Определение группы крови, резуспринадлежности, типирование антител
 Скачать 1.68 Mb.
|
|
Введение Определение группы крови, резус-принадлежности, типирование антител эритроцитов уже многие десятилетия проводится всем донорам и реципиентам. Изучение химических свойств антигенов эритроцитов и определение их значения в трансфузиологии не прекращаются пo сей день. Благодаря достижениям генетики создаются новые диагностикумы для более детального типирования крови, что позволяет снизить риск посттрансфузионных осложнений. При проведении иммуносерологических исследований могут наблюдаться отклонения от обычной картины крови. Это приводит к ряду затруднений при идентификации групп крови, Правильная трактовка полученных результатов позволяет давать четкие рекомендации по переливанию компонентов крови. Разновидности антигенов системы АВО Антигены эритроцитов человека являются структурными образованиями, расположенными на внешней поверхности мембраны эритроцитов, обладающими способностью взаимодействовать с соответствующими антителами и образовывать комплекс антиген-антитело. Антигены эритроцитов наследуются от родителей. Антигены эритроцитов являются протеинами (антигены эритроцитов системы Резус, Кидд, Диего, Колтон), гликопротеинами (антигены эритроцитов систем MNS, Гебрих, Лютеран) или гликолипидами (антигены эритроцитов систем АВО, Н, Le, I).  В 1901 году Ландштейнер впервые опубликовал наблюдения о существовании различий среди эритроцитов человека. Он исследовал в перекрестной пробе сыворотки и эритроциты, взятые от разных людей, и отметил наличие двух типов антигенов, названных А и В. Антитела в сыворотке, реагирующие с этими антигенами, были названы анти-А и анти-В. На основании своих исследований Ландштейнер пришел к выводу, что все люди по способности сыворотки и эритроцитов крови давать агглютинацию Moгут быть разделены на три группы, которые были названы А, В и С (группа С затем стала обозначаться 0 и подразумевает отсутствие антигенов, а не наличие антигена 0). В 1907 году Янский, обследуя групповую принадлежность больных, установил наличие группы крови АВ. Характерной особенностью, отличающей систему антигенов эритроцитов АВО от других систем антигенов, является постоянное присутствие в сыворотках людей (кроме лиц с группой крови АВ) антител, направленных к антигенам А или В. Антитела к антигенам эритроцитов других систем не являются врожденными и вырабатываются вследствие антигенной стимуляции. По наличию на эритроцитах антигенов А и В, а также присутствию в сыворотках анти-А, анти-В антител, различают следующие группы крови:  При выявлении антигенов системы АВО стандартными сыворотками существуют определенные трудности, связанные с разновидностями антигенов. Было установлено, что существует две подгруппы антигена A: A1 и А2. Антиген А1 встречаются в 88%, а антиген А2 в 12% среди лиц, относящихся к группе А(II). К настоящему времени установлено, что различия между A1 и А2 антигенами являются качественными и количественными. Качественные различия обусловлены особенностями в биохимической структуре, количественные различия связаны с увеличенным содержанием А детерминант в А1 по сравнению с А2. В связи с этим антиген А2 отличается от антигена A1 низкой агглютинабельностью по отношению к антителам анти-А. Существует ещё несколько подгрупп антигена А: A3, A4, Ах и т.д., но они не имеют клинического значения. Невыявление антигена А2 во А(II) группе приводит к ошибочной трактовке группы крови как O(I), в AB(IV) - как В(III). Варианты антигена А передаются по наследству. Рекомендации при переливании компонентов кропи: - Антиген А2 в А(II) - А2(II) - переливать эритромассу O(I) группы, плазму А(II) группы. - Антиген А2 в AB (IV) - A2B(IV) - переливать эритромассу В(III) группы, плазму AB(IV) группы. Для определения антигена А1 во А(II) и AB(IV) группах необходимо использовать специальный реагент - Цоликлон анти – А1, который позволяет дифференцировать А1 и А2 подгруппы антигена А. Определение А, антигена системы АВО при помощи Цоликлона анти –А1 Цоликлон анти – А1 обладает способностью агглютинировать только эритроциты, несущие А1 антиген, и не взаимодействует с эритроцитами А2 в прямой реакции гемагглютинации на плоскости. Оснащение: - Цоликлон анти –A1; - изотонический раствор 0,9% натрия хлорида (физ. раствор); - светлая плоскость со смачиваемой поверхностью: - пипетки; - стеклянные или пластмассовые палочки. Порядок проведения исследования: 1. Проводить испытания при температуре + 15° - 25°С, в помещении с хорошим освещением. 