иипи. Lavrinenko,Babina_fiziol krovi-КРИ. Учебнометодическое пособие В. А. Лавриненко А. В. Бабина Новосибирск, 2015 2 Учебнометодическое пособие физиология крови для студентов кри предназначено для студентов го курса биологического отделения совместного Китайскороссийского института
 Скачать 1.91 Mb.
|
|
— — 0 (I) + — A (II) — + В) + + АВ(IV) Примечание. «+» - наличие агглютинации, «–» – отсутствие агглютинации. Рекомендации по оформлению протокола работы Интерпретируйте результаты реакции агглютинации в соответствии сданными, приведенными в таблице. Работа № 10. Определение резус-фактора Определение резус-принадлежности заключается в выявлении в эритроцитах крови человека наличия или отсутствия особого белка (антигена, названного резус-фактором. 104 Выделяют три разновидности резус-антигена: D, СЕ. Наибольшей активностью обладает антиген D, поэтому именно его определение имеет важное значение. Группы крови, в которых содержится антиген Rh(D), условно принято считать резус-положительными (Rh+), а группы крови, не содержащие антигена Rh(D) – резус-отрицательными (Rh-). Метод определения резус-принадлежности – резус-фактора (Rh- фактора) крови человека – основан на смешивании капли крови с раствором, содержащим антитела против резус-антигена (D). В качестве таких растворов служат моноклональные анти-Dантитела или поликлональная иммунная антирезусная сыворотка. Ход работы Исследование группы крови производите в цельной крови, забранной из пальца. В лунку эмалированного планшета внесите большую каплю (0,1 мл) реагента – раствора с антирезусными антителами. Рядом поместите маленькую каплю исследуемой крови (мл. Стеклянной палочкой кровь смешайте с реагентом. В течение 3 мин наблюдайте заходом реакции визуально при легком покачивании пластины. Результат реакции в лунках может быть либо положительным, либо отрицательным. Рекомендации по оформлению протокола работы Сделайте вывод, исходя из того, что положительный результат выражается в агглютинации (делается вывод о наличии в крови испытуемого резус-фактора, то есть резус-положительности). При отрицательном результате агглютинация отсутствует (делается вывод об отсутствии в крови испытуемого резус-фактора). 105 РАБОТА НА ГЕМАТОЛОГИЧЕСКОМ АНАЛИЗАТОРЕ ГЕМОЛЮКС 19 Подготовка пробы Рекомендуется использовать для анализа венозную кровь с антикоагулянтом К 3 ЭДТА или К 2 ЭДТА. В случае самостоятельного приготовления пробирок помните, что концентрация приготовленного антикоагулянта должна составлять 1,5–2,2 мг/мл цельной крови. Оптимально, если кровь будет сразу браться с помощью вакуумных систем взятия крови, например «Вакуэт» (Грайнер). При использовании капиллярной крови надо брать кровь самотеком, исключить надавливание и забор тканевой жидкости использовать специальные пробирки с капиллярами (типа «Миниколлект»), содержащие К 3 ЭДТА или К 2 ЭДТА. Кровь забирать до меток, указанных на пробирках. Только в этом случае будет исключена преаналитическая ошибка измерения. После взятия крови в пробирку содержимое необходимо перемешать для равномерного растворения ЭДТА и исключения образования осадка. Оптимально для этого использовать механические шейкеры-ротаторы с вертикальным регулируемым вращением (типа Ротатора RS-24 или Ротамикс RM1). Идеальна ситуация, когда кровь до анализа непрерывно плавно перемешивается. Если это невозможно, то перемешивание необходимо перед анализом. Если нет ротатора, то перемешивание вручную должно проводиться при плотно закрытой крышке плавным покачиванием примерно на 180° в вертикальной плоскости. Недопустимы резкое встряхивание, щелчки по пробирке, так как это может приводить к повреждению клеток. 