Методичка по микробиологии. Методические рекомендации для студентов, в том числе для самостоятельной аудиторной и внеаудиторной работы

Название	Методические рекомендации для студентов, в том числе для самостоятельной аудиторной и внеаудиторной работы
Анкор	Методичка по микробиологии.doc
Дата	02.05.2017
Размер	1.09 Mb.
Формат файла
Имя файла	Методичка по микробиологии.doc
Тип	Методические рекомендации #6585
страница	4 из 18

1 2 3 4 5 6 7 8 9 ... 18

Тема: КОЛЛОКВИУМ ПО РАЗДЕЛУ: «ФИЗИОЛОГИЯ

МИКРООРГАНИЗМОВ». УЧЕБНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКАЯ РАБОТА СТУДЕНТОВ - УИРС.
Цель: контроль усвоения теоретического материала и практических

навыков по разделу: «Физиология микроорганизмов».

УИРС 1 этап.
ВОПРОСЫ ДЛЯ ПОДГОТОВКИ:

Теоретические вопросы и вопросы для самоподготовки

к занятиям №№ 5-7.
САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА:
Ответить на 20 вопросов ЭВМ-контроля или по теме.

Каждому студенту рассказать о препарате, предложенном

преподавателем:

состав, принцип работы и применение питательных сред - Ру, Левенштейна-Йенсена, Эндо, Левина, Плоскирева, Олькеницкого, Раппопорта, Китта-Тароцци, Вильсона-Блера, Игла, 199;

характер роста бактерий на жидких и плотных средах, «пестрый ряд»;

применение, постановка и учет методов Фортнера, Горовец-Власовой, Перетца, Аппельмана, Грациа, использование трубок Вейон-Виньяля, культур клеток - фибробластов, HeLa;

оценить методы индикации вирусов - РГА, ЦПД, «цветная проба», включения;

применение, постановка и учет реакций фаголизиса и фаготипирования, получение и применение бактериофагов.
3. УИРС - I этап:
1) – посев-отпечаток большого пальца на среду Эндо,

2)– посеять волос на МПА,

3)– посев тампоном мазка из носа на ЖСА.

У всех посевов подписать свой номер и поместить в термостат.

Лабораторное занятие №9
Тема: ИНФЕКЦИЯ. НЕСПЕЦИФИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ ЗАЩИТЫ

ОРГАНИЗМА. ПОНЯТИЕ И ВИДЫ ИММУНИТЕТА
Цель: отработать методику заражения и вскрытия лабораторных животных. Усвоить методы определения основных факторов неспецифической

защиты организма
ВОПРОСЫ ДЛЯ ПОДГОТОВКИ:

Понятие об инфекции. Условия возникновения, стадии развития

и характерные признаки инфекционной болезни.

Патогенность и вирулентность бактерий. Факторы патогенности.
Токсины бактерий, их природа, свойства, получение.
Неспецифическая резистентность. И. Мечников и его роль в формировании

учения об иммунитете. Виды фагоцитов, стадии фагоцитоза.

Комплемент, его структура, функции, пути активации, роль в иммунитете. Другие гуморальные факторы неспецифической резистентности.
Интерфероны, природа, виды, получение, применение.
Теории иммунитета.
Понятие об иммунитете. Виды иммунитета. Видовой (наследственный)

и приобретенный иммунитет.

Структура и функции иммунной системы.

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА:
1. Отработать и описать методику заражения и вскрытия лабораторного

животного. При вскрытии: а) сделать посев крови в сахарный бульон;

б) сделать посевы и мазки-отпечатки легких, печени, почек, селезенки;

в) мазки окрасить фуксином, промикроскопировать, найти возбудителя,

зарисовать.

2. Изучить и зарисовать готовый мазок незавершенного фагоцитоза

гонококков.

3. Просмотреть и зарисовать мазки-отпечатки капсульных микроорганизмов.

4. Сделать вывод по результатам титрования биологических жидкостей

(сыворотки крови, слюны) на определение в них лизоцима. Зарисовать.

5. Отчет по протоколу.

6. Уборка рабочего места.
Основные понятия темы:

Инфекционный процесс-
Инфекционное заболевание –

Пути передачи инфекционного агента:

1. 2.

3. 4.

5. 6.