2. На плоскость нанести одну большую каплю (0,1 мл) реагента. 3. Рядом поместить маленькую каплю (0,01- 0,05 мл) исследуемой крови и смешать кровь с реагентом. Плоскость после смешивания реагента с кровью рекомендуется покачивать не сразу, а через 20-30 секунд, что позволяет за это время развиться более полной крупнолепестковой агглютинации. Результат реакции оценить через 3 минуты. Трактовка результатов Результат оценить визуально по наличию или отсутствию агглютинации эритроцитов. Положительный результат - наличие агглютинатов (склеенных эритроцитов) на фоне обесцвеченной жидкости. Такая кровь относится к подгруппе А1. Отрицательный результат - равномерно окрашенная капля в красный цвет. Такая кровь относится к подгруппе А2. Антиген В, в отличие от антигена А, характеризуется большей однородностью, но были обнаружены слабые разновидности антигена В – В3 и Bw. Варианты антигена В передаются по наследству. Рекомендации при переливании компонентов крови: - Антиген В2 в В(III) - В2(Ш) - переливать эритромассу O(I) группы, плазму В(III) группы. - Антиген В2 в AB(IV) -AB2(IV) - переливать эритромассу А(II) группы, плазму AB(IV) группы. Специального реагента для определения разновидностей антигена В нет. ХАРАКТЕРИСТИКА АНТИ-А, АНТИ-В АНТИТЕЛ Естественные антитела анти-А, анти-В принадлежат к иммуноглобулинам класса М. Выработанные в процессе иммунизации А или В антигеном анти-А, анти-В антитела являются иммунными и принадлежат к иммуноглобулинам класса G. Они вырабатываются в результате полигенного воздействия группоспецифических субстанций А и В на организм человека: инфекционные заболевания, медицинские профилактические прививки, потребление продуктов животного и растительного происхождения, гетероспецифическая беременность, гемотрансфузии иногруппной крови. Анти-А, анти-В антитела в сыворотках большинства людей представляют собой смесь естественных и иммунных антител (смесь иммуноглобулинов классов М и G). Вследствие структурных особенностей иммуноглобулинов класса М (пентамерное образование с десятью активными центрами), естественные анти-А, анти-В антитела способны связывать большое количество эритроцитов и вызывать прямую агглютинацию в солевой среде. Это свойство естественных антител используется при приготовлении типирующих стандартов для выявления антигенов эритроцитов системы АВ0. Кроме того, высокая активность анти-А, анти-В антител определяет клиническую значимость указанных антител в развитии посттрансфузионных реакций при трансфузиях несовместимой по антигенам АВО крови. Доноры группы крови 0, имеющие IgGанти-А, анти-В антитела, являются «опасными универсальными донорами», т.к. трансфузия их эритроцитов, содержащих даже небольшое количество плазмы, реципиентам А, В, АВ может приводить к посттрансфузионным осложнениям. Гипопластический тип крови Тип крови, при котором могут отсутствовать агглютинины α и/или β относится к гипопластическому типу крови. Этот феномен встречается:
Гипопластический тип крови выявляется при перекрестном способе определения групповой принадлежности крови. Он выражается в отсутствии агглютинации со стандартными эритроцитами А(II) и/или B(III) группы. Рекомендации при переливании компонентов крови: Переливать эритромассу одногруппную, плазму АВ(IV). Экстраагглютинины Landsteiner с сотрудниками (1926 г.) обнаружили, что сыворотки некоторых людей групп А2(II) и A2B(IV) содержат особый экстраагглютинин–α1,который может быть использован для выделения антигена А1. У некоторых лиц, принадлежащих к группе А1(II) или A1B(IV), в сыворотке может содержаться экстраагглютинин α2. Обнаруживаемые в сыворотке человека такого рода агглютинины назвали «иррегулярными», т.е. непостоянными. Экстраагглютинины чаще всего встречаются при системных заболеваниях, беременности, сепсисе. Частота встречаемости экстраагглютининов α1 и α2 среди лиц А(II) и AB(IV) групп: - α1в А(II) - 1 - 2 % случаев - α1 в AB(IV) - 26 % случаев - α2в А(II) и AB(IV) - 0,1 % случаев Экстраагглютинины α1 и α2 выявляются при перекрестном способе определения групповой принадлежности крови. Экстраагглютинин α1определяется в виде агглютинации со стандартными эритроцитами А(II) группы. Экстраагтлютинин α2 (анти - Н) определяется в виде агглютинации состандартными эритроцитами 0(I) группы. Экстраагглютинины могут быть: - холодовыми - активны при комнатной температуре и неактивны при температуре человеческого тела; при добавлении теплого физ.