лабораторный практикум ТХ. Регистрация в Журнале регистрации вещественных доказательств и документов к ним
 Скачать 0.77 Mb.
|
|
Лабораторная работа №1 Тема: «Регистрация в «Журнале регистрации вещественных доказательств и документов к ним» объектов, представленных для судебно-химического исследования». Цель: познакомиться с правилами регистрации вещественных доказательств и оформления документов к ним. Образец описания вещественного доказательства (на примере биологического объекта – кровь). 12.09.2015г. в 08.30. доставлен флакон из стекла емкостью 10 мл с жидкостью темно-красного цвета (объем жидкости 10 мл). Горловина флакона закрыта резиновой пробкой, фрагментом белой бумаги, обвязана ниткой, концы которой вклеены под бумажную этикетку, опоясывающую флакон. Надпись на этикетке: «В судебно-химическую лабораторию. Кровь из трупа Петрова И.И. 1956г.р. для определения алкоголя. Акт вскрытия №236 от 11.09.15г., направление на судебно-химическую экспертизу № 124 от 11.09.15г. СМЭ Сидоров С.С. Ярцевское РОМ». Лабораторная работа №2 Тема: «Освоение практических навыков правил упаковки биологического материала и других вещественных доказательств». Цель: познакомиться с правилами упаковки биологических объектов и других вещественных доказательств. Задание №1 Упаковка твердого биологического объекта Перед Вами твердый БО (печень, почки или др.). Необходимо правильно упаковать БО для направления его на СХЭ. Для этого отрежьте кусочек биологического объекта (не менее 100г), определите его точную массу, взвесив объект на технических весах. Внутренние органы нельзя обмывать водой! Поместите объект в стеклянную банку. Проведите консервирование объекта. В качестве консерванта используют спирт-ректификат, уровень которого над внутренними органами в банке должен быть высотой не менее 1 см. Банку закрывают притертой крышкой (в порядке исключения полиэтиленовой крышкой), обертывают чистой бумагой, обвязывают шпагатом или прочной ниткой. Оформляют этикетку согласно приложению, указанному после задания №1. Этикетку наклеивают на банку таким образом, чтобы обвязка проходила под ней, а концы нити выходили из-под этикетки. Приложение:«В судебно-химическую лабораторию. Печень (почки) трупа Старовойтова Н.П. 1963г.р. Для определения металлических ядов. Акт вскрытия №78 от 08.09.15 г., направление на судебно-химическую экспертизу №125 от 07.09.15 г. СМЭ Агельярова Л.В. Велижское РОМ». (Массу объекта укажите самостоятельно). Сделайте фотографию упакованного Вами БО и вклейте ее в рабочую тетрадь. Задание №2 Упаковка жидкого биологического объекта Перед Вами биологическая жидкость: кровь, моча, промывные воды желудка или др. Необходимо правильно упаковать БЖ для направления ее на СХЭ. Кровь. В стерильный, сухой пенициллиновый флакон вносят 0,8 мл 3,8% р-ра цитрата натрия. Встряхивают флакон, смачивая его стенки. Отмеряют пипеткой 5 мл (точный объем) крови и вносят в заранее подготовленную пенициллинку. Флакон тотчас же закрывают стандартной резиновой пробкой, фиксируют пробку и содержимое флакона перемешивают. Пробки фиксируют алюминиевыми колпачками. В случае герметизации другим способом, флаконы должны быть опечатаны (см. упаковку твердого БО). На флакон наклеивается этикетка, оформленная согласно приложению, указанному после задания №2. Моча. Отмеряют пипеткой 10 мл (точный объем) мочи и вносят ее в стерильный, сухой пенициллиновый флакон. Флакон тотчас же закрывают стандартной резиновой пробкой. Пробки фиксируют алюминиевыми колпачками. В случае герметизации другим способом, флаконы должны быть опечатаны (см. упаковку твердого БО). На флакон наклеивается этикетка, оформленная согласно приложению, указанному после задания №2. Приложение2.1.: «В судебно-химическую лабораторию. Кровь гр.Алексеева М.С. 1982г.р. Для определения этанола. СМЭ Самойлова Е.А. направление на судебно-химическую экспертизу №126 от 08.09.15г. Рославльское РОМ». Приложение2.2.: «В судебно-химическую лабораторию. Моча гр. Ташлыкова Р.И. 1985г.р. Для определения морфина. СМЭ Курнасенкова Е.