Краткий курс микробиологии. Общая микробиология
 Скачать 379 Kb.
|
|
IV этап - Учет результатов и выдача окончательного ответа. СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД ИССЛЕДОВАНИЯ. Ставят развернутую реакцию агглютинации с аутоштаммами и парными сыворотками больного. Кровь берут в конце первой и начале третьей недели. При положительном результате отмечается значительное нарастание титра антител. ПИЩЕВЫЕ ОТРАВЛЕНИЯ БАКТЕРИАЛЬНОЙ ПРИРОДЫ МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ Пищевые отравления - острые системные заболевания, возникающие в результате приема в пищу продуктов, массивно обсемененных микроорганизмами или содержащих микробные экзотоксины. Пищевые отравления бактериальной природы подразделяются на пищевые токсикоинфекции и пищевые токсикозы (интоксикации), а также отравления смешанной этиологии. 1. Пищевые токсикоинфекции (ПТИ) - острые кишечные заболевания с инфекционным воспалением кишечника, возникающие в результате употребления в пищу массивно обсемененных некоторыми бактериями продуктов. Возбудителями могут быть условно-патогенные представители семейства Enterobacteriaceae - E.сoli, Рroteus (P. vulgaris, mirabilis, Morganella morganii), Citrobacter, Enterobacter, Hafnia, Klebsiella pneumoniae; семейства Vibrionaceae - V. parahaemoliticus; семейства Bacillaceae - B. cereus, C. perfringens серотипа А; семейства Streptococcaceae - S. faecalis; семейства Pseudomonadaceae - P. aeruginosa и др. После приема пищи возбудитель бурно размножается в тонком кишечнике, проникает в лимфоидный аппарат, где происходит его массовая гибель с выделением эндотоксина. Эндотоксин вызывает поражение интрамурального нервного аппарата кишечника и клеток ЦНС, сосудов, а бактерии вызывают воспалительный процесс в кишечной стенке. Заболевание начинается внезапно с тошноты, рвоты, поноса, болей в животе и общих симптомов: головная боль, падение сердечной деятельности, вплоть до коллапса. По типу ПТИ могут протекать заболевания, вызываемые энтеропатогенными эшерихиями, сальмонеллами, шигеллами (S. sonnei) и иерсиниями (Y. enterocolitica). При этих инфекциях клинический диагноз ставится соответственно их нозологической форме: колиэнтерит, сальмонеллез, дизентерия, иерсиниоз. Этот диагноз устанавливается после выделения из исследуемого материала (испражнения, моча, рвотные массы, остатки пищи) соответствующего возбудителя. 2. Пищевые микробные токсикозы (интоксикации) - острые заболевания, возникающие при употреблении в пищу продуктов, в которых в результате массивного размножения микробов содержится большое количество экзотоксина. К ним относят ботулизм, токсикозы, вызванные стафилококковым энтеротоксином и токсинами микроскопических грибов. При этих формах пищевого отравления патогенез заболевания и его клинические проявления обусловлены действием микробного экзотоксина. Микробные экзотоксины не разрушаются при кипячении, устойчивы к пищеварительным ферментам и кислому содержимому желудка. Пищевые отравления часто носят групповой характер. Каждый случай пищевого отравления подлежит обязательному санитарно-эпидемиологическому расследованию с целью установления причин заболевания и разработки мер ликвидации вспышки и профилактики. Расследование пищевых отравлений производится немедленно с участием санитарного врача по гигиене питания или главврача СЭС и врача-бактериолога. Для исследования от больных забирают рвотные массы, промывные воды желудка, испражнения, мочу, кровь, а также секционный материал (в случае летального исхода). Одновременно производят отбор остатков подозреваемой пищи (употребленной заболевшим), исходных продуктов и полуфабрикатов, которые использовались при её приготовлении, суточных проб пищи, а также смывов и соскобов с кухонного инвентаря. Для постановки