Правилозаборов. 1 Проведение забора материала от больных для бактериологических исследований
 Скачать 326.18 Kb.
|
|
1.1. Проведение забора материала от больных для бактериологических исследований Правила: 1. Вид материала определяется клинической картиной заболевания, т.е. он должен соответствовать локализации предполагаемого возбудителя с учетом патогенеза болезни. Например, забираем гнойное содержимое ран, фурункулов, карбункулов, мокроту при бронхо-легочных заболеваниях4; испражнения при заболеваниях ЖКТ; кровь при лихорадочных состояниях и т.д. 2. Материал следует брать до применения антибиотиков или других химиотерапевтических препаратах или через определенный промежуток времени после их назначения, необходимый для выведения препарата из организма (например, антибиотики выводятся из организма через 8-10 часов) 3. Материал необходимо брать в достаточном количестве для исследования, соблюдая правила асептики в процедурном кабинете, в перевязочной или операционной, что бы не загрязнить его микроорганизмами окружающей среды и представителями нормальной микрофлоры человека. 4. Забор материала осуществляют, по возможности, в начальном периоде болезни, т.к. именно в этот период возбудители выделяются чаще, их больше и они имеют более типичную локализацию. Ранний этиологический диагноз предполагает более ранее, следовательно, более эффективное лечение и профилактику. 5. Исследуемый материал в возможно короткие сроки (1-2 часа) следует доставить в лабораторию. Его доставка должна осуществляться средним медицинским персоналом и производиться в лабораторной посуде или специальных контейнерах при сохранении первоначальной температуры материала, или при охлаждении, замораживании сухим льдом (зависимости от характера материала). Любой материал, направляемый в лабораторию, должен сопровождаться соответствующим направлением, в котором указывается фамилия, имя и отчество больного, вид материала, дата и время его взятия, предварительный диагноз заболевания, название учреждения или отделения, подпись врача, направляющего материал на исследование. 6. Любой клинический материал должен рассматриваться как потенциально опасный для человека. Поэтому при его заборе, хранении, доставке, обработке во избежание заражения должны соблюдаться такие же меры техники безопасности, как в бактериологической лаборатории. 7. После исследования остатки материала подлежат уничтожению (автоклавированию или сжиганию), а посуда, контейнеры, инструменты – обеззараживанию. 1.2.Правила забора и посева крови на стерильность и гемокультуру Производится при тифо-паратифозных заболеваниях, сепсисе, менингококковой инфекции или других инфекциях, сопровождающихся лихорадкой, причем на протяжении всего лихорадочного периода болезни, но лучше в начальном периоде или в разгаре болезни (при выраженной бактериемии). Для исследования берут кровь из вены локтевого сгиба, у маленьких детей кровь берут в меньшем количестве из мочки уха, пятки, пальца. Пробы крови отбирают после тщательной обработки кожи с соблюдением правил асептики, одноразовым стерильным шприцем. Посев на питательные среды стерильного материала (кровь или другие, содержащие микробов жидкости у здоровых лиц) также лучше делать у постели больного, либо помещать в стерильную посуду, содержащую вещества, препятствующие свертыванию крови 0,3% раствора цитрата натрия, 0,1% раствор оксалата натрия). Обычно берут 5-10мл крови и засевают во флакон, содержащий 50-100 мл среды. Для этого используют для флакона с питательной средой (один для аэробов, другой для анаэробов). Посев крови производится на жидкие питательные среды – 10% желчный бульон, 1% сахарный бульон, двухфазную среду, а также жидкие и полужидкие среды для культивирования анаэробов в разведении 1:10. Флаконы с питательной средой получают в лаборатории, переливание крови из шприца во флакон необходимо производить над пламенем спиртовки, предварительно сняв иглу. Флакон с посевом направляется в лабораторию, а в вечернее и ночное время помещают в термостат. Студенту важно помнить, что тем раньше от начала заболевания производится посев. Тем больше шансов получить положительный результат. И, наоборот, чем позже взята кровь, тем меньшее количество возбудителя в ней находится и положительные результаты получаются реже. А при нормальной температуре – совсем редко. Следует знать, что для повышения числа положительных результатов гемокультуры рекомендуется, при отсутствии противопоказаний, за 15-20 минут для взятия крови ввести подкожно 1мл 0,1% раствора адреналина, что способствует сокращению селезенки и выходу в кровяное русло возбудителей (например, при тифозно-паратифозных заболеваниях) Предварительный результат посева при тифо-паратифозных заболеваниях получают через 2-3 дня, а окончательный – через 7-10 дней. Следует помнить, что увеличение кратности посевов крови (три дня подряд на подъеме температуры) значительно повышают частоту выделения микробов из крови. У леченных больных кровь для посева следует брать 5-6 раз. 1.3.