Факторы, необходимые для развития инфекционного заболевания:

микроорганизма	Макроорганизма	внешней среды

Формы инфекционных болезней:

по виду возбудителя – _______________________________________

___________________________________________________________________

по количеству возбудителей - _____________________________________

по поражению различных систем –__________________________________

____________________________________________________________________

по распространению агента ______________________________________ ______________________________________________________________

по источнику инфекции – __________________________________________

_______________________________________________________________

по степени распространенности – __________________________________

_______________________________________________________________

Периоды инфекционного заболевания:

1. 2.

3. 4.

Патогенность –
Вирулентность –
DLM - LD₅₀ -
Факторы патогенности микроорганизмов:

структурные	ферменты агрессии	токсины

Характеристика бактериальных токсинов:

свойства	экзотоксины	эндотоксины
локализация
химическая природа
отношение к высокой t⁰
Токсичность
органотропность (специфичность)
источник получения анатоксина

Неспецифическая резистентность –
Факторы неспецифической резистентности:

общефизиологические	Гуморальные	клеточные

Фагоцитоз -

клетки	Стадии	причины незавершенности

Комплемент (С) –

Биологические функции комплемента –
Активаторы комплемента

а) по классическому пути –

б ) по альтернативному пути –

Интерфероны (ИФН) –
Виды интерферонов: 1. 2.

3. 4.
Иммунная система –

Компоненты иммунной системы:

Органы	Клетки	биомолекулы
1.центральные-

2.периферические -

Виды иммунитета –
по происхождению:

врожденный
приобретенный активный естественный

приобретенный активный искусственный

приобретенный пассивный естественный

приобретенный пассивный искусственный

по направленности:

Работа №1: методика заражения и вскрытия лабораторного животного
Заражение. Мышь берем зажимом за хвост, опускаем на стол, туловище быстро прижимаем к столу двумя пальцами левой руки и, скользя ими по спине, захватываем кожу над головой. Животное фиксируем в руке в растянутом положении, придерживая хвост мизинцем.

Для подкожного заражения ______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Для внутрибрюшинного заражения ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вскрытие: цель –

Этапы:

1) фиксация животного - ______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

2)осмотр наружных покровов –

3) вскрытие и исследование грудной полости - ________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
4) вскрытие и исследование брюшной полости:

_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Оформляется протокол вскрытия животного и готовятся мазки-отпечатки.
Мазки-отпечатки из органов

Вывод:

Работа № 2: Микроскопия мазков с незавершенным фагоцитозом

окраска______________________

фагоцит

возбудитель

незавершенный фагоцитоз

Работа № 3: капсульные микроорганизмы в мазках-отпечатках из органов

окраска________________________

клетки органов

капсульный микроб
Работа № 4: определение лизоцима в биологических жидкостях

методом титрования
Компоненты:

1.

2.

Инкубация в термостате

Механизм: __________________________________________________

____________________________________________________________

10 ^-1 10 ^-2 10 ^-3 10 ^-4 10 ^-5 10 ^-6 10 ^-7 10 ^-8 КК КС
Результат:_________________________________________________________
Титр лизоцима ___________________________________________________
Вопросы для самоконтроля:

