Краткий курс микробиологии. Общая микробиология
 Скачать 379 Kb.
|
|
О Г Л А В Л Е Н И Е В В Е Д Е Н И Е ОБЩАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ 1. Микроскопический (бактериоскопический) метод исследования. 2. Противомикробные мероприятия (стерилизация, дезинфекция, антисептика, асептика). 3. Классификация питательных сред. 4. Культуральный метод исследования. 5. Методы выделения чистых культур микроорганизмов. 6. Схема выделения чистой культуры клостридиальных анаэробов. 7. Схема выделения чистой культуры неклостридиальных анаэробов. 8. Схема идентификации микроорганизмов. 9. Определение биохимических свойств микробов. 10. Биологический метод исследования. 11. Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам. 12. Методы изучения генетики микробов. 13. Методы изучения нормальной микрофлоры. ЧАСТНАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ 1. Микробиологическая диагностика пневмококковых инфекций. 2.Общие принципы диагностики острых кишечных инфекций, вызванных микробами семейства энтеробактерий 3. Лабораторная диагностика кишечного иерсиниоза. 4. Клебсиеллы. Лабораторная диагностика склеромы и озены. 5. Лабораторная диагностика холеры. 6. Кампилобактерии. Кампилобактериозы. Методы диагностики. 7. Пищевые отравления бактериальной природы. Методы диагностики. 8. Лабораторная диагностика газовой гангрены, столбняка и ботулизма. 9. Серологическая диагностика сифилиса. 10. Лабораторная диагностика хламидиозов. 11. Микоплазмы и микоплазмозы. ОБЩАЯ И ЧАСТНАЯ ВИРУСОЛОГИЯ 1. Методы культивирования вирусов. 2. Принципы диагностики вирусных инфекций. 3. Лабораторная диагностика гепатитов. 4. Лабораторная диагностика СПИДа. ДРУГИЕ ИНФЕКЦИИ 1. Классификация грибов. Микозы. Методы диагностики. 2. Возбудители мадуромикоза. 3. Возбудитель пневмоцистоза. 4. Возбудитель донованоза. 5. Возбудитель язвы Бурули. 6. Возбудитель мелиоидоза. В В Е Д Е Н И Е Медицинская микробиология является одной из наиболее важных областей знаний широко используемых во врачебной практике. Студенты медики нуждаются в изучении микробиологии для успешной диагностики и лечения заболеваний. Инфекционная заболеваемость в мире до сих пор остается очень распространенной, в ее структуре постоянно происходят существенные изменения, появляются новые возбудители, изменяется характер течения хорошо известных заболеваний. В последние десятилетия в фундаментальной и прикладной микробиологии накоплены новые научные факты, разработаны новые методы исследований. В связи с этим весьма важно, чтобы в обучении студентов медицинской микробиологии дать достаточно полные знания как о биологии микроорганизмов, так и о методах их выделения из разнообразных материалов, идентификации, методах диагностики инфекционных заболеваний, а также интерпретации полученных данных. В представленном пособии к практическим занятиям для студентов Минского медицинского института по микробиологии представлены материалы по общей микробиологии (методы микроскопии, противомикробных мероприятий, выделения чистых культур и их идентификации, изучения нормальной микрофлоры) и частной микробиологии (методы диагностики пневмококковых инфекций и клебсиеллезов, острых кишечных инфекций и пищевых отравлений кампилобактериоза, анаэробной инфекции, сифилиса, хламидиозов и микоплазмозов). Кроме того, рассматриваются методы культивирования и лабораторной диагностики ряда распространенных вирусов и грибов. В подготовке данного пособия принимали участие большинство сотрудников кафедры микробиологии, иммунологии и вирусологии Минского медицинского института. ОБЩАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ МИКРОСКОПИЧЕСКИЙ (БАКТЕРИОСКОПИЧЕСКИЙ) МЕТОД ИССЛЕДОВАНИЯ Микроскопический (бактериоскопический) метод исследования - совокупность способов обнаружения и изучения морфологических и тинкториальных (способность окрашиваться) свойств микробов в исследуемом материале (лабораторная культура, патологический материал, пробы из внешней среды) с помощью микроскопии. Основная цель - установление этиологии болезни, а также определение чистоты выделенной чистой культуры. В лабораторной практике используют следующие типы микроскопических микропрепаратов: а) бактериологический мазок; б) висячая капля; в) придавленная капля; г) тонкий мазок крови, мокроты и др.; д) толстая капля; ж) препарат-отпечаток. Этапы метода 1. Забор материала (гной, мокрота, кровь, моча, испражнения, промывные воды бронхов и желудка, ликвор, содержимое полостей носа, вагины, трупный материал). 2. Транспортировка материала. 3. Приготовление микропрепаратов (фиксация и окраска при необходимости). 