|
|
Экзамен перечень 77. Основные исторические этапы развития микробиологии, вклад отечественных и зарубежных ученых. Разделы микробиологии
Микробиологическая диагностика. При прионной патологии характерны губкообразные изменения мозга, астроцитоз (глиоз), отсутствие инфильтратов воспаления; окраска. Мозг окрашивают на амилоид. В цереброспинальной жидкости выявляют белковые маркеры прионных мозговых нарушений (с помощью ИФА, ИБ с моноклональными антителами). Проводят генетический анализ прионного гена; ПЦР для выявления РгР.
Профилактика. Введение ограничений на использование лекарственных препаратов животного происхождения. Ограничение трансплантации твердой мозговой оболочки. Использование резиновых перчаток при работе с биологическими жидкостями больных.
Листерии и листериозы. Характеристика возбудителя, микробиологическая диагностика, профилактика, лечение.
Таксономия. Род Listeria семейства Corynebacteriacea отдела Firmicutes образуют небольшие палочковидные бактерии, образующие короткие цепочки из 3
5 клеток. В мазках из молодых S-колоний располагаются в виде палисадника либо V- и Y-образно.
Морфология. В молодых культурах листерии представлены палочками и коккобациллами размером 1-2x0,5 мкм; в старых культурах образуют нитевидные формы до 20-200 мкм длиной. Бактерии подвижны (перитрихи) при выращивании при 20-25"С; совершают характерные «кувыркающиеся» движения. Культивирование при 37 "С приводит к резкому снижению подвижности вплоть до её потери. Медицинское значение имеет L. monocytogenes, вызывающая листериоз — полиморфное заболевание, протекающее в большинстве случаев с поражением нервной ткани или в виде ангнозно-септической формы.
Эпидемиология листерий
Listeria monocytogenes распространена повсеместно.
Листериоз — зооноз с природной очаговостью и множественными источниками инфекции. Основной природный резервуар листерий — грызуны, травоядные и птицы, а также большинство сельскохозяйственных и домашних животных. Листерии устойчивы во внешней среде; при умеренных и низких температурах в почве сохраняются (и даже размножаются) в течение месяцев и лет. На фураже жизнеспособны до 3 лет; длительно переживают и размножаются в мясе и молоке при 4-6 °С. При кипячении листерии погибают в течение 3-5 мин; также неустойчивы к действию дезинфицирующих веществ.
Заболеваемость листериями у животных может носить эпизоотический характер (особенно у молодняка). Основные пути заражения листериями — алиментарный и трансмиссивный (через кровососущих членистоногих). Характерный признак заболевания листериоза — выраженный моноцитоз в периферической крови, что обусловило видовое название возбудителя. Из организма больного животного листерия выделяется с мочой, испражнениями, носовым отделяемым, молоком, околоплодной жидкостью.
Заболеваемость листериями у людей носит преимущественно профессиональный характер. Основные пути заражения листериями — контактный (через кожу и слизистые оболочки), алиментарный, аэрогенный (при работе с кормами) и трансмиссивный. Листериоз регистрируют во всех возрастных группах, чаще у новорождённых, при нарушениях питания, у лиц с иммунодефицитами и сопутствующей патологией.
Бессимптомное носительство листерий. Доказана возможность бессимптомного носительства листерий. У женщин листерии можно выделить из влагалища и шейки матки. Особую опасность представляет носительство у беременных, так как возможно заражение плода (трансплацентарно) и новорождённого (при аспирации инфицированных плодных вод).
Листерии растут в интервале температур от 4 до 38 °С (особенно в присутствии небольших количеств глюкозы). Температурный оптимум листерий 30-37 °С; физиологическое развитие происходит при 18-20 °С (температура оптимальна для образования жгутиков, но удлиняет срок выделения и роста культуры). Из биохимических свойств наиболее часто учитывают способность L. monocytogenes гидролизовать гиппурат, ферментировать глюкозу и рамнозу с образованием кислоты, а также инертность к манниту и крахмалу.
Рост листерий на твердых средах
На твёрдых средах при сплошном посеве листерии образуют сплошной тонкий и голубоватый налёт, иногда с трудом обнаруживаемый. Культуры листерий имеют характерный запах творога или молочной сыворотки, обусловленный накоплением продуктов углеводного обмена. Изолированные 24-48-часовые колонии листерий мелкие (1-2 мм), больших размеров достигают на средах с глюкозой. Образуют S- и R-диссоциаты. S-колонии гладкие, резко очерченные, выпуклые (позднее происходит их уплотнение с центральным возвышением), прозрачные, бесцветные или нежно-голубоватые, в падающем свете серовато-молочные (рис. 6, см. цветную вклейку).
