного и животного происхождения. Годовое поступление пестицидов в организм человека с продуктами питания
Пестицидная нагрузка на человека в разных странах различна в зависимости от ассортимента потребляемых продуктов, принятой системы защиты растений и регламентирования остаточного содержания пестицидов в пищевых продуктах. Допустимые остатки пестицидов в продуктах - это официально разрешенное безвредное количество остатков пестицидов в пище (в мг/кг) того или иного продукта. Все приемы хранения, переработки и приготовления продуктов, как правило, способствуют уменьшению остатков пестицидов в пище. В России утверждены гигиенические нормы максимально допустимых уровней пестицидов в продуктах питания. Поступление с пищей предельно допустимых остаточных количеств пестицидов, как правило, не приводит к острым отравлениям. Оно проявляет себя растянутым во времени хроническим действием со слабовыраженной этиологией либо практически никак себя не проявляет. Непосредственный контакт с пестицидными препаратами, потребление продукции с высоким их содержанием могут стать причиной острых отравлений и даже гибели людей. По данным ООН, ежегодно почти у 1 млн. человек регистрируют отравления пестицидами, применяемыми при обработке сельскохозяйственных культур, из них около 40 тыс. человек погибают. При этом следует отметить, что число острых отравлений, вызванных пестицидами, как правило, не превышает 10% общего числа острых отравлений. В Нидерландах, например, применяли 413 химических средств защиты растений, содержащих 221 действующее вещество. Доля вызванных ими острых отравлений составила 10,7%. В Австрии этот показатель был равен 4%, в США - 5,3%, в России - 6,7%. Какое же место занимают пестициды среди других веществ, представляющих опасность для жизни человека? По данным ООН, из общего числа отравлений химическими средствами со смертельным исходом в мире на долю пестицидов приходится лишь 2,6%. Согласно той же статистике, например, обезболивающие лекарства стали причиной более многочисленных смертельных отравлений - 17,4%, а алкоголь вызвал смерть в 10,5% случаев. Таким образом, пестициды, казалось бы нельзя отнести к химическим средствам, представляющим ощутимую реальную опасность в повседневной жизни человека. В то же время существует опасность косвенного (через трофические, пищевые цепи) влияния пестицидов на здоровье человека и его наследственный аппарат. Следовательно, токсиколого-гигиенические проблемы, с которыми сталкивается человек при применении пестицидов, носят хронический характер. Третья проблема - это способность вредителей становиться устойчивыми к пестицидам: пестициды перестают их убивать. Устойчивость организма к пестициду, или резистентность, - это биологическое свойство организма сопротивляться отравляющему действию пестицида, способность выживать и размножаться в присутствии химического вещества, которое раньше подавляло его развитие. При многократном воздействии пестицидов подавляются нормальные чувствительные формы популяции и выживают резистентные формы, которые получают преимущество и становятся доминирующей частью популяций. Выявлена резистентность и 91 вида фитопатогенов к 40 фунгицидам, у 7 видов грызунов к родентицидам, у более 50 видов сорных растений к гербицидам. Так, возбудитель пиренофороза овса обладает восьмикратной устойчивостью к этилмеркурхлориду. Обнаружены популяции колорадского жука с трехсоткратной резистентностью к децису, тепличной белокрылки с 100-600 кратной резистентностью к актеллику и всей группе пиретроидов. Явлению резистентности вредных организмов присущи следующие отрицательные факторы:
Кроме того, развитие устойчивости у насекомых поставило под угрозу успешное использование пестицидов для борьбы с насекомыми - переносчиками заболеваний. Например, комары стали восприимчивы сначала к ДДТ, а потом к пропоксуру, который заменил ДДТ. Сейчас снова наблюдается рост числа заболеваний малярией. С четвертой проблемой столкнулись сравнительно недавно. Пестициды основное влияние оказывают на почвенную биоту, то есть живую фазу почвы. Было установлено, что почвенные микроорганизмы адаптируются к пестицидам и начинают разрушать или использовать их, или угнетаются и погибают. Выпадение отдельных таксономических групп микробиоценоза характеризует направленность действия химических соединений. Из трех основных типов средств защиты растений влияние фунгицидов является максимальным, а гербицидов - минимальным. Гербициды способны оказывать побочное действие на культуру, подавляя или активизируя развитие болезней растений. Это может быть как прямым - подавление или стимуляция фитопатогенов, так и косвенным - изменение физиологических процессов, происходящих в культурных растениях и ведущих к повышению или снижению их устойчивости к фитопатогенам. Так, внесение гербицида хлорсульфурона привело к усилению развития корневой гнили ячменя и снижению урожая почти вдвое, но не оказало никакого влияния на степень поражения растений офеоболезной гнилью. При применении гербицидов отмечено усиление вредоносности нематод и поражение зерновых вирусной инфекцией, последнее связано с нарушением обмена веществ в растениях. Подавляющее действие гербицидов на патогенную микрофлору семян и проростков кукурузы приводило к снижению семенной инфекции, но к увеличению пораженности кукурузы стеблевыми и корневыми гнилями. Установлено усиление степени развития некоторых заболеваний картофеля и овощных бобов при обработке диносебом и трифланом. На фоне использования атразина многие овощные культуры сильнее поражаются фузариозом, что приводит к гибели растений, а дифеномид отрицательно влияет на урожайность пасленовых овощей. В результате пестициды становятся неэффективными в борьбе с вредными организмами, а их все увеличивающееся количество ведет к дальнейшему загрязнению окружающей среды.
Как уже было сказано ранее, пестициды проявляют высокую физиологическую активность не только в отношении вредных организмов, но многие из них обладают высокой токсичностью для людей и животных. По сравнению с химическими веществами другого назначения пестициды имеют ряд особенностей, определяющих их опасность для человека и живой природы. Это преднамеренность их внесения в окружающую среду, непредотвратимость циркуляции в ней, возможность контакта с ними больших масс населения, высокая биологическая активность, направленная на уничтожение вредных живых объектов. Критериями токсичности пестицидов являются величины токсических и смертельных доз при разных путях поступления в организм - через кожу, легкие или желудочно-кишечный тракт. Помимо острой токсичности пестицидов особенно большие требования предъявляются к возможным отдаленным последствиям для человека, животных и прочей биоты, так как при обработке растений 99,0-99,9% вносимых пестицидов попадают в почву, водоемы, атмосферу и в конечном результате - в сельскохозяйственное сырье. Многие вещества, будучи малотоксичными, опасны в связи с возможностью мутагенного, тератогенного и канцерогенного действия при влиянии на организм в небольших количествах, близких к реально встречающимся. Они могут оказывать токсическое действие на плод, не принося вреда организму матери и, выделяясь с молоком, затем отрицательно влиять на рост и развитие младенца. Опасность пестицидов для человека определяют рядом критериев, характеризующих возможность поступления в организм и способность оказывать неблагоприятное воздействие. К критериям опасности относят их устойчивость в окружающей среде, стойкость к химическим, физическим и прочим факторам. Степень опасности при работе с пестицидами определяется величинами среднесмертельной (ЛД50) и пороговой - вызывающей минимальные нарушения - доз и концентраций при разных путях поступления в организм; зоной токсического действия (отношением ЛД50 к пороговой дозе; чем эта зона уже, тем больше опасность острого отравления), способностью проникать через неповрежденные кожные покровы и оказывать токсическое действие, наличием и выраженностью кумулятивных свойств. Для оценки опасности пестицидов разработана их классификация по накоплению (кумуляции) их в организме (см. Классификация пестицидов). | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
итающаяся рыбой птица