раствора агглютинация исчезает; -тепловыми - активны при температуре человеческого тела; при добавлении теплого физиологического раствора агглютинация не исчезает или даже усиливается. Экстраагглютинины могут послужить причиной осложнений после переливания совместимой в групповом отношении крови. Рекомендации при переливании компонентов крови: - A2(II) с экстраагглютином α1 - переливать эритромассу 0(I) группы, плазму А(II) группы. - A2B(1V) с экстраагглютинином  - переливать эритромассу В(III) группы, плазму AB(IV) группы.- А(II) с экстраагглютинином α2- переливать эритромассу с индивидуальным подбором, плазму А(II) группы. - AB(IV) с экстраагтлютинином α2- переливать эритромассу В(III) группы, плазму AB(IV) группы. Аллоантитела к антигенам эритроцитов Аллоантитела не являются нормальным свойством сыворотки человека, носят иммунный характер и появляются лишь при особых условиях. Аллоантитела вырабатываются как результат иммунного воздействия при попадании в организм реципиента антигена, отсутствующего у него. Чаще всего это происходит при несовместимой гемотрансфузии или при несовместимой беременности. Антитела к антигенам эритроцитов системы Резус, так же как и к антигенам эритроцитов других систем, по своей химической природе являются иммуноглобулинами и синтезируются иммунокомпетентными клетками под воздействием иммунного стимула. Антитела относятся к иммуноглобулинам М, G. По своей форме антитела разделяют на два основных вида: полные и неполные. Форма антител определяется тем, каким образом они реагируют с эритроцитами, содержащими специфические антигены. Полные АТ относятся к иммуноглобулинам М, вызывают агглютинацию эритроцитов в солевой среде при комнатной температуре. Полные АТ появляются в самом начале иммунизации, быстро исчезают и на смену им появляются неполные АТ. Полные АТ определяются реакцией агглютинации в солевой среде. Неполные АТ относятся к иммуноглобулинам G и отличаются небольшим размером. Неполными они называются на основании того факта, что их взаимодействие с АГ ограничено лишь первой фазой иммунологической реакции - фазой соединения, в то время как вторая фаза – внешнее проявление этой реакции – отсутствует. Необходимы специальные условия для выявления АТ: - коллоидная среда (желатин, полиглюкин и др.); - температурный режим (+46-480С и температура человеческого тела). Неполные АТ имеют небольшую молекулярную массу, легко проходят через плаценту, являются наиболее частой причиной гемолитической болезни новорожденных. Неполные АТ появляются на более поздних стадиях иммунизации, не ранее 7-10 дня после трансфузии, а максимум их активности отмечается к 10-20 дню. Неполные АТ можно определить: - желатиновым методом; - с применением полиглюкина (в пробирках без подогрева) - антиглобулнновым тестом (непрямая проба Кумбса); - гелевым тестом (ID-карты). Антитела бывают разные по специфичности: анти-D, анти-С, анти-Е, анти-е, анти-с, анти-Keлл, анти-Даффи и т.д. Специфичность антител определяется тем, с каким из антигенов они реагируют. У пациента одновременно могут присутствовать полные и неполные антитела и антитела нескольких специфичностей. Аллосенсибилизация антигенами эритроцитов является одной из причин тяжелых пострансфузионных реакции и осложнений в лечебно-профилактических учреждениях. Для обеспечения безопасности гемотрансфузионной терапии большое значение имеет своевременное выявленное аллоэритроцитарных антител у доноров н пациентов. Для решения вопроса о возможной сенсибилизации к различным антигенам первостепенное значение имеют трансфузионный н акушерско-гинекологический анамнезы. На возможную сенсибилизацию пациента указывают реакции или осложнения при совместимых гемотрансфузиях по системе АВО, резус-фактору и отягощенный акушерско-гинекологический анамнез у женщин (выкидыши, рождение детей с гемолитической болезнью, многочисленные аборты). Важным является поиск антиэритроцитарных антител у доноров. Скрининг антител в крови донора, так же как и у больных проводится независимо от резус-принадлежности. Переливание крови или плазмы от сенсибилизированных доноров не допускается. Особенности выявления аллоАТ у сенсибилизированных пациентов. У ранее сенсибилизированных пациентов антиэритроцитарные АТ на момент поступления в ЛПУ могут не определяться в результате ослабления активности АТ и снижения их титра ниже пороговой чувствительности метода. Сенсибилизированным реципиентам АТ должны исследоваться при каждой гемотрансфузии, т.