1. Типы биотических взаимоотношений макро и микроорганизма
 Скачать 232.49 Kb.
|
|
62. Лабораторная диагностика микоплазмозов. Микоплазмы относятся семейству Mycoplasmataceae, вызывают заболевания с общим названием микоплазмозы. Среди микоплазм есть патогенные и сапрофитные виды. Микоплазмы осложняют течение многих вирусных инфекций, особенно гриппа и парагриппа. При смешении микоплазменной и гриппозной инфекций летальность может достигать 10%. Микоплазменная инфекция может вызвать пороки развития плода, мертворождения, раннюю детскую смертность в связи с внутриутробным заражением. Исследуемый материал, цель исследования, методы лабораторной диагностики микоплазмозов: Респираторный микоплазмоз. 1а. Материал для исследования – мокрота, слизь из носоглотки, плевральный экссудат, лаваж при бронхоскопии, биоптаты легочной ткани. Метод диагностики — культуральный. -На сердечно-мозговом агаре колонии в виде «яичницы глазуньи». -На двухфазной среде (короткий столбик селективного агара, сверху налит сывороточно-глюкозный бульон) — изменение цвета жидкой части среды. -Тест эпифлуоресценции — на поверхность колонии наносят люминисцирующие микоплазменные антитела — под люминесцентным микроскопом наблюдают специфическое свечение. -Выращивание микоплазм в культуре трахеи куриных эмбрионов и цыплят — результат получают через 3-5 дней. 1б. Материал для исследования – кровь. Метод диагностики — серологический. — РСК; — РНГА; — ИФА. 2. Микоплазменный артрит. 2а. Материал для исследования — синовиальная жидкость, ткани суставных хрящей. Метод исследования – культуральный. Посевы и результаты такие, как при респираторном микоплазмозе. 2б. Материал для исследования — кровь. Метод исследования — серологический. — РСК; — РНГА; — ИФА. 3. Уреаплазмоз. 3а. Материал для исследования у мужчин — выделения из уретры, секрет простаты, сперма; у женщин — материал из уретры, цервикального канала, заднего свода влагалища. Метод исследования — микроскопический. Базируется на выявлении ДНК возбудителя — препарат окрашивают флуорохромом оливомицином (стандартная тест-система) — под люминесцентным микроскопом уреаплазмы имеют вид ярко-зеленой зернистости на темном фоне 3б. Материал для исследования тот же. Метод исследования — культуральный Посев проводят на стандартные среды: на жидкой питательной среде меняется цвет от начального желтого до розового без мути; на плотной питательной среде образуются мелкие колонии с зубчатым краем и сморщенной поверхностью (биохимические свойства — гидролизует мочевину, поскольку производит уреазу). 3в. Материал для исследования — кровь. Метод исследования — серологический. — РСК; — РНГА; — ИФА; — Рекция агрегат-гемагглютинации. 63. Биологический метод диагностики бруцеллеза. Биопроба. Осуществляют на морских свинках (не менее двух), сыворотка которых в разведении 1:5 отрицательно реагирует в РА с бруцеллезным антигеном. На 15, 25 и 40-е сутки после заражения берут кровь, из которой получают сыворотку и исследуют ее в пробирочной РА в титрах от 1:10 до 1:80. Результат считают положительным, если сыворотка реагирует в титре 1:10 и выше. Для вьщеления культуры морских свинок убивают и делают посевы из лимфоузлов, селезенки, печени и костного мозга. 64.Возбудитель стафилококкозов. Таксономия: относятся к отделу Firmicutes, семейству Мicrococcacae, роду Staphylococcus. К данному роду относятся 3 вида: S.aureus, S.epidermidis и S.saprophyticus. Морфологические свойства: Все виды стафилококков представляют собой округлые клетки. В мазке располагаются несимметричными гроздьями. Клеточная стенка содержит большое количество пептидогликана, связанных с ним тейхоевых кислот, протеин А. Грамположительны. Спор не образуют, жгутиков не имеют. У некоторых штаммов можно обнаружить капсулу. Могут образовывать L-формы. Культуральные свойства: Стафилококки — факультативные анаэробы. Хорошо растут на простых средах. На