Методичка по микробиологии. Методические рекомендации для студентов, в том числе для самостоятельной аудиторной и внеаудиторной работы
 Скачать 1.09 Mb.
|
|
Федеральное агентство по здравоохранению и социальному развитию ГОУ ВПО «Ижевская государственная медицинская академия» «УТВЕРЖДАЮ» Проректор по учебной работе, профессор Бутолин Е. Г. «____»_______________2008 г. Учебно-методический комплекс По дисциплине микробиология, вирусология и иммунология Преподаваемой на кафедре микробиологии, вирусологии и иммунологии Для студентов лечебного факультета Раздел 3. Методические рекомендации для студентов, в том числе для самостоятельной аудиторной и внеаудиторной работы Ижевск 2008 Учебно-методический комплекс одобрен и утвержден на заседании кафедры «_____» __________________ 2008 г. Протокол № ______________________ Заведующий кафедрой __________________________ В.Н. Марков Учебно-методический комплекс одобрен и утвержден на заседании ЦМК «_____» __________________ 2008 г. Протокол № __________________ Председатель ЦМК __________________________ Н.Н. Чучкова Учебно-методический комплекс одобрен и утвержден на заседании ЦКМС «_____» __________________ 2008 г. Протокол № _____________________ Председатель ЦКМС __________________________ Д.М. Михайлов Учебно-методический комплекс одобрен и утвержден Начальник учебной части ________________________ О.И. Лосева «______» ____________________ 2008 г.  Разделы морфология, физиология, генетика и экология микроорганизмов представлены в методическом пособии (прилагается) РАЗДЕЛ 1: МОРФОЛОГИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ. Лабораторное занятие №1. Тема: МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ЛАБОРАТОРИЯ. ФОРМЫ БАКТЕРИЙ. ПРОСТЫЕ МЕТОДЫ ОКРАСКИ. Цель: Усвоить правила работы в бактериологической лаборатории. Отработать технику приготовления мазков, окраски их простыми методами и микроскопии. Научиться определять микроорганизм по морфологическим признакам. ВОПРОСЫ ДЛЯ ПОДГОТОВКИ:
Организация рабочего места. Техника безопасности.
Предмет и задачи микробиологии.
Р.Коха и их значение для развития науки.
(И.И. Мечников, Д.И.Ивановский, Г.Н. Габричевский, Ф. Гамалея, З.В.Ермольева, Л.И.Зильбер, А.А.Смородинцев, М.П.Чумаков, В.М.Жданов и др.).
Простые методы окраски бактерий.
люминесцентная, электронная), их особенности и возможности.
Методы фиксации, значение.
САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА:
лаборатории и технику безопасности.
с иммерсионной системой.
чистой культуры, фиксировать и красить их.
палочку, бациллы антракоида. Зарисовать и подписать.
Работа № 1: Правила работы в бактериологической лаборатории.
инструктаж по правилам работы и технике безопасности.
5. Во время работы с заразным материалом ограничиваются разговоры и перемещения по лаборатории. 6. Рабочее место должно содержаться в образцовом порядке. После работы с заразным материалом все принадлежности убирают на свое место. 7. При случайном попадании заразного материала на стол или другие поверхности, это место необходимо обработать дезинфицирующим раствором.
при необходимости обработать дезинфицирующим раствором. По окончании работы студент должен:
практической работой. Правила техники безопасности на кафедре микробиологии: А) при работе со спиртовым горючим - спиртовкой:
было возгорания спирта и взрыва.
другой.
5. Нельзя над зажженной спиртовкой передавать какие-либо предметы. 6. Нельзя оставлять без присмотра работающую спиртовку. Б) при работе с электрооборудованием запрещается:
приборами.
токоведущим элементам.