Правила забора и посева испражнений Производится при кишечных инфекциях (брюшной тиф, паратифы, шигеллезы, сальмонеллезы и т.д.), а так же при всех болезнях, протекающих с поражением ЖКТ и сопровождающихся расстройством стула. Сбор испражнений производится стерильным деревянным шпателем или стеклянной палочкой в количестве 2-3г в стерильные баносчеи из судна, горшка или лотка, а так же непосредственно из прямой кишки с помощью тампонов, металлических петель или трубки ректоскопа. Студенты должны помнить, что даже остаточное количество дезинфицирующих средств на стенках судна или горшка способно значительно изменить как количественный, так и качественный состав микробов в клиническом материале, поэтому их следует тщательно промывать горячей водой. Следует брать слизь, гной, фибринные пленки и избегать примеси крови. При невозможности своевременного посева кала используют консервант – глицериновую смесь, составляющую 2\3 общего объема. Необходимо помнить, что посев испражнений производят прямым способом на чашки Петри со средой Плоскирева, Левина, Эндо, висмут-сульфит агаром или на среды обогащения (селенитовая, среда Мюллера), с последующим пересевом на перечисленные выше среды для выделения энтеробактерий, на щелочной агар (1% пептонную воду с последующим пересевом на щелочной агар) – для вибрионов, МПА – для бацилл, МПА с фурагином – для выделения псевдомонад, ЖСА – для выделения стафилококков, среду Китта-Тароцци – для клостридий. Студенты должны знать, что при брюшном тифе посевы кала следует проводить со второй недели заболевания, перед выпиской из стационара, а пищевикам и им приравненным лицам – на протяжении всего периода работа в декретированных учреждениях. Положительные результаты копрокультуры при тифо-паратифозных заболеваниях бывают на 2-3 неделе заболевания и реже – в первые дни болезни, а рри других заболеваниях – на 2-3 день после посева. 1.4.Правила забора мочи Производится при воспалительных заболеваниях мочевыводящих путей. Для бактериологического исследования следует брать среднюю порцию утренней мочи после тщательного туалета мочеполовых органов кипяченой водой с мылом. Мочу собирают в стерильную посуду, на исследование отбирают 3-5мл в стерильной, плотно закрывающийся флакон и доставляют в лаборатории. В течение 1 часа. При затрудненном мочеиспускании возможен отбор мочи с помощью катетера. При бактериологическом исследовании определяют степень бактериурии, т.е. количество колониеобразующих единиц в 1мл мочи, методом секреторных посевов мочи. Для этого чашку Петри с питательной средой 3-5% кровяным агаром необходимо разделить на 4 сектора. Бактериологической петлей диаметром 2мм (вместимость 0,005мл) производят посев мочи (30-40 штрихов) на сектор а чашки Петри, после этого петлю прожигают и производят 4 штриховых посева из сектора А в сектор ! и аналогичным образом – из 1 во 2, из 2 в 3. Наносят по капле мочи на чашки Петри со средами Эндо (для энтеробактерий) и Сарубо (для грибов), а затем засевают штрихом по всей поверхности чашек. По капле материала (0,05мл) засевают в селенитовую среду и сахарный бульон в соотношении 1:9, все чашки и пробирки инкубируют 18-24 часа при 35-37 градусах. После инкубации число выросших колоний на разных секторах подсчитывают и определяют степень бактериурии по таблице. Наличие в 1 мл мочи у детей 10 4 , а у взрослых 10 5 микроорганизмов и более, говорит о наличии инфекции в мочевыводящих путях или почках. После подсчета микролных клеток в 1мл мочи проводят выделение чистой культуры микробов для дальнейшей идентификации и определения чувствительности к атибиотикам. Окончательный результат исследования выдается на 4-5 сутки. 1.5.Правила забора желчи Производится при воспалительных заболеваниях желчевыводящих путец. Желчь забирается во время дуоденального зондирования. В отдельные стерильные пробирки собирают все три порции желчи (А, В и С) с количестве 10-20мл и не ранее 8-10 дня нормальной температуры. Конец зонда предварительно обрабатывают спиртом, затем, после выделения 1-2мл желчи, которые не используют для исследования, наполняют пробирки через зонд с помощью стерильного шприца. При тифо-паратифозных заболеваниях студент должен знать, что положительная биликультура может быть в течение всего заболевания, а так же в периоде реконвалесценции. При этом возбудитель в желчи обнаруживается в ,15 чаще, чем в корпо- и уринокультурах. Однако, из-за опасности дуоденального зондирования в лихорадочном периоде, посев желчи производится только у реконвалесцентов и бактерионосителей. Для посева желчи используют жидкие среды обогащения (селенитовая, Мюллера и т.