Биохимия слюны. Слюна. Слюна ее значение и роль в развитии заболеваний полости рта

• Название: Слюна ее значение и роль в развитии заболеваний полости рта
• Анкор: Биохимия слюны
• Дата: 14.02.2022
• Размер: 5.73 Mb.
• Имя файла: Слюна.docx
• Тип: Документы; #361425
• страница: 3 из 7

Методики определения скорости секреции смешанной слюны

Смешанная слюна может быть собрана и количественно измерена рядом объемнометрических (волюмометрических) и гравиметрических методик (Леус П.А., 2004, 2007). Эти методики включают сбор слюны при самопроизвольном истечении из полости рта, при сплевывании или сбором на тампон.

В стоматологической клинике традиционно используют комбинацию волюмометрического метода с методикой сбора самоистечения и сплевывания слюны (Леус П.А., 2004). В качестве измерительного устройства также применяют «сиалометр» или хорошо калиброванный мерный цилиндр.

Сбор нестимулированной смешанной слюны
(в состоянии покоя)

Пациента усаживают, просят опустить голову и сидеть в таком положении, не глотать слюну и не двигать губами и языком во время всего периода сбора слюны. Слюна накапливается в полости рта в течение 2 мин, затем пациента просят сплюнуть все содержимое полости рта в приемный сосуд. Процедуру сбора проводят еще два раза так, чтобы общее время сбора составило 10 мин. Для расчета скорости слюноотделения в мл/мин общий объем собранной слюны делят на 10.

Сбор стимулированной смешанной слюны

Метод с парафином. Пациенту дают подержать кусочек парафина (Orion Diagnostia, Espoo., Финляндия; Леус П.А., 2004) в полости рта 30 сек (до тех пор, пока парафин не станет мягким). Затем предлагают проглотить всю накопившуюся в полости рта слюну. Далее просят пожевать кусочек парафина в своей обычной манере в течение 2 мин, точно засекая время. Накопленную слюну сплевывают в приемный сосуд (пробирку). Процедуру повторяют еще два раза. Объем слюны определяют по делениям сосуда и вычисляют скорость в мл/мин или за 10 мин.

Метод с лимонной кислотой. Приготовленный в аптеке 2 %-ный раствор лимонной кислоты наносят на дорсолатеральную поверхность языка каждые 30 сек в течение 2 мин (с помощью тампона или аппликаторной кисточки). Слюну накапливают, а затем сплевывают в приемный сосуд (пробирку). Как в методе с парафином, процедуру повторяют несколько раз, так что общее время сбора составляет
10  мин. Рассчитывают скорость слюноотделения, также выраженную в мл/мин и за 10 мин.

Сбор слюны из больших слюнных желез (дифференцированно)

Слюну из околоушной  слюнной железы традиционно собирают, используя модифицированную двухкамерную капсулу Carlson-Crittenden (Леус П.А., 2004). Внутреннюю камеру капсулы помещают над входным отверстием стенного протока; внешняя камера соединена с помощью резиновой трубки с резиновой грушей, которая при сжимании создает небольшое отрицательное давление и позволяет всей капсуле зафиксироваться на окружающей слизистой оболочке. Это устройство позволяет собрать чистую слюну из околоушной  слюнной железы неинвазивным методом.

Чтобы собрать слюну подчелюстных и (или) подъязычных желез, область Вартоновых протоков изолируется марлей, а устья Степановых протоков закрываются. Стимулированная слюна или слюна в состоянии покоя, собирающаяся в течение известного периода времени, аспирируется пластмассовой микропипеткой. Скорость слюноотделения выражается мл/мин/пар подчелюстных и (или) подъязычных желез (Леус П.А., 2004).

Определение скорости отделения слюны малыми слюнными железами

Слюна может быть получена и из малых слюнных желез нижней губы или неба. Малые железы просушиваются и изолируются валиками из марли или ваты. Через 2 мин (при сборе слюны в состоянии покоя) жидкость, выделенную из отверстия одной или нескольких желез, собирают полоской фильтровальной бумаги (Perio-Paper). Затем эту полоску помещают в устройство «Periotron», которое электронным способом определяет объем жидкости, адсорбированной на полоске. Для сбора стимулированной слюны малых желез язык смазывают 2 %-ным раствором лимонной кислоты, как описано выше. Результаты выражают в мкл/мин. Поскольку количество желез и площадь поверхности, с которой производится забор, варьируют, величина скорости отделения секрета является величиной полуколичественной.

