Литература для студентов медицинских вузов биохимический практикум под общей редакцией профессора агма д. М. Никулиной

• Название: Литература для студентов медицинских вузов биохимический практикум под общей редакцией профессора агма д. М. Никулиной
• Дата: 20.09.2019
• Размер: 2.08 Mb.
• Имя файла: Biokhimicheskiy_praktikum_chast_1.doc
• Тип: Литература; #87283
• страница: 2 из 5

I. ЛИТЕРАТУРА

а) обязательная

1. Т.Т.Березов, Б.Ф.Коровкин //Биологическая химия. М.: Медицина, 2002.

б) дополнительная

1. Т.Л.Алейникова, Г.В.Рубцова, Н.А.Павлова //Руковод-ство к практическим занятиям по биохимии.М.:Медицина, 2000.-126с.

2. Биохимия. //Под ред. Е.С.Северина. М.,Геотар-мед, 2003.-779с.

3. Горбунова В.Н., Баранов В.С. //Введение в молекулярную диагностику и генотерапию наследственных заболеваний. С.-Петербург:«Спец. лит-ра», 1997.-286с.

4. Климов А.Н., Никульчева Н.Г. //Обмен липидов и липопротеидов и его нарушения. С.-Петербург:«Питер», 1999.-505с.

5. Кольман Я., Рем К.-Г. //Наглядная биохимия. М.: Мир, 2000.-470с.

6. Крю Ж. // Биохимия. Медицинские и биохимические аспекты. М.: Медицина, 1979.

7. Ленинджер А. //Основы биохимии. М.: Мир, 1985.- т.I - III.

8. Марри Р. и др. //Биохимия человека. М.: Мир, 1993.-тт.I, II.

9. Молекулярная клиническая диагностика. Методы. //Под ред.С.Херрингтона и Дж.Макги.М.: Мир, 1999.-560с.

10. Мецлер Д. //Биохимия. М.: Мир, 1980.- тт.I - III.

11. Николаев А.Я. //Биологическая химия. М.:Высшая школа, 1998.

12. Пустовалова Л.М.//Практикум по биохимии. Ростов на Дону: Изд-во Феникс, 1999.-544с.

13. Сборник тестов и задач по биохимии. //Под ред. акад. И.П.Ашмарина. М.: Изд-во МГУ, 1996.234с.

14. Страйер Л. //Биохимия. М.: Мир, 1984.-тт.I - III.

15. Строев Е.А. //Биологическая химия. М.: Высшая школа,1989.

16. Уайт А. и др. //Основы биохимии. М.: Мир, 1981.-тт.I - III.

17. Щербак И.Г. //Биологическая химия. С-Пб.: Изд-во СПбГМУ, 2005.-480с.

18. Элементы патологической физиологии и биохимии. //Под ред акад. И.П.Ашмарина. М.:Изд-во МГУ, 1997. – 237с.

19. Эллиот В., Эллиот Д. //Биохимия и молекулярная биология. М.:Изд-во НИИ Биомед.химии РАМН, 1999.-373с.

II. КОНСПЕКТЫ ЛЕКЦИЙ

III. МЕТОДИЧЕСКИЙ МАТЕРИАЛ: тематические папки,

таблицы, плакаты и пр.

КРИТЕРИИ ОЦЕНКИ ЗНАНИЙ СТУДЕНТОВ

Студенту выставляется оценка:

ОТЛИЧНО - при глубоком знании программного материала, продемонстрированном: а) исчерпывающим ответом;

б) грамотным свободным владением теорией при решении логических задач и практических заданий; в) знакомством с дополнительной литературой.

ХОРОШО - при твердом знании и грамотном изложении программного материала, отсутствии существенных неточностей в ответе, правильном применении теоретических положений в решении практических вопросов и задач.

УДОВЛЕТВОРИТЕЛЬНО - при знании только основных положений программного материала и недостаточном усвоении его деталей, характеризующимся неточностями формулировок, недостаточно грамотным и последовательным ответом, затруднением в решении задач.

