1. Типы биотических взаимоотношений макро и микроорганизма
 Скачать 232.49 Kb.
|
|
70. Лабораторная диагностика лептоспироза. ЛЕПТОСПИРОЗ - инфекционная болезнь разных видов животных и человека. Наиболее часто болезнь протекает с кратковременной лихорадкой в острой и подострой форме; гемоглобинурией (особенно у телят), желтушностью слизистых оболочек. У коров и свиноматок возможны аборты. Переболевшие животные длительное время остаются лептоспироносителями. Принадлежит к порядку Spirochaetales, семейству Spirochaetaceae, роду Leptospira. Морфология (микроскопия). Лептоспиры представляют собой тонкие длинные спиралеподобные микроорганизмы длиной 10...15 мкм и шириной 0,1...0,2 мкм, количество спиралей (завитков) 10...12 и более. Споры и капсулы не образуют. На концах лептоспир имеются утолщения. Движение маятникообразное. Подвижность сохраняется не более 2 ч с момента взятия крови или мочи. Материал для исследования. В лабораторию направляют при жизни животного мочу, кровь в период лихорадки; посмертно — труп или кусочки паренхиматозных органов, почку, транссудат из грудной и брюшной полостей, перикардиальную жидкость, мочевой пузырь с содержимым, абортированный плод или органы плода. Жидкие субстраты отсасывают в стерильные пробирки. Патологический материал доставляют с нарочным в опечатанном ящике не позднее 6 ч после гибели животного в летнее время и 12 ч зимой. Воду (до 2 л) на наличие лептоспир направляют в лабораторию в бутылях (колбах). Из патологического материала готовят нативные неокрашенные препараты для микроскопирования методом «раздавленной капли» в темном поле зрения. Лептоспиры плохо воспринимают анилиновые краски. По Граму окрашиваются отрицательно, по методу Романовского-Гимза через 48ч — в розово-фиолетовый цвет, по методу Киктенко — в красно-фиолетовый цвет (на бесцветном фоне). Метод Киктенко заключается в том, что на нефиксированный препарат наносят специальный раствор (0,2 г танина, 2 мл формалина, 5 мл 4 %-го спиртового раствора йода, 100 мл дистиллированной воды). Выдерживают 1 мин, сливают и наносят другой краситель (1 г генцианвиолета в 100 мл 25%-го этилового спирта) на 50с при подогревании. После этого препарат промывают, высушивают и микроскопируют под иммерсией. Культивирование. Выделение чистой культуры. Производят посевы патологического материала на полусинтетическую среду ГНКИ, состоящую из овечьего альбумина, воды и компалона (фактора роста), или на среды Любашенко и Терских, в основу которых взят фосфатно-буферный раствор на 5 % кроличьей сыворотки и 1 % пептона, дистиллированная вода; рН среды 7,2...7,4. Лептоспиры — факультативные аэробы. Оптимальная температура роста культивирования 28...30°С. Культивирование составляет 7...20 сут. Среда остается прозрачной, рост культуры определяют микроскопированием препаратов из нее. Если макроскопически виден рост (помутнение среды и осадок) — культура загрязнена. Патогенность (биопроба). Определяют биопробой: выделенной культурой заражают морских свинок или золотистых хомяков, крольчат 3...5- недельного возраста Культуру или взвесь исследуемого растертого материала инъецируют подкожно или внутрибрюшинно хомякам в дозе до 1 мл, крольчатам - 2...3 мл (по два животных на каждую пробу). Одного убивают через 4...5сут., второго — спустя 14...16сут., вскрывают и проводят бактериологическое исследование. Лептоспиры продуцируют ферменты (плазмокоагулазу, липазу и лецитиназу) и экзотоксины (гемотоксин, некротоксин), а также эндотоксин. В культуре ткани лептоспиры проявляют цитопатогенное действие. Серологические методы. Чаще используют для прижизненной диагностики лептоспироза. Кровь от животных допускается исследовать лишь через два месяца после их вакцинации. Самым распространенным методом является реакция микроагглютинации (РМА) со свежей, высушенной на фильтровальной бумаге или консервированной 0,5 %-м раствором фенола сывороткой. Сначала готовят разведения сыворотки — 1:50, 1:100, 1:200, 1:400 (при необходимости