Что такое инфекция?
Факторы, обуславливающие развитие инфекционной болезни.
Чем характеризуется инфекционная болезнь?
Периоды инфекционной болезни.
Свойства микроорганизма, обусловливающие инфекционную болезнь.
Свойства макроорганизма, обусловливающие инфекционную болезнь.
Патогенность и вирулентность микробов.
С чем связана вирулентность микроорганизмов?
Факторы агрессии, связанные с морфологией возбудителя.
Факторы агрессии, связанные с физиологией возбудителя.
Характеристика экзотоксинов микробов.
Характеристика эндотоксинов микробов.
Из каких токсинов можно получить анатоксины и почему?
Классификация токсинов по механизму действия.
Чем отличаются экзогенные и эндогенные инфекции?
Формы инфекций в зависимости от локализации.
Повторное проявление инфекционного заболевания.
Когда происходит размножение возбудителя в крови?
Что такое рецидив, реинфекция, суперинфекция, микстинфекция?
Возврат клинических проявлений без повторного заражения.
Что значит аутоинфекция?
Классификация инфекций по кругу хозяев.
Что изучает эпидемиология?
Что необходимо для развития эпидемического процесса?
Классификация инфекций по путям передачи.
Спорадические заболевания, эпидемии, эндемии, пандемии.
Что такое конвенционные заболевания?
Что изучает иммунология?
Разделы иммунологии.
Неспецифическая резистентность организма.
Общие факторы неспецифической резистентности.
Клеточные факторы неспецифической резистентности.
Гуморальные факторы неспецифической резистентности.
Какую резистентность обеспечивает нормальная микрофлора?
Защитная функция кожи и слизистых оболочек.
Фагоцитоз, стадии.
Фагоцитирующие клетки.
Роль полиморфно-ядерных лейкоцитов (ПМЯЛ).
Макрофаги: фиксированные и подвижные, их роль.
Процессы, в которых участвуют макрофаги.
Причины незавершенного фагоцитоза.
Характеристика и функции нормальных киллеров (NK).
Система комплемента: химическая структура, организация.
Где синтезируются белки комплемента?
Пути активации комплемента, их отличия.
Активаторы комплемента по классическому пути.
Активаторы комплемента по альтернативному пути.
Значение комплемента для развития воспаления.
Конечный итог активации комплемента.
В каких реакциях участвует комплемент?
Лизоцим: химическая структура, биологическая роль.
Какие клетки синтезируют лизоцим?
Система пропердина: химическая структура, биологическая роль.
Интерфероны: химическая структура, биологическая роль.
Виды интерферонов, их отличия.
Функции лейкоцитарного и иммунного интерферонов.
Острофазные белки, их участие в неспецифической резистентности.
Понятие иммунитета.
Отличия специфических реакций резистентности от неспецифических.
Особенности видового (врожденного) иммунитета.
Классификация иммунитета по происхождению.
Варианты приобретенного активного иммунитета.
Варианты приобретенного пассивного иммунитета.
Местный иммунитет, его особенности.
Иммунная система, ее структура и функции.
Центральные и периферические органы иммунной системы.
Костный мозг: его роль в иммунитете.
Строение и функции тимуса.
Какие иммунные процессы протекают в селезенке и в лимфоузлах?
Биологическая роль небных миндалин, аппендикса, пейеровых бляшек.

Лабораторное занятие №10
Тема: ИММУНИТЕТ: АНТИГЕНЫ И АНТИТЕЛА. ИММУНОКОМПЕТЕНТНЫЕ

КЛЕТКИ. РЕГУЛЯЦИЯ ИММУННОГО ОТВЕТА.

РЕАКЦИЯ АГГЛЮТИНАЦИИ (РА) И ЕЕ МОДИФИКАЦИИ
Цель: изучить постановку и учет результатов РА в различных модификациях,

уметь давать правильное заключение по готовым результатам
ВОПРОСЫ ДЛЯ ПОДГОТОВКИ:

Антигены, их основные свойства. Антигены бактериальной клетки.
Изоантигены (эритроцитарные, лейкоцитарные и др.). CD-антигены.
Иммунокомпетентные клетки, их кооперация в иммунном ответе.

Регуляция иммунного ответа.

Формы иммунного ответа.
Иммуноглобулины, их структура и функции. П. Эрлих.
Классы иммуноглобулинов, их отличия.
Антителообразование, первичный и вторичный ответ.
Иммунологическая память. Иммунологическая толерантность.
Реакция агглютинации: компоненты, механизм, способы постановки.
Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА): компоненты, механизм,

постановка, применение.

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ): механизм, варианты постановки,

применение.
САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА:

Поставить реакцию агглютинации (РА) на стекле для определения

неизвестной культуры. Сделать вывод, зарисовать.

Разобрать постановку и учет результатов развернутой РА для определения

неизвестного микроба, зарисовать.

Изучить и сделать вывод по готовой РА при определении антител

(на примере реакции Райта).

Оценить готовую реакцию непрямой или пассивной гемагглютинации

(РНГА): описать схему постановки, учесть результаты, дать заключение.

Разобрать и записать схему постановки и учет результатов прямой и

непрямой реакции иммунофлюоресценции (РИФ).

Изучить по таблице и записать механизм и схему постановки реакции

Кумбса на выявление неполных антител. Применение.

Описать диагностические препараты, используемые для постановки

изучаемых реакций.

Уборка рабочего места.
Отчет по протоколу.

