Методика. Методика ИФА принцип. Метод иммуноферментного анализа (ифа) основывается на двух принципиальных научных открытиях
 Скачать 102.5 Kb.
|
|
ДИНАМИКА ИЗМЕНЕНИЙ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ИФА-ТЕСТОВ При инфицировании В связи с тем, что различные тест-системы дают возможность получить информацию о различных сторонах взаимодействия инфекционного агента и организма человека, возникает вопрос: каким образом значения отдельных показателей связаны с развитием исследуемых процессов. Всегда ли справедлива простая логика — чем ниже показатель, тем лучше? На рис. 3 схематически показана возможная динамика различных показателей при развитии острого инфекционного процесса. Предположим, что инфекция быстро развивается и заканчивается полным уничтожением инфекционного агента, что отражено на рис. За. Кривая 1 соответствует изменению числа бактерий, кривая 2 — уровню поверхностных Ag, определяемых методом ИФА. На рисунке видно, что эти кривые не совпадают во времени. Увеличение уровня поверхностных Ag может существенно отставать от роста числа бактерий. Некоторое запаздывание этой кривой может объясняться и тем, что чувствительность методов не бесконечно высокая, и ограниченной доступностью инфекционного агента в исследуемом материале, и рядом других причин. Возможно, сказывается то, что тест-системы, как правило, лучше реагируют на антигенноактивные фрагменты, в то время как Ag непосредственно на поверхности живой клетки могут оставаться недоступными для тест-системы. Даже при адекватном заборе материала для лабораторного исследования с соблюдением всех предосторожностей, как правило, отмечается подобного рода несовпадение. Таким образом, далеко не всегда результат лабораторного теста по определению поверхностного Ag инфекционного агента полностью соответствует содержанию биологически активного инфекционного материала. Результат теста зависит от многих составляющих инфекционного процесса и от конкретной реализации тест-систем. Имеют значение технология получения диагностических Ag и некоторые другие факторы, в том числе описанные выше. Еще более неоднозначной может быть трактовка результатов теста на наличие Ab к антигенам инфекционного патогена. Часто результаты такого теста могут, в общем, достаточно хорошо описываться известной кривой иммунного ответа на иммунизацию чужеродными Ag (рис.Зб). На рисунке кривая 1 отражает содержание инфекционного агента, кривая 2 — результаты вышеописанных тестов   Отметим две особенности этих кривых. Во-первых, кривая 2, которая, по сути, является кривой иммунного ответа, запаздывает по отношению к кривой, отражающей содержание инфекционного агента. Иногда это бывает очень существенно. Во-вторых, уровень специфичных иммуноглобулинов (Ig) , который собственно и определяется в нашем тесте, может сохраняться высоким и после подавления инфекции. Хотя это и не является абсолютным правилом. Кроме того, при анализе результатов такого теста необходимо помнить о том, какого класса Ig определялись в применявшемся тесте, поскольку при развитии иммунного ответа происходит закономерная смена классов Ig. В типичных случаях Ig класса М (первичный иммунный ответ) сменяются на Ig класса G (вторичный иммунный ответ). Вместе с тем, при реактивации хронической инфекции, “серологический профиль” пациента может имитировать первичный иммунный ответ (рис. 4).  Из всего вышесказанного для практического врача важно следующее. Тесты, определяющие непосредственно уровень Ag в исследуемом материале, более адекватно отражают уровень содержания инфекционного патогена или другого агента, однако результаты анализа сильно зависят от выбора материала для исследования, условий его забора и др. Причем невозможность забора необходимого материала может поставить под вопрос и применимость теста вообще. Особенно важно, что во многих случаях при исследовании наиболее доступного биологического материала, которым является сыворотка крови - такие тесты закономерно дают отрицательные результаты. Вторая группа тестов, достоинство которых заключено в возможности определения инфекции или опухоли вне зависимости от локализации патологического процесса, основана на выявлении Ab различного класса, а также их субпопуляций к антигенам инфекционного агента, раковой клетки, гормона и т.