Ответы ординатура БАКТЕРИОЛОГИЯ. Правила работы и поведения в бактериологической лаборатории общего назначения
 Скачать 1.49 Mb.
|
Лабораторная диагностика псевдотуберкулёза и кишечного иерсиниоза у людей:Подтверждение диагноза "псевдотуберкулёз" и "кишечный иерсиниоз" осуществляется на основании клинической картины по результатам бактериологического (выделение культуры Y.pseudotuberculosis или патогенных Y.enterocolitica), молекулярно-генетического (выявление ДНК возбудителя псевдотуберкулёза и патогенных Y.enterocolitica в полимеразной цепной реакции, ПЦР), серологического (выявление антител к Y.pseudotuberculosis, Y. enterocolitica) методов с учетом эпидемиологического анамнеза. Взятие материала от больного (пациента с подозрением на заболевание) для бактериологического, молекулярно-генетического, серологического исследований осуществляется в медицинских организациях с учетом клинических проявлений инфекции и стадии инфекционного процесса при соблюдении процедур взятия и транспортировки биологического материала. Для проведения бактериологического и молекулярно-генетического анализа материал от больного (пациента с подозрением на заболевание) отбирают немедленно при выявлении больного (пациента с подозрением на заболевание), до начала лечения антибиотиками. Исследуют клинический материал: - испражнения на протяжении всего периода заболевания; - мочу в первые семь дней болезни; - мазки из зева в первые три дня болезни; - кровь в течение болезни при фебрильной лихорадке, весь лихорадочный период и в период рецидива болезни; - операционный или секционный материал (ткань аппендикулярных отростков, мезентериальные лимфоузлы, биоптаты синовиальной оболочки, синовиальная жидкость, биоптаты слизистой кишечника, другие патологически измененные органы и ткани), сгустки крови, желчь, содержимое кишечника. Схема бактериологического исследования включает "холодовое обогащение" исследуемого материала при температуре (6±2)°С, использование дифференциально-диагностических сред для выделения и идентификации штаммов, определение их серотипа, биотипа, маркеров патогенности. Также для индикации псевдотуберкулёзного микроба возможно использование метода флюоресцирующих антител (МФА) с применением иммуноглобулинов диагностических флюоресцирующих. Молекулярно-генетическое исследование проводится в день поступления материала. При получении отрицательного результата ПЦР-исследование повторяют на 3 календарный день после "холодового обогащения". Для серологического исследования на иерсиниозы необходимо два образца сыворотки крови (ОСК), взятые в разные периоды заболевания (парные сыворотки): в первую неделю от начала заболевания и в конце второй - начале третьей недели болезни. Серологическая диагностика основывается на появлении или нарастании титра специфических антител в течение болезни. При исследовании ОСК в реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) достоверным считается 4-кратное и выше нарастание титра антител при исследовании парных сывороток. В отдельных случаях (невозможность взятия парных сывороток, обследование больного в поздние сроки и иных) при наличии конкретных клинических, эпидемиологических данных, результатов бактериологического, молекулярно-генетического исследований допускается однократное исследование сывороток крови. Методом иммуноферментного анализа (ИФА) с использованием существующих тест-систем выявляют антитела классов IgA, IgM, IgG к родоспецифическим белкам Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica, детерминированным плазмидой вирулентности pYV, без дифференциации нозологических форм псевдотуберкулёз и кишечный иерсиниоз. При исследовании ОСК методом ИФА учет и оценку результатов проводят в соответствии с инструкцией по применению тест-системы. Для подтверждения диагноза при затяжном и хроническом течении иерсиниозов (более трех месяцев), а также в сложных диагностических случаях используют референс-метод иммуноблота. Применяют тест-системы для определения антител классов IgA и IgG к родоспецифическим белкам обоих возбудителей, детерминированных плазмидой вирулентности pYV, без дифференциации нозологических форм псевдотуберкулёз и кишечный иерсиниоз. В качестве альтернативного варианта используют тест-системы, позволяющие дополнительно выявить антитела классов IgA и IgG к видоспецифическим белкам Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica, и, таким образом, дифференцировать псевдотуберкулёз и кишечный иерсиниоз. При исследовании ОСК методом иммуноблота учет и оценку результатов проводят в соответствии с инструкцией по применению тест-системы. 42. Энтеробактерии — большая группа микроорганизмов, обитающих в различных отделах ЖКТ и оказывающих позитивное или патогенное воздействие на организм человека и подразделяются на 3 группы: патогенные, условно-патогенные и сапрофитные. К УПМ относятся: клебсиелла, энтеробактер, серрация, протей, цитробактер, провиденция и иерсиния. Они выполняют в макроорганизме жизненно важные функции, но под воздействием негативных факторов становятся опасными и вызывают различные заболевания. В семейство Enterobacteriaceae входит множество родов и видов, способных вызвать развитие серьезных заболеваний у человека. Одним из основных представителей данного семейства является энтеробактер. Он считается нормальным обитателем кишечника человека, обеспечивающим его адекватное функционирование. Проникая в другие органы, этот микроб становится причиной серьезных недугов. Чаще всего поражаются почки, мочевыводящие пути, органы репродуктивной и дыхательной систем. Enterobacter spp – одна из ведущих причин смерти новорожденных детей. Энтеробактерии — аспорогенные палочковидные бактерии, способные развиваться и размножаться как в присутствии кислорода, так и без него. Микробы имеют жгутики, обеспечивающие их подвижность, а некоторые образуют капсулу. По Граму они окрашиваются в красный цвет. Большинство бактерий ферментируют углеводы до кислоты и газа, являются оксидазоотрицательными и каталазоположительными, а также способными к денитрификации. Энтеробактерии растут на универсальных питательных средах, обязательным компонентом которых является лактоза. Они формируют характерные колонии: на Эндо – красные блестящие слизистые или мелкие бледно-розовые без отпечатка на среде, на Плоскирева – кирпично-красные, цвета среды или желтоватые колонии. При выращивании в бульоне Хоттингера бактерия вызывает равномерное помутнение с выпадением осадка. Температурный оптимум для них — 35-36 градусов. Факторы патогенности бактерий: Ферменты, Эндотоксин, Белки-адгезины, Энтеротоксин,Ммикроворсинки. Энтеробактерии устойчивы к большинству антисептиков, дезинфектантов и противомикробных средств. Условно-патогенные энтеробактерии —обитают на эпителии кишечника в строго определенном количестве, которое не должно превышать 104 КОЕ/г. Под воздействием эндогенных или экзогенных факторов микробы начинают активно размножаться, утрачивают свои полезные качества и приобретают болезнетворные свойства. В организме формируется кишечный дисбиоз. При этом оппортунистические микробы начинают покидать пределы кишечника и, попадая в другие биоценозы, вызывать развитие различных недугов. Нередко инфекционная патология затрагивает органы мочевыделения, гепатобилиарной зоны, нервной системы. Со временем появляется доминирующий вид бактерий, который угнетает рост других. Он и становится непосредственной причиной патологии. |