Основные понятии по теме
Антигены-
Гаптены –
Антигены бактериальной клетки –

1._____________________ 2. ___________________ 3.______________________

4. ____________________ 5.____________________ 6. _____________________
Гетероантигены -
Ксеноантигены -
Изоантигены -
Аллоантигены -

Основные иммунокомпетентные клетки

клетки	функции	Маркеры	продуцируемые цитокины
АПК: -дендритные -моноциты -макрофаги
Т-лимфоциты: -Т-хелперы Th1 Th2 Т-цитотоксические
В-лимфоциты

Антитела –
Функции-
Валентность-
Аффинность-
Авидность-
Виды –
Характеристика основных классов иммуноглобулинов:

Свойства	IgG	IgM	IgA	IgE	IgD
Молекулярная масса
% в сыворотке крови
Подклассы
Валентность
Проходимость через плаценту
Связывание комплемента
Число субъединиц
Наличие в молозиве

Динамика образования антител при первичном и вторичном

иммунном ответе (ИО)

стадия	первичный ИО (дни)	вторичный ИО (дни)
латентная
продуктивная
стационарная
угасания

Иммунологическая память –
Иммунологическая толерантность-
Серологические реакции –
Стадии: 1)специфическая

2)неспецифическая
Реакция агглютинации –
Варианты использования:

1. Для определения возбудителя -

2. для определения антител -
Варианты постановки РА:

ориентировочная -
развернутая -

Работа № 1: ориентировочная реакция агглютинации (РА)

для определения неизвестной культуры
Компоненты: 1. культура ___________________________________________

2. диагностические аггл.сыворотки___________________________________

________________________________________________________________

Механизм: ______________________________________________________

Учет ______________

эшерихиозная О-26 О-55 О-111

поливалентная

Результат:
Заключение: _______________________________________________________
Работа №2: развернутая реакция агглютинации (РА) при определении

неизвестной культуры
Компоненты:

1. культура _______________________________________________________

2. аггл.сыворотка _______________________________________Титр=

Инкубация в термостате_________________

Механизм: ________________________________________________________

__________________________________________________________________

1/100 1/200 1/400 1/800 1/1600 1/3200 КС КК
Результат:

Заключение:
Работа № 3: Реакция агглютинации (РА) при определении антител
А)Ориентировочная –реакция Хеддльсона при бруцеллезе -
Компоненты:

1. сыворотка_______________________________________________________

2. диагностикум____________________________________________________

Инкубация ______________________

Механизм: ________________________________________________________ __________________________________________________________________

0,1 0,2 0,4 К
Результат:
Заключение:
Б) развернутая –реакция Райта при бруцеллезе.
Компоненты: 1. сыворотка

диагностикум

Инкубация -

Механизм: __________________________________________________________
Титр АТ в РА _______________________________________________________

1/100 1/200 1/400 1/800 1/1600 1/3200 КС КД
Диагностический титр (ДТ) –

Результат: титр АТ= ДТ=
Заключение:
Работа № 4: Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА)

при серодиагностике инфекций
Компонеты:1.сыворотка______________________________________________

2.диагностикум______________________________________________________

Инкубация__________________

Проводится в лунках плексигласового планшета.

Механизм: _______________________________________________________

_________________________________________________________________

РНГА ( + ) – РНГА ( - ) -

Титр АТ в РНГА -___________________________________________________

1/10 1/20 1/40 1/80 1/160 1/320 1/640 1/1280 КС КД
Учет: Титр АТ= ДТ=

Заключение:
Работа № 5: Реакция иммунофлюоресценции (РИФ)
Прямая РИФ позволяет выявить ___________________________________

Компоненты: 1. ____________________________________________________

2.________________________________________________________________

Постановка:

Механизм:_________________________________________________________

РИФ ( + ) – РИФ ( - ) –

Непрямая РИФ – двухфазная: 1-я фаза ______________________________

2-я фаза__________________________________________________________

1вариант – для выявления возбудителя -

Компоненты: 1. 2. .

3.

Механизм: _________________________________________________________

2 вариант – для выявления антител –

Компоненты: 1. 2.

3.

Механизм: ________________________________________________________
Работа № 6: реакция Кумбса на выявление неполных антител
Неполные антитела -

Компоненты: реакция двухфазная, 1-я фаза - __________________________

____________________________ 2-я фаза _____________________________

Механизм: _______________________________________________________

________________________________________________________________________
Используется для определения резус-антител.
Работа № 7: диагностические препараты, используемые

для постановки изучаемых реакций

агглютинирующие сыворотки:

поливалентные
видовые
монорецепторные.-

диагностикумы

диагностикумы эритроцитарный

сыворотка антиглобулиновая (АГС)

