Виды асептики и антисептики. Учебное пособие для студентов III курсов фармацевтического факультета Под редакцией канд мед наук

• Название: Учебное пособие для студентов III курсов фармацевтического факультета Под редакцией канд мед наук
• Дата: 06.10.2019
• Размер: 0.53 Mb.
• Имя файла: Виды асептики и антисептики.doc
• Тип: Учебное пособие; #88772
• страница: 6 из 8

Принципы отбора проб

Отбор проб для санитарно-микробиологического исследования предметов, аппаратуры, рабочих поверхностей проводится с по­мощью следующих методов:

— смыв с использованием стерильного тампона или салфетки или ополаскивания мелких предметов и внутренней поверх­ности флаконов;

— контактный метод — метод «отпечатков».

Метод смывов.При отборе проб с крупных плоскостей (повер­хности рабочих столов, стен, ванн и др.) используют стерильные ватные или марлевые тампоны размером 2x2 см, не более 2 слоев. Перед употреблением их смачивают физиологическим раствором хлористого натрия или питательной жидкой средой.

Тампоны вмонтированы в пробирки, на дно которых наливается смачивающая жидкость (физиологический раствор, среда Кесслера) в объеме 3-5 мл.

На исследуемую поверхность для ограничения площади обсле­дования накладывают рамку-шаблон площадью 100 см² (10x10 см), изготовляемую из проволоки диаметром 3-5 мм. Перед взятием пробы шаблон стерилизуют пламенем горелки.

Для взятия пробы тампон опускают до дна пробирки, затем влажным тампоном производят смыв и снова погружают его в жидкость. Перед использованием салфеток их также смачивают стерильной жидкостью и после обтирания ими поверхностей пере­носят в колбу для последующего исследования.

Мелкие предметы (пробки, прокладки и т. д.) погружают непос­редственно в питательную среду (10 мл), встряхивают в течение 10 мин. Полученную смывную жидкость используют для посева.

Для забора смывов с рук: увлажненной стерильной марлевой салфеткой размером 5x5 см протирают руки обследуемого, начиная с менее загрязненных участков кожи (тыльная часть ладони, ла­донь, межпальцевые промежутки, ногтевые ложа и подногтевые пространства). Салфетки помещают в колбы с увлажняющей жид­костью и транспортируют в лабораторию с соответствующим сопро­водительным документом.

Смыв с халатов производится с площади 100 см². Обязательно исследуются передняя сторона халата и нижние части рукавов.

Смывы с аптечной посуды проводят путем ополаскивания буты­лок, флаконов и т. д. — 10-30 мл стерильного физиологического раствора с последующим мерным высевом. Одновременно исследу­ется не менее 3-5 емкостей.

Метод отпечатков.Метод применяется для определения мик­робной контаминации ровной гладкой поверхности (как горизон­тальной, так и вертикальной).

Кусочки марли в виде кружков диаметром 3—6 см, мембранные фильтры или полоски фильтровальной бумаги (все должно быть стерильным!) помещают в чашку Петри и заливают расплавленной плотной средой (3%-й МПА или среда Эндо двойной концентра­ции). После остывания стерильным пинцетом забирают кружочки марли, полоски бумаги или фильтры, накладывают стороной, про­питанной средой, на исследуемую поверхность, осторожно прижи­мая пинцетом. Затем переносят в стерильную чашку Петри нижней поверхностью вверх для последующей инкубации в термостате.

Метод отпечатков выгоден тем, что позволяет непосредственно обнаруживать загрязнение объектов.
Определение общего микробного числа

ОМЧ горизонтальных и вертикальных поверхностей, халатов, рук определяют путем мерного высева жидкости или питательной среды, которой производили смыв.

В пробирках с тампонами или в колбах, содержащих салфетки (после проведения смывов), общий объем жидкости доводят до ко­нечного объема, добавляя стерильный изотонический раствор хло­рида натрия, чтобы получилось исходное разведение 1:10. После интенсивного 2-3-минутного встряхивания готовят десятикратные разведения. В зависимости от предполагаемой степени загрязнен­ности посевы производят из нескольких разведений.

