Учение об инфекции. Факторы патогенности бактерий. Роль микроорганизма, внешней среды и социальных условий в развитии инфекции. Формы инфекции
 Скачать 0.88 Mb.
|
|
тест - кассет, состоит в том, что исследуемый образец абсорбируется поглощающим участком планшета. При наличии в анализируемом образце антител к возбудителю заболевания последние вступают в реакцию с протеином А, конъюгированным с частицами коллоидного золота, образуя окрашенный комплекс. Этот комплекс движется по мембране и связывается с рекомбинантным антигеном, иммобилизованным на мембране в тестовой зоне планшета, образуя полоску розово-фиолетового цвета на уровне маркировки Т (Test). Остальные компоненты образуют полоску розово-фиолетового цвета в тестовой зоне на уровне маркировки С (Control). Результаты реакции оцениваются визуально в течение 10 минут. В том случае, когда концентрация антител к возбудителю заболевания в анализируемом образце сыворотки крови равна пороговому уровню или превышает его, в тестовой зоне выявляются две полоски розово-фиолетового цвета на уровне маркировок Т и С. Основными преимуществами использования иммунохроматографического анализа являются: • Простота и удобство - позволяет получить результат (анализ и первичное представление о причине заболевания) без оборудования и специальных навыков • Надежность - достоверность тестов достигает 92-99,8%, при этом каждый тест имеет встроенный внутренний контроль • Экономичность - минимальные затраты на приобретение теста и экономия времени на проведение обследования. В рознице стоимость одного ИФА- исследования в 5-10 раз дороже ИХА и получение результата минимум на следующий день • Анонимность - что особенно важно при выявлении заболеваний, передаваемых половым путем, других инфекционных заболеваний, а также выявлении фактов употребления наркотических веществ • Независимость - не требует предварительной медицинской консультации и рецепта врача Иммуноблотинг — метод идентификации антигенов или антител. Заключается в следующем. Смесь антигенов инфекционного агента разделяют методом электрофореза в полиакриламидном геле. При этом белки в зависимости от молекулярной массы и заряда, под действием электичского поля мигрируют на разные расстояния от стартовой лунки 16 тема. Учение об иммунитете. Специфическая профилактика и лечение инфекционных заболеваний. Диагностические биопрепараты. Аллергены. 1.Принципы иммунопрофилактики и иммунотерапии. Иммунопрофилактика и иммунотерапия являются разделами иммунологии, которые изучают и разрабатывают способы и методы специфической профилактики, лечения и диагностики инфекционных и неинфекционных болезней с помощью иммунобиологических препаратов, оказывающих влияние на функцию иммунной системы, или действие которых основано на иммунологических принципах. Иммунопрофилактика направлена на создание активного или пассивного иммуни- тета к возбудителю инфекционной болезни, его антигену с целью предупреждения возможного заболевания путем формирования невосприимчивости к ним организма. Иммунотерапия направлена на лечение уже развившейся болезни, в основе которой лежит нарушение функции иммунной системы. Иммунопрофилактика и иммунотерапия применяются, когда необходимо: а)сформировать, создать специфический иммунитет, активизировать деятельность иммунной системы; б) подавить активность звеньев иммунной системы; в)нормализовать работу иммунной системы. Иммунопрофилактика и иммунотерапия применяются в профилактике и лечении инфекционных болезней, аллергий, иммунопатологических состояний, в онкологии, трансплантологии, при первичных и вторичных иммунодефицитах. В лечении токсинемических инфекций (ботулизм, столбняк) значение имеет серотерапия, т.е. применение антитоксических сывороток, и иммуноглобулин. В терапии онкологических болезней применяются иммуноцитокины. Для всего этого – иммунобиологические препараты. 2.Вакцинопрофилактика. Характеристика вакцинных препаратов. Лечебные вакцины. Характеристика вакцинных препаратов Классификация вакцин Живые вакцины Корпускулярные инактивированиые вакцины Надмолекулярные вакцины Молекулярные вакцины Аттенуированные Цельноклеточные На основе протек- тивных антигенов (субъединичные и субклеточные) Биосинтетические (анатоксины) Дивергентные Цельновирионные Химически- синтезированные антигены Векторные (рекомбинантные) Генноинженерные В настоящее время для профилактики инфекционных заболеваний применяют следующие вакцинные препараты: 1) Вакцины живые составляют примерно половину из всех применяемых в практике вакцин. Живые вакцины при введении в организм (обычно в дозе 1 тыс.