плотных средах образуют гладкие, выпуклые колонии с различным пигментом, не имеющим таксономического значения. Могут расти на агаре с высоким содержанием NaCl. Обладают сахаролитичес- кими и протеолитическими ферментами. Стафилококки могут вырабатывать гемолизины, фибринолизин, фосфатазу, лактамазу, бактериоцины, энтеротоксины, коагулазу. Стафилококки пластичны, быстро приобретают устойчивость к антибактериальным препаратам. Существенную роль в этом играют плазмиды, передающиеся с помощью трансдуцирующих фагов от одной клетки к другой. R-плазмиды детерминируют устойчивость к одному или нескольким антибиотикам, за счет продукции в-лактамазы. Антигенная структура. У стафилококков лучше всего изучены антигены клеточной стенки: пептидогликан, тейхоевые кислоты и белок А. Пептидогликан -- общий видовой для стафилококков антиген. Тейхоевые кислоты --видоспецифические полисахарид-ные антигены. S.aureus содержит рибитолтейхоевую кислоту (полисахарид A), S. epidermidis -- глицеринтейхоевую кислоту, называемую полисахаридом В. Протеин А обнаружен у золоти-стого стафилококка. Это низкомолскулярный белок, имеющий свойство соединяться с Fc-фрагмснтами IgG млекопитающих. Штаммы, продуцирующие большое количество белка А, обладают более высокой резистентностью к фагоцитозу. У мукоидных штаммов золотистого стафилококка выявлен также капсульный полипептидный антиген. Биохимические свойства: Стафилококки ферментируют с обра-зованием кислоты без газа глюкозу, мальтозу, фруктозу, сахарозу, ксилозу, глицерин, маннит и не разлагают дульцит, салицин, инулин, раффинозу. Выделяют аммиак и сероводород, не образуют индол, восстанавливают нитраты в нитриты; продуцируют каталазу, фосфатазу, уреазу; патогенные штаммы -- аргиназу. Свертывают и пептонизируют молоко, разжижают желатин, иногда свернутую сыворотку крови. Однако протеолитическая активность у стафилококков может варьировать в значительной степени. Таксиобразование: Патогенные стафилококки синтезируют и секретируют высокоактивные экзотоксины и ферменты. Среди экзотоксинов выделяют четыре типа гемотоксинов (стафилолизи-нов), лейкоцидин и энтеротоксины. К гемотоксинам относятся альфа-, бета-, гамма- и дельта-гемо-лизины. Альфа-гемолизин вызывает лизис эритроцитов овец, свиней, собак, обладает летальным и дерматонекротическим действием, разрушает лейкоциты, агрегирует и лизирует тромбо-циты. Бета-гемолизин лизирует эритроциты человека, овец, крупного рогатого скота, летален для кроликов. Гамма-гемолизин обнаруживается- у штаммов, выде-ленных от человека, его биологическая активность низкая. Дельта-гемолизин вызывает лизис эритроцитов чело-века, лошадей, овец, кроликов, разрушает лейкоциты. Все стафилококковые гемолизины--мембранотоксины: они спо-собны лизировать мембраны клеток эукариотов. Лейкоцидин негемолитический экзотоксин, вызывает де-грануляцию и разрушение лейкоцитов. Энтеротоксины -- термостабильные полипептиды, обра-зуются при размножении энтеротоксигенных стафилококков в питательных средах, продуктах питания (молоко, сливки, творог и др.), кишечнике. Устойчивы к действию пищеварительных ферментов. Известно шесть антигенных вариантов. Энтеротоксины вызывают пищевые токсикозы человека, к ним чувствительны кошки, особенно котята, и щенки собак. К факторам патогенности стафилококков также относятся фер-менты коагулаза, гиалуронидаза, фибринолизин, ДНК-аза, леци-товителлаза и др. Коагулаза -- бактериальная протеиназа, свер-тывающая плазму крови животных. Наличие коагулазы является одним из наиболее важных и постоянных критериев патогенности стафилококков. Факторы патогенности: Условно – патогенные. Микрокапсула защищает от фагоцитоза, способствует адгезии микробов; компоненты клеточной стенки – стимулируют развитие воспалительных процессов. Ферменты агрессии: каталаза – защищает бактерии от действия фагоцитов, в-лактамаза – разрушает молекулы антибиотиков. Резистентность. Устойчивость