Заключение по общей микробиологической чистоте дают на ос­новании подсчетов по формуле:

М = n ^. 10 / S , (дробь)

где М — общее микробное число (КОЕ); п — количество колоний в 1 мл исходного разведения смыва (КОЕ); 10 — количество смачи­вающей жидкости, мл; S— площадь, с которой произведен смыв, см².

При оценке санитарно-гигиенического состояния предметов оби­хода и оборудования можно ориентироваться на критерии, разработанные и предложенные ЛВ Георгиевой (1977).

Степень чистоты объекта	ОМЧ
чистый	до 10 000
умеренно загрязненный	от 10 000 до 100 000
сильно загрязненный	более 100 000

При определении ОМЧ вспомогательных материалов смывную жидкость в количестве 1 мл засевают в 2 чашки Петри с мясо-пептонным агаром, предварительно расплавленным и остуженным до 40 "С, с последующей инкубацией в термостате в течение 18-24 ча­сов при t =37 °С.

Количество микроорганизмов не должно превышать 150 КОЕ с 3 флаконов (колб, цилиндров и т. д.), 5 пробок, 5 прокладок и т. д.
Определение титра бактерий группы кишечной палочки (БГКП) в смывах

Общая характеристика БГКП:

— грамотрицательные бактерии;

— не образуют спор;

— ферментируют лактозу до кислоты и газа (КГ);

— ферментируют глюкозу до КГ;

— не обладают оксидазной активностью.

Выделяются в окружающую среду только из кишечника чело­века и теплокровных животных.

К бактериям группы кишечной палочки (БГКП) относятся 4 представителя семейства энтеробактерий:

— Escherichia coli;

— Klebsiella spp.;

— Enterobacter spp.;

— Citrobacter spp.

При предполагаемой малой степени фекального. загрязнения предварительно производят посев смыва на среду обогащения (сре­ду Кесслера, глюкозо-пептонную среду) при обнаружении БГКП контактным методом или используют среду Эндо, расчет числа БГКП ведут на 1 см2 поверхности иссле­дуемого предмета.

Идентификация выделенных культур БГКП ведется как при исследовании питьевой воды.

Наличие бактерий группы кишечной палочки в смывах не до­пускается.

Исследование смывов на присутствие патогенных бактерий (ста­филококки, сальмонеллы, протеи, синегнойная палочка) проводят по общепринятым методикам санитарно-микробиологического кон­троля пищевых продуктов (3. Н. Кочемасова и др. Санитарная мик­робиология и вирусология. 1987).

Наличие патогенных кишечных бактерий, а также стафилокок­ков и синегнойной палочки в смывах не допускается.

(!!!) Практическая работа
Задание 1

В больничной аптеке проведено исследование оборотной аптеч­ной посуды, возвращающейся из отделений (инфекционного, легоч­ного, гнойной хирургии) до и после ее обработки дезраствором.

Согласно Приказу № 309, такая посуда до мытья погружается в один из дезрастворов:

1%-й активированный раствор хлорамина на 30 минут или

свежеприготовленный 3%-й раствор перекиси водо­рода на 80 минут с последующим мытьем, или

Если дезинфекция прово­дится одновременно с мытьем, для чего посуду погружают:

— в 1%-й (0,5%-й) раствор хлорцина на 120 минут;

— в 0,2%-й (0,1%-й) раствор ДП-2 на 120 минут;

— в 3%-й раствор перекиси водорода + 0,5%, моющего средства.

В данной аптеке обрабатывают 1%-м активированным раствором хлорамина.

Данные смывов представлены на чашках с питательными среда­ми до и после обработки раствором хлорамина: на МПА для опре­деления общей микробной обсемененности, на среде Эндо для оп­ределения БГКП, на среде Сабуро для определения плесневых грибов и грибов рода Candida, на желточно-солевом агаре для оп­ределения стафилококков.

Высевы сделаны мерно из 10-кратных разведений.

Оцените качественный и количественный состав микрофлоры, полученной до и после обработки, и сделайте заключение об эф­фективности предстерилизационной подготовки оборотной посуды в данной аптеке.