4. Микроскопия с оценкой формы, размеров, взаимного расположения микробов и т.д. 5. Заключение. Оценка метода Метод прост, широко доступен, быстр, экономичен, но мало чувствителен (около 10 54 0-10 55 0 бактерий в мл) и специфичен (из-за схожести морфологии микроорганизмов разных видов). ПРОТИВОМИКРОБНЫЕ МЕРОПРИЯТИЯ. Под противомикробными мероприятиями понимают совокупность методов уничтожения, подавления жизнедеятельности и ограничения распространения во внешней среде потенциально патогенных для человека микроорганизмов с целью предупреждения развития и лечения инфекционных болезней. Совокупность строго регламентированных и обязательных для выполнения противомикробных мероприятий в конкретных лечебных, детских или иных учреждениях и производствах носит название противомикробный режим. К противомикробным мероприятиям, оказывающим прямое повреждающее действие на микробы, относят стерилизацию, дезинфекцию, антисептику и химиотерапию. СТЕРИЛИЗАЦИЯ Под стерилизацией понимают совокупность физических или химических способов полного освобождения объектов внешней среды от вегетативных и покоящихся форм патогенных, условно-патогенных и непатогенных микроорганизмов. Целями стерилизации являются: 1) предупреждение заноса микроорганизмов в организм человека при медицинских вмешательствах, 2) создание и поддержание асептической и безмикробной (гнотобиотической) среды, 3) исключение микробного обсеменения (контаминации) питательных сред, культур клеток, реагентов при микробиологических и иммунологических исследованиях, 4) предупреждение микробной биодеградации (разрушения) лекарственных, диагностических, продовольственных и иных материалов. В медицинской практике стерилизации подвергают медицинский инструментарий и аппаратуру, лекарственные и диагностические препараты, перевязочный и шовный материал, белье, предметы ухода за больными, питательные среды, лабораторную посуду; при создании гнотобиотической зоны - воздух помещения, оборудование и все остальные объекты зоны (боксы, палаты и др.). Процесс стерилизации объектов состоит из следующих этапов: 1) дезинфекция, 2) очистка, 3) сборка, группировка, размещение в стерилизаторе, 4) собственно стерилизация, 5) сушка, 6) контроль за стерилизацией, 7) хранение стерилизованных материалов. Стерилизующие агенты и режимы стерилизации. Большинство объектов стерилизуют насыщенным паром под давлением в специальных аппаратах (паровых стерилизаторах, автоклавах). В зависимости от стерилизуемых материалов температура насыщенного пара устанавливается от 110 5о 0С до 138 5о 0С, давление - от 0,4 до 2,5 атм., экспозиция - от 3 до60 мин. Наборы инструментов, текстильные изделия в свертках, простые питательные среды стерилизуют при режиме 1 атм. (121 5о 0С) 15-30 мин. Чувствительные к температуре материалы стерилизуют при более низком давлении (0,4-0,5 атм.), устойчивые к ней - при более высоком (2,5 атм.). Стерилизация сухим жаром в аэростерилах также высокоэффективна, но высокая температура (160-180 5о 0С), длительные сроки экспозиции (1-2 часа) и сухой горячий воздух могут вызвать повреждение стерилизуемых материалов. Поэтому сухим жаром стерилизуют предметы из термостабильных материалов (стекло, металл и др.), а также гидрофобные вещества. Термолабильные материалы стерилизуют 3-4-кратным (дробным) прогреванием текучим паром при 100 5о 0С по 1 часу с перерывами в 1 сутки, в течение которых материал находится в термостате (для прорастания спор). Крупногабаритные изделия, предметы из термолабильных и разнородных материалов стерилизуют в герметических контейнерах (например, ЭТО-стерилизаторах) парами формальдегида, этиленоксида, а также растворами формалинэтилалкоголя, формалинизопропана при экспозиции в 6-24 часа (химическая стерилизация). В заводских условиях медицинские изделия, в основном одноразовые, часто стерилизуют гамма-лучами 0,2-4,5 М рад (лучевая стерилизация). Жидкости можно простерилизовать пропусканием через мелкопористые фильтры, воздух помещений - пропусканием через бактерицидные фильтры, а также многократным «промыванием» помещения ламинарным потоком стерильного воздуха. Эффективность стерилизации проверяют биологическим, химическим, механическим методами. ДЕЗИНФЕКЦИЯ Под дезинфекцией понимают совокупность способов полного, частичного или селективного уничтожения потенциально патогенных для человека микроорганизмов на объектах внешней среды с целью предупреждения передачи возбудителей болезней от больных и микробоносителей здоровым людям. Дезинфекция в очагах инфекционных заболеваний (квартира, дом, больничное, служебное помещение и др.) ставит цель селективного уничтожения возбудителя конкретной болезни, например, в очаге туберкулеза - возбудителя туберкулеза, дифтерии - возбудителя дифтерии, гепатита - возбудителя гепатита и т.