106 Выбор режима анализа (образца) Режим Цельная кровь. В этом режиме игла прибора забирает из пробирки 13 мкл крови на анализ. Нов пробирку надо брать не менее 200 мкл крови для того, чтобы исключить ошибки, связанные с перемешиванием пробы, и иметь возможность сделать повторный анализ, если возникают сомнения в первом результате. Рекомендуется использовать пробирки «Миниколлект», рассчитанные на объем 250 мкл. Измерение в режиме Цельная кровь должно быть выполнено не позднее 8 часов с момента взятия крови. Не рекомендуется использовать консервированную кровь, которая хранилась сутки, так как показатели MCV, PLT и % распределения лейкоцитов могут подвергаться существенным изменениям. Режим Капиллярная кровь (режим предилюции). Рекомендуется использовать в педиатрии, когда нет возможности забрать 200 мкл крови. При выборе этого режима необходимо взять чистый стаканчик (входят в комплект поставки анализатора, подставить его под пробозаборник, нажать клавишу «Дилюент» в экране Анализ. В стаканчик будет внесено 1,6 мл изотонического разбавителя, после чего точно вносится 20 мкл крови. Закрыть крышкой и аккуратно перемешать. В дальнейшем анализатор учтет это разведение и выдаст корректные результаты. Измерение в режиме Капиллярная кровь должно быть выполнено не позднее 40 минут с момента взятия крови для анализа по лейкоцитами не позднее 2 часов по всем другим параметрам исследования. Измерение фона Измерение фона от реагентов начинается автоматически после включения прибора, а также клавишей START UP. После цикла на дисплее 107 прибора будут отражены фоновые показатели. Они не должны превышать следующих значений WBC < 0.3·10 3 /mm 3 RBC < 0.03·10 6 /mm 3 PLT < 10·10 3 /mm 3 HGB < 1 g/L Если эти значения превышаются, прибор выдаст сообщение о превышении максимально допустимого фона. В этом случае необходимо повторить цикл START UP. Если это не помогает, то замените реагенты. Не переливайте остатки реагента в емкость с новым реагентом При этом загрязняются новый реагент и прибор. Реагенты необходимо держать плотно закрытыми. Одна из причин повышенного фона по тромбоцитам – это либо загрязнения, попавшие в емкость с изотоническим разбавителем в процессе замены реагента, либо использование очищающего раствора другой концентрации. Категорически запрещается использовать нерекомендованные очищающие растворы, так как это может привести к повреждению прибора. Калибровка Калибровку необходимо проводить при использовании нового набора реагентов после устранения поломки прибора при использовании нового лота контрольной крови если не принимаются результаты контроля качества. Калибровка осуществляется с помощью контрольной крови нормального уровня. Цель калибровки – расчет фактора линейности. Если после трех измерений значения удовлетворяют критерию линейности, то анализатор предложит завершить калибровку. Если не удовлетворяют, то 108 она проводится до 5 раз. Для режима Капиллярная кровь проводится отдельная калибровка (фон экрана черный. Контроль качества Ежедневное проведение контроля качества – гарантия достоверности результатов исследований. В анализаторе Гемолюкс 19 предусмотрены два режима контроля качества по коммерческой контрольной крови и «X-B Анализ. X-B анализ оценивает стабильность измерения параметров MCV, MCH и MCHC по образцам крови. Карта контроля качества строится по 30 точкам. При использовании контрольной крови значения показателей указаны в паспорте на контрольную кровь. Необходимо брать значения для анализаторов BC1800, BC3000 фирмы Mindray – они есть в паспортах контрольной крови, производимой фирмой В (США. Требования к контрольной крови непросроченная, хранившаяся при температуре 4–8 С, без признаков подтекания перед анализом кровь необходимо прогреть при комнатной температуре не менее 15 минут и хорошо перемешать, не встряхивая. Распечатка результатов Рекомендуется подключать внешний принтер (типа Epson 300+), в этом случае будет выводиться полный отчет исследования, который включает границы норм и полную информацию по пациенту. Не следует убирать из распечаток гистограммы – они очень информативны и позволяют поставить предварительный диагноз или указать на неправильность проведения анализа. 