Дайте свои рекомендации по улучшению качества обработки.

Какие последствия могут возникнуть при использовании посуды после столь неэффективной обработки и почему?

Задание 2

Из дистиллированной воды до стерилизации (вода взята из кол­бы) выделена кишечная палочк

Параллельно с водой исследован смыв с внутренней поверхно­сти водоприемника, с рук сотрудника, работающего с дистиллято­ром. Из обоих объектов также выделена кишечная палочка.

Для решения вопроса об источнике контаминации воды было проведено колицинотипирование выделенных кишечных палочек.

Определите колицинотипы, данные внесите в таблицу и дайте заключение.

Задание 3

Методом смыва обследован стол для приготовления инъекцион­ных растворов. Обследование проведено на выявление БГКП, синегнойной палочки, стафилококка, дрожжевых и плесневых гри­бов. Для выявления БГКП посевы сделаны на среду Эндо, для вы­явления стафилококка — на желточно-солевой агар, для выявле­ния синегнойной палочки — на МПБ, для выявления дрожжевых и плесневых грибов — на среду Сабуро.

Изучите посевы, определите, выделены ли представители пере­численных групп микроорганизмов.

Предложите мероприятия по предотвращению в последующем попадания патогенных и условно-патогенных бактерий на поверх­ность стола для приготовления инъекционных растворов.

Микробиологическое исследование нестерильных лекарственных форм
(???) Контрольные вопросы

1. Основные группы нестерильных лекарственных препаратов.

2. Источники попадания микроорганизмов в нестерильные лекар­ственные формы.

3. Поведение микроорганизмов (сапрофитов, условно-патогенных и патогенных) в лекарственной форме или субстрате.

4. Стадии размножения микроорганизмов в жидких, сыпучих, плотных субстанциях и лекарственных формах.

5. Методы микробиологического контроля субстанций и несте­рильных лекарственных форм:

а) выявление энтеробактерий;

б) выявление синегнойной палочки;

в) выявление золотистого стафилококка;

г) выявление грибов (дрожжевых, дрожжеподобных и плесне­вых).

6. Методы и пути предупреждения микробной контаминации суб­станций и нестерильных лекарственных форм.
(!!!) Задания для практической работы

1. Работа с ситуационными задачами по теме, анализ представлен­ных в задаче результатов, выработка заключения, разработка профилактических мер по предупреждению микробной конта­минации.

2. Знакомство с требованиями ГФ XI и Изменений к ГФ XI по группам нестерильных лекарственных форм.

Исходные субстанции для приготовления нестерильных лекар­ственных препаратов часто контаминированы большим количе­ством разнообразных микроорганизмов. Так, среди субстанций и препаратов высокую степень микробной загрязненности имеют: тальк, окись магния, папаверин, фенобарбитал (люминал), кофеин, порошки глюкозы, амидопирина и др. Исследование микробной контаминации этих объектов выявило результаты, представленные в табл. 1.

Таблица 1

Микробная обсемененность лекарственных препаратов, субстанций и др.

Объекты	Микробная обсемененность |
Настои, ароматные воды, миксту­ры, сиропы	до 10 000 микробов в 1 мл
Натрия гидрокарбонат (ХЧ)	3000-50 000 микробов в 1 г
Концентраты из бюреточной установки: натрия гидрокарбонат, маг­ния сульфат, барбитал, аскорбино­вая кислота, мятная вода и др.	микробная обсемененность в нес­колько раз больше, чем у исходных субстанций или растворов
Мазевые основы: желтый вазелин, ланолин, эуцерин и др.	Е. coli и Staph. aureusпри +4 оС со­храняются 40-60 дней, при +20 °С — 20-40 дней

Кроме исходной субстанций и сырья, на микробную чистоту лекарственного препарата влияют микроорганизмы, находящиеся на различном оборудовании, с помощью которого производится препарат (весы, дозирующее устройство, устройство для закупорки флаконов и т. д.), вспомогательные материалы и инструменты (фильтры, шпатели, прокладки и т. д.), посуда, воздух производственных помещений, дистиллированная вода, одежда и руки персонала и т. д. Последствия этой контаминации были рассмотрены в разделе «Асептика».