А. направление на судебно-химическую экспертизу №127 от 08.09.15г. Рославльское РОМ». Сделайте фотографию упакованного Вами БО и вклейте ее в рабочую тетрадь. Задание №3 Упаковка волос Перед Вами биологический объект: волосы. Необходимо правильно упаковать БО для направления его на СХЭ. Линейкой измеряют длину волос. Из плотной бумаги вырезают прямоугольник, длина которого на 2-3 см превышает длину волос. Укладывают биологический объект на подготовленном кусочке бумаги, указывая направление роста волоса (верх, низ). Пробу волос фиксируют тонкой липкой лентой на бумаге (если волосы короткие, то фиксацию проводят в одном месте посередине, если волос длинный, то фиксируют в двух местах по краям). БО помещают в полиэтиленовый пакет. Пакет плотно завязывают прочной ниткой, оставляя длинные концы. Оформляют этикетку согласно приложению, указанному после задания №3. Этикетка оформляется в количестве двух одинаковых экземпляров. Концы нити вкладывают между этикетками и склеивают. Приложение: «В судебно-химическую лабораторию. Волосы трупа Ильиной С.И. 1882 г.р. Для определения мышьяка. СМЭ Захаренкова Т.Ю. Направление на судебно-химическую экспертизу №128 от 08.09.15г. РОМ г. Гагарина». Сделайте фотографию упакованного Вами БО и вклейте ее в рабочую тетрадь. ОГУЗ Медицинская документация Смоленское областное ф.№У-317(76) бюро судмедэкспертизы Утверждена МЗ СССР химическое отделение 10 сентября 1976г. №877 ЖУРНАЛ №____ регистрации вещественных доказательств и документов к ним в лаборатории начат «___»__________________201__г. окончен «__» ______________________201__г. с №_____ по №______
Лабораторная работа №3 Тема: «Изолирование токсических веществ методом Стаса-Отто» Цель: познакомиться с начальными этапами подготовки биологического объекта к химико-токсикологическому исследованию, приобрести практические навыки изолирования токсических веществ полярными растворителями (метод Стаса-Отто), научиться оформлять заключение эксперта (вводную и исследовательскую части). Опыт №1 Установление целостности упаковки, определение консервирования, цвета, запаха, наличия инородных включений и массы (объема) биологического материала Проводят осмотр упаковки биологического материала. Необходимо удостовериться в ее целостности. Изучают надписи на этикетке. Упаковку аккуратно вскрывают, не допуская попадания ее частей в биологический материал. Устанавливают наличие консервирования объекта. Отмечают запах: естественный (запах печени, мочи, почек и т.д.), специфические, посторонние запахи: (запах аммиака, сероводорода, уксусной кислоты, горького миндаля и т.д.). Определяют цвет биологического объекта. Устанавливают наличие инородных включений. Если на исследование поступил твердый биологический материал, необходимо измерить его массу на технических весах. Если поступил жидкий биологический объект, устанавливают его объем мерным цилиндром. Опыт №2 Определение рН биологического объекта Определение рН среды имеет большое значение для предварительного решения вопроса о веществах, которые могли вызвать отравление. Для определения рН среды небольшое количество объекта измельчают, вносят в пробирку, добавляют дистиллированную воду и хорошо взбалтывают, фильтруют. Определяют рН среды водной вытяжки: стеклянной палочкой наносят каплю вытяжки на красную и синюю лакмусовые бумажки или универсальный индикатор. Параллельно ставят контрольный опыт с дистиллированной водой. Покраснение синей лакмусовой бумажки свидетельствует о кислой реакции среды. При кислой реакции среды необходимо провести исследование с красной бумажкой Конго. Посинение бумажки Конго свидетельствует о наличии минеральных или органических кислот, введенных извне. Для уточнения характера кислоты водную вытяжку разбавляют в 5-10 раз и вновь исследуют с помощью красной бумажки Конго. При отравлении минеральными кислотами бумажка Конго синеет, а в случае органических кислот – не меняет своей окраски. Следует помнить, что слабокислую реакцию среды объекты могут иметь за счет кислотного брожения, а также объекты, содержащие малые количества органических кислот. Посинение красной лакмусовой бумажки свидетельствует о щелочной реакции среды. Щелочная среда водных вытяжек может быть обусловлена наличием в объекте едких щелочей, карбонатов щелочных металлов, аммиака и других соединений. Для решения вопроса о наличии едкой или карбонатной щелочи в объекте проводят дополнительные исследования: при добавлении к 1мл водного извлечения капли спиртового раствора фенолфталеина наблюдается розовое или красное окрашивание. К окрашенной жидкости при взбалтывании добавляют 3-5 капель 10%-ного раствора хлорида бария. При наличии в водном извлечении едкой щелочи окраска фенолфталеина не исчезает, а в случае наличия карбонатов щелочных металлов – окраска исчезает, и появляется белый осадок карбоната бария. Для определения аммиака часть водной вытяжки после обработки ее избытком раствора хлорида бария наносят на красную лакмусовую