д. Дезинфекции в этом случае подвергается та группа объектов, которая служит фактором передачи возбудителя этой болезни. Она бывает заключительной, когда инфекционный больной госпитализируется в инфекционную больницу, и текущей, когда больной остается в очаге на какой-то период времени. В больницах, детских, общественных учреждениях ежедневно или периодически проводится профилактическая дезинфекция, ставящая цель резкого снижения численности популяции всех потенциально патогенных для человека микробов на всех объектах помещения. В лечебных учреждениях особое внимание обращают на дезинфекцию инструментария, аппаратов, белья, предметов ухода, воздуха, выделений от больных. Дезинфицирующие средства. В подавляющем большинстве случаев для целей дезинфекции используют химические вещества, которые носят название дезинфектанты. Дезинфектанты должны обладать широким спектром действия, микробоцидным эффектом, хорошо растворяться в воде и образовывать с ней или с воздухом стойкие активные растворы, суспензии, эмульсии, аэрозоли, туманы, обладать низкой токсичностью и аллергенностью, сохранять активность в обеззараживаемой среде, не повреждать обеззараживаемые объекты, не иметь неприятного запаха, быть экологически чистыми. Чаще применяют хлорсодержащие соединения (гипохлорид кальция, гипохлорид натрия, хлорамин и др.), препараты фенола, глюконат хлоргексидина, формальдегид и глютаральдегид, алкоголи, четвертичноаммониевые соединения, перекись водорода, надмуравьиная и надуксусная кислоты, персепт, виркон. Выбор дезинфектанта, его концентрации, лекарственной формы (раствор, аэрозоль, эмульсия, суспензия, порошок, паста, лаки, краски и др.), экспозиции (время действия) зависит от требуемой степени дезинфекции, спектра и уровня чувствительности микроба-воз-будителя, вида дезинфекции, объекта дезинфекции, условий, в которых протекает процесс дезинфекции. Среди последних важное значение имеет температура рабочей формы дезинфектанта, которая должна быть не ниже 20 5о 0С (200 С ?). Дезинфекция должна сопровождаться выборочным бактериологическим и иным контролем. Дезинфицирующий эффект может быть достигнут также с помощью сжигания объекта, прокаливания в пламени, воздействия горячего воздуха или пара в камерах, кипячения в воде, ультразвука, ультрафиолетового облучения, гамма-лучей, очистки, стирки, мытья, выколачивания, вытряхивания, протирания, проветривания. АНТИСЕПТИКА Под антисептикой понимают совокупность способов уничтожения или подавления жизнедеятельности потенциально опасных для здоровья человека организмов на интактных или поврежденных коже, слизистых оболочках и в полостях с целью профилактики (профилактическая) и лечения (терапевтическая антисептика) инфекционных процессов. Выделяют следующие категории профилактической антисептики: 1) антисептика свежих ран, 2) хирургическая антисептика рук, 3) гигиеническая антисептика рук, 4) антисептика операционного поля, 5) антисептика пупочной раны, глазных инфекций, опрелостей и ссадин кожи новорожденных, 6) предупреждение послеродового мастита, микоза стоп и других инфекций кожи и слизистых оболочек. Терапевтическая антисептика применяется с целью: 1) подавления жизнедеятельности микробов-возбудителей местных инфекционных процессов и предупреждения сепсиса, 2) предупреждения повторного попадания микробов в патологический очаг и развития суперинфекции, реинфекции и вторичной инфекции. Процесс антисептики состоит из следующих этапов: 1) очистка места нанесения антисептика от грязи, сала, сгустков крови, слизи, инородных частиц, 2) хирургическая обработка (при антисептике ран), 3) внесение антисептического препарата, 4) изоляция обработанного антисептиком участка от повторного проникновения микробов. Используемые для целей антисептики факторы называют антисептическими средствами. Их подразделяют на: 1) химические антисептики, 2) биологические антисептики (бактериофаги и препараты из бактерий-антагонистов), 3) физические и механические факторы (хирургическая обработка, промывание, дренирование, сорбция и др.). Антисептические препараты относятся к следующим классам химических веществ: хлор, йод и другие галогены; органические и неорганические кислоты; перекись водорода и перманганат калия; формальдегид и спирты; фенол и его препараты; соли тяжелых металлов; красители; катионные и анионные поверхностно-активные