В табл. 2 показано, каким образом микроорганизмы действуют на химические структуры лекарственных препаратов.

Таблица 2

Влияние микроорганизмов на качество лекарств

Род и вид микроба	Препараты	Характер действия микроба
Bacillus mycoides, Bacillus mesenthericus	амидопирин, ан­типирин, кофеин-бензоат нат­рия	используют азот и углерод для синтеза собственных молекул, что ведет к разрушению препа­рата
Proteus vulgaris	амидопирин	разлагает за сутки более 50% препарата
Сапрофиты	а) калия хлорат	а) восстанавливают до калия хлорида;
	б) бруцин	б) окисляют до бруцинхинона
194 различных штам­ма микроорганизм	ацетилхолин	разлагают

Микроорганизмы, попадая в субстанцию или жидкую лекарственную форму, мазь, мазевую основу и т. д., размножаются с разной скоростью (рис. 1). Типичную кривую размножения микроорганизмов в жидкой среде можно разделить на 4 основные стадии.

I. ЛАГ-фаза (4-5 часов) — фаза приспособления микробов к новой среде. Размножения не происходит, происходит рост (увеличение размеров) микробных клеток за счет накопления белка; часть микробов может погибнуть, не приспособившись к новым условиям.

П. ЛОГ-фаза (5-6 часов) — фаза логарифмического роста. Происходит бурное размножение микробов в среде. Микроорганизмы физиологически наиболее активны, выделяют в среду большое количество продуктов метаболизма. Гибели микробов в этой фазе практически не происходит.

III. Стационарная фаза (5-7 часов) — кривая размножения переходит в линию, параллельную нижней оси. Процессы метаболизма идут активно, и среда насыщается продуктами обмена, ухудшаются условия для нормального функционирования микробов, идут процессы отмирания. Число вновь образующихся и отмирающих клеток практически эквивалентно, поэтому кривая размножения и идет горизонтально.


Рис. 1. Кривая роста микроорганизмов
IV. Фаза ускоренной гибели микробов (более 10 часов) — в среде практически не остается источников питания. Микробы резко меняют свои морфологические, физиологические характеристики, что приводит к их гибели.

Эта кривая может видоизменяться в зависимости от вязкости, плотности субстрата, количества в нем воды, консервантов, но принцип сохраняется. Каждая из указанных стадий характеризует то или иное состояние системы «микроорганизм — лекарственный препарат» и тем самым определяет качество препарата в данный временной момент.

Если система «микроорганизм — лекарственный препарат» находится в III или IV стадии, то в зависимости от состава ингредиентов и попавшей в нее микрофлоры могут наблюдаться изменения вкуса, цвета или запаха (органолептические характеристики), выделение газов, появление осадка, хлопьев, плесени или даже изменение консистенции. В этом случае выбраковка идет по органолептическим свойствам.

Наиболее часто подобные изменения отмечается в водных настоях, отварах. При добавлении консервантов этот процесс может удлиниться во времени в несколько раз. Если микробная контаминация происходит в вязких субстанциях и лекарственных формах (мази, мазевые основы и др.), то микробная диффузия резко затрудняется и формируются локальные очаги размножения микробов в виде гнездных очагов (изменение цвета, консистенции, появление плесени и т. д.).

Гораздо сложнее обстоит дело с I и II стадиями. Проблема состоит в том, что бактерии не успевают за это время столь значительно изменить качества субстанции или лекарственного препарата, чтобы это можно было определить органолептически. Именно с I и особенно II стадий развития пирогенные свойства возникают у инъекционных растворов. Нестерильные лекарственные препараты меняют свою лечебную эффективность, приобретают свойства токсичности или инфективности, снижается их способность к длительному хранению. Эти процессы на I и II стадиях не сопровождаются внешними, органолептически определяемыми изменениями.