в окружающей среде и чувствительность к дезинфектантам обычная. Биопрепараты. Предложены очищенный адсорбированный ста-филококковый анатоксин и аутовакцина -- прогретый при 70--75 °С смыв агаровой культуры стафилококка, выделенного из организма больного животного. Иногда местно применяют фаг и антивирус-фильтрат 2--3-недельной культуры стафилококка. Лабораторная диагностика. Исследуют раневой экссудат, гной абсцессов, ран, молоко при маститах, выделения из половых органов при эндометрите, кровь из яремной вены при септицемии. Из патологического материала готовят мазки, окрашивают по Граму, микроскопируют. Прямая микроскопия позволяет дать только предварительный ответ. Одновременно сеют материал в чашки с кровяным, молочно-солевым и желточно-солевым агаром. Патогенные штаммы на кровяном агаре образуют вокруг коло-ний зону гемолиза. На чашках с молочно-солевым агаром учиты-вают образование пигмента. На желточно-солевом агаре большин-ство патогенных стафилококков вызывает лецитовителлазную ре-акцию, проявляющуюся в образовании вокруг колонии зоны помутнения с радужным венчиком по периферии. Для получения чистой культуры и дальнейшего изучения материал из характерной колонии отсевают на МПА. Чистую культуру микроскопируют, после чего ставят реакцию плазмокоагуляции с цитратной плазмой крови кролика. При наличии фермента коагулазы плазма сверты-вается. Дополнительно определяют ДНК-азу и расщепление ман-нита в анаэробных условиях. Выявляют летальные свойства культуры на кроликах и проводят дерматонекротическую пробу. С этой целью в выбритый участок кожи кролика вводят внутрикожно 0,2 мл 2-миллиардной взвеси культуры. В положительном случае в месте введения образуется инфильтрат и наступает некроз. S. aureus в отличие от других видов ферментирует маннит в анаэробных условиях. Патогенные стафилококки кроме гемолити-ческой и лецитиназной активности обладают способностью коагу-лировать плазму, вызывать некроз кожи и разрушать ДНК. Гибель же кролика свидетельствует о наличии летального действия токсина. При необходимости установления источника возникновения стафилококковой инфекции и путей ее распространения выделен-ные культуры подвергаются фаготипированию. Международный набор стафилококковых фагов состоит из 22 типов, разделенных на 4 группы. Энтеротоксины в пищевых продуктах и культурах определяют в РДП со стафилококковыми антисыворотками к энтеротоксинам А, В, С, D, Е, F. В связи с широким распространением штаммов стафилококков, резистентных к лекарственным препаратам, проводят определение чувствительности выделенных культур к антибиотикам на плотной среде методом бумажных дисков или реплик. Это очень важно для выбора рациональной химиотерапии. Патогенез. Источником инфекции стафилококков - человек и некоторые виды животных (больные или носители). Механизмы передачи — респираторный, контактно-бытовой, алиментарный. Иммунитет: Постинфекционный – клеточно-гуморальный, нестойкий, ненажряженный. Профилактика: Наиболее эффективным методом профилактики этого заболевания является иммунизация. Для этих целей с успехом используется препарат АСП. Биопроба: проводится на белых мышах, выявляют токсигенные свойства стафилококка. Применяются бактериологические исследования. Включает в себя обнаружение возбудителя в исходном материале методом световой микроскопии, выделение чистой культуры посевом на питательные среды и идентификацию возбудителя по культуральноморфологическим, ферментативным, серологическим, а также токсигенным признакам (методом биопробы). 65.