Методичка по микробиологии. Методические рекомендации для студентов, в том числе для самостоятельной аудиторной и внеаудиторной работы
Скачать 1.09 Mb.
|
Лабораторное занятие № 11Тема: ИММУННЫЙ ОТВЕТ ПРИ РАЗЛИЧНЫХ ИНФЕКЦИЯХ И СОСТОЯНИЯХ. РЕАКЦИИ ИММУНИТЕТА: ПРЕЦИПИТАЦИИ (РП), С УЧАСТИЕМ КОМПЛЕМЕНТА - СВЯЗЫВАНИЯ КОМПЛЕМЕНТА (РСК), ИММОБИЛИЗАЦИИ И ИММУННОГО ПРИЛИПАНИЯ; РЕАКЦИИ НЕЙТРАЛИЗАЦИИ ТОКСИНОВ (РН) Цель: научиться ставить, учитывать результаты и давать оценку изучаемым иммунным реакциям ВОПРОСЫ ДЛЯ ПОДГОТОВКИ:
3. Особенности противогрибкового и противопаразитарного иммунитета.
5. Реакции иммобилизации и иммунного прилипания. Механизм, постановка и применение РИБТ и РНБТ.
постановка, применение. САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА:
оценить результат, дать заключение. 2. Дать заключение по определению токсигенности дифтерийной палочки (готовая демонстрация). Зарисовать. 3. Разобрать и записать схему постановки реакции Манчини и зарисовать результаты. 4. Записать схему постановки и определить силу анатоксина в реакции флоккуляции (РФ). 5. Записать компоненты и механизм реакции связывания комплемента. Учесть результат и сделать вывод при постановке РСК на определение антител в сыворотке больного. 6. Оценить реакцию нейтрализации на белых мышах в диагностике ботулизма (по таблице). 7. Изучить и записать иммунопрепараты по теме занятия. 8. Защита протокола. 9. Уборка рабочего места. Основные понятия по теме Главный комплекс гистосовместимости- МНС или HLA Антигены МНС 1 класса- Антигены МНС 2 класса- Антигены МНС 3 класса- Значение : Особенности различных видов иммунитета:
Реакция преципитации (РП) –
Работа №1: реакция Асколи при выявлении сибиреязвенного антигена Компоненты: 1.___________________________________________________ 2.___________________________________________________ Учет через________________ Результат: Заключение: Работа №2: определение токсигенности дифтерийной палочки реакцией преципитации в геле Компоненты: 1.__________________________2___________________________ 3.__________________________________ Учет _______________ Результат: Заключение: Работа №3: реакция преципитации в геле для определения уровня иммуноглобулинов - метод радиальной иммунодиффузии Манчини Компоненты: 1._____________________________________________________ 2._____________________________________________________ 3._____________________________________________________ Результат: Заключение: Работа № 4: реакция флоккуляции (РФ) для определения силы анатоксина Компоненты: 1. ________________________2._____________________________ Учет через __________________________ 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1,0 Инициальная флоккуляция (ИФ) – Расчет силы анатоксина: Заключение: Работа №5: реакция связывания комплемента (РСК) при определении антител в сыворотке больного Компоненты: 1 система – 2 система – Условия постановки Схема РСК: АГ АТ С ЭБ ГС РСК (+) РСК ( - ) Механизм: ________________________________________________________ 1/10 1/20 1/40 1/80 1/160 1/320 КС КД КЭ Титр АТ в РСК - ____________________________________________________ Результат: Титр АТ = ДТ= Заключение: Реакция иммобилизации (РИБТ )______________________________________ и реакция иммунного прилипания (РНБТ )_______________________________ Назначение: Компоненты: Механизм: опыт контроль Учет: Работа №6: реакция нейтрализации in vivo на белых мышах при диагностике ботулизма Назначение: Компоненты: Механизм-
Заключение: Реакция нейтрализации токсина антитоксинами in vivo используется также для выявления антитоксического иммунитета – постановка внутрикожных проб при дифтерии (Шика) и скарлатине (Дика). Постановка- Учет - Механизм-________________________________________________________ Результат: проба (+)_____________________проба(-)_____________________ Заключение: Работа №7: иммунопрепараты по теме занятия
2. сыворотки монорецепторные против иммуноглобулинов (G,M,A) человека 3. сыворотка противодифтерийная антитоксическая 4. видовые диагностикумы 5. комплемент 6. гемолитическая сыворотка 7. сыворотки противоботулинические типовые 8. токсин Шика и Дика Вопросы для самоконтроля:
Лабораторное занятие №12 Тема: АЛЛЕРГИЯ. ИММУНОДЕФИЦИТЫ. ИММУНОМОДУЛЯТОРЫ. ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ (ИФА), ИММУНОБЛОТИНГ. ИММУННЫЕ РЕАКЦИИ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ДИАГНОСТИКЕ ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ. ОЦЕНКА ИММУННОГО СТАТУСА ОРГАНИЗМА ЧЕЛОВЕКА Цель: изучить принцип постановки и учета результатов изучаемых реакций. Ознакомиться с методами оценки иммунного статуса человека ВОПРОСЫ ДЛЯ ПОДГОТОВКИ:
клиническое значение. Анафилактический шок и сывороточная болезнь, их предупреждение. 3. Гиперчувствительность замедленного типа, ее диагностическое значение 4. Аллергические пробы, их сущность, применение. 5. Первичные и вторичные иммунодефициты, причины их возникновения, примеры. 6. Понятие об иммуномодуляторах, принцип их действия и применения. 7. Иммуноферментный анализ (ИФА): компоненты, механизм, постановка, применение. Иммуноблотинг. 8. Понятие о клинической иммунологии. Иммунный статус организма человека и факторы, влияющие на него. Основные методы оценки иммунного статуса. 9. Антигены вирусов. Особенности противовирусного иммунитета. 10. Серологические реакции, используемые в вирусологии: реакция торможения гемагглютинации (РТГА), реакция нейтрализации по типу «цветной пробы» (РН на культуре клеток) и др. Компоненты реакций, механизм постановки, применение. САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА:
с инфекционными аллергенами. 2. Учесть готовый результат ИФА на определение антител в парных
ЕАС-РОК) и бластной трансформации лимфоцитов (РБТЛ). 4. Изучить и записать методику оценки иммунного статуса человека, нормальные показатели иммунного статуса. 5. Поставить на стекле реакцию торможения гемагглютинации (РТГА) для определения типа вируса гриппа (идентификация вируса). 6. Учесть результат РТГА в парных сыворотках на определение антител при
7. Оценить готовый результат реакции нейтрализации -РН « цветная проба» при идентификации вируса, зарисовать. 8. Разобрать и записать постановку и учет РН «цветная проба» на определение антител при серодиагностике вирусных инфекций. 9. Описать иммунные препараты по теме занятия. 10. Уборка рабочего места. 11. Отчет по протоколу. Основные понятия по теме Аллергия- ГНТ- ГЗТ - Фазы аллергических реакций: 1.- 2. – 3. - Типы аллергических реакций
Методы предупреждения: 1.анафилактического шока – 2. поллинозов- 3. сывороточной болезни- 4. контактной аллергии – Работа №1: кожно-аллергические пробы (КАП) с инфекционными аллергенами Компоненты: Постановка Учет _____________________ Механизм: ________________________________________________________ _________________________________________________________________ КАП (+)___________________________ КАП ( -) _________________________ Заключение: Применение: Иммунопатологические состояния:
Иммуномодуляторы:
Реакции с использованием меченых антител (реже антигенов)
Иммуноферментный анализ (ИФА)- сэндвич-метод Компоненты: Постановка: Механизм: _______________________________________________________ _________________________________________________________________ _________________________________________________________________ ИФА (+)________________________ ИФА (-) ___________________________ Работа №2: иммуноферментный анализ (ИФА) для определения антител в парных сыворотках Компоненты: 1 сыв 2 сыв 1/40 1/80 1/160 1/320 1/640 1/1280 . . . . . . КС КД Титр АТ в ИФА ____________________________________________________ Результат: Заключение: На основе ИФА используется реакции иммуноблотинга. Особенности реакции_______________________________________________ __________________________________________________________________ Применение________________________________________________________ Результат: Работа №3: реакции розеткообразования (Е-РОК, ЕАС-РОК) и бластной трансформации лимфоцитов (РБТЛ) Количество Т-и В-лимфоцитов определяют в реакциях розеткообразования Для Т-лимфоцитов – Е-РОК :к лимфоцитам добавляют _________________, Инкубируют __________, готовят мазки и красят_________________________ для В лимфоцитов – ЕАС-РОК :к лимфоцитам добавляют _________________ инкубируют __________, готовят мазки и красят_________________________ В световом микроскопе подсчитывают количество «розеток», образуемых Т- и В-лимфоцитами. «розетка» - Функциональную способность лимфоцитов оценивают по способности переходить в бластные клетки под влиянием неспецифических митогенов- реакция бласттрансформации лимфоцитов-РБТЛ. Для Т-лимфоцитов митогеном является ____________________________ Дл В-лимфоцитов -______________________________________________ К лимфоцитам добавляют митогены, инкубируют_____________________ Готовят мазки, красят по __________________________________________ При световой микроскопии подсчитывают % бластных клеток к количеству малых лимфоцитов. В норме под действием митогена в бласты должны перейти _______% клеток. Работа №4: оценка иммунного статуса человека и иммунограмма здорового человека Иммунный статус организма -________________________________________ __________________________________________________________________ Схема оценки иммунного статуса организма: Иммунограмма
Серологические реакции в вирусологии применяются для: 1. определения возбудителя _________________________________________ 2. определения антител______________________________________________ При диагностике вирусных инфекций всегда используются парные сыворотки, взятые с 2-недельным интервалом, чтобы выявить нарастание уровня антител. Диагностическим считается увеличение уровня антител в 4 и более раз. Примеры серологических реакций:
Работа №5: реакция торможения гемагглютинации (РТГА) для идентификации вируса гриппа Компоненты: 1______________________________ 2.________________________________________3_______________________ Постановка: Механизм: ________________________________________________________ __________________________________________________________________ РТГА (+) ___________________________РТГА (-) ________________________