и больше), затем добавляют антиген — живые культуры лептоспир. Помимо РМА ставят обычные РА, РСК и РИФ по общепринятым методикам. Биопрепараты. -Депонированная поливалентная вакцина против лептоспироза сельскохозяйственных и промысловых животных: готовят из 7...10-суточной культуры лептоспир, консервированных 5%-м раствором карболовой кислоты. -Поливалентная вакцина против лептоспироза сельскохозяйственных и промысловых животных: получают методом гипериммунизации волов-продуцентов. Антигены для гипериммунизации готовят из производственных штаммов 6 серогрупп. -Антигены для диагностики лептоспироза в реакции макроагглютинации: готовят из эталонных штаммов лептоспир. Выращенные культуры инактивируют формалином, концентрируют, расфасовывают по ампулам и подвергают сублимационному высушиванию. -Групповые агглютинирующие лептоспирозные сыворотки предназначены для определения серогрупповой принадлежности лептоспир, выделенных из патологического материала, а также лептоспир, используемых в качестве антигенов в реакции микроагглютинации при серологической диагностике лептоспироза. 71. Лабораторная диагностика Ку-лихорадки.(см 86) 72. Возбудитель пастереллеза. Пастереллез (геморрагическая септицемия) – инфекционная болезнь многих видов сельскохозяйственных и диких животных, в том числе птиц, характеризующаяся явлениями септицемии и воспалительно-геморрагическими процессами во внутренних органах, на серозных и слизистых оболочках. Впервые возбудителя холеры кур в чистой культуре выделил Л. Пастер в 1880 г. Название Pasteurella возбудителю присвоено в честь ученого в 1910 г. По современной классификации пастереллы объединены в секцию 5, семейство Pasteurellaceae, в котором один род Pasteurella. Род представлен шестью видами. Основные возбудители болезни – Pasteurella multocida и Pasteurella gemolytica. Морфология P. multocida в мазках-отпечатках из крови и органов представляют собой грамотрицательные короткие овоидные палочки (длиной 0,4-1,2мкм и шириной 0,3-0,4мкм). При окраске по Романовскому-Гимзе имеют вид биполяров (интенсивно окрашиваются по полюсам). В мазках из культур пастереллы имеют вид коккоовоидных палочек, располагающихся одиночно, попарно, реже в виде коротких цепочек Неподвижные, образуют слизистые капсулы, спор не образуют. Культуральные свойства P. multocida – факультативный анаэроб. Оптимум температуры 37-38 0С, рН среды 7,2-7,4. Растут в МПБ и на МПА, но лучше, при внесении к ним сыворотки крови, на средах Хоттингера или Мартена. На МПА (S-формы) образуют мелкие, выпуклые, прозрачные, круглой формы колонии серого цвета, М-формы – более крупные слизистые колонии с непрозрачным центром; R-формы – шероховатые непрозрачные колонии. В косопроходящем свете колонии S-формы флюоресцируют, что связано с капсулообразованием; в МПБ – слабое равномерное помутнение среды и образование на дне пробирки слизистого осадка, поднимающегося при встряхивании в виде характерной косички. М-формы растут более интенсивно и дают более выраженный слизистый осадок. R-формы образуют хлопьевидный или зернистый осадок. Пастереллы ферментируют с образованием кислоты глюкозу, сахарозу, маннит, сорбит, не ферментируют лактозу, дульцит, аденит. Образуют индол, не разжижают желатин, на кровяном агаре не вызывают гемолиза, проба на каталазу положительная. Антигенная структура P. multocida имеет К-(капсульный) и О-(соматический) антигены. К-антигены разделены на четыре серологических типа: А, В, D и Е. P. multocida серовара А (по Картеру) преимущественно поражает птиц (холера), реже крупный рогатый скот и свиней, серовара В и Е вызывают острое заболевание домашних и диких животных, протекающее в виде геморрагической септицемии, серовар D встречается у всех видов животных. У коров и свиней вызывает аборты, у овец и коз – маститы, у телят и ягнят – артриты. Устойчивость В окружающей среде невысокая. При 58 0С погибают за 20 минут, при 90 0С – за 10 минут, при кипячении – моментально. Выдерживают замораживание