Ромачева И. Ф. с соавторами (1987) предложила использовать метод подсчета функционирующих слюнных желез на слизистой оболочке нижней губы, окрашенной метиленовым синим, в пределах рамки 2 х 2 см после стимуляции секреции раствором пилокарпина гидрохлорида. В норме функционирует 21 ± 0,9 малой слюнной железы.

Рабинович  И.М. также исследовал клинико-функциональную  характеристику  малых  слюнных  желез слизистой  оболочки  полости  рта (1991).

 

8. Роль слюны в образовании биофильма (биопленки) на тканях полости рта

Все поверхности и твердых, и мягких тканей полости рта по­крыты пелликулой, в основном состоящей из компонентов слюны (Барер Г.М., Денисов А.Б., Уварова Л.В., 2010; Вавилова Т.П., Медведев А.Е., 2016). Пелликула обеспечивает смазку, увлажнение тканей и регуляцию со­става микробиоты. В состав пелликулы входят слюнные белки и пептиды и другие молекулы, экспрессируемые эпители­альными клетками. Часть из них, а также гликолипиды могут служить рецепторами адгезии для бактерий и обеспечивать их прикрепление (Коленбрандер, 2009). В ее составе присутствуют антимикробные пептиды (3-дефензины и кальпротектин, препятствующие внедрению микроорганизмов в мяг­кие ткани).

Осаждение клеток и остатков пищи из слюны на пел­ликулу приводит к формированию зубного налета (К03.66 dental plaque; относится к разделу «Отложения на зубах» МКБ-10 – ICD-DA, WHO, 1995) – рыхлого бело­го биоматериала, образующегося на поверхностях зубов из бактерий, слущенного эпителия, лейкоцитов и остатков пищи. Согласно современной концепции, бактерии могут прикрепляться к  пелликуле  зуба  путем  соединения  толерантных  молекулярных  терминалов с обеих сторон (цит. по: Леус П.А., 2007) (рис. 16).

 



 

Рис. 16. Концепция механизма прикрепления бактерий к пелликуле.

 

Состав зубного налета меняется со временем. По мере старения зубного налета на­чинает преобладать анаэробная микрофлора, для которой характер­ны высокая ферментативная активность и образование органических кислот. Зубной налет примерно на 80% состоит из воды, в которой раство­рены микро- и макроэлементы, белки и углеводы (20%). Содержание неорганических веществ варьирует. По мере старения зубного на­лета количество кальция и фосфора продолжает расти. Помимо ма­кроэлементов, в зубном налете присутствуют и микроэлементы – Sr, Fe, Mg, Mn, F и др. Содержание фтора может быть в десятки и даже сотни раз больше, чем в слюне, и достигать 6–180 мкг/г, что в зна­чительной мере зависит от уровня фтора в воде. Фтор присутствует в виде фторида кальция CaF₂, связывается с белками матрикса зубного налета и проникает внутрь бактерий, вызывая их гибель. В незрелом зубном налете присутствуют глицерофосфолипиды, триацилглицеролы и холестерол. По мере созревания зубного налета появляются гликолипиды (Леус П.А., 2007).

Бактерии способны прилипать и к эмали зуба, и к разным поверхностям полости рта. Адгезия микроорганизмов происходит за счет ван-дер-ваальсовых сил, образования «сшивок» с помощью ионов кальция (Са²⁺), гидрофобных взаимодействий и во­дородных связей. На образованной первичной колонии происходит коадгезия, т.е. фиксация нового слоя бактерий, и формируется вто­ричная колонизация (рис. 17) (Уварова Л.В., 2010).

 



Рис. 17. Первичная и вторичная колонии бактерий (микробного биофильма).

 

Взаимодействие первичной и вторичной коло­ний осуществляется зачастую с использованием белково-углеводных (лектиноподобных) связей, и в результате формируются простран­ственно-ориентированные группы микроорганизмов. Расположение бактерий обеспечивает метаболи­ческие взаимодействия между ними. Например, стрептококки после утилизации глюкозы освобождают из клетки лактат, который утили­зируют вейлонеллы, поэтому вблизи клеток микроорганизмов сре­да защелачивается, что способствует расщеплению еще большего количества углеводов с последующим ростом количества молочной кислоты, т.е. активация метаболических процессов в анаэробных условиях в S. Mutarts и других бактериях неизбежно приводит к раз­витию патологии в твердых тканях зубов или воспалению в тканях пародонта.