109 Обязательные процедуры обслуживания прибора Общий вид гемоанализатора Гемолюкс 19 приведен на рисунке. Ежедневно промывка Е раствором (синяя маркировка) для белковой очистки. Еженедельно очистка пробоотборника (иглы) с помощью раствора Probe Cleaner (красная маркировка) Ежеквартально осмотр состояния блока шприцов (надо открыть правую боковую крышку, очистка крышек измерительных камер. Очистка по требованию прибора – c помощью раствора Probe Cleaner: через 300 циклов измерений – приглашение очистить систему пробоотборника через 4000 циклов измерений – приглашение очистить блок обтирки иглы. Текущие процедуры замена реагентов, осушка трубок при коротко-временном выключении прибора, консервация прибора при длительном выключении более 5 дней. Для консервации гематологического анализатора нажмите клавишу [MENU] и выберите клавишами со стрелками «Service/Prepare to Ship» («Обслуживание/Консервация»). Следуя инструкциям на экране, промойте 110 прибор дистиллированной водой. После этого прибор может находиться без реагентов в течение неограниченного времени. По требованию Разв месяцев в зависимости от нагрузки на прибор – замена блока обтирки иглы (выполняется персоналом. Замена фильтров вакуума или давления (при эксплуатации в пыльных условиях не реже 1 раза в год. Замена наконечника поршня шприца разбавителя (1 разв год или реже в зависимости от загрузки. Процедура устранения сгустка Если возникнет ошибка сгустка «CLOG WBC» или «CLOG RBC» Закупорка WBC» или Закупорка RBC»), то выполните 1 раз холостое измерение. Если ошибка не исчезла, то из экрана Анализ нажмите клавишу FLUSH (Очистка апертур») и выполните эту процедуру дважды. Если ошибка исчезла, выполните холостое измерение фона и продолжайте работать. Если ошибка не исчезла, смотрите рекомендации в руководстве пользователя или свяжитесь с сервисным центром. 111 ОБЩИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ ИНТЕРПРЕТАЦИИ РЕЗУЛЬТАТОВ Рекомендации приведены по справочным данным ООО «Реамед». Таблица 4 Основные показатели эритроцитов Показатель Единицы измерения Метод определения HGB (Hemoglobin) – концентрация гемоглобина гл Фотометрический RBC (Red Blood Cells) – эритроциты 10 л Кондуктометрический MCV (Mean Cell Volume) – средний объем эритроцитов фл Кондуктометрический HCT (Hematocrit) – гематокрит % HCT = RBC × MCV / 10 МСН (Mean Cell Hemoglobin) – среднее содержание гемоглобина в эритроците пг MCH = HGB / RBC МСНС (Mean Cell Hemoglobin Concentration) – средняя концентрация гемоглобина в эритроците г/дл MCHC = HGB × 10 / / HCT[%] RDW (Red cell Distribution Width) – ширина распределения эритроцитов по объемам. Характеризует степень анизоцитоза эритроцитов. % Кондуктометрический RDW = SDRBC × 100 / / MCV МСН можно пересчитать в значения цветового показателя ЦП = МСН / 33,4. 112 Эритроцитарные индексы связаны между собой соотношением МСН = MCHC × MCV / 100. Атак как МСНС – очень стабильный показатель, и его среднее значение в правильно откалиброванном анализаторе примерно равно 34 %, то приближенно МСН = 34 × MCV / 100, а ЦП = MCV / 100. Таблица 5 Основные показатели лейкоцитов и тромбоцитов Показатель Единицы измерения Метод определения WBC (White Blood Cells) – лейкоциты 10 л Кондуктометрический В анализаторах с частичной дифференцировкой лейкоцитов определяются следующие показатели (относительные и абсолютные количества LYM (LY) – лимфоциты %, 10 л Кондуктометрический