до – 70 0С. При высушивании на открытом воздухе гибнут за 2-3 суток. В почве выживают до 12 суток, в навозе – 14 суток, птичьем помете – до 72 суток, в гниющих трупах — до 3 месяцев, в зерне – до 44 суток. Дезинфицирующие растворы в принятых концентрациях (раствор, содержащий 5 % активного хлора, 3 % растворы формальдегида и гидроксида натрия) убивают пастерелл в течение 10 минут. Патогенность Патогенные и вирулентные свойства пастерелл варьируют и наиболее сильно выражены у животных того вида, от которого они выделены. Эпизоотические штаммы высоковирулентны для белых мышей и кроликов. Установлена корреляция между вирулентностью, капсуло- и токсинообразованием. Наибольшей вирулентностью обладают свежевыделенные культуры. В лабораторных условиях при хранении культур вирулентность пастерелл резко снижается. Патогенез При остром течении болезни пастереллы быстро размножаются, проникают в кровеносную и лимфатическую системы, вызывая септицемию. За счет образования эндотоксинов и других агрессивных субстанций повреждаются стенки сосудов, они становятся проницаемы для плазмы, клеточных элементов, развивается геморрагический диатез, появляются отеки подкожной и межмышечной клетчатки. В результате нарушения кровообращения наступает некроз тканей. К пастереллёзу наиболее восприимчив крупный рогатый скот (молодняк), куры, гуси, утки. Определенную устойчивость к пастереллезу имеют лошади и плотоядные. Пастереллы имеют широкую экологическую амплитуду, способны нормально развиваться в разнообразных условиях окружающей среды. В природе среди животных и птиц установлено широкое и длительное пастереллоносительство. Источник возбудителя – больные и переболевшие животные (птица), выделяющие возбудителя с истечениями из носа, испражнениями. К заболеванию пастереллезом приводит ослабление резистентности организма под влиянием неблагоприятных факторов (неудовлетворительные условия содержания и кормления, стрессы). Основные пути заражения – аэрогенный и алиментарный. Пастереллёз относится к респираторной инфекции. Эпизоотические вспышки пастереллеза с острым проявлением болезни по типу геморрагической септицемии у крупного рогатого скота и диких жвачных в условиях СНГ обычно вызывает P. multocida типа В, у кур и индеек – P. multocida типа А. Спорадическую заболеваемость пастереллезом (подострое и хроническое течение болезни по типу энзоотической пневмонии) чаще вызывают у телят P. multocida типа А и Р- haemolytica; у свиней – P. multocida типов А и D и P. haemolytica. При остром течении пастереллеза отмечают резкое повышение температуры, угнетенное состояние, конъюнктивит, опухание языка, затрудненное дыхание, кашель, отеки. Если поражен кишечник, то наблюдается понос, жажда от потери воды, прогрессирующее исхудание, бледность слизистых оболочек, упадок сил, вялость. Течение и симптомы болезни Инкубационный период продолжается от нескольких часов до 2-3 дней. Болезнь протекает сверхостро, остро, подостро и хронически. У крупного рогатого скота различают грудную, отечную и кишечную формы. У больных животных отмечают повышение температуры тела до 41-42 °С, учащение пульса, общую слабость, отсутствие аппетита, отеки в области межчелюстного пространства, подгрудка, конечностей (отечная форма), частое и затрудненное дыхание, сухой кашель, пенистое истечение из носа (грудная форма), прогрессирующую анемию, запор, затем понос, в фекалиях имеются примеси крови (кишечная форма, встречающаяся у молодняка). Болезнь длится 1-2 суток, при подостром и хроническом течении – 2-3 месяца. Часто у телят P. multocida серогруппы А и Д вызывает хроническую бронхопневмонию – легочной пастереллез. У свиней температура тела повышается до 41,0 °Си выше, учащается пульс и дыхание, наблюдаются отеки в межчелюстной области, цианоз кожи ушей, живота. При подостром течении отмечаются симптомы фибринозной плевропневмонии, при хроническом течении – исхудание, кашель, опухание суставов. Продолжительность болезни от нескольких часов (при сверхостром течении) до 3-6 недель (при хроническом течении). Профилактика и меры борьбы В комплексе профилактических мероприятий ведущее место должно отводиться мероприятиям – повышающим иммунный статус организма животных (соблюдение общих ветеринарно-санитарных правил, обеспечение нормальных условий содержания и кормления животных и т.