Зубной налет отличается высокой метаболической активностью. По мере роста зубного налета на порядок увеличивается активность гликозидаз и других ферментов.

При участии бактериальных гликозилтрансфераз образуются лип­кие полисахариды (гликаны), которые адсорбируются на поверхности зуба. В прилипании микроорганизмов участвуют гликаны – леваны и декстраны – и гликансвязывающий белок (Вавилова Т.П. Медведев А.Е., 2016; рис. 18).

В синтезе леванов осуществляют бактериальные фруктозилтрансферазы, а декстрана – глюкозилтрансферазы. Они переносят остатки глю­козы от сахарозы.

 



 

Рис. 18. Схема образования липких полисахаридов в зубном налете.

 

Леван – полисахарид, состоящий из остатков фруктозы, связанных В (2->6)–гликозидными связями, и соединенный с молекулой саха­розы. Молекула декстрана — разветвленный полисаха­рид, образованный остатками α-D-глюкозы, соединенный с молекулой сахарозы. Молекулы декстрана достаточно долго сохраняются в зубном налете, в то время как молекулы левана легко растворимы и быстро гидролизуются леваназой некоторых стрептококков. Липкие полисахариды помогают бактериям занять определенное место в зубном налете и обеспечивают их адгезию к эмали. Связь поверхности апатитов эмали с полисахаридами бактерий обеспечивают водородные связи, ионы кальция и белки адгезины. К белкам адгезинам относится гликопротеин с молекулярной массой 200 кДа, который выделяется стрептококками. Бактерии способны утилизировать углеводы, аминокислоты с образованием короткоцепочечных органических кислот – уксусной, пропионовой, масляной, молоч­ной. Их накопление, особенно масляной кислоты, является одним из этиопатогенетических факторов развития пародонтита.

Зубной камень. Обызвествление зубного налета приводит к образова­нию зубного камня. В зависимости от расположения различают над- и поддесневой зубной камень. Они по своему составу сходны, но различа­ются по источникам поступления фосфорно-кальциевых соединений. В наддесневой камень минералы поступают из слюны («слюнный камень»), а в поддесневой из десневой жидкости («сывороточный камень»).

В зубном камне определяется до 50% кальция, до 30% неорганиче­ского фосфата и около 0,5% магния. В следовых количествах присут­ствуют свинец, молибден, кремний, алюминий, стронций, кадмий, фтор и другие химические элементы (Вавилова Т.П. с соавт., 2016).

Кальций и неорганический фосфат осаждаются на органической ма­трице в виде солей, и на начальных этапах в основном образуется брушит (СаНРО4 • 2Н2О). Помимо брушита образуются витлокит, монетит, октокальцийфосфат, гидроксиапатит и другие кристаллы. В структуре витлокита определяются безводный фосфат кальция (Са3РО4)2 и ионы Mg2+, Mn2+, Fe3+. Октокальцийфосфат – Са8Н2(РО4)4 • 5Н2О является промежуточным связующим звеном между кислыми солями – монетитом, брушитом и гидроксиапатитом. Кристаллы октакальцийфосфата растут в форме тонких пластинок, содержат кислый фосфатный ион и не имеют гидроксильных групп. В зубном камне нередко присутствует и указанный выше другой кристалл – витлокит (CaMg)3(P04)2.

 

9. Микрокристаллизация смешанной слюны

    Как указано выше, слюна может стимулировать или подавлять рост микробов и процесс отложения зубного налета. Это, в свою очередь, изменяет бляшкообразование и процесс кальцификации (Барер Г.М., Денисов А.Б., 2003; Еловикова Т.М. с соавт, 1999, 2000, 2005, 2015; Молвинских В.С. с соавт., 2016; Вавилова Т.П., Медведев А.Е., 2016).

Органические и неорганические компоненты смешанной слюны влияют на аккумуляцию бляшки и ее микробный состав. Биологические жидкости организма, в том числе смешанная слюна, имеют способность кристаллизоваться при высушивании и образовывать узоры в виде древовидного рисунка или листа папоротника (Барер Г.М. с соавт., 2003, 2008). Структура этих узоров значительно меняется в зависимости от различных условий: углеводной нагрузки, хронических бронхолегочных заболеваний, эстрогенной (андрогенной) насыщенности организма, воздействий постоянного магнитного поля, множественного кариеса зубов и т.д.