Лабораторная диагностика сибирской язвы. Сибирская язва (Anthrax) - зооантропоноз. К ней восприимчивы животные многих видов, особенно травоядные, и человек. Болезнь протекает преимущественно остро с явлениями септицемии или с образованием различной величины карбункулов. Регистрируют в виде спорадических случаев, возможны энзоотии и эпизоотии. Возбудитель сибирской язвы - Bacillus anthracis (Cohn, 1872) - относится к семейству Bacillaceae. Таксономия. Возбудитель относится к отделу Firmicutes, роду Bacillus. Морфология. Bacillus anthracis неподвижная, грамположительная (в молодых и старых культурах встречаются и грамотрицательные клетки), образующая капсулу (в организме или при культивировании на искусственных питательных средах с большим содержанием нативного белка и СО2) и спору палочка, размером 1-1,3 х 3,0-10,0 мкм. При температуре ниже 12 и выше 42 оС, а также в живом организме или невскрытом трупе, в крови и сыворотке животных споры не образуются. В окрашенных препаратах из крови и тканей больных или погибших от сибирской язвы животных бактерии располагаются одиночно, попарно и в виде коротких цепочек по 3-4 клетки; концы палочек, обращенных друг к другу, прямые, резко обрубленные, свободные - слегка, закругленные. Иногда цепочки имеют форму бамбуковой трости.В мазках из культур на плотных и жидких питательных средах палочки располагаются длинными цепочками. Культивирование. Bacillus anthracis по способу дыхания относят к факультативным анаэробам, хорошо растет на универсальных средах (МПБ, МПА, МПЖ, картофеле, молоке).Оптимальная температура роста на МПА 35-37oС, в бульоне 32-33oС. При температуре ниже 12 и выше 45oС не растет. Оптимум рН сред 7,2-7,6. На поверхности МПА в аэробных условиях при температуре 37oС 17-24-часовые культуры состоят из серовато-беловатых тонкозернистых с серебристым оттенком, похожих на снежинки колоний, имеющих шероховатый рельеф и характерных для типичных вирулентных штаммов (R-форма). Диаметр колоний не превышает 3-5 мм.На сывороточном агаре и свернутой лошадиной сыворотке в присутствии 10-50% углекислоты колонии гладкие полупрозрачные (S-форма), а также слизистые (мукоидные), тянущиеся за петлей (М-форма), состоящие из капсульных палочек.В МПБ Bacillus anthracis через 16-24 ч на дне пробирки образует рыхлый белый осадок, надосадочная жидкость остается прозрачной, при встряхивании бульон не мутнеет, осадок разбивается на мелкие хлопья (R-форма).При посеве в столбик желатина на 2-5-е сут появляется желтовато-белый стержень. Культура напоминает елочку, перевернутую верхушкой вниз. Постепенно верхний слой желатин начинает разжижаться, принимая сначала форму воронки, затем мешочка.Bacillus anthracis при росте в молоке вырабатывает кислоту и через 2-4 дня свертывает его и пептонизирует сгусток.Возбудитель хорошо размножается в 8-12-суточных куриных эмбрионах, вызывая их гибель на 2-4 дней с момента заражения. Биохимические свойства. Ферменты Bacillus anthracis: липаза, диастаза, протеаза, желатиназа, дегидраза, цитохромоксидаза, пероксидаза, каталаза, лецитиназа и др.Ферментирует с образованием кислоты без газа глюкозу, мальтозу, сахарозу, трегалозу, фруктозу и декстрин. На средах с глицерином и салицином возможно слабое кислотообразование. Арабинозу, рамнозу, галактозу, маннозу, раффинозу, инулин, маннит, дульцит, сорбит, инозит не сбраживает. Утилизирует цитраты, образует ацетилметилкарбинол (реакция Фогеса - Проскауэра положительная). Выделяет аммиак. Редуцирует метиленовый синий и восстанавливает нитраты в нитриты. Некоторые штаммы образуют сероводород. Токсинообразование. Bacillus anthracis образует сложный экзотоксин, состоящий из трех компонентов: эдематогенный фактор (ЕF), протективный антиген (РА) и летальный фактор (LF) или факторы I, II, III. Эдематогенный фактор вызывает местную воспалительную реакцию - отек и разрушение тканей. Протективный антиген - носитель защитных свойств, обладает выраженным иммуногенным действием. Летальный фактор в смеси со протективным вызывает гибель крыс, белых мышей и морских свинок.Каждый из трех факторов обладает выраженной антигенной функцией и серологически активен.Инвазивные свойства микроба обусловлены капсульным полипептидом d-глутаминовой кислоты и экзоферментами. |