На КА листерии могут быть окружены зоной бета-гемолиза; увеличение гемолитической активности наблюдают при уменьшении содержания О2.
R-колонии листерий шероховатые, с утолщённым зазубренным краем и возвышающейся грубозернистой массой, достигают 1,5-3 мм; S-R-переход листерий сопровождается снижением гемолитической активности и потерей вирулентности.
Рост листерий на жидких средах
В жидких средах листерии дают равномерное помутнение, с последующим выпадением осадка; осадок слизистый, трудно диспергируемый, иногда поднимается в виде косички. Культивирование при 21 С сопровождается характерным помутнением с образованием поверхностного «купола» и спускающегося вниз хвостика (так называемый зонтик).
Особенности роста листерий на полужидких средах
В полужидких средах листерии дают рост по уколу, более обильный у поверхности (факультативный аэроб) с отходящим помутнением (особенно на глубине 3-5 мм). В МПЖ некоторые 10- суточные культуры образуют перпендикулярные выросты; в желатине с глюкозой растут в виде «щёточки» или вязанки хвороста.
Антигенная структура листерий. Антигены листерий. Патогенез поражений листериями. Клинические проявления листериоза. Клиника листериоза. Проявления заражения листериями.
У листерии выделяют О- и Н- антигены ( Аг ); по структуре пяти термолабильных жгутиковых (Н-) и четырнадцати термостабильных углеводных соматических антигенов ( Аг ) выделено 16 сероваров. Три серовара (4b, l/2b, 1 /2а) вызывают 90% всех случаев листериоза человека.
Патогенез поражений листериями. Поскольку листериоз развивается только у 20% инфицированных лиц, то листериоз можно рассматривать как оппортунистическую инфекцию. Входные ворота для листерий — миндалины, слизистые оболочки глаз, дыхательных путей, полости рта и кишечника, а также микротравмы кожных покровов. Возбудитель может диссеминировать по кровеносным и лимфатическим путям и проникать в различные органы и ткани, в том числе мозговые оболочки и ЦНС.
Основной фактор патогенности листерий — эндотоксин.
Другие факторы патогенности листерий: интерналин, листериолизин О, фосфолипазы.
Интерналин листерий — мембранный белок, облегчающий проникновение бактерий в макрофаги и эндоте-.лиоциты. Бактерии способны мигрировать из фаголизосом и вегетировать в цитоплазме клеток.
Листериолизин О листерий — гемолизин, вызывающий повреждение мембран фаголизосом; считается основным фактором вирулентности.
Фосфолипазы листерий вызывают растворение клеточной мембраны и проникновение в клетки, в том числе и макрофаги (что защищает возбудитель от действия AT). Дочерние популяции связывают и полимеризуют актин инфицированных клеток, что нарушает подвижность макрофагов и приводит к их аккумуляции в кровотоке (моноцитоз).
Клинические проявления листериоза. Клиника листериоза. Проявления заражения листериями
Продолжительность инкубационного периода листериоза составляет 2-4 нед; листериоз начинается остро, с подъёмом температуры тела до 38-41 °С, ознобом, головной болью, тошнотой, рвотой и т.д. Нередко наблюдают гриппоподобный комплекс, боль при глотании, лимфадениты и конъюнктивиты.
Температура при листериозе держится 7-14 сут (3-22 сут), затем литически (реже критически) падает. Отмечают инъекцию склер и гиперемию лица. С 1-5-го дня болезни листериоза может появиться полиморфная сыпь, исчезающая ко времени окончания лихорадочного периода.
По типу течения листериоза выделяют острые, подострые, хронические и абортивные инфекции. По характеру проявлении листериоза выделяют следующие формы— ангинозно-септическую (с мононуклеозом), окуло-гландулярную, септико-тифозную, листериоз ЦНС, листериоз беременных, септико-гранулематозную (сепсис новорождённых) и др.
Прогноз листериоза серьёзный; 30% случаев листериоза взрослых (60% у лиц с иммунодефицитами) заканчивается фатально. Особую опасность представляет внутриутробное заражение плода, обычно приводящее к выкидышам или мертворождениям. У плода или новорождённого наблюдают многочисленные абсцессы и гранулёмы (листериомы), напоминающие таковые при милиарном туберкулёзе. Особенно много очагов развивается в лёгких, печени и ЦНС.
Менингиты возникают в течение 3 нед после рождения; молниеносные формы листериоза новорождённых сопровождаются 54-90% смертностью.
снову распознавания листериоза составляют выделение и идентификация возбудителя.