Показано влияние искусственного магнитного поля на состояние биологических жидкостей организма, выражающееся в изменении их физико-химических свойств. При этом происходит изменение  ионного состава и кристаллической структуры биожидкостей организма, в частности слюны. Данные параметры, безусловно, влияют на скорость накопления зубного налета, аккумуляцию бляшки, ее микробный состав и процесс кальцификации (Барер Г.М., Денисов А.Б., 2003; Еловикова Т.М. с соавт, 1999, 2000, 2005, 2015; Молвинских В.С. с соавт, 2016 и др.). Вышесказанное свидетельствует о значении микрокристаллизации слюны и целесообразности изучения изменений ее под действием различных факторов. Так, в качестве диагностического теста, а также для оценки эффективности профилактических мероприятий при кариесе зубов может быть применена методика Леуса П.А. (1977). Микрокристаллизация смешанной слюны исследуется методом микроскопии высохшей капли слюны обследованных пациентов. С этой целью со дна полости рта пипеткой собирают 0,2–0,3 мл смешанной слюны, 3 капли ее наносят на стерильное стекло, которое затем помещают на час в термостат (37⁰С). По прошествии этого времени высохшие капли смешанной слюны исследуют с помощью стереомикроскопа в отраженном свете при малом увеличении. Различают три типа микрокристаллизации смешанной слюны: I тип (рис. 19) — крупные древовидные кристаллоподобные образования, расположенные в центре, II тип (рис. 20) — единичные кристаллоподобные конгломераты или игольчатые кристаллы, расположенные по всему полю зрения, III тип — разрозненные, единичные мелкие кристаллы, без ориентации (рис. 21).

 

 

Рис.19. Микрокристаллизация ротовой жидкости I типа.

 



 

Рис. 20. Микрокристаллизация ротовой жидкости II типа.

 



Рис. 21. Микрокристаллизация ротовой жидкости III типа.

 

Исследования морфологической картины смешанной слюны (ротовой жидкости) у санированных пациентов и у лиц с природной санацией представлены в публикациях  Разумовой С.Н., Булгакова В.С., Шатохиной С.Н., Шабалина В.Н. Авторами установлены типы морфологической картины смешанной слюны указанного контингента в зависимости от соотношения органического и минерального компонентов в ней. Получение структур смешанной слюны достигалось методом клиновидной дегидратации. Смешанную слюну забирали в пластиковую пробирку в количестве 1,5—2  мл  натощак, после чистки зубов, центрифугировали  в  течение 10 мин при 3000 об/мин. Полуавтоматическим дозатором  брали  надоса-дочную  жидкость  в  количестве 0,01—0,02  мл  и  наносили  на  специальную пластиковую поверхность тест-карты диагностического набора «Литос-система», который разрешен  к  применению  в  клинической  практике. Капля высушивалась  при  температуре 20—25  °С,  относительной влажности 65-70%  и  минимальной  подвижности  окружающего  воздуха. Продолжительность  периода  высыхания  составляла 3-4 часа. При завершении дегидратации получали фацию смешанной слюны, представлявшую собой высушенную пленку. Все  фации подвергали морфологическому анализу с помощью стереомикроскопа MZ12 фирмы «Leica» (Германия) и фиксировали видеоизображение (рис.22).

 



Рис. 22. Типы фаций ротовой жидкости:

а – I тип, б – II тип, в – III тип

Фации  смешанной слюны пациентов с природной санацией и у санированных в пробах «после сна» характеризовались наибольшей площадью, занятой кристаллами солей. Фации смешанной слюны II типа в течение суток распределялись у обследованных пациентов  следующим  образом:  наибольший пик выявляемости  отмечен в обеих сравниваемых группах в пробе «после обеда». Поскольку  прием пищи вызывает активацию пищеварительных ферментов в полости рта, это закономерно отразилось на увеличении доли органического компонента в фациях смешанной слюны. Наибольший пик фаций смешанной слюны III типа встречался только у санированных пациентов в пробе «до обеда» у 23 (40%), что свидетельствует об активизации органической составляющей смешанной слюны, связанной либо с недостаточным очищением полости рта после завтрака, либо с активностью пищеварительных ферментов.