вещества; нитрофурановые, сульфаниламидные, 8-оксихинолиновые, хинолоновые, имидазольные и др. соединения. Готовые лекарственные формы антисептиков прежде всего должны вызывать гибель (бактерицидный эффект) или задерживать рост и размножение (бактериостатический эффект) микробов и не должны оказывать повреждающее действие на организм человека. Кроме того, к ним предъявляются требования: не снижать противомикробную активность в присутствии патологических и физиологических субстратов, обладать достаточно широким спектром действия, хорошо растворяться в липидах, быть недорогими, экологически чистыми в производстве и стабильными при хранении. Перед применением антисептика с целью лечения от больного выделяют возбудитель болезни и определяют его чувствительность к дезинфектанту. При выборе антисептика для профилактической антисептики ориентируются на спектр и уровень естественной чувствительности микробов, которые обитают в месте нанесения антисептика. В больничных стационарах в связи с широким распространением устойчивых к антибиотикам, антисептикам и дезинфектантам вариантов бактерий устанавливают систематический контроль за их распространением. АСЕПТИКА Асептика - это совокупность противомикробных мероприятий, направленных на предупреждение развития инфекционного заболевания во время медицинских вмешательств или нарушений технологического процесса при микробиологических исследованиях и производстве различных материалов. В медицинской практике асептические условия создаются при производстве хирургических вмешательств, приеме родов, эндоскопических процедурах, парентеральном введении лекарств и других медицинских вмешательствах, а также при больничном содержании лиц с высоким риском развития инфекции. Для этого инструментарий, перевязочный и шовный материал, инъекционные растворы, халаты, маски, перчатки, дренажи и другие соприкасающиеся с раной объекты стерилизуют; руки лиц, принимающих участие в медицинском вмешательстве, операционное поле пациента подвергают антисептической обработке; воздух помещений, в которых проводят асептические мероприятия, и все, что в них находится, дезинфицируют; асептическая зона с помощью шлюзов или аналогичных приспособлений изолируется от смежных помещений. В микробиологической практике асептика включает: 1) забор материала для исследования стерильным инструментарием и в стерильную посуду в условиях, исключающих его микробную контаминацию посторонней микрофлорой; 2) предупреждение контаминации материала во время его доставки в лабораторию; 3) использование стерильных петель, пипеток, питательных сред, посуды, реактивов и других объектов в процессе микробиологических исследований; 4) предупреждение контаминации микробных культур с рук, волос, одежды лабораторного работника, а также с нестерильных объектов внешней среды; 5) работу в стерильных боксах, ламинарном потоке стерильного воздуха, в зоне пламени спиртовки или газовой горелки. Несоблюдение указанных мер приводит к неправильному заключению о виде выделенной культуры и ее свойствах, что, в свою очередь, ведет к ошибочному диагнозу и неадекватным мерам терапии и профилактики. КЛАССИФИКАЦИЯ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД Питательные среды можно разделить: А) По происхождению на: 1) естественные - натуральные продукты питания (мясо, молоко, картофель) и
Искусственные питательные среды, в свою очередь, делятся на: а) среды из естественных продуктов (мясная вода, мясопептонный бульон (МПБ), мясопептонный агар (МПА), не имеющие постоянного состава; б) синтетические питательные среды - растворы строго определенных количеств солей, аминокислот, азотистых оснований, витаминов в дистиллированной воде - имеют постоянный состав, используются для выращивания микроорганизмов и культур клеток при получении вакцин, иммунных сывороток и антибиотиков. Б) По назначению: 1) общего назначения (МПБ, МПА) - на них растет большинство микробов; 2) элективные - избирательно способствующие росту одного вида микробов из смеси (например, желточно-солевой агар для стафилококков); 3) дифференциально-диагностические - позволяющие отдифференцировать по внешнему виду колоний один вид микроба от других (Эндо, Левина для кишечной группы микробов). Кроме того, по назначению выделяют среды в зависимости от целей использования в схеме выделения чистых культур на: 1) среды обогащения - подавляют рост в смеси микробов, сопутствующих возбудителю, 2) среды для получения изолированных колоний,
В) По консистенции среды подразделяются: 1) жидкие; 2) полужидкие (при добавлении агар-агара в концентрации 0,5%); 3) плотные - выше 1%. |