НЕУДОВЛЕТВОРИТЕЛЬНО - при отсутствии знаний по значительной части программного материала, при существенных ошибках в ответе, неумении использовать теоретический материал при решении логических задач.

 Ч А С Т Ь  П Е Р В А Я
ОБЩИЕ БИОХИМИЧЕСКИЕ

ПРОЦЕССЫ В ЖИВЫХ ОРГАНИЗМАХ
РАЗДЕЛ I. СТРОЕНИЕ И СВОЙСТВА БЕЛКОВ

Занятие № 1
ТЕМА. БИОЛОГИЧЕСКАЯ РОЛЬ И ФИЗИКО-ХИМИ-

ЧЕСКИЕ СВОЙСТВА БЕЛКОВ. МЕТОДЫ ВЫДЕЛЕНИЯ

И ФРАКЦИОНИРОВАНИЯ БЕЛКОВ
Цель занятия:

1.Повторить физико-химические и изучить биологические

свойства белков.

2.Ознакомиться с методикой выделения белков.

3.Усвоить принцип разделения белков на фракции методом

высаливания.

Исходный уровень знаний:

- кислоты и основания в органической химии;

- химические свойства карбоксильной группы;

- механизм нуклеофильного замещения у тригонального ато-ма углерода;

- химические свойства аминогруппы: основность и нуклео-

фильность;

- строение, амфотерность и растворимость аминокислот;

- коллоидные растворы и их свойства.

Содержание занятия.

I.2. Элементарный состав белков.

Классификация и номенклатура аминокислот, входящих в состав белков.

Функции белков.

Характерные физико-химические свойства белков.

Методы выделения и очистки белков.
II.1. Работа: ВЫСАЛИВАНИЕ БЕЛКОВ

Высаливание - это осаждение белков с помощью больших концентраций нейтральных солей: NaCl, (NH₄)₂ SO₄ и др.

Принцип метода.

Реакция высаливания обусловлена дегидратацией макромолекул белка с одновременной нейтрализацией электрического заряда. Для высаливания различных белков требуется определенная концентрация одних и тех же солей. При высаливании белок обычно не теряет своих нативных свойств. Он может, например, вновь проявлять ферментативную активность. Метод высаливания позволяет получить белки в кристаллическом виде и разделить белковую смесь на фракции, а именно: белки сыворотки крови - на альбумины (А) и глобулины (Г). Глобулины, имеющие большую молекулярную массу, высаливаются в полунасыщенном (50%), а альбумины - в насыщенном (100%) растворе сернокислого аммония.

Хлористый натрий осаждает глобулины при полном насыщении (100%) раствора, а для осаждения альбуминов требуется еще и его подкисление.

Высаливание белков является обратимой реакцией, т.к. осадок белка опять может раствориться после уменьшения концентрации солей диализом или разведением водой.

Для определения белка в растворе используется универсальная биуретовая реакция.

Химизм биуретовой реакции. Биуретовая реакция выявляет в белке пептидную ( -CO-NH- ) связь. В щелочной среде раствор белка при взаимодействии с ионами меди приобретает сине-фиолетовый цвет, а продукты его неполного гидролиза (пептоны) - розовое окрашивание. Биуретовую реакцию способны давать вещества, которые содержат не менее двух пептидных связей. Биуретовая реакция обусловлена образованием биуретового комплекса в результате соединения меди с пептидной группировкой белка. В щелочной среде лактимные формы образуются из лактамных форм. Биуретовая реакция схематично протекает так:

H R₂ O H R₄ O

| | || | | || Cu(OH)₂+2NaOH

H₂N-CH-C-N-CH-C-N-CH-C-N-CH-C-N-CH- .....

| || | | || | |

R₁ O H R₃ O H R₅

полипептид (лактамная форма)
R₂ OH R₄ OH

| | | |

H₂N-CH-C=N-CH-C=N-CH-C=N-CH-C=N-CH- ....

| | | | |

R₁ OH R₃ OH R₅

полипептид (лактимная форма)

Положительную биуретовую реакцию отдельные аминокислоты не дают. Исключение: гистидин и аспарагин, с которыми биуретовая реакция происходит при условии их больших концентраций в растворе.