А1 А2 В Результат: Заключение: Работа №6: РТГА в парных сыворотках на определение антител при серодиагностике гриппа Компоненты:1.______________________ 2. _____________________________3__________________________________ Постановка: Механизм: ________________________________________________________ __________________________________________________________________ РТГА (+) _____________________________РТГА (-) ______________________ Титр АТ в РТГА ____________________________________________________ 1сыв 2 сыв 1/10 1/20 1/40 1/80 1/160 1/320 1/640 КС КД КЭ Результат: в 1 сыв.Титр АТ=__________, во 2 сыв.Титр АТ =________________ ___________________________________________________________________ Заключение: Работа №7: реакция нейтрализации по типу «цветной пробы» при идентификации вируса полиомиелита Компоненты: 1._________________________________ 2______________________________________3 ___________________________ 4______________________________________ Постановка: Механизм: _________________________________ ________________________ ___________________________________________________________________ РН «ЦП» (+) ______________________РН «ЦП» (-)_________________________ I типа II типа III типа Результат: Заключение: Работа №8: реакция нейтрализации по типу «цветной пробы» на определение антител при серодиагностике полиомиелита Компоненты: 1.____________________________ 2______________________________________3________________________ 4______________________________________ Постановка: Механизм: __________________________________________________________ ___________________________________________________________________ ___________________________________________________________________ РН «ЦП» (+) ______________________РН «ЦП» (-)_________________________ Титр АТ в РН «ЦП» ___________________________________________________ Заключение: Работа №9: иммунопрепараты по изучаемой теме 1. аллергены инфекционные
Вопросы для самоконтроля
Лабораторное занятие № 16 Тема: ИММУНОПРЕПАРАТЫ Цель: изучить принципы приготовления и применения иммунопрепаратов различных групп ВОПРОСЫ ДЛЯ ПОДГОТОВКИ:
применение, достоинства и недостатки. Роль адъювантов. Генно-инженерные вакцины, ассоциированные (комбинированные) вакцинные препараты. Достоинства.
Осложнения при использовании, методы предупреждения. Г. Габричевский.
интерфероны, пробиотики. САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА:
Записать правила приготовления и применения аутовакцин.
приготовления, состав, применение.
Основные понятии по теме Иммунные препараты по назначению делят на группы: 1. для создания активного иммунитета – 2. для создания пассивного иммунитета- 3. для подавления размножения возбудителя в организме- 4. для диагностики заболеваний - Вакцины – Характеристика вакцин
Работа № 1: классификация вакцин
Профилактика заболеваний – это ______________________________________ Виды профилактики
Прививки или вакцинация поводятся для _________________________________ ____________________________________________________________________ Работа №2: Календарь профилактических прививокприказ от 27.06.2001 № 229
Работа №3: приготовление убитой вакцины Используют штамм стафилококка _____________________________________ Этапы приготовления: 1.посев на __________________________________________________________ 2. проверка _________________________________________________________ 3. приготовление ____________________________________________________ 4.инактивация ______________________________________________________ 5. контроль ________________________________________________________ 6.стандартизация ___________________________________________________ 7. применение ______________________________________________________ Работа №4: состав, получение и применение других иммунопрепаратов Анатоксины – Схема получения: очистка___________________, титрование_______________________________ сорбирование____________________ Проверка на _________________________________________________________ Применение: Антитоксические сыворотки- Схема получения Очистка_______________________титрование___________________________ Сорбирование_____________________ Проверка на ________________________________________________________ Применение: Примеры: Осложнения Предупреждение осложнений__________________________________________ ___________________________________________________________________ Метод Безредки: Гамма-глобулины – По получению: По составу: По назначению: Получение иммуноглобулинов – Очистка_____________________________________________________________ Примеры: Антибактериальные – Противовирусные – Моноклональные антитела МКА – Получение – Применение – Преимущества – Диагностические сыворотки - (агглютинирующие, преципитирующие, меченные и др.) – Получение Применение Гемолитическая сыворотка Получение Применение Диагностические препараты
Вопросы для самоконтроля
получение, применение.
Лабораторное занятие № 17 Тема: КОЛЛОКВИУМ ПО РАЗДЕЛУ « ИНФЕКЦИЯ. ИММУНИТЕТ» |