д.) и плотные дифференциально-диагностические (Плоскирева, висмут- сульфит агар). Материал в количестве 1-2мл вносят в жидкую среду, а 0,5мл наносят на поверхность на поверхность плотной среды, затем равномерно распределяют шпателем. При воспалительных процессах в желчном пузыре иной этиологической природы необходимо посев материала проводить как при посеве мочи. Учет результатов исследования и выписка производится на 4-5 сутки. 1.6.Правила забора рвотных масс и промывных вод желудка Производится при пищевых токсикоинфекциях и кишечных инфекциях. Рвотные массы собирают в стерильные банки в количестве 50-100мл и немедленно отправляют их в лабораторию. Целесообразно проводить исследование материала на обнаружение и патогенной и условно- патогенной флоры. Для этого полученный материал разводят в физ. растворе, затем титруют его и засевают на чашки со вредами для выделения энтеробактерий (Левина, Эндо, Плоскирева), для вибрионов – на щелочной агар, для бацилл – на МПА, для клостридий – на стреду Китта-Тароцци. После инкубации выделяют чистые культуры, проводят их идентификацию, определяют чувствительность к антибиотикам, определяют факторы патогенности. При выделении УПМ необходимо учитывать не только качественный состав микрофлоры, но и количественный, т.к. этиологически значимой для отсутствующих или присутствующих в небольшом количестве в кишечнике здоровых людей видом является 10 6 и больше Посев промывных вод желудка производится при пищевых токсикоинфекциях и кишечных инфекциях. Собираются в количестве 20-25мл в стерильные банки или широкогорлые флаконы после промывания желудка кипяченой водой без добавления гидрокарбоната натрия или перманганата калия. Из промывных вод следует забирать первые порции, доставляется материал в лабораторию немедленно. Посев проводится так же как и рвотных масс, только без разведения в физ. растворе. 1.7.Правила забора гноя, экссудата и розеолокультуры Посев производится из воспалительных очагов. Материал забирается стерильным шприцем, пинцетом или тампоном, по возможности из более глубоких отделов, т.к. верхние отделы могут содержать сапрофитную микрофлору. При снятии повязки рекомендуется очистить поверхность от мази, отмерших тканей и только после этого отбирать материал с соблюдением правил асептики. Взятый материал помещают в стерильную пробирку, флакон или чашку Петри и доставляют в лабораторию. Забор отделяемого проводят двумя ватными тампонами – один для приготовления нативного мазка, второй для посева на питательные среды. Посев производят в пробирку с сахарным бульоном, неоднократно погружая ее в среду, после чего несколько капель сахарного бульона пипеткой засевают в среду Китта-Тароцци или тиогликолевую. Этим же тампоном материал засевают на плотные питательные среды (кровяной агар, ЖСА, Эндо, Сабуро). После инкубирования выделяют чистую культуру, идентифицируют микрофлору по рода и вида и определяют чувствительность к антибиотикам. Посев из розеол производится для выделения микроорганизмов (при тифо-паратифозных заболеваниях). С целью получения содержимого розеолы кожу над ней обрабатывают спиртом и скарифицируют. На место скарификации наносят капли стерильного желчного или простого бульона, а затем с помощью пипетки переносят во флакон с 50мл желчного бульона. После инкубации 24 часа при 37 градусах материал из флакона пересевают на плотные питательные дифференциально- диагностические среды (Плоскирева, висмут-сульфит агар и т.д.). материал в количестве 0,5мл наносят на поверхность плотной среды и затем равномерно растирают шпателем. Посев из розеол желается с 8-10 для болезни, когда появляются розеолы на коже. Метод не ранний, но важный в периоде реконвалесценции и при диагностике стертых форм тифо-паратифозных заболеваних, так как в крови возбудители бывают в небольшом количестве. 1.8.