Все процессы, происходящие на I-IV стадиях развития микроорганизмов в субстрате, могут ускоряться на фоне нарушения санитарных нормативов, микроклимата помещений (температура, влажность, содержание пылевых частиц и т. д.). Например, повышение влажности и температуры воздуха способствует отсыреванию порошков, таблеток с последующей активацией в них жизнедеятельности микроорганизмов.

Растворы в бюреточных установках (концентраты) почти всегда содержат большое количество микроорганизмов (споровые, неспоровые палочки, стафилококки, дрожжевые грибы, сарцины и др.). Концентраты из бюреточной установки в несколько раз более обсеменены, чем исходные растворы, что указывает на нарушение правил санитарного режима эксплуатации бюреточных установок.

В мазевых основах микрофлора может сохраняться длительное время. Так, кишечная палочка, золотистый стафилококк при температуре +4 °С сохраняются в вазелине, белом ланолине и других основах до 60 дней.

Нормативы микробной обсемененности нестерильных лекарственных средств и перечень патогенных бактерий, которые не должны присутствовать в НЛС, представлены в Изменениях к ГФ XI.

Помимо НЛС, в Изменения внесены микробиологические требования к субстанциям и вспомогательным материалам. Учитываются многие параметры: возрастные категории лиц, для которых готовится НЛС; пути введения препарата; происхождение компонентов НЛС (синтетические, природные, животного, растительного и т. д. происхождения).

Требования к приготовлению НЛС и микробиологические нормативы регламентируются Приказом МЗ РФ № 309 (п. 9 и приложение № 12).

Из числа патогенных бактерий, вызывающих заболевания у человека, в НЛС не должны встречаться кишечная палочка, сальмонеллы или вообще представители семейства энтеробактерий (в зависимости от категории препарата и его назначения); из гноеродных — золотистый стафилококк и синегнойная палочка. На этом основании и составляется схема выделения и идентификации микроорганизмов из нестерильных лекарственных средств (рис. 2).

При проведении исследования на микробиологическую чистоту необходимо определить антимикробную активность лекарственного препарата. Определение антимикробного действия препарата проводят при отсутствии явных указаний на наличие консерванта или антимикробного вещества.

Используемые в методике тест-штаммы указаны в разделе «Микробиологический контроль стерильности лекарственных препаратов» данного методического пособия.

Методика

Рис. 2. Схема выделения и идентификации микроорганизмов из нестерильных лекарственных средств

2-я пробирка: 0,1 мл взвеси Candida albicans + (10:1) буферный раствор и лекарственное средство; г=20-25°С, 72 часа;

3-я пробирка: 0,1 мл взвеси Pseudomonas aeruginosa + (10:1) среда № 8 и лекарственное средство; t=35-37 °C, 48 часов;

4-я пробирка: 0,1 мл взвеси Staphylococcus aureus + (10:1) среда № 3 и лекарственное средство; £=35-37 °С, 48 часов;

5-я пробирка: 0,1 мл взвеси Е. coli + (10:1) среда №8 и лекарственное средство; t=35-37°C, 48 часов.

Контроли: пробирки с теми же средами, но без лекарственного средства + тест-штаммы (для оценки жизнеспособности тест-штаммов).




Рис. 2. Схема выделения и идентификации МО из НЛФ

Отсутствие роста в опытных пробирках свидетельствует об антибактериальном действии лекарственного препарата.

При наличии антибактериального действия при испытании на микробиологическую чистоту препарат разводится в 100-200 раз и засевается в данном разведении мерно в необходимые питательные среды или применяются инактиваторы. указанные в фармакопейных статьях. При подсчете колоний необходимо учитывать разведение препарата.