-1 млн. клеток) приживаются, размножаются, вызывают вакцинальный процесс и формирование активного иммунитета против соответствующего возбудителя. Вакцины получают из аттенуированных вакцинных штаммов или из непатогенных для человека природных (дивергентных) штаммов, имеющих общие антигенные свойства с болезнетворными патогенными штаммами представляют собой взвеси выращенных на различных питательных субстратах вакцинных штаммов. Основным свойством живого аттенуированного штамма, используемого в производстве вакцин, является стойкая утрата вирулентности при сохранении способности вызывать иммунную реакцию, схожую с естественной. Вакцинный штамм размножается в организме хозяина и индуцирует клеточный, гуморальный, секреторный иммунитет, создавая защиту всех входных ворот инфекции. Главными преимуществами живых вакцин являются: • высокая напряженность, прочность и длительность создаваемого ими иммунитета; • возможность применения не только путем подкожного введения, но и другими, более простыми путями (накожно, перорально, интраназально). Живые вакцины имеют ряд недостатков: • сложно комбинируются и плохо дозируются; • категорически противопоказаны людям, страдающим иммунодефицитом; • вызывают вакцинно-ассоциированные заболевания • относительно нестабильны; • естественно циркулирующий дикий вирус может тормозить репликацию вакцинного вируса и снизить эффективность вакцины; это отмечалось в отношении вакцинных штаммов полиовируса, размножение которого может подавляться при инфицировании другими энтеровирусами. В процессе производства, транспортировки, хранения и применения живых вакцин, на- ходимо строго соблюдать меры, предохраняющие микроорганизмы от гибели и гарантирующие сохранение активности препаратов (холодовая цепь). В Российской Федерации живые вакцины широко применяют с целью специфической профилактики полиомиелита, кори, эпидемического паротита, гриппа, туберкулеза, чумы, туляремии, бруцеллеза, сибирской язвы. 2) Убитые вакцины (инактивированные) получают путем получаемые путем инактивации выращенных штаммов различными методами таким способом, который приводит лишь к минимальному повреждению структурных белков. Чаще всего с этой целью прибегают к мягкой обработке формалином, фенолом, спиртом. Инактивируют нагреванием при температуре 56 С в течение 2-х часов, УФ-лучами. Иммуногенность инактивированных вакцин ниже в сравнении с живыми, иммунитет менее напряженный и непродолжительный. Убитые вакцины имеют следующие преимущества: 1. хорошо комбинируются, дозируются; 2. не вызывают вакцинно-ассоциированных заболеваний 3. применяются у людей, страдающих иммунодефицитами В Российской Федерации применяют убитые вакцины (против брюшного тифа, холеры, бешенства, гриппа, клещевого энцефалита, лентосиироза, коклюша. Лечебные убитые вакцины против бруцеллеза, дизентерии, гонореи, стафилококковых инфекций. Лечебный эффект достигается за счет активации работы иммунной системы и факторов естественной резистентности организма. Лечебные убитые вакцины применяют при хронических, вялотекущих инфекциях; вводят в/мышечно, дозировано под контролем состояния больного. К недостаткам корпускулярных вакцин (живых и убитых) следует отнести наличие в их составе большого количества «балластных» АГ и других компонентов, не участвующих в формировании специфической защиты; они способны оказывать токсическое и/или аллергизируюшее влияние на организм. 3) Химические вакцины содержат отдельные компоненты (обладающие иммуногенностью) извлекаемые из микроорганизмов различными химическими методами Химические вакцины имеют следующие преимущества: —менее реактогенны, пригодны для детей дошкольного возраста Химические вакцины имеют ряд недостатков: — иммуногенность химические вакцин ниже в сравнении с живыми, поэтому часто в такие препараты добавляют адъювант (гидрат окиси алюминия). В Российской Федерации применяют вакцины для профилактики брюшного и сыпного тифов, менингококковую, гриппозную и др. 4) Анатоксины, анатоксины, получают путем обезвреживания формалином токсинов, являющихся продуктом метаболизма некоторых патогенных микроорганизмов. Они предназначены для иммунизации людей, используются в виде очищенных, концентрированных препаратов, адсорбированных на гидрате окиси алюминия. Для очистки их от балластных веществ нативные анатоксины подвергают специальной обработке различными химическими методами, в результате чего препараты не только освобождаются от балластных