В) при работе с химическими веществами:
Работа №2: Устройство оптического микроскопа. Иммерсионная система. В микроскопе различают механическую и оптическую части. Механическая:–1/_____________,2/______________, 3/______________, 4/________________, 5/_________________, 6/_____________________ Оптическая – 1/_______, 2/_______, 3/осветительная система, которая состоит из: а)_____________, б) ____________, в)__________________. В зависимости от среды, которая находится между объективом и препаратом, различают «сухие» объективы малого и среднего увеличения и иммерсионные (увеличение х90- х100). Между фронтальной линзой такого объектива помещают иммерсионное масло (кедровое или синтетическое). Иммерсионное масло имеет показатель преломления как у стекла, что обеспечивает увеличение разрешающей способности объектива. Большинство микроорганизмов изучают в световом микроскопе с окулярами х7 или х10 и объективом х90. Техника иммерсионной микроскопии:
7 Четкость изображения устанавливают __________________. Работа №3: Правила приготовления микропрепаратов. Приготовление микропрепаратов из чистой культуры. Мазки из крови готовят с помощью второго стекла с отшлифованным краем. Каплю крови наносят у левого края стекла, перед каплей под углом помещают край отшлифованного стекла и продвигают его вперед вместе с каплей крови. Мазки из мокроты и гноя – материал стерильной петлей наносят на середину предметного стекла, накрывают вторым предметным стеклом и с усилием раздвигают в стороны. Мазки из гноя, взятого с помощью тампона – плоскостью тампона готовят штриховой мазок по середине стекла. Мазки-отпечатки из органов – вырезанный кусочек органа поверхностью среза прижимают к стеклу. Мазки из культуры бактерий, выращенной на плотной питательной среде, готовят с помощью бактериологической петли. Правило: бактериологическая петля стерилизуется до и после любой работы с ней и может находиться только в штативе или в руке. Этапы приготовления мазка: 1. Предметное стекло обезжирить мылом. 2. Петлей взять каплю стерильного физиологического раствора и нанести ее на середину предметного стекла. 3. Плоскостью стерильной петли осторожно снять культуру с агара в пробирке или чашке Петри и внести ее в каплю на стекле. 4. Круговыми движениями петли культуру растереть в капле, чтобы получился равномерный мазок диаметром около 2 см. 5. Мазок высушить над парами спиртовки. 6. Зафиксировать. 7. Окрасить и снова высушить. 8. Иммерсионная микроскопия. Значение фиксации: а) ___________________________ б)_____________________, в)_________________________. Методы фиксации: 1. Термическая – а) в пламени спиртовки: 3 раза медленно провести мазок через пламя; б) несколько капель спирта поджечь на стекле (при окраске по методу Бурри-Гинса). 2. Химическая – мазок опустить в ацетон на ___ мин., или в 95% этанол на ____ мин., или в смесь Никифорова (1:1 спирт и эфир) – на ____ мин. Простые методы окраски (принцип:____________________________) генцианвиолет, метиленовая синь, фуксин, и др. Для окрашивания фона в качестве краски используют черную тушь (метод Бурри). Работа № 4: Приготовление мазков из культур с плотной питательной среды и окраска их простым методом.
При простом методе окраски выявляется только форма микроба. По форме выделяют 4 группы бактерий:
б) неспорооборазующие - кишечная палочка, дифтерийная палочка, туберкулезная палочка, вибрион холеры, палочка чумы.
С  тафилококкStaphylococcus aureus (фуксин). Кишечная палочка Escherichia coli. (фуксин)  Бациллы антракоида Bacillus antracoides. (генцианвиолет) Гонококк в гное (метиленовая синь) лейкоцит Подпись преподавателя:_____________________ Вопросы для самоконтроля:
микробиологии?
микробиологии?
микробиологии?
микробиологии.
Лабораторное занятие №2. Тема: СТРУКТУРА БАКТЕРИАЛЬНОЙ КЛЕТКИ. СЛОЖНЫЕ МЕТОДЫ ОКРАСКИ. Цель: уметь выявлять различные структуры бактериальной клетки. Освоить технику окраски сложными методами: Грама, Гинса-Бурри, Нейссера, Циля-Нильсена, Ожешко. ВОПРОСЫ ДЛЯ ПОДГОТОВКИ:
выявления.
САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА:
Промикроскопировать и зарисовать готовые микропрепараты в окраске этими методами.