бумажку. Если посиневшая бумажка через некоторое время (20-30 минут) на воздухе принимает первоначальную окраску (розовеет), делают заключение об отравлении аммиаком. Испытание на аммиак проводят только при отсутствии едкой или карбонатной щелочи. Опыт №3 Определение свежести биоматериала Часть объекта помещают в коническую колбу (объемом 50мл), отверстие колбы закрывают пробкой, под которую прикрепляют 3 бумажки: смоченную водой красную лакмусовую бумажку; бумажку, смоченную раствором ацетата свинца; бумажку, смоченную раствором сульфата меди. Если в исследуемом объекте содержится аммиак, то лакмусовая бумажка и бумажка, смоченная сульфатом меди, синеют, последняя – за счет образования аммиаката меди. Если в исследуемом объекте присутствует сероводород, бумажка, смоченная щелочным раствором ацетата свинца, чернеет. Наличие в исследуемом объекте аммиака и сероводорода свидетельствует о процессах гниения и поэтому сделать заключение, что аммиак поступил извне, нельзя. Опыт №4 Изолирования токсических веществ методом настаивания биологического объекта с подкисленным спиртом (метод Стаса – Отто) От биологического объекта отрезается кусочек, массой примерно 100г. Определяется точная масса на технических весах. Биологический объект измельчается ножом (скальпель) на специально подготовленной доске. Измельченный БО помещают в стеклянную банку, заливают спиртом, уровень которого должен на 4-5 см превышать уровень БО. Проводят подкисление 20% раствором щавелевой кислоты до рН 2,5 – 3. Определение рН проводят путем нанесения капельки изолирующего агента стеклянной палочкой на лакмусовую бумажку. Банку закрывают крышкой. Наклеивают этикетку с указанием номера группы (фамилий студентов), проводящей исследование. Объект оставляют настаиваться до следующего практического занятия. При исследовании биологических жидкостей, стадия настаивания объекта со спиртом отсутствует. После подкисления БО щавелевой кислотой сразу проводится экстракция. Все манипуляции с БО, а также полученные результаты студент оформляет в виде заключения судебно-химического эксперта по плану, предложенному преподавателем. Лабораторная работа №4 Тема: «Изолирование токсических веществ методом Стаса-Отто» (продолжение). Цель: познакомиться с экстракцией токсических веществ органическими растворителями, методом осаждения белков спиртом. Опыт №1. Осаждение белков и экстракция органическими растворителями токсических веществ. При сохранившейся кислой реакции объекта исследования на лакмус спиртовое извлечение отделяют путем фильтрования через складчатый фильтр, предварительно смоченный спиртом, и собирают в фарфоровую чашку емкостью 200-250 мл. Если реакция объекта исследования изменилась (стала нейтральной или даже щелочной), объект вновь подкисляют 20% раствором щавелевой кислоты и настаивание объекта со спиртом повторяют. При сохранившейся кислой реакции операцию извлечения повторяют 2-3 раза. Вытяжки собирают вместе и выпаривают на водяной бане до густоты сиропа при температуре не выше 40-50°С. В сиропообразном остатке производят осаждение белков, для чего остаток повторно обрабатывают 95% спиртом, приливая его по каплям и все время перемешивая жидкость стеклянной палочкой; спирт добавляют до тех пор, пока следующая капля спирта не перестанет вызывать помутнения жидкости. Образовавшемуся осадку дают отстояться в течение 10-15 минут и отфильтровывают его через гладкий маленький фильтр (5-6 см в диаметре). Остаток на фильтре промывают по каплям несколькими миллилитрами спирта. Фильтрат собирают в маленькую фарфоровую чашечку, сгущают его на водяной бане до густоты сиропа и снова повторяют операцию осаждения белков. Операцию осаждения белков производят несколько раз (2-3 раза и более) до тех пор, пока спирт не перестанет что-нибудь осаждать. В последний раз вытяжку выпаривают на водяной бане до густоты сиропа, остаток растворяют в 25-30 мл дистиллированной воды и, не фильтруя, переносят в делительную воронку, где производят извлечение тремя порциями органического растворителя - хлороформа (10;5;5 мл). Соединенные вместе хлороформные вытяжки фильтруют через маленький сухой фильтр, помещают в маленькую сухую колбочку на 25 мл, которую снабжают этикеткой «извлечения из кислого раствора». Водный остаток в делительной воронке подщелачивают 25% раствором аммиака до ясно щелочной реакции на лакмус и снова извлекают тремя порциями хлороформа (10;5;5мл), соединенные извлечения снова осушают путем фильтрования через сухой и гладкий маленький