|
|
Биохим_15. Учебное пособие Хабаровск 2015 методические указания составили поступаев валерий Васильевич, д м. н., профессор
АТФ
  
2Н+
О2-
 
 
НАДН
½ О2
 
 
АДФ+Фн
 
2ē
2ē
2ē
2ē
2ē
Цитохром с   
 
2Н+
2Н+
Q
2Н+
 Межмембранное пространство
Рис.
Q
 
2ē
 9. Митохондриальная цепь переноса электронов
Ориентировочная карта действия
№
| Вопросы, подлежащие изучению |
Последовательность работы
и способ оформления результатов
|
1.
|
Выявление сукцинатдегидрогеназы в мышечной ткани и конкурентное торможение ее активности малонатом.
|
Принцип: Сукцинатдегидрогеназа окис-ляет янтарную кислоту. В качестве акцептора водорода используют ДХФИФ (синего цвета), который, восстанавливаясь, превращается в бесцветную лейкоформу.
Ход работы: Для получения ферментного препарата 1-2 г свежей мышцы, растирают в ступке с небольшим количеством воды, затем мышечную кашицу переносят на двойной слой марли, помещённой в воронку, и промывают 25 мл дистиллированной воды. Промытую кашицу отжимают, переносят в пробирку и суспендируют стеклянной палочкой с 4 мл воды. Полученную суспензию равномерно разливают в четыре пробирки.
Содержимое 1-й пробирки кипятят 1‑2 мин. Затем в пробирки приливают реактивы по схеме, приведённой в таблице:
№
пробы
|
Сукцинат, мл
|
Н2О, мл
|
Малонат, мл
|
ДХФИФ
|
1
|
1
|
0,5
|
-
|
2 капли
|
2
|
1
|
0,5
|
-
|
2 капли
|
3
|
-
|
1,5
|
-
|
2 капли
|
4
|
1
|
-
|
0,5
|
2 капли
|
Через 15 мин наблюдают окраску раствора в пробирках.
В протоколе отметить изменение окраски красителя в опытных пробирках, дать объяснение полученным результатам, записать реакцию окисления янтарной кислоты. Сделать вывод об изменении активности сукцинатдегидрогеназы в присутствии малоната.
| |
|
|
Скачать 2.47 Mb.