этиологического диагноза бактериологическое исследование одновременно ведут в нескольких направлениях: на облигатно-патогенные и условно-патогенные энтеробактерии и вибрионы, стафилококки, стрептококки, бациллы, а также (по показаниям) - на обнаружение возбудителей и токсинов ботулизма. Стерильно взятый жидкий материал после отстаивания засевают без обработки. Плотный материал гомогенизируют в 0,1% пептонной воде в соотношении 1:2, 1:5 и засевают надосадок. При бактериологической диагностике ПТИ, вызванной условно-патогенными микробами, применяют количественный метод. Готовят разведения материала (10 , 10 , 10 ) и засевают по 0,1 мл на чашки с дифференциально-диагностическими средами: Плоскирева, Эндо (Левина) - на энтеробактерии; ЖСА с полимиксином и 2,3,5-триметилтетразолий хлоридом - на B. cereus; МПА с фурагином - на псевдомонады; щелочной агар - на вибрионы. При стафилококковом токсикозе производят посев на ЖСА. При наличии роста колоний, подозрительных на патогенные энтеробактерии, дальнейшие исследования ведут по их выделению и идентификации. При отсутствии роста облигатно-патогенных микробов изучают характер колоний УПМ на указанных средах. Определяют количество бактерий в 1 г материала. Выделяют чистые культуры и подвергают их идентификации и внутривидовому типированию. ОЦЕНКА РЕЗУЛЬТАТОВ Выделение из материалов сальмонелл, шигелл, энтеропатогенных кишечных палочек, иерсиний или других облигатно-патогенных микробов, независимо от количества, подтверждают соответствующее заболевание или носительство. Для оценки этиологической роли УПМ главным критерием является количественный. Этиологически значимым является присутствие в материалах от больных и пищевых продуктах микробов в большом количестве (10 -10 и более КОЕ в 1 г). При пищевых отравлениях диагноз становится более достоверным при одновременном обнаружении тех же микробов в больших количествах в пищевых продуктах, явившихся причиной заболевания. Этиологическую роль микроба подтверждает его повторное выделение из материала больного, идентичность штаммов возбудителя (по фаго- и сероварам) у большого числа больных при групповом пищевом отравлении, а также нарастание титра антител в динамике болезни. Для диагностики пищевых токсикозов используют методы обнаружения в материалах от больных (рвотных массах, промывных водах), в пищевых продуктах экзотоксинов микробов. При ботулизме с этой целью применяют биологическую пробу нейтрализации на белых мышах с антисыворотками к ботулотоксинам различных типов (А,В,Е), чаще встречающихся в умеренных широтах. При стафилококковом токсикозе используют РПГА с эритроцитами, обработанными содержащими экзотоксин материалами и типовыми стафилококковыми антисыворотками. Применяется также реакция иммунопреципитации экстрагированного из материала токсина (солевой экстракт, очищенный и концентрированный диализом) со стандартными типовыми антисыворотками. К Л Е Б С И Е Л Л Ы. ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА СКЛЕРОМЫ И ОЗЕНЫ. Бактерии рода Klebsiella (капсульные бактерии) включают в семейство Enterobacteriaceae. K. scleromatis является возбудителем склеромы, K. ozaenae - возбудитель озены, K. pneumoniae способен при определенных условиях вызывать у человека сепсис, воспаление легких, острые кишечные заболевания, пиелонефрит, цистит, перитонит, менингит и др. Клебсиеллы - это палочки длиной 1-5 мкм, эллипсоидные, неподвижные, без спор, капсула является у них постоянной структурой. Они растут на плотных средах в виде блестящих, влажных, серовато-белых колоний с перламутровым оттенком, слизистой консистенции. В бульоне - диффузное помутнение, иногда слизистое кольцо на поверхности. У клебсиелл слабо выражены протеолитические свойства и относительно хорошо гликолитические. ДИФФЕРЕНЦИАЦИЯ КЛЕБСИЕЛЛ.