Морфологическая  картина  смешанной слюны  у  пациентов  без  патологии полости рта характеризовалась наличием двух компонентов: неорганического (минерального) в виде кристаллов солей и органического – в  виде  аморфной (бесструктурной) субстанции. В зависимости от соотношения минерального и органического компонента смешанной слюны авторами условно предложено выделять три типа морфологической  картины:  от  наименьшей  доли  органической  составляющей (I  тип)  к  наибольшей (III  тип).  У  лиц  с  природной  санацией  в  течение  суток  картина  фаций смешанной слюны была представлена только двумя типами – I и II, в то время как у санированных – тремя.  Результаты  проведенных  исследований показали,  что маркером здорового пародонта (природная санация) является I тип морфологической картины смешанной слюны с максимальной площадью, занятой кристаллами солей в пробе, полученной сразу после сна. У пациентов с природной санацией в течение суток  отмечено  гармоничное  изменение  соотношения  минерального  и  органического компонентов, связанное с приемом пищи. У санированных пациентов доля органического компонента в ротовой жидкости выше, по сравнению с пациентами с природной санацией. Кроме того, по данным Разумовой С.Н., наличие в фации смешанной слюны участков пигментации, то есть маркера интоксикации, свидетельствовало о высоком уровне распространенности и интенсивности кариозных поражений (рис.23).

 



Рис.23. Маркер застойных явлений (трехлучевые трещины в краевой зоне), интоксикации (пигментация). Ув. 60.(цит. по: Разумова С.Н., Королев А.В., Шатохина С.Н.,  Шабалин В.Н., 2007).

Представлены маркеры застойных явлений в виде трехлучевых трещин в краевой зоне и интоксикации в виде пигментации. Выделен феномен патологической кристаллизации солей в белковой среде (маркер деструкции) в виде складчатости в краевой зоне фации. Его наличие свидетельствует о признаках защитной биоминерализации, т.е. связывании органического детрита кристаллами солей и перевода токсических продуктов в инертный органно-минеральный агрегат гриба (рис. 24).

 



Рис.24. Складчатость в краевой зоне фации. Ув. 60.

 

Следует отметить, что структуры типа «морщин» – постоянный признак патологии полости рта у пациентов, страдающих сахарным диабетом, и  являются маркером деструкции тканей (феномен патологической кристаллизации и наличие мицелия гриба в фации смешанной слюны, рис. 25).

 



Рис. 25. Фрагмент  краевой зоны фации смешанной слюны пожилого пациента с феноменом патологической кристаллизации и наличием мицелия гриба. Ув. 50.

 

Кроме того, при патологических состояниях ткани полости рта также выявлены маркеры: маркер деструкции твердых тканей зуба (высокое содержание микрочастиц гидроксилапатита в краевой зоне фации ротовой жидкости), маркер атрофического процесса слизистой полости рта (широкие ломаные трещины в краевой зоне фации), маркер применения лекарственных препаратов (содержание в фации ротовой жидкости химических элементов, отсутствующих в норме – серебро, цинк и др.).

Исследования Разумовой С.Н. доказали, что тип фации смешанной слюны характеризует качественный состав бактериальной флоры ротовой полости пациента. Для первого и второго типа фаций характерны бактериологические показатели здоровой полости рта (Str. oralis, Str. salivarius – не более 5x103), при третьем типе фаций имеет место сдвиг в сторону увеличения более агрессивной микрофлоры (Str. haemolyticus (α -гемолиз), Str. haemolyticus (ф-гемолиз), S. aureus, Candida albicans) при средних величинах титра ее высеваемости (не более 5х10³ ТО4').

Разумовой С.Н. также выявлена четкая корреляция между некоторыми видами локальных структур фации смешанной слюны, состоянием тканей пародонта и зубов, показателями местного иммунитета полости рта. Феномен патологической кристаллизации в фациях смешанной слюны имеет место при повышенном уровне иммуноглобулина А, маркеры застойных явлений и интоксикации указывают на сниженный уровень иммуноглобулина А в смешанной слюне. Полученные результаты целесообразно использовать в клинической практике, в том числе при скрининговых исследованиях, а также с целью прогнозирования, ранней диагностики и оценки эффективности профилактики и лечения различных стоматологических заболеваний (Разумова С.Н., 2007).