Правила забора и посева носоглоточной слизи Производится при менингококковом назофарингите и для выявления носительства менингококка, реже – при других формах менингококковой инфекции. Слизь из носоглотки берется натощак или через 3-4 часа после еды. Стерильный тампон, укрепленный на изогнутой проволоке (угол 120-130 градусов), направляется концом вверх и подводится под мягкое небо в носоглотку. Материал берется при надавливании шпателем на корень языка. После взятия носоглоточной слизи необходимо сразу же сделать посев на теплые чашки с сывороточным агаром, можно с добавлением ристомицина, который ингибирует рост сопутствующей флоры. После посева необходимо незамедлительно поставить чашки в термостат и, не допуская охлаждения, доставить их в лабораторию, так как менингококк очень чувствителен к снижению температуры ниже 36 градусов. Окончательный ответ посева выдается на 4 день исследования. Необходимо помнить, что при менингитах другой этиологии в носоглоточной больного может быть обнаружен менингококк, а так же отрицательные результаты посева не исключают менингококковую этиологию заболевания. 1.9.Правила забора слизи из зева и носа Производятся при ангине, дифтерии и других инфекциях. Тампон для взятия мазков должен быть заранее простерилизован в лаборатории. Мазок из зева берут натощак или не ранее 2 часов после полоскания, питься, или еды под контролем глаза, не касаясь тампоном слизистых оболочек рта, языка, зубов. Корень языка придавливают книзу и кпереди шпателем, держа его левой рукой, а правой осторожно вводят в ротовую полость тампон и осторожно снимают налет или слизь на границе пораженного участка и здоровой ткани, где количество возбудителей больше, чем в других местах. Перед взятием слизи из носа предварительно необходимо очистить нос, удалить корки. Тампон вводят поочередно в обе ноздри, плотно прикасаясь к стенкам, перегородке носа и плотно прижимая крылья носа к тампону. Полученный материал с тампона немедленно засевается на плотные питательные среды и одновременно наносится на предметное стекло, подсушивается и направляется в лабораторию для микроскопического исследования. При подозрении на дифтерию материал засевают на кровяно-теллуритовый агар, предварительно подогретый до комнатной температуры. При посеве материал со всех сторон тампона втирают в среду на участке площадью 2х1см, а затем этим жен тампоном засевают круговыми движениями, втирая в общую поверхность среды. Засеянные чашки инкубируют при 37 градусах на 24-48 часа. При отсутствии возможности доставить материал в лабораторию в течение 3 часов с момента взятия пробы рекомендуется засевать материал на чашки с питательной средой непосредственно у постели больного или пробирки с транспортной средой помещают в термостат и затем доставляют в лабораторию. Через 24 часа инкубации с транспортной среды проводитсч пересев на КТА, поэтомк срок исследования увеличивается на одни сутки. После инкубации проводится выделение чистой культуры. Определяется род и вид. Кроме того, обязательно определяется токсигенность возбудителя дифтерии. При подозрении на другую инфекцию мазок из зева берется параллельно двумя стерильными тампонами. Один помещают в пробирку с сахарным бульоном, другой используют для приготовления мазка. После инкубации через 24 часа проводится пересев с сахарного бульона на питательные среды (кровяной агар, шоколадный агар, ЖСА, Эндо, Сабуро). Чем больше набор селективных питательных сред используется для посева материала, тем больше вероятность выделения и идентификации микроорганизмов, вырвавших болезнь. После идентификации до рода и вида необходимо определить чувствительность к антибиотикам. 1.12. Правила забора и посева ликвора Производится на 20% сывороточный агар или же на среду обогащения – 0,1% полужидкий агар. Среды должны быть свежими: срок хранения их в холодильнике не более суток. Ликвор необходимо собирать в стерильную пробирку и немедленно доставлять в лабораторию на исследование в водяной бане при 37 градусах. Ликвор центрифугируют, берут 2-3 капли осадка жидкости, взятой со дна пробирки, засевают на повехность подогретого сывороточного агара в чашку Петри. Готовится мазок для бактериоскопического исследования, а оставшийся ликвор в пробирке заливается 5мл стерильного полужидеого 0,1% агара с добавлением сыворотки и помещается в термостат для накопления микробных клеток (так называемое «обогащение»). Предварительный результат посева, получается через 1-2 дня, а окончательный – через 3-4 дня, при выделении чистой культуры менингококка с помощью метода обогащения – через 7-8 дней. 2. Правила приготовления и окрашивания микропрепаратов, методы окраски Окраска по Граму. Методика: 1) окрасить мазок генцианвиолетом ( 2 минуты,через фильтровальную бумагу); 2) бумагу удалить, оставшуюся краску слить; 3) окрасить мазок раствором Люголя (1 минута); 4) раствор Люголя слить и нанести несколько капель чистого 96% спирта (30-40 секунд, осторожно покачивать стекло); 5) тщательно смыть спирт водой; 6) окрасить водным фуксином (2 минуты); 7) промыть водой и высушить. Грам-положительные бактерии окрашиваются в темно-фиолетовый цвет, Грам-отрицательные – в красный |