Таблица

Микробиологическая чистота готовых лекарственных средств (ГЛС) (изменения к ГФ XI)

(при отсутствии других требований в частных фармакопейных статьях)

Кате­гория	Применение	Требования
1	Препараты для инъекций, инфузий и других видов парентерального введения; препараты для введения в полость тела, где отсутст­вуют микроорганизмы; глазные препараты; препараты для нанесения на открытые раны, ожоги	Стерильность
2	Средства для местного, трансдермального, интравагинальнго применения; для введения в полости уха, носа; ингаляции.	Не более 102 бактерий и грибов суммар­но в 1 г или в 1 мл; при отсутствии Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus иЕпterobacteriaceae
3	Для приема внутрь
а	Детские лекарственные средства (от 0 до 1 года)	Не более 50 бактерий и грибов суммарно в 1 г или в 1 мл при отсутствии Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus иЕпterobacteriaceae
б	Детские лекарственные средства	He более 500 аэробных бактерий и 50 дрожжевых и плесневых грибов в 1 г или в 1 мл при отсутствии Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus иЕпterobacteriaceae
в	Жидкие лекарственные средства из синтетическо­го сырья (растворы, сиро­пы, капли и др.)	He более 500 аэробных бактерий и 50 дрожжевых и плесневых грибов в 1 мл при отсутствии Е. coli, Salmonellaspp.; не более 102 других кишечных бактерий
г	Лекарственные средства из синтетического сырья (таблетки, драже, капсу­лы, гранулы и др.)	Не более 103 аэробных бактерий и 102 дрожжевых и плесневых грибов в 1 г при отсутствии Е coli, Salmonellaspp.; не более 102 других кишечных бактерий
д	Жидкие лекарственные средства из сырья растительного, животного или природного происхождения	Не более 5.103 аэробных бактерий, 102 дрожжевых и плесневых грибов в 1 мл при отсутствии Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, E.coli, Salmonella spp-; не более 102 других кишечных бактерий
е	Лекарственные средства из сырья растительного, животного или природного происхождения	Не более 104 аэробных бактерий, 2 • 102 дрожжевых и плесневых грибов в 1 г при отсутствии Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, E.coli, Salmonella spp-; не более 102 других кишечных бактерий
4	Лекарства для ректального введения	Не более 103 аэробных бактерий и 102 дрожжевых и плесневых грибов в 1 г при отсутствии Enterobacteriaceae, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus

Помимо микробной контаминации (ОМЧ и наличие определенных патогенных МО) применяются другие виды микробиологических исследований, представленные на схеме.

(!!!) Практическая работа

Задание 1

Из косметического кабинета поступила жалоба на недоброкачественную партию косметической мази на ланолиновой основе: гнездное разжижение, неспецифический неприятный запах.

Мазь была исследована в бактериологической лаборатории на микробную чистоту согласно нормативам и требованиям ГФ XI: мазь в разведении 1:10 в количестве 1 мл засеяна на плотную среду № 1, в количестве 0,5 мл — на плотную среду Сабуро, в жидкие среды накопления № 1, № 2 (Сабуро), № 3 (для выявления энтеробактерий), № 8 (для выявления стафилококков и синегнойной палочки) по 0,5 мл. После 5-суточной инкубации при 37 "С на плотных питательных средах выявлен рост колоний, а на жидких — равномерное помутнение на средах № 1, № 2, № 8. Из среды № 8 сделан высев на среду № 9 (для выявления пигмента пиоцианина у синегнойной палочки) и на желточно-солевой агар для выделения стафилококков.

Проанализируйте полученные результаты. Сравните их с нормативами. Дайте свое заключение по микробной чистоте данного препарата.

Какой микроб выявлен в данном препарате?

Откуда он мог попасть в мазь?

Как можно установить источник контаминации мази?

Задание 2

В бактериологическую лабораторию для оценки микробиологической чистоты поступил сироп «Бронхолитин», содержащий консервант (этиловый спирт).

Препарат был исследован согласно нормативам и требованиям ГФ XI. Разведение препарата 1:100 было засеяно на плотные среды № 1 в количестве 1 мл и № 2 (Сабуро) — 0,5 мл. В количестве 0,5 мл данное разведение препарата засеяно в жидкие среды накопления: №1, №2 (Сабуро), №3 (для накопления энтеробактерий) и № 8 (для накопления стафилококков и синегнойной палочки).

После 5-суточной инкубации на питательных средах выявлен рост только на среде № 1 (жидкой и плотной).

Проанализируйте полученные результаты. Сравните их с нормативами. Дайте заключение по микробной чистоте данного препарата.

Почему при исследовании данного препарата использовано 100-кратное разведение?