сыворотки меченные ФИТЦ

Вопросы для самоконтроля

Понятие об антигене.
Условия, определяющие антигенные свойства различных веществ.
Характерные свойства антигенов.
Что такое антигенность, с чем она связана?
Что такое валентность антигена?
Как можно повысить антигенность?
Адъюванты, химическая природа, роль.
С чем связана специфичность антигенов?
Что такое эпитопы, их строение, виды, свойства.
От каких факторов зависит иммуногенность антигенов?
Свойства антигена, обусловливающие его иммуногенность.
Типы антигенной специфичности.
Специфичность антигенов: видовая, групповая, типовая, патологическая.
Экзо- и эндоантигены.
Отличия антигенов Т-зависимых и В-зависимых.
Отличия полноценных антигенов от гаптенов.
Условия перехода гаптена в полноценный антиген.
Ксеноантигены, изоантигены, аллоантигены, их отличия.
Основные антигены тела человека.
Эритроцитарные антигены системы АВО и Rh.
Что такое CD-антигены, их структура и значение.
Что собой представляют аутоантигены?
Когда и почему к клеткам органов поздней закладки развивается

иммунный ответ?

Антигены бактериальных клеток.
Почему экзотоксины бактерий являются полноценными антигенами?
Какие клетки называют иммунокомпетентными (ИКК)?
Как подразделяют ИКК по функциональной активности?
Какие клетки относятся к эффекторным?
Какие клетки выполняют регуляторную роль?
Где находятся полипотентные стволовые клетки (ППСК)?
Основные антигенпрезентирующие клетки (АПК).
Профессиональные фагоциты - маркеры, продуцируемые цитокины.
Дендритные клетки, их характеристика и роль в иммунитете.
Из каких клеток происходят лимфоциты?
Основные группы лимфоцитов, их отличия.
Т-лимфоциты, основные рецепторы и функции.
Субпопуляции Т-лимфоцитов.
Основные рецепторы и продуцируемые цитокины Th1.
Основные рецепторы и продуцируемые цитокины Th2.
Какие Т-лимфоциты запускают гуморальный иммунитет?
Какие Т-лимфоциты запускают клеточный иммунитет?
В каком взаимоотношении находятся Th1 и Th2?
Какие Т-лимфоциты выполняют эффекторную роль?
Основные рецепторы и продуцируемые цитокины Т-киллеров.
Морфологические и функциональные особенности Т-киллеров.
Чем отличаются клетки-памяти от других лимфоцитов?
Особенности нулевых клеток.
В-лимфоциты, их отличия от Т-лимфоцитов.
Основные рецепторы В-лимфоцитов.
От каких клеток получают помощь В-лимфоциты?
Основные индукторы иммунного ответа.
Участие каких клеток необходимо для развития иммунного ответа?
Какие вещества относятся к цитокинам?
Какие процессы регулируют цитокины?
Какова роль миелопептидов?
Основные участники запуска гуморального механизма иммунного ответа.
Основные участники запуска клеточного механизма иммунного ответа.
Формы иммунного ответа.
Иммунологическая память, механизм.
Положительные и отрицательные стороны иммунологической памяти.
Иммунологическая толерантность, врожденная и приобретенная.
Виды иммунологической толерантности.
Толерогены естественные и искусственные.
Положительные и отрицательные стороны иммунной толерантности.
Формы иммунного ответа клеточного типа.
Особенности иммунного фагоцитоза.
Антитела: химическая структура и функции.
Основные свойства антител: валентность, аффинность и авидность.
Антигенные детерминанты антител: изотипы, аллотипы, идиотипы.
Классы иммуноглобулинов, их структура и функции.
Основная характеристка Ig G, M, А, E, D.
В результате чего происходит переключение синтеза с IgM на IgG?
Какими иммуноглобулинами обусловлен местный иммунитет?
Какие клетки синтезирую антитела?
Где происходит синтез антител?
Стадии (фазы) продукции антител.
Чем обусловлен вторичный иммунный ответ?
Отличия первичного и вторичного иммунного ответа.
Нормальные антитела, неполные антитела, отличия, методы выявления.
Что лежит в основе серологических реакций ?
Реакция агглютинации (РА): понятие, механизм, варианты постановки.
Компоненты ориентировочной и развернутой РА для выявления антигена.
Компоненты ориентировочной и развернутой РА для выявления антител.
Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА): понятие, механизм.
Компоненты РНГА, особенности постановки, положительный результат.
Реакция Кумбса: компоненты, механизм.
В какой реакции определяют группу крови у человека?
Реакция иммунофлюоресценции (РИФ), механизм.
Компоненты и особенности постановки прямой РИФ. Применение.
Компоненты и особенности постановки непрямой РИФ. Применение.

1 2 3 4 5 6 7 8 9 ... 18