д.). При установлении диагноза больных и подозрительных по заболеванию животных изолируют и лечат. Остальных – вакцинируют. Производят дезинфекцию. Ограничения снимают через 14 дней после последнего случая падежа, выздоровления или вынужденного убоя. Иммунитет После переболевания вырабатывается стойкий инфекционный иммунитет. Биопрепараты - профилактичекие эмульгированные вакцины против пастереллёза. - формолвакцина, ассоциированная вакцина против сальмонеллёза и эшерихиоза. - живая вакцина против паст. из штамма К. - сухая авирулентная вакцина. - противовоспалительная гипериммунная сыворотка – вместе с ней применяют тетрациклины и антибиотики тетрациклинового ряда. 73. Возбудитель паратуберкулёза. Морфология. Возбудитель Mycobakterium paratuberculosae (бактерия Johne, названа по имени автора, открывшего микроб в 1895 г.) – самая маленькая микобактерия из всей кислотоустойчивой группы микробов; длина ее 0,5-1,5 мкм, ширина 0,2-0,5 мкм, окрашивается по Циль-Нильсену и Граму. В патологическом материале (комки слизи, пораженные части слизистой кишечника) бактерии характерно располагаются в виде глыбок, кучек, редко одиночно или группами по 2-4 клетки. В окрашенных препаратах глыбки видны даже при небольшом увеличении микроскопа. Культивирование. Получение первичных культур микобактерий паратуберкулеза связано со значительными трудностями. Решающим моментом при выращивании культур является введение в питательную среду материала из убитых туберкулезных или вытяжки из других кислотоустойчивых бактерий – тимофеевой травы (Мус. phlei). В обычных питательных средах микроб не в состоянии ассимилировать необходимые для своего роста вещества, которые имеются в упомянутых экстрактах. Данкин предложил такую благоприятную среду из следующих ингредиентов: бактерийная масса микобактерий тимофеевой травы, печеночный экстракт, глицерин, свежее яйцо и спиртовой раствор краски генцианвиолет. Особое значение приобрела среда Вишневского, содержащая аспарагин, щавелевокислый аммоний, сернокислый магний, сернокислое железо, глицерин. Для роста культур благоприятна температура 38 0С. Первые признаки роста с момента посева появляются через 6 недель, иногда – через 7 месяцев. На плотных средах (яичные среды Петраньяни, Гельберта, Левенштейна, агаризированная среда Сотона) вначале вырастают изолированные серовато-желто-белые маленькие колонии, в дальнейшем приобретающие вид сосочков. С течением времени появляется складчатое наложение. На жидких средах (Данкина, Вишневского, Дорсета, Бокэ, Генлея) образуется нежная беловато-сероватая пленка, которая через 3-4 месяцев культивирования увеличивается в объеме и осаждается на дно пробирки. Антигенная структура. У микобактерий паратуберкулеза изучена недостаточно. Установлено лишь антигенное родство с Мус. avium. Устойчивость. Возбудитель паратуберкулеза довольно устойчив к воздействию физико-химических и биологических факторов. В почве и навозе он сохраняется до 10-12 месяцев, в кормах и воде непроточных водоемов – 8-10 месяцев, в моче – 7 суток. Солнечный свет убивает его через 10 месяцев. В молоке, в закрытых сосудах, при нагревании до 63 0С гибнет через 30 минут, при 65 0С – через 25 и при 85 0С – в течение 1-5 минут. Патогенность. Микобактерии паратуберкулеза поражают крупный рогатый скот (особенно молодняк), буйволов, верблюдов, овец и коз. Лошади, мулы и свиньи паратуберкулезом не болеют. В качестве лабораторных животных служат кролики, хомяки, мыши. Морские свинки, куры используются для сенсибилизации при изучении аллергии и стандартизации изготавливаемых аллергенов. В течение многих месяцев у инфицированных