БАВ. Природные биологически активные вещества
 Скачать 1.93 Mb.
|
КАЧЕСТВЕННЫЙ АНАЛИЗДля качественного определения иридоидов в ЛРС часто используют реактив Трим-Хилла. Реактив Трим-Хилла: смесь кислот уксусной ледяной, хлористоводородной концентрированной, 0,2% -ного водного раствора меди сульфата (20:1:2). К 1 мл спиртового извлечения из ЛРС прибавляют 0,5 мл реактива Трим-Хилла. Смесь нагревают на водяной бане 1-2 мин. При взаимодействии с этим реактивом иридоиды ряда аукубина дают голубое или синее окрашивание. С помощью этого реактива могут быть обнаружены асперулозид, гарпагид, монотропеин, тевирикозид. Несмотря на то, что эта реакция является общепринятой, некоторые иридоиды (например, вербеналин, логанин, плюмирид) ею не выявляются. В аналитической практике находит применение реактив Шталя, с которым реагируют большинство веществ иридоидной природы. Иридоиды группы аукубина с этим реативом дают синюю или голубую окраску. Реактив Шталя: n-диметиламинобензальдегид – 1г, концентрированная хлористоводородная кислота – 5 мл, этанол – до 100 мл. Реактив Бэкон-Эдельмана: бензидин – 0,5 г, трихлоруксусная кислота – 10 г, этанол – до 100 мл. Иридоиды с этим реактивом окрашиваются от лимонно-желтого до коричневого цвета. С вербеналином –фиолетовая окраска, с аукубином – лимонно-жёлтая, с каталполом – коричневая окраска в видимом свете с интенсивной жёлтой флуоресценцией в УФ - свете. Реактив Година: ванилин – 1 г, 3% водный раствор хлорной кислоты – 50 мл, этанол – до 100 мл. Логанин с этим реактивом даёт окрашивание от красного до фиолетового. Обнаружение аукубина: кусочек растительного материала помещают на фильтровальную бумагу, смачивают каплей реактива Шталя, через 2-3 мин сырьё снимают с бумаги и место с реактивом прогревают струёй горячего воздуха (90-100°С). При наличии аукубина наблюдают появление на бумаге голубого пятна (при наличии в сырье проазуленов образуется пятно зеленого цвета). ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ Для более достоверного суждения о содержании иридоидов используют бумажную (БХ) и тонкослойную (ТСХ) хроматографии. Системы растворителей для БХ: Н-БУТАНОЛ - УКС. КИСЛОТА - Н2О (4:1:5); Н-БУТАНОЛ - МЕТАНОЛ - Н2О (4:1:5); ПРОПАНОЛ - Н2О (4:1); для ТСХ: ЭТАНОЛ - ХЛОРОФОРМ (1:1); ЭТИЛАЦЕТАТ-МЕТАНОЛ (4:1) и др. Для обнаружения иридоидов на хроматограммах используют 3% спиртовые растворы серной, соляной, трихлоруксусной кислот, реактивы Трим-Хилла, Шталя, Бэкон-Эдельмана и др. После проявления хроматограммы выдерживают 5 - 10 мин в сушильном шкафу при температуре 110°С. Иридоиды аукубинового ряда проявляются реактивами Трим-Хилла и Шталя в виде синих, зелёных и фиолетовых пятен. КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ АНАЛИЗ ЛРС Для определения количественного содержания иридоидов в ЛРС используют колориметрические, спектрофотометрические, хромато-спектрофотометрические методы, а также ВЭЖХ. Способ 1: Навеску (0,2 г) измельченного растительного сырья перемешивают с небольшим количеством карбоната кальция и трижды экстрагируют этанолом по 3 мин на кипящей водяной бане с обратным холодильником. Полученный экстракт фильтруют, упаривают досуха. Остаток обрабатывают петролейным эфиром. К очищенному остатку прибавляют 5-10 мл воды и раствор фильтруют через колонку (1х10 см) с нейтральным оксидом алюминия, после чего колонку промывают водой до получения 20 мл фильтрата. 1 мл полученного фильтрата смешивают с 0,5 мл реактива Трим-Хилла, 2,5 мл 50% уксусной кислоты и нагревают 15 мин при 70°С. Полученный раствор синего цвета охлаждают, перемешивают в течение 5 мин и измеряют оптическую плотность при 570 нм. Способ 2: 0,2 г измельченного растительного сырья смешивают с 2 мг карбоната кальция и экстрагируют 3 раза по 10 мл 50% метанола при нагревании на водяной бане с обратным холодильником. Обьединенные экстракты выпаривают досуха, остаток для удаления липофильных веществ обрабатывают петролейным эфиром. Очищенный остаток растворяют 5-10 мл воды, полученный раствор фильтруют через колонку (2 х 1 см) с оксидом алюминия, которую затем промывают водой до получения 20 мл элюата. К 1 мл очищенной суммы иридоидов прибавляют 0,5 мл реактива Трим-Хилла, 2,5 мл 50% водного раствора уксусной кислоты и нагревают 15 мин на водяной бане при 70°С. Полученный синий раствор охлаждают в течение 5 мин и измеряют оптическую плотность на фотоэлектроколориметре при желтом светофильтре (570 нм). Количественное содержание иридоидов в ЛРС можно опредилить общепринятыми физико-химическими методами. Тем не менее, когда исследуют чистые горечи, в первую очередь устанавливают показатель горечи. Горечь в растительном сырье определяют путём сравнения порога концентрации горечи в экстракте из растительного сырья со стандартным раствором хинина гидрохлорида. Порог чувствительности горечи – это наименьшая концентрация раствора, которая позволяет ощутить горечь в течение 30 с. Показатель горечи выражается в единицах, которые эквивалентны горечи в растворе, содержащем 1 г хинина гидрохлорида в 2000 мл воды. |