веществ, но и концентрируются по объему, что позволяет вводить необходимую дозу препарата в значительно меньшем объеме. Иммунная система человека не способна эффективно отвечать на одновременное введение нескольких антигенов. Адсорбция антигенов резко повышает эффективность вакцинации. Это объясняется тем, что в месте инъекции адсорбированного препарата создается «депо» антигенов, характеризуется замедленным их всасыванием; дробное поступление антигена из места инъекции обеспечивает эффект суммации антигенного раздражения и резко повышает иммунный эффект. Анатоксины имеют следующие преимущества: - препараты относительно термостабильны, однако Анатоксины имеют ряд недостатков: • индуцируют только антитоксический иммунитет, что не позволяет предотвратить бактерионосительство и локализованные формы заболеваний • не допускается замораживание адсорбированных препаратов (АДС, АС, АД, АДС- м, и т.д.). • требуются повторные ревакцинации Синтетические и полусинтетические вакцины, разрабатываемые в рамках проблемы повышения эффективности и снижения побочного действия вакцин, состоят из антигена или его детерминанта в молекулярном виде, полимерного носителя (для придания макромолекулярности) и адъюванта, неспецифически повышающего иммуногенность АГ. В качестве носителя используют полиэлектролиты (винилпирролидон, декстран), с которыми соединяют АГ. Разрабатываются синтетические вакцины против гриппа, гепатита В и др. 5. векторные вакцины получают генно-инженерным способом. Получены сотни рекомбинантных штаммов бактерий, вирусов, дрожжей, несущих определенный антиген (например, сальмонеллезная вакцина против гепатита В) 6. молекулярные вакцины получают путем биосинтеза (анатоксины) или химического синтеза (антигенные компоненты ВИЧ, гепатитов); молекулярные генноинженерные вакцины получают из протективных антигенов, которые нарабатывают рекомбинантные штаммы микроорганизмов (вакцина дрожжевая против гепатита В, против малярии и др.). 7. Ассоциированные вакцины (поливакцины) включают антигены нескольких микробов и нередко в различных видах (убитые клетки, анатоксины и др.), что позволяет одновременно иммунизировать против нескольких инфекций. В РФ используют одну ассоциированную вакцину АКДС (вакцина АКДС содержит убитые коклюшные бактерии и 2анатоксина - дифтерийный и столбнячный); за рубежом широко используют ассоциированные вакцины - тетракокк (коклюш, дифтерия, столбняк, полиомиелит); вакцина MMR (корь, эпидемический паротит, краснуха) и др. Дифтерийный анатоксин (АД): содержит антиген в виде обезвреженного (0,4% р- ром формалина, при 37 0 С, втечение 1 месяца) дифтерийного экзотоксина, соединенного с адъювантом; дозируется в мл, в 1 мл содержится 10 ЛФ (флоккулирующих единиц) дифтерийного анатоксина; используется для плановой специфической профилактики дифтерии путем парентерального (внутримышечно или глубоко подкожно) введения: действие основано на формировании искусственного активного антитоксического иммунитета к дифтерийному токсину. 3.Анатоксины, их характеристика, методы получения и применения. Анатоксины (anatoxinum от греч.— «an» — отрицание и toxo» — отравляю) представляют собой препараты, полученные из бактериальных экзотоксинов, полностью лишенные токсических свойств, но сохранившие антигенные и иммуногенные свойства. Метод получения анатоксина предложил в 1923 году крупнейший французский ученый Рамон (G. Ramon). При приготовлении анатоксинов культуры бактерий — возбудителей токсинемических инфекций, продуцирующих экзотоксины, выращивают в жидких питательных средах (реакторах большой емкости) для накопления токсина. Затем фильтруют через бактериальные фильтры для удаления микробных тел. К фильтрату добавляют 0,3—0,4 % —формалина и помещают в термостат при температуре 37°—40°С н а 3—4 недели до полного исчезновения токсических свойств. Полученный анатоксин проверяют на стерильность, безвредность и иммуногенность. Такие препараты получили название нативных анатоксинов, т. к. они содержат большое количество веществ питательной среды, которые являются балластными и могут способствовать развитию нежелательных реакций организма при введении препарата. Нативные анатоксины необходимо вводить в больших дозах из-за их невысокой удельной активности. Поэтому в настоящее время применяются преимущественно очищенные анатоксины, для чего нативные анатоксины подвергают обработке различными физическими и химическими методами (ионнообменной хромотографии, кислотному осаждению и др.), чтобы освободить от всех балластных