Задание 3

В бактериологическую лабораторию поступили таблетки тетрациклина для исследования на микробиологическую чистоту. Препарат исследовался с соблюдением требований и нормативов ГФ XI.

После предварительного разведения 1:400 тетрациклин в количестве 1 мл был засеян на плотную среду № 1, в количестве 0,5 мл — на плотную среду № 2 (Сабуро) и по 0,5 мл в жидкие среды накопления № 1, № 2 (Сабуро), № 3 (для накопления энтеробактерий) и № 8 (для накопления стафилококков и синегнойной палочки).

После 5-суточной инкубации был выявлен рост в виде колоний только на плотной среде Сабуро и в виде равномерного помутнения также только в среде № 2 (Сабуро).

Проанализируйте полученные результаты. Сравните их с нормативами. Дайте свое заключение по микробной чистоте данного препарата.

Какие микроорганизмы выделены из данного препарата? Чем можно объяснить их присутствие в тетрациклине?

Почему при исследовании данного препарата использовано 400-кратное разведение?
Задание 4

В бактериологическую лабораторию на исследование микробиологической чистоты поступил сухой экстракт корня солодки. Исследование проводилось с соблюдением требований и нормативов ГФ XI.

После предварительного разведения в 10 раз препарат в количестве 1 мл был засеян на плотную среду № 1, в количестве 0,5 мл — на плотную среду № 2 (Сабуро) и в количестве 0,5 мл — на жидкие среды накопления: № 1, № 2 (Сабуро), № 3 (для накопления энтеробактерий) и № 8 (для накопления стафилококков и синегнойных палочек).

После 5-суточной инкубации при 37 °С на плотных питательных средах обнаружен рост микроорганизмов в виде колоний и равномерное помутнение жидких сред накопления: № 1, 2, 3. Из среды № 3 сделан высев на среду Эндо (№ 4 — для выявления кишечной палочки и других энтеробактерий) и на висмут-сульфитный агар (№ 5 — для выявления сальмонелл). Через сутки на среде Эндо отмечен рост лактозо-положительных, грамотрицательных, оксидазо-негативных микроорганизмов.

Проанализируйте полученные результаты. Сравните их с нормативами. Дайте свое заключение по микробной чистоте данного препарата.

Какой микроорганизм выделен из данного препарата?

Каким путем выделенный микроб мог попасть в препарат?

Как можно определить источник контаминации экстракта данным микроорганизмом?

Определение количества жизнеспособных клеток в препаратах из микробов

Материал для исследования: препарат «Бактисубтил».

Цель исследования: определение количества жизнеспособных клеток бактерий штамма Bacillus cereus IP 5832.

1 капсула должна содержать не менее 1 млрд. зародышевых спор!

Методика исследования. В стерильных условиях содержимое одной капсулы вносится в мерный объем стерильного физиологического раствора, из которого готовят последовательные десятикратные или стократные разведения (от 10"1 до 108). Из разведения 10"8 делается мерный высев в количестве 1 мл на 2—3 чашки Петри с МПА и заливается 20-30 мл расплавленного и охлажденного до 40-45 °С МПА. Чашки помещаются в термостат на 18-24 часа (t=37°C).

После инкубации производится подсчет колоний на всех чашках и определяется среднее арифметическое, которое является основным для вычисления количества жизнеспособных спор. Для этого найденное среднее количество спор необходимо умножить на разведение.

(!!!) Практическая работа. На исследование поступили 2 серии препарата «Бактисубтил». После выполнения соответствующих разведений, посевов и инкубации в термостате на МПА выявлен рост колоний бацилл.

Произведите подсчет бацилл для каждой серии препарата, сделайте заключение о соответствии нормативам данной лекарственной формы.
Определение идентичности Lactobacillus bulgaricus в препарате «Гастрофарм»

и наличия энтеробактерий (ФС № 42-368-86)

Материал для исследования: таблетки «Гастрофарм».

Цель исследования

1. Микроскопическое определение (на основании морфологических и тинкториальных свойств) микроорганизмов Lactobacillus bulgaricus.

2. Определение энтеробактерий в препарате.

Методика исследования