Бактериологические исследования листерий
Материалы для исследования на листерии — кровь, СМЖ, слизь из зева, пунктаты увеличенных лимфатических узлов, у новорождённых дополнительно — меко-ний, пупочная кровь; секционный материал (кусочки мозга, печени, селезёнки, лимфатические узлы). Посевы рекомендуют делать в первые 7-10 сут болезни. Кровь и СМЖ засевают на плотные среды (глюкозный, глкжозо-печёночный или КА с глюкозой). Выросшие колонии отбирают для дальнейших исследований по наличию гемолитической активности (на средах с кровью) либо по способности приобретать сине-зелёную окраску при косом освещении.
Серологические исследования листерий
Обычно ставят РА с листериозным диагностикумом. Реакция специфична и положительна со второй недели с последующим нарастанием титра AT; последние сохраняются не менее 1
2лет после выздоровления (реакция может быть использована для ретроспективного анализа).
Биологическая проба в выявлении листерий
Для биологической диагностики листериоза лучше всего использовать белых мышей, иммуносупрессированных введением кортизона (4
5 мг в/м за 4 ч до заражения). После гибели животного (обычно на 2-6-е сутки) проводят посев материала из различных органов. Следует помнить, что листе-рии размножаются в мёртвых тканях, и для избежания диагностических ошибок часть патологического материала следует поместить в стерильные пробирки и хранить в течение 5
10 сут при температуре 4-6° С, а затем подвергнуть повторному исследованию.
Лечение листериоза. Профилактика листериоза
Основу лечения и профилактики листериоза составляет проведение адекватной антибиотикотерапии (цефалоспорины, аминогликозиды). Ведущее значение в профилактике листериоза имеют соответствующие ветеринарно-санитарные мероприятия. Определённый вклад вносят своевременное проведение дератизации и немедленное изъятие и уничтожение продуктов, испорченных грызунами (или подозрительных продуктов!). Больных лиц следует госпитализировать, а за населением неблагополучного пункта устанавливают наблюдение.
Пневмококки и заболевания, вызываемые ими.
Пневмококк (Streptococcus pneumoniae) впервые выделил Пастер (1881) во время работы над антирабической вакциной и первоначально посчитал его возбудителем бешенства. Этиологическую роль микроорганизма в развитии пневмоний у человека доказали Френкель и Вайхзельбаум (1884). Бактерии колонизируют организмы человека и животных и входят в группу так называемых «оральных» стрептококков. Являются основными возбудителями воспаления лёгких, также могут вызвать плевриты, менингиты, ползучие язвы роговицы, гнойные воспаления среднего уха, септические состояния и другие заболевания. В IX издании определителя бактерий Берджи (1994 год) пневмококки включены в 17 группу «Грамположительные кокки».
Эпидемиология поражений. Пневмококк — один из основных возбудителей бактериальных пневмоний, регистрируемых вне Резервуар инфекции — больные и носители ,основной путь передачи — контактный; в период вспышек также воздушно-капельный. Пик заболеваемости приходится на холодное время года. К пневмококкам чувствительны белые мыши (при заражении они погибают от септицемии в течение суток), телята, ягнята, поросята, собаки и обезьяны.
Морфология. Пневмококки неподвижны, они не образуют спор, имеют слегка вытянутую форму, напоминающую контуры пламени свечи. В мазках из клинического материала располагаются парами, каждая из которых окружена толстой капсулой. В мазках с питательных сред могут располагаться короткими цепочками и быть более округлыми. На простых средах образуют тонкую капсулу; её развитие стимулирует внесение крови, сыворотки или асцитической жидкости. Капсулообразование наиболее хорошо выражено у бактерий III типа. При расположении цепочками капсула может быть общей.
Культуральные свойства. Пневмококки аэробы или факультативные анаэробы; при культивировании предпочтительны капнофильные условия (5-10% СО2). Хемоорганогрофы и хорошо растут на кровяных или сывороточных средах, дополненных внесением 0,1% глюкозы. Могут расти в диапазоне температур 28-42 °С, оптимум — 37 °С. Оптимум рН —7,6-7,8. На плотных средах образуют нежные полупрозрачные четко—очерченные—колонии диаметром около 1мм. Иногда они могут быть плоскими с центральным углублением; подобно прочим стрептококкам, колонии никогда не сливаются между собой. На кровяном агаре образуют мелкие полупрозрачные колонии зеленовато-серого цвета. Центр колоний более темный, периферия светлее. Под колонией и по ее периферии видна зона а-гемолиза в виде зеленоватой обесцвеченной зоны (что обусловлено переходом гемоглобина в метгемоглобин). Колонии пневмококка III типа часто имеют слизистую консистенцию, величина их до 2 мм. Они мутноваты, могу г сливаться между собой. Образуют S- и R-формы колоний. При переходе из S- в R-форму теряют способность синтезировать капсулу. На жидких средах с сывороткой и 0,2% глюкозой дают равномерное помутнение и небольшой хлопьевидный осадок. При длительном культивировании осадок увеличивается.