к. каждая гемотрансфузия может вызвать выработку дополнительных АТ. При повторных исследованиях АТ у пациентов могут не выявляться или снижаться в титре как результат ослабления активности АТ в процессе проводимого лечения (гормональная терапия, лучевая терапия и др.). У пациентов после перенесенных гемотрансфузионных осложнений происходят определенные серологические изменения. При первичном иммунном ответе (первичная аллоиммунизация) АТ появляются к 7-10 дню, период нарастания АТ – до 20 дня. При вторичном иммунном ответе нарастание титра происходит быстрее к 3-7 дню. Затем начинается постепенное снижение титра АТ и возможное их исчезновение в обратном порядке. Таким пациентам пробы на совместимость перед гемотрансфузией и подборы следует проводить с сывороткой, полученной непосредственно в день проведения трансфузии крови или накануне при условии сохранения ее при температуре +4-80С и с порцией сыворотки, заготовленной на высоте сенсибилизации. Это дает возможность предупредить переливание несовместимой крови. Сенсибилизированным беременным независимо от резус-принадлежности исследование антител необходимо проводить до 28 недель беременности 1 раз в 4 недели, после 28 недель - 1 paз в 2 недели. Всем сенсибилизированным пациентам, независимо от наличия или отсутствия антиэритроцитарных антител на момент определения, показаны гемотрансфузии с подбором. Для более полного решения проблемы профилактики сенсибилизациии предупреждение посттрансфузионных осложнений необходимо фенотипирование крови всех доноров и внедрение в практику в ЛПУ метода фенотипировання крови пациентов. Аутоантитела В норме у человека образуются антитела только по отношению к отсутствующим у него групповым антигенам. Однако в некоторых случаях могут вырабатываться антитела и по отношению к собственным неизмененным групповым антигенам, т.е. истинные аутоантитела. Истинные аутоантитела, направленные по отношению к антигенам своих собственных нормальных клеток и тканей, являются патологией. Это свидетельствует о глубоких нарушениях иммунообразовательной функции. В результате развиваются самые разнообразные аутоиммунные заболевания. В иммуносерологии аутоАТ называют любые АТ, которые реагируют с соответствующим АГ на собственных эритроцитах индивида. АутоАТ исследуют в следующих случаях: - при выявлении аутосенсибилизации к АГ эритроцитов при аутоиммунных заболеваниях; - при диагностике гемолитической болезни новорожденных, обусловленной иммунологическим конфликтом мать-плод; - при исключении причин ложноположительных реакций в аутоконтроле при проведении иммунологических исследований АГ и АТ. Различают 2 типа аутоАТ, которые вызывают аутоиммунные заболевания: холодовые и тепловые аутоантитела. АутоАТ холодового типа более активны при низкой (до + 20°С) температуре. Однако они могут проявлять пониженную активность и при более высокой температуре (+30-320С). Аутоантитела тепловоз типа активны при температуре + 370С. Аутоантитела бывают фиксированные - адсорбированы на поверхности эритроцитов, или присутствующие в сыворотке в свободном виде Наличие в крови реципиентов аутоантител создаст проблемы при проведении иммунологических исследований, т.к. искажает правильность типированных антигенов эритроцитов при определении группы крови, pезvc-принадлежности, антиэритроцитарных антител и постановке пробы на совместимость за счет неспецифической агглютинации. Холодовые и тепловые аутоантитела могут перекрывать собой присутствие в исследуемом образце специфических аллоантител, которые имеют клиническое значение н могут вызывать гемотрансфузионные осложнения. Отличить аутоантитела от аллоантител можно по результатам аутоконтроля - исследование сыворотки реципиента с собственными эритроцитами. В случае обнаружения у больного аутоантител для проведения безопасной гемотрансфузии необходим индивидуальный или специальный подбор крови. |