MID (MON) – средние клетки (в них входят моноциты и частично эозинофилы и базофилы) %, 10 л GRA (GRAN) – гранулоциты %, 10 л PLT (Platelets) – тромбоциты 10 л Кондуктометрический MPV (Mean Platelet Volume) – средний объем тромбоцитов фл Кондуктометрический P-LCR (Large Platelet Ratio) – относительное количество крупных тромбоцитов (> 12 фл) % Кондуктометрический расчетный PDW (Platelet Distribution Width) – ширина распределения тромбоцитов по объемам. *) % Кондуктометрический РСТ (Platelet Grit) – тромбокрит *) % Расчетный 113 Примечание *) – диагностическая значимость данных тромбоцитарных индексов в настоящее время не определена. Таблица 6 Нормальные показатели крови у взрослых Показатель Нормальные значения Мужчины Женщины HGB (гемоглобин, гл 130–170 120–150 RBC (эритроциты, 10 л 4,0–5,6 3,8–5,2 НСТ (гематокрит, % 39–48 34–44 MCV (средний объем эритроцитов, фл 80–100 МСН (среднее содержание гемоглобина в эритроците, пг 26–34 МСНС (средняя концентрация гемоглобина в эритроците, г/дл 32–36 RDW (ширина распределения эритроцитов, % 12,0–15,0 WBC (лейкоциты, 10 л 4,0–9,0 LYM (лимфоциты, % (10 л) 19–45 (1,2–3,5) MON (моноциты, % (10 л) 4–11 (0,1–0,6) GRA (гранулоциты, % (10 л) 45–80 (1,6–6,9) PLT (тромбоциты, 10 л 180–320 MPV, фл 7,0–10,0 Интерпретация гистограмм лейкоцитов На рис. 9 приведена типичная гистограмма лейкоцитов. Лимфоциты расположены в области примерно 35...90 фл, средние клетки (моноциты) – 114 90...130 фл, гранулоциты – 130...400 фл. Количество клеток в каждой фракции лейкоцитов пропорционально площади соответствующего пика. Рис. 9. Дифференцировочная гистограмма лейкоцитов LYM – лимфоциты, MON – моноциты, GRA – гранулоциты Аномально приподнято левое крыло лимфоцитов наиболее частая причина – частичная агрегация тромбоцитов в пробе. Сопровождается занижением количества тромбоцитов и завышением лейкоцитов с увеличением процентной доли лимфоцитов. При аномалиях в форме распределения лейкоцитов, как правило, выявляются патологии в мазке крови. Особое внимание следует обращать на область 100...180 фл: подъем кривой в этой области может быть связан с эозинофилией, базофилией, моноцитозом и др. Интерпретация гистограмм эритроцитов В норме распределение эритроцитов имеет симметричную колоколообразную форму (рис. 10). Наличие дополнительного максимума свидетельствует о гетерогенности популяции клеток (в данном случае 115 наблюдается микроцитарная фракция. Гетерогенность популяции эритроцитов также сопровождается увеличением параметра RDWs. Обратите внимание небольшой пик на правом крыле распределения эритроцитов в области 110...150 фл не имеет диагностического значения, а является приборным артефактом. Рис. 10. Типичная гистограмма распределения эритроцитов по объему Рис. 11. Изменения гистограмм распределения эритроцитов Выраженная ассиметрия контура также указывает на гетерогенность популяции эритроцитов (анизоцитоз). Гистограмма на рис. 11 свидетельствует о наличии как микроцитов, таки макроцитов. 116 Интерпретация гистограмм тромбоцитов Типичная гистограмма тромбоцитов имеет ассиметричную форму рис. 12). В подсчет тромбоцитов идут клетки с объемами примерно от 2 до 25 фл. Максимум функции распределения расположен в области 5...7 фл. Рис. 12. Гистограммы тромбоцитов Подъем правого крыла функции распределения (рис. 12) указывает на возможную интерференцию со стороны микроцитарной фракции эритроцитов. В этом случае измеренное число тромбоцитов будет недостоверным. Смещение максимума распределения влево с резким спадом левого крыла (рис. 13) свидетельствует либо об электрических помехах посети, либо о наличии бактерий в анализируемом разведении. В этом случае измеренное число тромбоцитов будет недостоверным. Рис. 13. Смещение гистограммы тромбоцитов влево |