фильтр, помещают в сухую колбочку и снабжают этикеткой «извлечения из щелочного раствора». Лабораторная работа № 5 ПРОИЗВОДНЫЕ КСАНТИНА И ПИРАЗОЛОНА Цель: подтвердить наличие производных ксантина и пиразолона в биоматериале. Опыт №1 Изолирование производных ксантина и пиразолона из биоматериала Изолирование производных ксантина: можно проводить по методу Крамаренко и Стаса-Отто. На стадии проведения экстракции из водной вытяжки органическими растворителями имеются особенности изолирования - поскольку производные ксантина являются амфолитами, максимальные количества кофеина экстрагируются при значениях рН = 4,0 - 5,5. Изолирование производных пиразолона: проводят методом Крамаренко, Стаса-Отто, Васильевой. Анальгин экстрагируется преимущественно из щелочной среды, а из кислой - незначительно. Опыт №2 Обнаружение производных ксантина 1. Реакция с реактивом Драгендорфа Производные ксантина проявляют основные свойства, поэтому их можно идентифицировать с помощью общеалкалоидных реактивов. Выполнение реакции: на предметное стекло помещают 2-3 капли исследуемого хлороформного экстракта, упаривают досуха, сухой остаток растворяют в 1 капле 0,1 М хлороводородной кислоты и прибавляют 1 каплю реактива Драгендорфа. Появление оранжевого или красного осадка указывает на возможность присутствия производных ксантина в экстракте. Напишите уравнение реакции. 2. Мурексидная реакция При действии окислителей (хлорная вода, бромная вода, пероксид водорода, хлорат калия, перйодат калия и др.) и соляной кислоты на производные ксантина происходит образование смеси производных аллоксана и диалуровой кислоты. От прибавления аммиака к этой смеси происходит образование метального производного мурексида, имеющего фиолетовую окраску. Выполнение реакции: 5-6 капель исследуемого хлороформного экстракта вносят в фарфоровую чашку и упаривают досуха при комнатной температуре. К сухому остатку прибавляют 0,5-1 мл бромной воды (пергидроля или несколько кристалликов калия йодата), 2-3 капли концентрированной хлороводороной кислоты и на водяной бане упаривают содержимое фарфоровой чашки досуха. К полученному остатку прибавляют 2-3 капли 25% раствора аммиака. Появление пурпурно-красной или фиолетовой окраски указывает на возможность присутствия производных ксантина в экстракте. Напишите уравнение реакции. 3. Реакция с реактивом Несслера Реакция позволяет отличить кофеин от других производных ксантина по цвету осадка. Выполнение реакции: 0,3 мл исследуемого хлороформного экстракта упаривают досуха, остаток растворяют в 2-3 каплях 0,1 М хлороводородной кислоты, прибавляют 2-капли реактива Несслера и нагревают на водяной бане в течение 1-2 мин. Появление красно-бурого осадка указывает на наличие кофеина (теобромин в этих условия дает )-коричневую окраску). Напишите уравнение реакции. Опыт №3 Обнаружение производных пиразолона
Выполнение реакции: на предметное стекло помещают 3 капли исследуемого хлороформного экстракта и упаривают досуха. К сухому остатку прибавляют 1 каплю свжеприготовленного хлорида железа (III). Появление синей окраски, исчезающей от >ытка реактива указывает на наличие анальгина. Напишите уравнение реакции.
Сущность реакции с хромотроповой кислотой заключается в том, что при нагревании 1альгина с разбавленными минеральными кислотами происходит выделение формальдегида, который взаимодействует с хромотроповой кислотой. Выполнение реакции: 5-6 капель исследуемого хлороформного экстракта и упаривают дocyxa, к сухому остатку прибавляют каплю концентрированной серной кислоты и 1 :аплю раствора хромотроповой кислоты. Появление фиолетовой окраски указывает на галичие анальгина. Напишите уравнение реакции.
При взаимодействии анальгина с йодатом калия в среде хлороводородной кислоты вначале происходит гидролиз препарата с выделением диоксида серы. Последний, взаимодействуя с йодатом калия, окисляется. При восстановлении йодата калия происходит выделение йода, калия йодида. Реакция сопровождается образованием малинового окрашивания, а затем появлением бурой окраски в результате выделения йода. Выполнение реакции: в пробирку вносят 3-5 мл исследуемого хлороформного экстракта, упаривают на водяной бане досуха. Сухой остаток растворяют в 3-5 каплях концентрированной хлороводороной кислоты и прибавляют несколько кристалликов йодата калия. Появление малиновой окраски указывает на наличие анальгина в исследуемом экстракте Напишите уравнение реакции Лабораторная работа №6 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||