Работа №1: Отличия прокариот и эукариот:
Работа №2: Сложные методы окраски бактерий.Метод Грама. Для выявления определенных структур бактерий применяют сложные методы окраски, в основе которых лежит учет химических особенностей этих структур и использование контрастных красителей. Метод Грама позволяет выявить особенности строения клеточной стенки бактерий. 1. Генцианвиолет (бумажки по Синеву) смочить водой _____мин. 2. Раствор Люголя –_______ мин. 3. Этиловый спирт –________________ 4. Промывание водой 5. Фуксин Пфейффера – ____ мин. 6. Промыть водой. При этом методе окраски одни бактерии не обесцвечиваются спиртом и сохраняют окраску_____________ красителя, вторые обесцвечиваются спиртом и окрашиваются _____________ красителем. В зависимости от строения клеточной стенки все микроорганизмы подразделяются на Грам (+) и Грам (-). Способность Грам (+) бактерий удерживать генцианвиолет в комплексе с йодом связана со свойством многослойного пептидогликана взаимодействовать с краской. Особенности строения клеточной стенки Грам (+)и Грам (-) бактерий.
Грам (+) бактерии окрашиваются в _____________________цвет, потому, что__________________________________________________ ____________________________________________________________. Грам (-) бактерии окрашиваются в ____________________цвет, потому, что __________________________________________________ ____________________________________________________________.  Грам (+)_____________________ Грам (- )_____________________ Работа №3: Техника окраски другими сложными методами. 1/Метод Нейссера позволяет определить зерна волютина.
Зерна волютина, как щелочные образования, окрашиваются кислым красителем в_____________ цвет. Цитоплазма бактериальной клетки окрашивается щелочным красителем в_______________ цвет.  Коринебактерии дифтерии Зерна волютина 2/Метод Циля-Нильсена позволяет определить кислотоустойчивые бактерии.
Кислотоустойчивые бактерии ________________________________, поэтому окрашиваются в ______________________цвет. Кислотонеустойчивые бактерии и структуры ______________________, поэтому красятся в ___________________________цвет.  Туберкулезные палочки в мокроте Волокна мокроты Лейкоциты 3/Метод Ожешко позволяет окрасить споры бактерий.
с прогреванием (протрава)
Спора, как кислотоустойчивая структура красится в ______________ цвет, а цитоплазма клетки, как кислотонеустойчивая структура – в __________________________цвет.  Споры бацилл сибирской язвы. 4/Метод Бурри-Гинса позволяет выявить капсулу бактерий (называется негативным, так как капсула не прокрашивается). 1. В каплю черной туши, внести культуру, смешать и 2 стеклом со шлифованным краем приготовить мазок, как из крови. 2. Высушить. З. Зафиксировать (_________________________________) 3. Фуксин Пфейффера - __________ мин. Капсула не воспринимает красители, поэтому окрашиваем бактерии и окружающий фон. Фон окрашивается тушью в _________ цвет, а возбудитель фуксином в __________ цвет, при этом капсула видна в виде __________________ ободка вокруг бактерий. Клебсиеллы пневмонии капсула. Капсулу можно выявить и при простом методе окраски, если исследовать мазки-отпечатки из органов. При этом клетки органов создают окрашенный фон, что позволяет увидеть капсулу вокруг прокрашенных бактерий.  Бациллы сибирской язвы в мазке-отпечатке капсула клетки органов Работа № 4: Методы определения подвижности микробов. Темнопольная микроскопия. Подвижность бактерий связана со жгутиками. Методы выявления жгутиков: 1/Прямые – виден сам жгутик (а/_____________________,б/_______________________________); 2/Косвенные – определяется подвижность бактерий (а/______________________, б/______________________________). Техника темнопольной микроскопии: а) источник света__________________________ б) зеркало _______________________________ в) конденсор______________________________ г) мазок __________________________________ д) иммерсия______________________________ е) объектив_______________________________ На темном фоне видны светящиеся и подвижные микробы. Подпись преподавателя __________________ Вопросы для самоконтроля:
Лабораторное занятие №3. |