R₂

|

R₁-HC-C=N-CH-C=N-CH-R₃

| | | |

H₂N O O C-ONa

||

Cu  — ―N

↑ ¦

| R₄-CH

| | СOONa COONa

| C -ОNа | |

| || CH-NH₂ CH-NH<sub>2

└ ― ― ― —</sub> N | |

| CH₂ CH₂

CH-R₅ | N N

N Cu N

биуретовый медный комплекс медный комплекс с гистидином

фиолетового цвета в случае биуретовой реакции
ПРИМЕЧАНИЕ: при постановке биуретовой реакции нельзя добавлять избыток сульфата меди, так как синий осадок гидрата окиси меди маскирует фиолетовое окрашивание биуретового комплекса белка.
Порядок выполнения работы.

Реактивы	1 пробирка	2 пробирка
Раствор белка	20 кап.	20 кап.
Порошок NaCl	до полного насыщения	-
Насыщенный раствор (NH4)2SO4	-	20 кап.
ФИЛЬТРОВАНИЕ
Осадок	Глобулины	Глобулины
	К фильтрату 1 добавить
1% раствор CH3COOH	10-20 кап.	-
Порошок (NH4)2SO4	-	до полного насыщения
ФИЛЬТРОВАНИЕ
Осадок	Альбумины	Альбумины
КОНТРОЛЬ - БИУРЕТОВАЯ РЕАКЦИЯ
Фильтрат 2	5 кап.	5 кап.
10% NaOH	5 кап.	5 кап.
1% CuSO4	1 кап.	1 кап.
РЕЗУЛЬТАТЫ:

ВЫВОД:


III.2.Контрольные вопросы.

Какие факторы удерживают белки в растворе?

Чем обусловлен коллоидный характер белковых растворов?

На чем основаны реакции осаждения белков?

Какие физико-химические свойства белков позволяют их

фракционировать?

Что такое высаливание?

С помощью какой реакции можно выявить белок

в растворе?

Какую окраску имеют белковые и безбелковые растворы

при проведении биуретовой реакции?

Какие отдельные аминокислоты могут дать

положительную биуретовую реакцию?

Чем отличаются альбумины и глобулины?
Материал для самоподготовки. I а)1. с.19-49, II, III.
Занятие № 2
ТЕМА. СТРУКТУРНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ БЕЛКОВЫХ

МОЛЕКУЛ. МЕТОДЫ ОЧИСТКИ БЕЛКОВ
Цель занятия: 1.Изучить структурную организацию белковой

молекулы как основу функционирования всех белков.

2.Ознакомиться с особенностями структуры фибриллярных

белков.

3.Освоить методы очистки белков от примесей на примере

диализа.

Исходный уровень знаний:

- аминокислоты: строение, классификация;

- ковалентные и нековалентные связи: характеристика, при-

меры;

- физико-химические свойства белков.

Содержание занятия.

I.2. Строение глобулярных белков (первичная, вторичная, третичная, четвертичная структуры).

Особенности строения молекулы фибриллярных белков.

Взаимосвязь структуры и функции белков.

Видовая специфичность первичной структуры и антигенные свойства белков.

Методы очистки белков (хроматография, электрофорез, диализ и др.).

Гидролиз белка (виды, условия, продукты полного и неполного гидролиза).
II.1. Работа: ДИАЛИЗ БЕЛКА

Принцип метода.

Диализ основан на способности полупроницаемых мембран пропускать сквозь поры низкомолекулярные вещества и задерживать высокомолекулярные коллоидные частицы. Ди-ализ является удобным методом очистки белков. При диализе коллоидный раствор помещают в коллодиевый или целлофановый мешочек и погружают в дистиллированную или водопроводную воду. Молекулы солей, сахаров и других низкомолекулярных веществ легко диффундируют через мембраны, а вещества коллоидной природы остаются в мешочке.



1