животных отсутствуют характерные клинические признаки и патологические изменения. Полагают, что в патогенезе инфекции большое значение имеет предшествующая сенсибилизация организма бактериями Ионе. Инкубационный период исключительно продолжительный – от нескольких месяцев до двух лет и более. Паратуберкулез представляет собой алиментарную инфекцию. Поскольку возбудитель выделяется с калом больных животных, заражение происходит через инфицированные корма, воду, подстилку, пастбище. Патогенез. После попадания возбудителя болезни в пищеварительный канал он проникает через поврежденный эпителий в строму ворсинок тонких кишок и фагоцитируется ретикулярными клетками. Однако при фагоцитозе микобактерии не перевариваются (из-за наличия в оболочке стеариновых кислот и других воскоподобных веществ), а размножаются в них. В результате этого фагоциты сильно увеличиваются в размере и объединяются в клеточные скопления. Внутриклеточное размножение микробов разрушает клетки тканей, а освободившиеся микробы заново фагоцитируются. Возникают крупные скопления микробов и пораженных макрофагов, вызывая атрофию клеток ворсинок кишечной стенки и брыжеечных лимфоузлов и характерное пролиферативное воспаление. Это приводит к нарушению ферментативной, секреторной и всасывающей функции кишечника, а также минерального, солевого и водного обмена, в результате чего происходит интоксикация и истощение организма. У молодняка может возникать бактериемия. Лабораторная диагностика. Бактериологический диагноз является решающим, особенно в доклиническом периоде болезни. Его устанавливают в основном микроскопией испражнений больного животного. Из фекалий собирают комочки слизи или кровяные сгустки, размазывают их тонким слоем на предметном стекле и после фиксации на пламени окрашивают по Циль-Нильсену. Просмотру подлежат не менее 8-10 препаратов, ввиду того, что выделение с фекальными массами бактерий Ионе происходит периодически. При отрицательном результате необходимы повторные исследования через различные промежутки времени. При исследовании фекалий и слизистой оболочки кишечника следует учитывать, что в препарате могут встречаться кроме бактерий Ионе и другие кислотоустойчивые микобактерии: возбудители туберкулеза или атипичные микобактерии. Для дифференциации высевают материал после обработки 5 % раствором серной кислоты на элективные и обычные питательные среды. Культуры атипичных микобактерии вырастают относительно быстро в течение первых 3 суток, иногда через 10 суток. Микобактерии туберкулеза, находящиеся в материале, отличаются от паратуберкулезных своим расположением, а также патогенностью для лабораторных животных. Для посмертной диагностики от павшего или убитого животного в лабораторию направляют отдельные участки пораженного кишечника и увеличенные брыжеечные лимфатические узлы, консервированные в стерильном 30 % растворе глицерина. Кал пересылают в стерильной закрытой посуде (пробирках, флакончиках). Серологический метод: в сыворотке крови животных при помощи РСК обнаруживают комплементсвязывающие антитела. Эта реакция подтверждает клинические формы паратуберкулеза у 85 % исследуемых животных. Аллергический метод: - паратуберкулезный скот реагирует на альттуберкулин для птиц в 80 % и на паратуберкулин (ионии) в 94 % случаев. Кроме этого, используют альттуберкулин для птиц и стандартный сухой очищенный (ППД) туберкулин для птиц. Крупный рогатый скот исследуют двойной внутрикожной аллергической пробой. Реакцию учитывают после первого введения через 48 ч с помощью измерения величины кожной складки кутиметром. Положительной реакцией считают появление на месте введения туберкулина разлитого отека без строгой конфигурации и границ, размерами приблизительно 35х45 - 100х120 мм и больше, напряженного в центре и тестоватой консистенции по краям, горячего па ощупь и болезненного при дотрагивании. Животным, давшим сомнительную реакцию и нереагирующим, альттуберкулин вводят повторно. Реакцию учитывают через 24 ч. |