Главная страница
Навигация по странице:

  • Сравнительное действие ферментов и небиологических катализаторов

  • Работа 19. Сравнение действия α-амилазы слюны и соляной кислоты на реакцию гидролиза крахмала

  • практикум строев. Практикум по биологической химии, изданный в 1986 году, подвергся существенной переработке, а также дополнен новыми лабораторными работами в разделах белки, липиды,


    Скачать 1.74 Mb.
    НазваниеПрактикум по биологической химии, изданный в 1986 году, подвергся существенной переработке, а также дополнен новыми лабораторными работами в разделах белки, липиды,
    Анкорпрактикум строев.docx
    Дата18.05.2017
    Размер1.74 Mb.
    Формат файлаdocx
    Имя файлапрактикум строев.docx
    ТипПрактикум
    #7805
    страница11 из 39
    1   ...   7   8   9   10   11   12   13   14   ...   39


    Практическое значение работы. Реакции на холестерин используются для обнаружения холестерина при гистохимическом и цитохимическом исследовании тканей, клеточных мазков и биологических жидкостей. Это имеет значение при нарушениях обмена холестерина, сопровождающихся отложением его в сосудах (атеросклероз), в коже (ксантоматоз) и т.д. Эти реакции характерны и для родственных холестерину соединений – стероидных гормонов, желчных кислот, растительных стеринов, поэтому применяются для качественного анализа лекарственных препаратов, содержащих указанные вещества, и для разработки методов их количественного определения.

    ФЕРМЕНТЫ



    Ферменты (энзимы) – биологические катализаторы белковой природы. Они содержатся во всех тканях, клетках, внутриклеточных органоидах и биологических жидкостях. Без них не осуществляется ни один химический процесс в организме. Разработка методов выделения и очистки ферментов дала возможность получить их в чистом и кристаллическом виде. Это позволило изучить структуру ферментов, активные и регуляторные центры их молекул, механизм действия, роль простетических групп в катализе и т.д. Как любые белки, ферменты подвержены денатурации, поэтому процедура их получения из биологического материала (ткани животных и растений, микроорганизмы, жидкости) должна быть щадящей, т.е. вестись при температуре 0-4˚С, при рН 5-9 (за исключением особых случаев). Среда для извлечения ферментов не должна содержать примесей тяжелых металлов, которые инактивируют ферменты.

    Ферменты делятся на простые и сложные. У простых ферментов функцию контактного и каталитического участков активного центра выполняют только радикалы аминокислот; у сложных – в состав активного центра входят также коферменты и ионы металлов. Сложные ферменты без кофакторов не активны, что нужно учитывать при их идентификации.



    1. Сравнительное действие ферментов

    и небиологических катализаторов
    Ферменты в отличие от небиологических катализаторов (металлы, кислоты и т.д.) обладают высокой эффективностью катализа, специфичностью действия, способностью ускорять реакции в мягких условиях.

    Работа 19. Сравнение действия α-амилазы слюны и соляной кислоты

    на реакцию гидролиза крахмала
    Реактивы. Крахмал, 1%-ный раствор в 0,3%-ном растворе хлорида натрия, свежеприготовленный; раствор иода в иодиде калия*; реактив Фелинга*; пероксид водорода, 10%-ный раствор.

    Оборудование. Штатив с пробирками; воронка с ватой; стеклянные палочки; глазные пипетки; водяная баня с термометром; пипетки вместимостью 5 мл.

    Материал.

    1. Разбавленная слюна. Для ее получения промывают рот водой от остатков пищи. Набирают в рот порцию дистиллированной воды около 20 мл и держат ее примерно 2 мин, смешивая языком со слюной. Жидкость со слюной выпускают в стаканчик и профильтровывают через вату в пробирку. Фильтрат используют для работы.

    2. Соляная кислота, 10%-ный раствор.


    Метод основан на изучении скорости гидролиза крахмала, определяемого по убыли субстрата (крахмал) реакцией с раствором иода или по приросту продукта (мальтоза), выявляемого реакцией Фелинга (образование красного осадка оксида меди). Реагентом на крахмал и декстрины служит иод, образующий с ними окрашенные комплексные соединения (табл.6). Амилоза крахмала при этом дает с иодом комплекс синего цвета, гликоген – красно-бурого, а декстрины в зависимости от молекулярной массы окрашиваются в красно-бурый или желтоватый цвет. Последний обусловлен не образованием комплекса, а находящимся в среде иодом.

    Мальтоза как восстанавливающий дисахарид выявляется реакцией Фелинга, которая основана на способности углеводов в щелочной среде восстанавливать ионы Cu2+, содержащиеся в жидкости Фелинга в виде комплексного соединения с тартратами, до оксида меди красного цвета, выпадающего в осадок.

    Таблица 6. Проба с иодом на крахмал и продукты его гидролиза





    Крахмал и продукты его гидролиза

    Окрашивание с иодом

    Крахмал

    Синее

    Амилодекстрины

    Фиолетовое

    Эритродекстрины

    Красное

    Ахродекстрины

    Желтое (окраска раствора иода) или бесцветное

    Мальтодекстрины

    То же

    Мальтоза

    То же
    1   ...   7   8   9   10   11   12   13   14   ...   39


    написать администратору сайта