веществ и сконцентрировать препарат в меньшем объеме. Однако уменьшение размеров частиц анатоксина сделало необходимым адсорбировать препарат на адъютантах. Таким образом, применяющиеся анатоксины являются адсорбированными высокоочищенными концентрированными препаратам:'Специфическую активность или силу анатоксина определяют в реакции флоккуляции в так называемых единицах флоккуляции — (Lf) или по реакции связывания анатоксинов, выражающуюся в единицах связывания— (ЕС). Титрование анатоксинов в реакции флоккуляции (по методу Рамона) производят по стандартной флоккулирующей антитоксической сыворотке, в которой известно количество международных антитоксических единиц (ME, см. с. 23) в 1 мл. Одна антигенная единица анатоксина обозначается Limes flocculationis (Lf — порог флоккуляции), это то количество анатоксина, которое вступает в реакцию флоккуляции с одной единицей дифтерийного антитоксина. Определив дозу анатоксина, давшую инициальную (первичную) реакцию флоккуляции с одной антитоксической единицей сыворотки, рассчитывают количество Lf препарата в 1 мл. Антигенные свойства столбнячного анатоксина (и некоторых других) обозначают в единицах связывания (ЕС). Для определения ЕС необходимы:испытуемый препарат анатоксина, стандартная антитоксическая сыворотка (с содержанием 0,1 ME в 1 мл), опытная доза токсина (вытитрованная к 0,1 ME стандартной сыворотки), белые мыши.Реакцию связывания проводят следующим образом: в ряд пробирок с одинаковым объемом стандартной сыворотки добавляют различные разведения испытуемого анатоксина.Смесь для связывания выдерживают в термостате 45 минут,затем в каждую пробирку добавляют опытную дозу токсина и вновь оставляют в термостате на 45 минут. После этого из каждой пробирки вводят смесь (сыворотки — анатоксина —токсина) 2—4 мышам и наблюдают за состоянием животных в течение 4 суток. Если весь анатоксин, добавленный к сыворотке, связался ею, то добавление токсина и последующее заражение мышей ведет к их гибели. При недостаточной дозе анатоксина для связывания всей сыворотки, добавленный токсин нейтрализуется сывороткой, и мыши остаются живыми. Для расчета ЕС в 1 мл определяемого анатоксина берется то разведение анатоксина, при котором происходит гибель 50% белых мышей на 4-е сутки. Это количество анатоксина содержит дозу, связывающую 0,1 ME сыворотки. Анатоксины применяются для профилактики и реже для лечения токсинемических инфекций (дифтерия, газовая гангрена, ботулизм, столбняк) и некоторых заболеваний, вызванных стафилококками. 4.Серотерапия и серопрофилактика. Антитоксические сыворотки и иммуноглобулины. Осложнения при введении. Серотерапия (от лат. serum - сыворотка и терапия), лечение человека или животных иммунными сыворотками, специфическими иммуноглобулинами, гамма-глобулинами, лечебными вакцинами, бактериофагами. Серотерапия использует препараты специфического действия, направленных на конкретный вид возбудителя. Начало применения иммунных сывороток датировано 1884 годом, когда были открыты возбудители дифтерии и столбняка, и разработаны технологии получения противодифтерийной и противостолбнячной сывороток. В последствие стали использоваться иммуноглобулины, полученные из сыворотки крови переболевших (вакцинированных) доноров. Антитоксические сыворотки состоят из антитоксинов (специфических антител против токсинов, нейтрализующих действие токсинов, вырабатываемых возбудителем) и дозируются антитоксическими единицами - АЕ. К антитоксическим сывороткам относятся: • противодифтерийная сыворотка; • противостолбнячная сыворотка; • противоботулиническая сыворотка; • противогангренозная сыворотка. Антибактериальные сыворотки содержат антитела против бактерий. Как правило, сыворотки вводятся внутримышечно, и, лишь в отдельных случаях - внутривенно. Поскольку токсин, вырабатываемый возбудителем, в течение 1-3 дней находится в свободном состоянии, циркулируя с кровью, то именно в этот период применение сыворотки наиболее эффективно. В дальнейшем токсины связываются с клетками и тканями, что делает задачу их обезвреживания более сложной. Чем раньше с момента заболевания введена сыворотка, тем эффективнее лечение. Иммуноглобулины и гамма-глобулины имеют высокую концентрацию антител, лишены балластных белков, лучше проникают в ткани организма. На сегодня в лечебной практике существуют иммуноглобулины против следующих распространенных инфекций: • натуральная оспа; • грипп; • корь; • клещевой энцефалит; • стафилококковая инфекция; • сибирская язва; • лептоспироз; • коклюш. |