п. В клиническом понимании эта информация дает сведения о стадии иммунного ответа. При лечении Рассмотрим возможные варианты результатов определения Ag и Ab методом тИФА на примере успешного лечения бактериальной инфекции (рис. 5). Начало графика соответствует началу лечения. На рисунке видно, что через некоторое время содержание поверхностных антигенов начинает увеличиваться, иногда значительно. Затем уровень медленно падает до низких значений. Показатели тестов, определяющих содержание Ig, вообще не имеют на начальном этапе лечения четких тенденций. Может наблюдаться как снижение, так и увеличение уровня. Область, в которой могут лежать возможные значения, на рисунке заштрихована. В различных случаях может наблюдаться как увеличение значений, так и их снижение. Причем это зависит не только от применявшегося препарата, но и от других факторов. Хотя можно отметить, что при использовании некоторых препаратов имеется тенденция к снижению данного показателя, в то время как при назначении других – нет.  Необходимо подчеркнуть, что в указанном случае речь идет только об изменении отдельных показателей, полученных определенным методом. Изменение содержания Ag инфекционного агента в исследуемом материале не обязательно коррелирует, а часто — вовсе не совпадает с содержанием патогена в организме пациента. Уровень специфических Ab к Ag инфекционного агента не отражает состояние общего иммунного статуса, и тем более динамику изменения концентрации специфических Аb нельзя рассматривать в качестве показателя эффективности терапии, т.е. элиминации или сохранения в организме инфекционного агента. Оценка результатов любых лабораторных исследований должна проводиться врачом с учетом особенностей метода диагностики, своеобразия патогенеза болезни и индивидуальных особенностей конкретного пациента. Таким образом, современные лабораторные технологии предъявили новые требования к квалификации врача и ещё более повысили значимость клинического мышления в понимании результатов лабораторных анализов. АНТИТЕЛА К ВИРУСУ ГЕРПЕСА 1+2 типов(HSV) Вирус простого герпеса 1+2 типов может вызывать не только поражения кожи и слизистых оболочек, но и тяжелое поражение ЦНС, глаз и внутренних органов. Внутриутробное инфицирование может привести к поражению ЦНС плода, зрения и слуха, к рождению ребенка с микроцефалией, пороками развития желудочно-кишечного тракта. В 80% случаев внутриутробное заражение заканчивается гибелью плода. Риск пренатального заражения плода при первичном инфицировании матери составляет около 75%. Защитную роль в предотвращении заражения новорожденного, ограничении формирования латентных форм заболевания играют антитела к вирусу простого герпеса. Отсутствие признаков заболевания у новорожденного не исключает факта врожденного инфицирования и развития симптомов заболевания в последующие месяцы и годы жизни. Эти обстоятельства диктуют необходимость серологической диагностики этих инфекций у матери во время беременности и у ребенка сразу после рождения. Реактивация инфекции HSVне может предотвращаться иммунологически, так как распространяется внутри нервных клеток и не вступает в контакт со специфическими антителами в серозной или тканевой жидкости или с иммунокомпетентными клетками. Вирус герпеса распространяется в клетках-мишенях, разрушая их. Это приводит к периодически появляющимся на коже и слизистых оболочках очагах поражения с различной степенью выраженности и активным его выделением. Существует определенная закономерность в динамике выработки специфических антител к возбудителям инфекции простого герпеса. Через несколько дней после инфицирования на первом этапе формирования иммунитета образуются IgM антитела, уровень которых повышается достаточно быстро и значительно опережает интенсивность образования IgG антител На втором этапе формирования иммунитета, в более позднее время, начинают формироваться IgG антитела, концентрация которых повышается в течение нескольких недель (5-8) до максимального уровня. К этому времени продукция IgM антител снижается или прекращается совсем. После выздоровления или стабилизации процесса в крови в небольших количествах циркулируют только IgG антитела. Эту закономерность важно учитывать при подозрении на острую инфекцию у женщин с малыми сроками беременности (І-ІІ триместры). В этих случаях обязательно исследование специфических IgM антител, т.к. в начале заболевания, в самом опасном для плода периоде, IgG антитела могут не определяться или выявляться на низком уровне. |