Устойчивость. Пневмококки относят к группе нестойких микроорганизмов. В сухой мокроте они сохраняются до двух месяцев. Способны длительно сохраняться при низких температурах; при температуре 60 °С погибают в течение 3-5 минут. 3% раствор карболовой кислоты убивает их за 1-2 минуты. На пневмококки губительно действуют оптохин (в концентрации 1:100000) и желчь, что используют для идентификации бактерий.
Антигенная структура. У пневмококков обнаружены несколько видов антигенов полисахаридный, 0-соматический антиген, находящийся в клеточной стенке; полисахаридные капсульные К-антигены и М-белок. Полисахаридный соматический антиген аналогичен С-субстанции других стрептококков. Родство обуславливает сходство химической структуры рибиттейхоевых кислот, связанных с холинфосфатом. Капсульные антигены также имеют полисахаридную природу, состоят из повторяющихся в различном сочетании моносахаров: D-глюкозы, D-галактозы и L-рамнозы. По структуре капсульных антигенов пневмококки разделяют на 84 серовара. Следует помнить, что капсульные антигены перекрёстно реагируют с антисыворотками к антигенам стрептококков групп А и В, а также с сыворотками к антигенам клебсиелл и эшерихии. При переходе из S в R-форму капсульные антигены утрачиваются. Для серотипирования пневмококков выпускают групповые сыворотки, обозначаемые латинскими буквами (А, В, С, D и т.д.) и серовариантные, обозначаемые римскими цифрами. Агглютинирующую сыворотку III не включают в смеси сывороток. Её выпускают отдельно и её нельзя разводить. У человека наиболее часто выделяют пневмококки I, II и III серовариантов. Они наиболее вирулентны для человека, поэтому реакцию агглютинации первоначально ставят, используя антисыворотки к этим вариантам. При отрицательном результате реакцию агглютинации ставят со смесью сывороток А, В, С и т.д. (до получения положительного результата), а затем с отдельными антисыворотками. Для более быстрой идентификации сероваров применяют реакцию Нойфельда (иммунного набухания капсулы). Метод основан на способности капсул пневмококков увеличиваться в объёме в присутствии гомологичной антисыворотки, что регистрируют светооптической микроскопией. Капсульные полисахариды обладают сенсибилизирующими свойствами, проявляющимися в развитии реакции гиперчувствительности замедленного типа, выявляемой с помощью кожных проб.
Факторы патогенности. Основным фактором является капсула, защищающая бактерии от микробицидного потенциала фагоцитов и уводящая их от действия опсонинов. Некапсулированные штаммы практически авирулентны и встречаются редко. Большую часть пула противопневмококковых AT составляют AT к Аг капсулы. Важной функцией капсулы и М-белка также является обеспечение адгезии на слизистой. Существенное значение имеет субстанция-С, специфически взаимодействующая с С-реактивным белком. Следствием подобного реагирования являются активация комплементарного каскада и высвобождение медиаторов острой фазы воспаления; их аккумуляция в лёгочной ткани стимулирует миграцию полиморфноядерных фагоцитов. Формирование мощных воспалительных инфильтратов сопровождается нарушением гомеостаза лёгочной ткани и её опеченением. Пневмококки образуют эндотоксин, а- и в-гемолизины (пневмолизины), лейкоцидин. а-пневмолизин является термолабильным белком, способным нейтрализовать 0-стрептолизин, эритрогенное вещество, нейраминидазу. Пневмококки также синтезируют ряд ферментов, вносящих вклад в патогенез поражений — мурамидазу, гиалуронидазу (способствует распространению микроорганизмов в тканях), пептидазу (расщепляет IgA).
Патогенез поражений. Биотопом пневмококков являются верхние дыхательные пути. Патогенез большинства пневмоний включает аспирацию слюны, содержащей S. pneumoniae, и проникновение бактерий в нижние отделы воздухоносных путей. Существенное значение имеет нарушение защитных дренирующих механизмов — кашлевого толчка и мукоцилиарного клиренса. У взрослых чаще наблюдают долевые поражения лёгких, у детей и лиц преклонного возраста доминируют перибронхиальные или очаговые поражения. Формирование мощных воспалительных инфильтратов сопровождается нарушением гомеостаза лёгочной ткани и её опеченением. Инфекции наиболее вирулентным 3 сероваром могут сопровождаться образованием полостей в паренхиме лёгких. Из первичного очага возбудитель может проникать в плевральную полость и перикард либо гематогенно диссеминировать и вызвать менингиты, эндокардиты и суставные поражения
|
|
|
Скачать 1.87 Mb.