Клебсиеллы содержат К - капсульный, О - соматический, СА - общий для энтеробактерий антиген. Род разделяется на 80 серологических вариантов. У клебсиелл склеромы обнаружен только один К3-антиген, идентичный с К-антигеном клебсиеллы пневмонии 3-го типа. У К.озены - К4, К5, либо К6-антигены. Клебсиеллы пневмонии - К-антигены 1-3 и 7-80. Известно 5 О-антигенов. К. склеромы имеют антиген О2А, К. озены - О2В, К. пневмонии - О-антигены 1, 3, 4, 5. Питательные среды: 1) Дифференциально-диагностическая среда - ЛБТА (лактозо-бромтимоловый агар). Содержит МПА+лактоза+бромтимоловый синий. К. склеромы, не разлагающая лактозу, дает колонии цвета среды, К. пневмонии - желтые, К. озены - либо желтые, либо цвета среды.
4) Среда с малонатом натрия (индикатор бромтимоловый синий). При утилизации малоната - среда интенсивно синего цвета, отрицательная реакция - среда желтая. Лабораторная диагностика проводится 2 методами: бактериологический и серологический. Бактериологическая диагностика: материалом для исследования служит содержимое носа, глотки, носоглотки. I этап. Посев материала петлей или тампоном на ЛБТА либо на пенициллиновый агар. II этап. а) Учет роста колонии клебсиелл - крупные, выпуклые, влажные, блестящие. На ЛБТА цвет колоний зависит от вида клебсиелл. б) Посев колоний на модифицированную среду Ресселя или косой агар. III этап. Идентификация выделенной культуры. а) мазок по Граму; б) препарат по Гинса-Бурри; в) определение биохимических свойств (см. таблицу); г) определение антигенной формулы с помощью клебсиеллезных сывороток О и К (р. агглютинации на стекле, р. агглютинации в пробирках, РИФ) Серологическая диагностика. Используют РСК и РПГА со склеромным и озенозным диагностикумами. ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ГАЗОВОЙ ГАНГРЕНЫ Газовая гангрена - полиэтиологическая травматическая раневая инфекция, которая проявляется омертвением тканей и газообразованием в них, интенсивным отеком и выраженной токсемией. Возбудителями являются грам+ спороносные палочки рода Clostridium. Основные возбудители: Cl. perfringens (серовар А), Cl. novgi (серовар А), Cl. septicum, Cl. histolyticum, Cl. sordelli. Ведущий возбудитель - Cl. perfringens. Материалом для исследования служит раневое отделяемое, некротизированная ткань, кровь. МИКРОСКОПИЧЕСКИЙ МЕТОД ИССЛЕДОВАНИЯ. Материал плотный измельчают, центрифугируют и из осадка готовят препараты с окраской по Граму и по Гинса-Бурри. Можно поставить пробу на подвижность (придавленная капля). Возбудители газовой гангрены подвижные (кроме Cl. perfringens), не имеют капсулы (кроме Cl. perfringens), спорообразование в животном организме не происходит. БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД ИССЛЕДОВАНИЯ. 1 этап. Обработанный материал в нативном состоянии и после 10-20 минутного прогревания при 80 С засевают на питательные среды: Китта-Тароцци, обезжиренное молоко, Вильсон-Блера, агар Цейколера. Жидкие среды регенерируют (кипятят) и заливают вазелиновым маслом. Чашки выращивают в анаэростате. Посевы просматривают ежедневно в течение 7 дней. 2 этап. Изучение роста на средах. Наиболее характерны изменения сред при росте Cl. perfringens. Помутнение и образование пузырьков газа на среде Китта-Тароцци наступает через 6 часов, молоко свертывается через 2-3 часа. К этому же времени наступает почернение с разрывами среды Вильсон-Блера. Другие возбудители указанные среды изменяют позже и менее типично. На среде Цейсслера (через 24-48 часов) Cl. perfringens образуют серые крупные дисковидные колонии с зоной гемолиза. На среде Вильсон-Блера - колонии черного цвета. Из отдельных колоний делают мазки по Граму и их отсевают на среду Китта-Тароцци (для накопления чистой культуры). Можно выделять культуру и другими методами (метод Фортнера, Вейнберга, трубочки Вейона). 3 этап. Изучение выделенной культуры: а) мазок по Граму; б) мазок по Ожешко; в) проба на подвижность; г) определение ферментативных свойств (в том числе лецитиназной активности); д) реакция нейтрализации на белых мышах для определения типа токсина; е) антибиотикограмма. |